Kamis, 20 Desember 2012

anti HAV dan anti HCV

A. Prosedur Pemeriksaan IgM Anti HAV

Tujuan :Untuk mendeteksi adanya antibodi IgM terhadap virus hepatitis A dalam serum atau
plasma secara kuantitatif.

Metode : imunocoombs

Prinsip : IgM anti HAV tes adalah enzin imunoassay fase padat (EIA), berdasarkan prinsip
imunocapture. Fase padat berupa kartu dengan 12 proyeksi (gigi) yang pake terhadap
:

- Upper spot  Ab monoklonal untuk virus hepatitis A (kontrol internal).

- Lower spot  Ab kelinci pada IgM manusia.

Developing plate memiliki 6 baris (A-F) dari 12 lubang, setiap baris berisi reagen yang
siap digunakan pada langkah yang berbeda dalam pengujian tersebut. Tes dilakukan
bertahap dengan memindahkan katru dari baris ke baris, dengan inkubasi pada
masing-masing langkah.

Pada awal tes, serum atau plasma diencerkan 1:50 dan ditambahkan diluent dalam
sumur/ lubang baris A pada developing plate. Kartu dimasukkan ke dalam sumur A.
IgM manusia akan ditangkap oleh anti-IgM Antibodi di lower spot dari gigi kartu.
Komponen yang terikat akan tersaapu di baris B, di baris C anti-HAV akan mengikat
anti-HAV antibodi pada upper spot (kontrol internal). Di baris D HAV yang terikat
antigen akan berinteraksi dengan monoklonal anti-HAV yang berlabel Alkali
Phospatase. Dalam baris E komponen yang terikat akan dihilangkan dengan mencuci
di baris F. Alkali Phospatase terikat akan bereaksi dengan komponen kromagen,
hasilnya terlihat seperti abu-abu biru dipermukaan gigi.

cara kerja:

1. Developing plate diinkubasi pada suhu 37ºC selama 45 menit.

2. Serum dan kontrol dipipet 10 µl dan diencerkan dengan larutan diluent sebanyak 490 µl.

3. Pengenceran serum dan kontrol dipindahkan ke dalam lubang A sebanyak 25 µl pada

developing plate dengan menggunakan mikropipet.

4. Kemudian dilakukan langkah di bawah ini :

Langkah Baris Proses

Antibodi capture A Dihomogenkan, diinkubasi 2 jam pada suhu

37ºC

Pencucian B Agitate, diinkubsi 2 menit

Reaksi Ag-Ab C Dihomogenkan, diinkubasi 30 menit pada suhu

37ºC

Pengikatan konjugate D dihomogenkan, diinkubsi 20 menit pada suhu

37ºC

Pencucian E Dihomogenkan, diinkubasi 2 menit

Kromogen F Dihomogenkan, diinkubasi 10 menit pada suhu

37ºC

Penghentian reaksi E Diinkubasi 1 menit dan dikeringkan di udara