ESCUELA POLITÉCNICA NACIONAL DEL ECUADOR – ESCUELA DE FORMACIÓN DE

TECNÓLOGOS

TECNOLOGÍA EN AGUA Y SANEAMIENTO AMBIENTAL

LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA BÁSICA No.2

Preparación de medios de cultivo: Agares y Caldos

Conceptos previos: Agar nutritivo, medio de cultivo, nutrientes, temperatura, aerobiosis,

anaerobiosis.

OBJETIVOS

 Comprender el concepto detrás del diseño de medios de cultivo: requerimientos

nutricionales y ambientales.
 Preparar medio de cultivo sólido y medios de cultivo líquido.

INTRODUCCIÓN

Para cultivar microorganismos, los microbiólogos usan una variedad de medios de cultivo. A
pesar de que los medios puedan ser hechos desde sus componentes bases, actualmente se usan
medios comerciales y se los rehidrata para su uso en laboratorio. Existen varios tipos de medios
de cultivo, desde los de uso general para el crecimiento de cualquier tipo de microorganismo,
hasta los más específicos, donde los medios de cultivo selectivos y diferenciales son usados para
la identificación de microbios.

Los agares nutritivos y los caldos nutritivos son medios de cultivo muy comunes para mantener
cultivos bacterianos. Estos medios deben cumplir una diversidad de requerimientos nutritivos
para satisfacer las necesidades de las bacterias que son cultivadas rutinariamente, de tal manera
que los medios son formulados a partir de fuentes que provean carbono y nitrógeno en una
variedad de formas: aminoácidos, purinas, pirimidinas, monosacáridos o polisacáridos, lípidos,
etc. Generalmente, estos provienen de digestiones de material vegetal (fitona) o de material
animal (peptona, extracto de carne, etc.). Debido a la composición exacta y las cantidades de
carbono y nitrógeno en estos elementos son desconocidos, los medios de cultivo generales son
indefinidos o medios complejos. En la mayoría de casos, los medios son preparados por el
técnico o auxiliar de laboratorio; sin embargo, es necesario que el microbiólogo tenga
experiencia para entender el mecanismo de acción del medio de cultivo.

Morfología de las colonias en agares

Cuando se deposita una célula simple en un sustrato sólido nutritivo (agar), ésta se divide y
eventualmente forma una colonia (UFC, unidades formadoras de colonias). El color, el tamaño,
la forma y la textura son características determinadas por la información genéticas del
microorganismo, pero también están grandemente influenciadas por diversos factores
ambientales, incluyendo la disponibilidad de los nutrientes, temperatura y tiempo de
incubación. Las categorías básicas para definir la morfología de la colonia incluyen la forma de
la colonia, el margen, elevación, textura y color.
 Forma se describe como circular, irregular o puntiforme.
 Margen se describe como entero (cuando no tiene irregularidades, suave), ondulado,
lobulado, filamentoso o rizoide (cuando tiene proyecciones como raíces).
 Elevación se describe como plana/llano, elevado, convexo, pulvinado (muy convexo) o
umbonado (con una elevación en el centro).
 Textura se describe como húmeda, mucoide o seca.
 Color o pigmentación se describe combinando con otras propiedades observables como
opaco, translúcido, brillante o sin brillo.

Patrones de crecimiento en caldo de cultivo

Los microorganismos cultivados en caldos muestran diferentes patrones de crecimiento.

Algunos crecen en la parte superior del tubo y producen un tipo de membrana superficial
denominada película mientras que otros se sedimentan al fondo. Otras bacterias producen una
turbidez uniforme, mientras que otros microorganismos se agrupan para formar flóculos.
Además, a pesar de no ser un patrón de crecimiento, se usa la producción de pigmentos como
una característica para la identificación bacteriana.
MATERIALES

 Botellas de vidrio autoclavables con tapa

 Tubos de ensayo con tapa
 Papel aluminio
 Plancha caliente
 Cajas Petri estériles (vidrio o plástico)
 Balanza analítica
 Espátulas de metal
 Desinfectante, alcohol 70%
 Agar nutritivo
 Medio EC
 Agua destilada o ultrapura
 Autoclave

Agar nutritivo

 Extracto de carne, 3g
 Peptona, 5g
 Agar, 15g
 Agua destilada, 1L

Caldo nutritivo

 Extracto de carne, 3g
 Peptona, 5g
 Agua destilada, 1L

METODOLOGÍA

Para minimizar la contaminación durante la preparación de los medios de cultivo, se debe

limpiar el área de trabajo con desinfectante y tener una técnica aséptica en todo momento. Los
medios de cultivo usados en la práctica son provistos de casa comercial y deben ser preparados
de acuerdo al manual provisto. En el caso de preparar agar nutritivo o caldo nutritivo desde cero,
se debe realizar los siguientes protocolos.

Agar nutritivo en cajas Petri

 Pesar los ingredientes en la balanza.

 Suspender los ingredientes en 1L de agua destilada. Mezclar vigorosamente y calentar
la solución hasta su completa disolución.
 Dividir la solución en botellas más pequeñas para un manejo adecuado.
 Autoclavar por 15min a 121°C para esterilizar el medio.
 Una vez autoclavado, dejarlo enfriar a 50°C.
 Dispensar aproximadamente 20mL en las cajas Petri, hacerlo rápidamente y evitando la
formación de burbujas. Cubrir y dejar enfriar.
 En el caso de no usarlos inmediatamente, almacenar las cajas Petri en la refrigeradora.
Caldo nutritivo en tubos de ensayo

 Pesar los ingredientes en la balanza.

 Suspender los ingredientes en 1L de agua destilada. Mezclar vigorosamente y calentar
la solución hasta su completa disolución.
 Dispensar aproximadamente 7mL en los tubos de ensayo, tapar sin apretar.
 Autoclavar por 15min a 121°C para esterilizar el medio.