UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA

Facultad de Ingeniería en Industrias Alimentarias

Biotecnología de Alimentos
Prof. Dr. Pedro P. PELAEZ SANCHEZ

PRÁCTICA N° 6

EXTRACCIÓN DE ADN DEL TOMATE

I. INTRODUCCIÓN

El éxito de numerosos estudios biológicos que incluyen la identificación

molecular, la inferencia filogenética y genómica, así como los crecientes

proyectos de secuenciación a gran escala, dependen fundamentalmente de un

primer paso que consiste en la extracción de ADN a partir de los organismos

en. Los diferentes métodos de extracción combinan procesos de lisis celular,

eliminación de proteínas, precipitación y purificación del ADN, los cuales dan

como resultado variaciones en concentración y calidad del ADN extraído

(DITTRICH et al., 2012).

Objetivo:

- Aprender el método para la extracción de ADN

- Extraer ADN de una muestra de tomate.

II. MARCO TEÓRICO

2.1 ADN

Esta estructura de doble hélice era de tal simplicidad, de tal belleza, y las

ventajas biológicas manaban de ella con tal claridad y rigor que era difícil
pensar que no fuese verdadera. Las dos cadenas, el alineamiento de las

bases, la complementariedad de las dos secuencias, todo esto tenía la fuerza

de lo necesario. Todo ello no podía ser falso, siendo el heraldo de un período

excitante en la biología (JACOB, 1987).

III. MATERIALES Y MÉTODOS

3.1 Materiales y Reactivos

- Tomate maduro - Varilla

- Cuchillo y Tabla para picar - Probeta

- Vaso de precipitados - Pipeta

- Tela - Etanol al 95% frío

- Detergente (Champú) - Cloruro de sodio 2M

3.2 Metodología

 El etanol debe ser colocado en el congelador al menos un día antes de la

realización de la práctica. También se debe enfriar en cloruro de sodio.

 Cortar el tomate en trozos pequeños

 Licuar el tomate en trozos, filtrar en un vaso, sobre una tela para separar

el resto de tejido que haya quedado por romper.

 Medir el volumen del filtrado en una probeta, luego depositar en un vaso.

 Añadir al filtrado un volumen igual de cloruro sódico 2M frio.

 A continuación, se añade 2 mL de detergente (Champú).

 Mezclar bien y colocar la mezcla en una probeta.

  Por las paredes de la probeta agregar muy despacio 50 mL de etanol 96%

frio, de manera que se formen dos capas.

 Esperar 10 minutos sin mezclar las capas y observar el ADN que precipita

en la interfase de las dos capas y llega hasta la superficie.

 Introducir una varilla de vidrio y remover lentamente en una misma

dirección, se observará que sobre la varilla queda adherido el ADN, con

aspecto de pequeñitos copos de algodón mojado.

IV. RESULTADOS Y DISCUSIONES

La Figura 1 muestra tres experimentos de extracción de ADN de

tomate. Los filamentos de ADN estarían en la “nube” observada en la capa de

etanol próxima a la interfase.

Como la pectinasa no es una enzima fácil de conseguir, incluimos en nuestro

protocolo un test que detectase la presencia de pectina en el material escogido

como fuente de ADN.

V. CONCLUSIONES

- Se aprendió el método para la extracción de ADN

- Se extrajo ADN de la muestra de tomate, desde el punto de vista técnico

se trata de una actividad cuyo único requisito es colocar etanol en el

congelador, en un frasco cerrado, al menos un día antes de la realización de la

práctica. El tomate puede ser reemplazado por frutillas, un poliploide con alto

contenido de ADN.

VI. REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA

DITTRICH-SCHRÖDER G., WINGFIELD M.J., KEEIN H.Y SLIPPERS B. 2012.

DNA extraction techniques for DNA barcoding of minute gall-inhabiting wasps.

Molecular Ecology Resources, 12: 109-115.

JACOB F. 1987. The Statue Within. Tomado de “La unidad de la vida”. Op. cit.

pp 68.