UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA

“JÚLIO DE MESQUITA FILHO”

Campus de Araraquara
DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA E TECNOLOGIA QUÍMICA

CURSO DE FARMÁCIA – BIOQUÍMICA

DISCIPLINA DE BIOQUÍMICA I - CURSO PRÁTICO
- 2018 -

VI - AMILASE SALIVAR

A presença de alimento na boca, assim como o aroma, estimula as glândulas salivares a secretar saliva,
que contém a enzima amilase salivar ou ptialina, além de sais e outras substâncias. A amilase salivar
catalisa a hidrólise do amido e outros polissacarídeos (como o glicogênio), reduzindo-os em moléculas
menores e mais simples como a maltose (dissacarídeo) e glicose. Os sais presentes na saliva
neutralizam substâncias ácidas e mantém, na boca, um pH praticamente neutro (6,8), ideal para a ação
da amilase. Além disso, sais como o NaCl, também servem como ativadores da enzima. A temperatura,
também é um fator importante para a atividade da amilase, assim como para a maioria das enzimas.
Para se comprovar a ação digestiva da amilase salivar pode-se pesquisar a presença de amido
(substrato) no meio, após a reação com a saliva. Nesta comprovação, quando se usa lugol (solução que
contém iodo), a coloração azul evidencia a presença de amido e, portanto, baixa atividade enzimática.

1. Determinação do ponto acromático

- Colete cerca de 5 mL de saliva estocando-a em um becker de 10 mL.

- Prepare 11 tubos de ensaio pequenos (numere-os), colocando em cada um deles, 2 gotas de solução de
iodo.
- A um erlenmeyer de 25 mL, adicione 6 mL de uma solução de amido 1%.
- Retire 0,5 mL desta solução, transferindo-o para o tubo de ensaio n° 0 (identificar como tempo zero).
- Adicione ao erlenmeyer, 6 gotas da saliva estocada, agite para homogeneização e deixe incubando a
temperatura ambiente (inicie a contagem do tempo).
- Retire, a cada minuto, 0,5 mL da solução contida no erlenmeyer, transferindo-os sequencialmente
para os tubos numerados de 1 a 10.
- Observe a variação da coloração nos diferentes tubos e anote o tempo gasto para que se atinja a
constância na coloração (permanência da coloração do iodo). Este será o ponto acromático.

OBS: Caso o ponto acromático seja superior a 10 minutos, repita o experimento adicionando 12 gotas
de saliva à solução de amido.

2. Ativação pelo NaCl

- Dilua 50 vezes a saliva obtida anteriormente, utilizando um balão volumétrico.

- Prepare duas séries (A e B) de pequenos tubos de ensaio, numerando-os de 1A a 8A e 1B a 8B,
respectivamente, e colocando em cada um deles, 2 gotas de solução de iodo.
- Prepare 2 tubos de ensaio maiores (identificados como A e B) de acordo com o seguinte protocolo:

REAGENTES TUBO A TUBO B

NaCl 10% (pH 6,8) 1 mL -
Tampão fosfato pH 6,8 - 1 mL
Solução de amido 1% 4 mL 4 mL
Saliva diluída 50X 1 mL 1 mL
- Agite bem, (Inicie a contagem do tempo ao adicionar a saliva) e incube-os a 37oC em Banho Maria.
- Retire uma amostra de 0,5 mL de cada um dos tubos A e B, a cada 5 minutos, adicionando-as à
respectiva série de pequenos tubos de ensaio numerados.
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- Compare os resultados anotando os tempos necessários para que a amilase torne a reação com iodo
negativa, tanto para o tubo A quanto para o tubo B.

3. Influência do pH

- Prepare 3 tubos de ensaio maiores, de acordo com o seguinte protocolo:

REAGENTES TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3

tampão fosfato pH 6,8 2 mL - -

tampão acetato pH 4,0 - 2 mL -
tampão borato pH 10,0 - - 2 mL
NaCl 4 % 0,5 mL 0,5 mL 0,5 mL
solução de amido 1 % 2 mL 2 mL 2 mL
saliva diluída 50X 1 mL 1 mL 1 mL

- Agite os tubos (Inicie a contagem do tempo ao adicionar a saliva) e incube-os a 37o C em Banho
Maria.
Observe os resultados após 30 minutos de incubação, pela adição de 2 gotas de solução de iodo a cada
tubo. Explique os resultados.

4. Temperatura ótima para atividade

- Prepare 3 tubos de ensaio, de acordo com o seguinte protocolo:

TUBOS NaCl 4% tampão Fosfato Saliva diluída Amido 1% temperatura

(pH 6,8) 50X de incubação

1 1 mL 2 mL 2 mL 4 mL 0ºC
2 1 mL 2 mL 2 mL 4 mL 37ºC
3 1 mL 2 mL 2 mL 4 mL 90ºC

- Agite os tubos (Inicie a contagem do tempo ao adicionar a saliva) e incube-os nas diferentes
temperaturas por 30 minutos.
- Após o período, divida o conteúdo dos tubos 1 e 3 em dois outros tubos, denominando-os tubos 1a,
1b, 3a e 3b, respectivamente.
- Adicione 3 ou 4 gotas de iodo aos tubos 2, 1a e 3a. Observe. Não adicione iodo aos tubos 1b e 3b.
- Coloque para incubar os tubos 1b e 3b, a 37 °C, por 20 minutos. Após o período, adicione 3 ou 4
gotas de iodo a cada tubo. Observe e explique os resultados.

5. Bibliografia

COLLOMICK and KAPLAN - Methods in Enzymology – Volume 1

DIXON and WEBB - Enzymes
LEHNINGER, A.L. - Princípios de Bioquímica, 2002
VOET, D.; VOET, J.G., PRATT, C.W. Fundamentos de Bioquímica, 2000
DEVLIN, T.M. – Manual de Bioquímica com correlações clínicas, 2003
CISTERNAS, J.R.; VARGA, J.; MONTE, O. Fundamentos de Bioquímica Experimental, 2001
RENDINA, G. Técnicas de Bioquímica Aplicada, 1976