PRACTICA “ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DEL AGUA DE LAS POZAS DE

OXIDACION DE EPSEL”
I. INTRODUCCIÓ
El crecimiento de la población a nivel
mundial y el aumento del uso del agua para
diferentes actividades, ha incrementado los
niveles de contaminación. Esta
contaminación está relacionada con los
vertidos de origen doméstico e industrial a
los cuerpos de agua. En el caso de los
residuos de origen doméstico, la carga
contaminante está representada por altos
porcentajes de materia orgánica y
microorganismos de origen fecal. Estos microorganismos son causantes de enfermedades de
origen hídrico, que generan altos porcentajes de morbi-mortalidad en la población. El control de
la calidad microbiológica del agua de consumo y de vertido, requiere una serie de análisis
dirigidos a determinar la presencia de microorganismos patógenos. Dentro de los
microorganismos patógenos se encuentran el grupo de bacterias coliformes el cual está
conformado por dos subgrupos: los coliformes totales y los termotolerantes. A estos últimos
antes se los denominaba coliformes fecales. El cambio de nombre se debe a que se demostró que
en el grupo de coliformes que se detectaban en siembras incubadas a temperaturas de 44,5 °C y
en medios de cultivo específicos, sólo una parte del grupo eran bacterias de origen fecal; el resto
eran bacterias ambientales. Se les puso entonces el nombre de bacterias coliformes
termotolerantes debido a la alta temperatura de incubación (44,5 °C) en la cual se obtenía un
óptimo desarrollo. En el grupo de bacterias termotolerantes está incluida la Escherichia coli,
considerada como un organismo indicador de contaminación fecal. Se ha demostrado que esta
bacteria siempre está presente en un número elevado en las heces de humanos y animales de
sangre caliente y comprende casi 95% de los coliformes en las heces. Por esta razón, la
contaminación de origen fecal puede ser evaluada mediante la determinación de coliformes
termotolerantes o mediante la presencia de E. coli. En los valores guía para la calidad
bacteriológica del agua de bebida (OMS, 1995), ambas determinaciones se consideran como
alternativas aceptables y su presencia indica contaminación de origen fecal.

II. OBJETIVOS
✓ Aplicar el método de recuento indirecto usando el método del NMP y determinar
el número de coliformes totales presentes en la muestra de agua procedente de la
planta tratadora de agua potable EPSEL.
✓ Determinar la presencia de coliformes totales y fecales en una muestra de agua
potable
III. MARCO TEÓRICO

