GUÍA DE INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS.

1. CAMPO DE APLICACIÓN Y ALCANCE

El presente documento proporciona una guía para la interpretación de los resultados de
tipificación de STRs autosómico empleados en el laboratorio de Genética Forense.

2. EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS

No Aplica

3. DESCRIPCIÓN DE ACTIVIDADES

3.1. Generalidades

La interpretación de los resultados generados a partir de muestras de trabajo de casos de

investigación, es una cuestión de criterio profesional y experiencia sin embargo es
necesario establecer directrices con los criterios mínimos para la interpretación y la
comunicación de los resultados analíticos que son generalmente aceptados en la
comunidad científica en base a los años de experiencia de los laboratorios forenses,
estudios de validación y las referencias bibliográficas.

3.2. Umbrales

3.2.1. Umbral analítico.- El umbral analítico se establece a través de estudios de

validación para cada uno de los kit´s de identificación humana y el umbral
analítico se fija un valor general en RFU para cada uno de los canales dye.
Cualquier pico presente por debajo del umbral analítico se considera que
no se puede distinguir del ruido de fondo y no se considera para el análisis.
Cada instrumento tiene su propia condición de inyección específico para
cada kit. Bajo ninguna causa se debe bajar el umbral analítico establecido
por estudios de validación.

3.2.2. Umbral estocástico.- El umbral estocástico se fija a través de estudios de

validación para cada uno de los kit´s de identificación humana. Cualquier alelo
homocigoto presente por debajo del umbral estocástico no se considera como
homocigoto verdadero, se reporta en el dictamen como: ejem. 11, -, y para realizar
los cálculos estadísticos si un alelo está por DEBAJO del umbral estocástico no se
considerara el marcador en el análisis estadístico y se realiza una anotación en el
pie de la tabla del dictamen.

3.3. Revisión de perfiles genéticos.

La revisión de los perfiles se realiza de acuerdo a los siguientes criterios:

3.3.1. Revisión del LIZ 600

El kit PowerPlex® Fusion System utiliza WEN ILS 500 debido a que utiliza 6 colores de
detección. Los alelos comunes para todos los loci PowerPlex® Fusion System son menores
de 500 pares de bases. El método de tallaje recomendado, Local Southern, utiliza dos
tamaños estándar de los picos más grandes que cada alelo y dos más pequeños que cada
alelo a ser medido. El estándar interno del tamaño se corre con cada muestra y se utiliza
para normalizar diferencias de migración de carril a carril o inyección a inyección,
proporcionando con ello una excelente precisión de tamaño dentro de un conjunto de
inyecciones capilares.

Los estándares de tamaño del WEN ILS 500 analizados deben ser como se demuestra en el
Anexo 1:

A) El parámetro de calidad debe ser igual a 1.0

B) Un rango de 60 a 500.
C) La altura debe estar por arriba del umbral analítico.

En caso de no cumplir con los criterios, repetir el ensayo.

3.3.2. Revisión de escalera alélica (Ladder) en el electroferograma.

El Ladder es utilizado por el software GeneMapper ID-v 1.4 para asignar valores alélicos de
los picos generados por el análisis. El ladder debe ser evaluado para determinar que todos
los picos requeridos se han identificado correctamente para cada locus.

Si a cualquier alelo en el ladder no se le asigna el valor correcto OL (Alelos off-ladder) y un

tamaño estándar, el ladder no puede ser utilizado.

Todos los alelos en la escalera alélica para todos los loci analizados deben ser como lo
muestra el Anexo 2.

A) Igual o mayor que el umbral analítico.

B) En la posición correcta con el fin de utilizar las muestras y los controles asociados.

En caso de no cumplir con los criterios necesarios utilizar otra escalera alélica, importando
un ladder de la carpeta llamada “Ladder” ubicada en el escritorio de la computadora del
analizador genético 3500 (GF-GA-001), siempre y cuando los controles y el LIZ hayan
cumplido con los parámetros establecidos por el laboratorio, quedando registro en el
formato de notas del caso ( ), el nombre de la corrida de la cual se importó el ladder. En
caso de que esto no funcione, repetir el ensayo.
 3.3.3. Revisión de controles.

Los controles son aquellos que verifican el buen funcionamiento del equipo y también el
buen estado de los reactivos utilizados en cada ensayo.

A) Control Negativo.

Son creados al momento de llevar a cabo un ensayo ya sea extracción o amplificación,

está compuesto únicamente de los reactivos que se utilizaron para llevar a cabo el ensayo.
De esta manera se verifica que los reactivos y durante el proceso no exista contaminación.