Bacteria Coliforme:
Incluyen E. Coli y otras bacterias que se
asemejan morfológica y fisiológicamente.
Estos M.O. con frecuencia difieren entre si
en características pequeñas. Las bacterias
coliforme suelen encontrarse en el aparto
intestinal del hombre y animal. E. Coli,
rara vez se encuentra fuera del intestino.
Las bacterias coliformes son bacilos
cortos, gram negativos que fermentan la
lactosa y forman ácido y gas.
Son anaeróbios facultativos, se multiplican
a mayor rapidez a temperatura entre 30 y 37 ºC, crecen a gran abundancias en medios corrientes,
como caldo y agar.
La colonia de E. Coli en agar E.M.B (eosina y azul de metileno) tienen 2 a 4 mm de diámetro, un
centro grande de color oscuro e incluso negro, y tienen brillo verde metálico cuando se observan
con luz refleja.
Se han creado otras pruebas para diferenciar tipos de bacterias coliformes, suelen emplearse 4 y
se han juntado sus iniciales en la palabra nemotécnica IMViC (Indol, Rojo Metilo
(R.M.), Borges – Proskauer (V:P) y utilizada de citrato.
La reacción de IMViC de algunas bacterias coliformes como E.coli ++ --, significa que el M:O:
produce Indol y es positivo al rojo metilo y negativo al V.P.
Hay 16 combinaciones posibles de resultados prueba negativa y positiva.
Se considera que todas las bacterias coliformes, tienen importancia en el H2O desde el punto de
vista sanitario aunque muchos autores an tratado de diferenciar el tipo fecal (e.coli) y el nofecal
(A: aurogenes)
Análisis sanitario del H2O
El diagnostico de las colonias coliformes en la muestra de H2O se basa en la capacidad de dicho
M:O: para producir gas a partir de la lactosa.
Filtración:
Es un medio eficaz de eliminar M.O. y otras sustancias de suspensión del H2O.
Cloración:
Es el método más eficaz de hacer potable el H2O. La cantidad de cloro que se agrega depende
del grado de contaminación del abasto hídrico y su contenido de sustancias orgánicas. El cloro
mata la mayor parte delas bacterias no esporágenas. El H2O clorada, en consecuencia no siempre
es estéril, pero suele brindar seguridad para consumo por el ser humano.
Recuento de Coliformes en Filtro de Membranas (Método):
Se hace pasar parte de la muestra por una membrana de filtración de acetatos de celulosa con
poros y diámetro tal capte la bacteria, en tanto que permita el paso libre del H2O.
La membrana de filtración se coloca asépticamente en una caja de Petri en un cojincillo
absorbente saturado con una sal nutritiva P. Ej., caldo M. Endo, se incuba a 24 ºC durante 24
horas. Después se examina la membrana con microscopio de poca potencia y se cuentan las
colonias verdes violáceos con resplandor metálico, si considera que son bacterias coliformes.
H2O potable:
Sea limpia, fresca, sin olores o sabores desagradables o que causen rechazo de quien lo consume
y sin sustancias químicas o M.O. nocivos.
Ventajas del uso de Filtro de membrana para las H2O:
1.
2. Rapidez en la obtención de resultados
3. Ahorro de manos de obra, medios, materiales de vidrios, y coste de los materiales si el filtro
se lava y se vuelve a utilizar.
4. Pueden exponerse los organismos a medio de enriquecimiento muy fácilmente durante un
corto tiempo y a una temperatura conveniente.

Inconvenientes de Uso:
1. No hay indicación de formación de gas (algunas H2O tienen gran cantidad de organismos
fermentadores de la lactosa sin producción de gas capaces de crecer en el medio).
2. La filtración por membrana es inadecuada para H2O con mucha turbidez y bajos recuentos,
porque el filtro llega a obturarse antes de que pase agua suficiente.
3. Cantidades grandes de organismos no coliformes capaces de crecer en el medio pueden
interferir en el crecimiento de los coliformes.

IV. MATERIALES

✓ Material Biológico: Agua del pozo N° 2 de la planta tratadora de agua potable

EPSEL
✓ Material de laboratorio: Caldo Lauril sulfato, campanas de Durham, tubos de
dilución estériles, pipetas estériles, mechero, estufa.

V. PROCEDIMIENTO

a) Recolección de la muestra:

Realizar la recolección de la muestra en las instalaciones de EPSEL- Chiclayo, en uno de

los pozos donde se el agua es sometida a un proceso de sedimentación con la finalidad de
separarla de los residuos con los que llega a la planta.
Preparación de la muestra
Esta debe de estar debidamente etiquetada en un frasco boca ancha estéril resistente, debe de
estar completamente homogeneizada por lo menos unas 20 veces y realizar de dos a tres
diluciones lo ideal sería de que se usen hasta cinco tubos por dilución.

Método para Coliformes totales

1. Preparamos las 3 series de tubos y agregamos 10 ml de solución peptonada, para
realizarlas diluciones.

2. Homogeneizar la muestra extraer para efectuar las diluciones de 10-1 hasta 10-3
agregando 1ml de muestra a 10 ml de solución Peptonada.

3. Luego realizamos las técnicas de los tubos: En nuestro caso utilizaremos la

técnica de los tres tubos.
4. Se utilizan 3 tubos por cada dilución, cada tubo con una campana de Durham. En
cada uno se agrega 10 mL de Caldo Lauryl Sulfato-triptosa.
5. Después de esto, en cada tubo agregar 1 ml de su dilución correspondiente.