 Un control negativo aceptable es aquel donde se presenta como una línea basal en
todo el electroferograma no teniendo alelos presentes como lo indica el Anexo 3.

 Un control negativo de electroforesis aceptable sería aquel donde solo se muestre

el corrimiento del LIZ 600 adecuado y la señal producida por el equipo donde no
hay presencia de ningún pico.

Si el resultado del control negativo de extracción y amplificación se presenta un pico por

encima del umbral analítico no atribuible a los artefactos, revisar los controles y
determinar a partir de que etapa del proceso se repetirá el análisis.

 Realizar la extracción o amplificación de la o las muestras y los controles, según sea

el control de la etapa, NO ACEPTABLE.
 En caso de que no vuelva a salir, se extraen o amplifican la o las muestras con un
perito diferente.
 Si no vuelve a salir, se realiza una verificación del kit o las alícuotas para descartar
o confirmar que el kit está funcionando correctamente, en caso contrario desechar
el kit o alícuotas.

Si no es posible el re-análisis, las muestras se pueden interpretar en consulta con el líder

técnico del laboratorio. El líder técnico tendrá en cuenta la altura del pico y el número de
picos con respecto al perfil genético. Esta consulta será documentada quedando registro
en el formato de notas del caso ( ).

B) Control Positivo.

El control positivo es un perfil de ADN conocido que se provee con el kit de amplificación.
Para PowerPlex® Fusion System el control positivo designado es el 2800M. El control
positivo es una prueba de la amplificación y el análisis.

Un control positivo aceptable es aquel donde todos los alelos fueron correctamente
etiquetados (y en el caso donde algún pico o picos fueran etiquetados como “OL”,
mientras se encuentre en la posición esperada, será aceptable el experimento) y todos los
picos se encuentran rebasando los umbrales analíticos específicos. En general, la relación
de la altura del pico para cada locus debe cumplir o superar el 50%. Los resultados de los
controles positivos se encuentran en el Anexo 4.

Control positivo de amplificación.

El control positivo de amplificación debe tener todos alelos descritos por el kit, en la
ubicación correcta con respecto a cada uno de los marcadores genéticos. Si estos alelos
esperados no se encuentran en la posición correcta o están por debajo del umbral
analítico se considerará como No concluyente y se procederá a reinyectar las muestras, en
caso de que siga sin pasar el control positivo se volverá a amplificar las muestras. También
se podrá considerar valido si existe una muestra de control de calidad satisfactorio, bajo
autorización del líder técnico.

Control positivo de extracción.

El control positivo de extracción debe estar positivo en los resultados de cuantificación y

haber obtenido todos alelos de referencia de no ser así o de presentar alguna
contaminación, que este no amplifique o que sea parcial, se deben realizar las siguientes
acciones:
 Revisar los demás controles.
 Realizar la extracción de la o las muestras y los controles.
 En caso de que no vuelva a salir, se extraen las muestras con un perito diferente.
 Si no vuelve a salir, se realiza una verificación del kit o las alícuotas para descartar
o confirmar que el kit está funcionando correctamente, en caso contrario desechar
el kit o alícuotas.

Si el resultado del control positivo de extracción es ACEPTABLE pero el control positivo de

amplificación es INCORRECTO (Que esté contaminado, parcial, no amplifique, etc):

 Volver a amplificar todas las muestras y los controles.

 En caso de que no vuelva a salir, amplificar con un perito diferente.
 Si no vuelve a salir, se realiza una verificación del kit o las alícuotas para descartar
o confirmar que el kit está funcionando correctamente, en caso contrario desechar
el kit o alícuotas.

Si no es posible el re-análisis, las muestras se pueden interpretar en consulta con el líder

técnico del laboratorio. El líder técnico tendrá en cuenta la altura del pico y el número de
picos con respecto al perfil genético. Esta consulta será documentada quedando registro
en el formato de notas del caso ( ).
 3.3.4. Revisión de las muestras.

A) Perdida alélica (Dropout) ó Falta de amplificación de algunos loci.

Al igual que con cualquier sistema de multi-locus, existe la posibilidad de que no todos los
locus sean amplificados. Esto se observa más frecuentemente cuando el ADN ha sufrido
un grave deterioro o cuando el sustrato muestra de ADN contiene inhibidores de la PCR.
La pérdida alélica es un término utilizado para describir cuando alguno de los alelos de los
contribuyente(s) de ADN no se identifican en el electroferograma, cada locus es un
marcador independiente, cuyos resultados no se basan en la información proporcionada
por los otros marcadores. Se debe tener cuidado al interpretar los resultados por debajo
de los umbrales establecidos.

Si se observa una perdida alélica de algún loci se realiza lo siguiente:

 Revisar los datos crudos para verificar, si realmente existe baja cantidad de ADN. Si
se empleo con la cantidad máxima de amplificación (15 µl como dice el protocolo
del kit) de ser así, se reporta como un perfil parcial, de lo contrario se amplifica con
la cantidad máxima o el ADN genómico es concentrado.

 Si las muestras fueron cuantificadas, verificar los resultados de cuantificación para

confirmar los resultados de electroforesis.

 Los electroferogramas obtenidos se diferencian con la condición relevante de

obtención y se almacenan de acuerdo a las políticas del sistema de gestión de
calidad del laboratorio.

B) Degradación de la muestra.

El ADN degradado por lo general se puede identificar debido a que los loci de menor
tamaño tendrán un mejor desempeño en la amplificación a diferencia de los loci de mayor
tamaño amplificado en menor medida o nada en absoluto (efectos estocásticos). El perfil
tiene un aspecto de pendiente hacia abajo de los fragmentos más pequeños hasta los más
grandes. Si la muestra es excesiva y se amplifica, podría tener un aspecto similar a una
muestra degradada.

Si se observa una degradación de la muestra se realiza lo siguiente:

 Revisar los datos crudos para verificar, si realmente existe baja o alta cantidad de
ADN. Si esta es alta, se realiza una dilución del amplicón con agua libre de
nucleasas, agua destilada o TE en el área de electroforesis capilar tomando como
referencia el pico de altura más bajo. Tomando en cuenta si se realiza una dilución
de 1:10 los picos resultantes tendrán una altura menor del 10% aproximadamente
de los picos detectados con anterioridad (Ver Anexo 5).
  Si esta es baja, ver si se utilizo la cantidad máxima para amplificar (15 µl como dice
el protocolo del kit) de no ser así, se amplifica con la cantidad máxima o el ADN
genómico concentrado.

 Si se obtiene un perfil parcial está permitido consensar los resultados de diferentes

amplificaciones del mismo extracto (ADN Purificado) de una misma muestra para
determinar un perfil genético final de ADN. Los resultados de las tres diferentes
amplificaciones deben ser consistentes para los diferentes locus. El analista debe
tener cuidado de la interpretación de los datos de todas las amplificaciones. Si
todas las amplificaciones se han hecho desde el mismo extracto, entonces el
resultado se reportará sólo con los alelos comunes a todas las amplificaciones en la
tabla de resultados.

 En caso de presentarse dicha situación, todos los electroferogramas generados

deben imprimirse para anexarse en el expediente del caso y realizando el registro
de todas las acciones tomadas en el formato de notas del caso ( ). Si no se obtiene
un perfil completo con los perfiles de consenso se reporta como perfil parcial.

 Si las muestras fueron cuantificadas, verificar los resultados del parámetro de

índice de degradación para confirmar una degradación de la muestra, siendo el
valor observado, un dato orientativo.

 Los electroferogramas obtenidos se diferencian con la condición relevante de

obtención y se almacenan de acuerdo a las políticas del sistema de gestión de
calidad del laboratorio.

C) Baja cantidad de copias de ADN.

Cuando el número total de copias del alelo añadidos a la PCR es extremadamente baja, la
amplificación desequilibrada de los dos alelos de un individuo heterocigoto puede ocurrir.
Esto es debido a la fluctuación estocástica en la relación de los dos alelos diferentes.

Cada conjunto de datos de fuentes con bajas copias de ADN pueden producir resultados
interpretables ligeramente diferentes ya que cada una de las amplificaciones puede
contener una dosis diferente de cada fragmento de blancos de ADN.

El analista debe tener cuidado de la interpretación de los datos de todas las

amplificaciones.

Si se observa baja cantidad de copias de ADN se realiza lo siguiente:

 Revisar los datos crudos para verificar, si realmente existe baja o alta cantidad de
ADN. Si esta es alta, se realiza una dilución del amplicón agua libre de nucleasas,
 agua destilada o TE en el área de electroforesis capilar, tomando como referencia
el pico de altura más bajo. Tomando en cuenta si se realiza una dilución de 1:10 los
picos resultantes tendrán una altura menor del 10% aproximadamente de los picos
detectados con anterioridad (Ver Anexo 5).
 Si esta es baja, ver si se utilizo la cantidad máxima para amplificar (15 µl como dice
el protocolo del kit) de no ser así, se amplifica con la cantidad máxima o el ADN
genómico concentrado.