10-1 10-2 10-3

6. Luego de haber colocado el inóculo, llevamos a incubación entre 35-37ºC por 24

horas.
 7. Luego se realiza la lectura correspondiente, observando la presencia de gas en las
campanas de Durham, lo que indicara la positividad de cada tubo. Si a las 24
horas hay tubos con gas positivo los retiramos, y los tubos negativos los dejamos
que cumplan las 48 horas de incubación.
8. Relacionamos los resultados obtenidos con la tabla según ISO del NMP

VI. RESULTADOS

Tubos positivos en caldo Lauryl

Sulfato para coliformes totales

10-1 10-2 10-3

 • De la dilución 10-1 = 3 tubos positivos
• De la dilución 10-2 = 3 tubos positivos
• De la dilución 10-3 = 1 tubos positivos

Por tanto, los resultados son 3:3:2 Siendo el NMP 460 / ml

VII. CONCLUSIONES

El número de coliformes totales es de 460 coliformes totales/ml

Según la Norma Sanitaria que establece los criterios microbiológicos de calidad sanitaria e
inocuidad para los alimentos y bebidas de consumo humano, el agua excede el límite de
coliformes que puede tener, siendo el máximo 102.
Pero es justificable debido a que la carga bacteriana es demasiado elevada ya que aún no recibe
un tratamiento de purificación que reduzca esta carga bacteriana. Para detectar la presencia de
estos microorganismos como E. Coli, se debe aplicar pruebas bioquímicas correspondientes
(serie colorimétrica, IMViC, etc) para agua potable no debe contener ningún agente patógeno.
Así se considera cuando en 100 ml de agua no se encuentran agentes enfermedad, y por tanto no
esté presente tampoco la especie E. Coli. Se estima que una persona en promedio excreta al día
miles de millones de estos microorganismos que viven mas tiempo en agua que los patógenos. El
agua que contenga pocos patógenos por litros puede estar lo suficientemente contaminada para
causar algunas enfermedades.
 Como estas especies Enterobacteriaceae tienen gran semejanza en su aspecto morfológico y
características de cultivo, es necesario recurrir a pruebas bioquímicas para diferenciarlas.
1. Capacidad para producir Indol. E. Coli lo produce y Ent. Aerógenes no.
2. Los dos microorganismos producen ácido de la glucosa, sin embargo, E.coli
produce pH mas bajo lo qu ehace que vire al rojo de metilo mientras que Ent. Aerogenes no
cambia el color.
3. E. Coli no produce acetilmetilcarbinol mientras que Ent. Aerogenes sí lo hace.
4. Utilización de citrato de sodio. Ent. Aerogenes es capaz de utilizar el citrato de sodio como
su única fuente de carbono. E. Coli no se desarrolla en estas circunstancias.

VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Camacho, A., Giles, M., Ortegón, A., Palao, M., Serrano, B. y Velázquez, O. (2009).
Método para la determinación de bacterias coliformes, coliformes fecales y
Eschericia coli por la técnica de diluciones en tubo múltiple (Número más
probable o NMP). Técnicas para el Análisis Microbiológico de Alimentos. 2ª ed.
Facultad de Química, UNAM. México.
González, U., Pérez, V., Clemente, A, Mazariegos, M, Ruiz, M. y Rodríguez, M. (2007).
Determinación de coliformes totales en los productos lácteos y su comparación
entre dos queserías del municipio de Pijijiapan, Chiapas, México. Bioquimia, 32,
98.
Ramos, L., Vidal, L., Vilardy, S. y Saavedra, L. (2008). Análisis de la contaminación
microbiológica (coliformes totales y fecales) en la bahía de Santa Marta, caribe
colombiano. Acta Biológica Colombiana, 13 (3), 87-98.