 Si se obtiene un perfil parcial está permitido consensar los resultados de diferentes

amplificaciones del mismo extracto (ADN Purificado) de una misma muestra para
determinar un perfil genético final de ADN. Los resultados de las tres diferentes
amplificaciones deben ser consistentes para los diferentes locus. El analista debe
tener cuidado de la interpretación de los datos de todas las amplificaciones. Si
todas las amplificaciones se han hecho desde el mismo extracto, entonces el
resultado se reportará sólo con los alelos comunes a todas las amplificaciones en la
tabla de resultados.

 En caso de presentarse dicha situación, todos los electroferogramas generados

deben imprimirse para anexarse en el expediente del caso y realizando el registro
de todas las acciones tomadas en el formato de notas del caso ( ). Si no se obtiene
un perfil completo con los perfiles de consenso se reporta como perfil parcial.

Los electroferogramas obtenidos se diferencian con la condición relevante de

obtención y se almacenan de acuerdo a las políticas del sistema de gestión de
calidad del laboratorio.

 Si las muestras fueron cuantificadas, verificar los resultados de cuantificación para

confirmar una baja cantidad de copias de ADN por el número de ciclos a través del
Ct.

D) Alta cantidad de copias de ADN.

Cuando el número total de copias del alelo añadidos a la PCR es extremadamente alto, los
electroferogramas obtenidos hacen más difícil la interpretación debido a la aparición de
múltiples artefactos. Para estas muestras se hacen diluciones cuando se observen picos en
varios marcadores.

Si se observa alta cantidad de copias de ADN se realiza lo siguiente:

 Si las muestras fueron cuantificadas, verificar los resultados de cuantificación y si

hay una alta cantidad de ADN se realiza una normalización (ajuste de la cantidad
de ADN) dividiendo 1 entre el resultado obtenido de ADN humano, tomando en
cuenta que se necesita 1 ng/µl.
  Revisar los datos crudos para verificar, si realmente existe alta cantidad de ADN. Si
esta es alta, se realiza una dilución del amplicón con agua libre de nucleasas, agua
destilada o TE en el área de electroforesis capilar tomando como referencia el pico
de altura más bajo. Tomando en cuenta si se realiza una dilución de 1:10 los picos
resultantes tendrán una altura menor del 10% aproximadamente de los picos
detectados con anterioridad (Ver Anexo 5).

 En caso de presentarse dicha situación, todos los electroferogramas generados

deben imprimirse para anexarse en el expediente del caso y realizando el registro
de todas las acciones tomadas en el formato de notas del caso ( ).

Los electroferogramas obtenidos se diferencian con la condición relevante de

obtención y se almacenan de acuerdo a las políticas del sistema de gestión de
calidad del laboratorio.

E) Inhibidores.

Los inhibidores son compuestos que se encuentran en el sustrato de una mancha o de

materia biológica que pueden interferir con el proceso de amplificación. Los inhibidores
pueden causar un aspecto diferente en cada conjunto de datos y tienen diferentes efectos
en cada locus.

El analista debe ser consciente de que la deserción alélica es posible cuando los
resultados son menores del umbral estocástico.

Se realiza lo siguiente:

 Verificar los controles positivos de cada proceso que hayan salido correctamente,
en caso contrario volver a repetir el proceso de amplificación o extracción
dependiendo de los resultados de los controles.

 Si las muestras fueron cuantificadas, verificar los resultados de cuantificación para

confirmar una inhibición ADN a través del valor de IPC.

 En caso de presentarse dicha situación, todos los electroferogramas generados

deben imprimirse para anexarse en el expediente del caso y realizando el registro
de todas las acciones tomadas en el formato de notas del caso ( ).

Los electroferogramas obtenidos se diferencian con la condición relevante de

obtención y se almacenan de acuerdo a las políticas del sistema de gestión de
calidad del laboratorio.
 F) Artefactos.

Son picos adicionales que aparecen en el electroferograma pero no corresponden a una

característica genética de la muestra ya que son producto de la técnica utilizada, sea
durante la amplificación o genotipificación deben estar etiquetados en el
electroferograma como artefactos (Figura 1).

 Artefactos producidos por PCR:

1. Sttuters
2. Adenilación (-A)

 Artefactos producidos por el instrumento:

1. Pull-Up
2. Spike
3. Dyeblot

Figura 1. Posibles artefactos visualizados en el electroferograma.

J.M. Butler (2005) Forensic DNA Typing, 2nd Edition © 2005 Elsevier Academic Press

 Artefactos producidos por PCR:

1. Stutter (tartamudeo).
Es un artefacto producido durante la PCR por la Polimerasa, se observa en el
electroferograma como un pico ubicado una unidad de repetición antes (n-4) o después
(n+4) del alelo verdadero y su altura generalmente es del 10% de la altura total del alelo.
Son producidas por una o dos replicas. Sin embargo en este laboratorio se emplea el 15%
de la altura total del alelo, antes (n-4) o después (n+4) del alelo verdadero, lo cual está
definido en el método de análisis en el software GeneMapper® utilizado por este
laboratorio como se muestra en la Tabla 1.

AGREGAR IMAGEN DEL METODO DE ANALISIS ESTABLECIDO EN GENMAPPER

Tabla 1. (%) Porcentaje de stutter establecidos por el proveedor para cada uno de los
marcadores.

Los resultados de la tipificación de una muestra de una sola fuente se pueden considerar
como concluyente aun cuando los picos de los Stutter estén presentes.

Hay que tomar en cuenta que en mezclas de perfiles genéticos, los picos menores en la
posición de Sttuter que no son indistinguibles de Stutter deben ser interpretados por el
perito pero no deberá apoyarse en el software de la computadora para discriminar los
alelos verdaderos de los
pull-up.

2. Adenilación (-A).
Es un artefacto producido durante la PCR por la Polimerasa debido a la falta de tiempo
para adicionar una Adenina al final de cada secuencia replicada, este se observa de un
tamaño menor (un par de base) al alelo real.

 Si se observa este tipo de artefacto, se realiza una amplificación del amplicon

obtenido a 60 ° C por 40 minutos.

 Todos los electroferogramas generados deben imprimirse para anexarse en el

expediente del caso y realizando el registro de todas las acciones tomadas en el
formato de notas del caso ( ).

Los electroferogramas obtenidos se diferencian con la condición relevante de

obtención y se almacenan de acuerdo a las políticas del sistema de gestión de
calidad del laboratorio.

 Artefactos producidos por el instrumento:

1. Pull-up (levantamiento o reflejo).

Los colorantes utilizados para etiquetar los fragmentos de ADN durante la amplificación
tienen superposición espectral lo que significa que una señal fuerte de un solo color
puede producir una respuesta más débil en otro color. La matriz que se aplica a una
ejecución matemáticamente filtra esta superposición de los resultados.

Cuando el solapamiento espectral se observa se demuestra por la aparición de pequeños

picos de color diferente bajo un pico real. Estos picos se llaman Pull-Ups. Los picos más
pequeños serán exactamente del mismo tamaño o muy cerca en pb al ápice del pico real.
La aplicación de una matriz no óptima puede causar pull-up.

2. Separación espectral incompleta /Pull up.

Generalmente los Pull-up se pueden observar cuando todos los alelos son sobrepuestos
usando el software y el pull-up es observado como un relativo pico pequeño localizado
directamente bajo el pico largo. El perito debe estar consiente de este fenómeno y usar el
software de la computadora.

 Revisar los datos crudos para verificar, si realmente existe alta cantidad de ADN. Si
esta es alta, se realiza una dilución del amplicón con agua libre de nucleasas, agua
destilada o TE en el área de electroforesis capilar, tomando como referencia el pico
de altura más bajo. Tomando en cuenta si se realiza una dilución de 1:10 los picos
resultantes tendrán una altura menor del 10% aproximadamente de los picos
detectados con anterioridad (Ver Anexo 4).

 Verificar la fecha en que se cargo la matriz, si es mayor a un año cambiarla y volver

a inyectar las muestras.

 Todos los electroferogramas generados deben imprimirse para anexarse en el

expediente del caso y realizando el registro de todas las acciones tomadas en el
formato de notas del caso ( ).

Los electroferogramas obtenidos se diferencian con la condición relevante de

obtención y se almacenan de acuerdo a las políticas del sistema de gestión de
calidad del laboratorio.

3. Spike (espiga).

Los picos son afilados y estrechos generalmente presentes en todos los colores y se
producen en la misma ubicación. Esto es a menudo causado por anomalías eléctricas o por
burbujas de aire y los cristales de urea.
  Verificar que efectivamente se trata de un spike y checar si no interfiere en la
interpretación de los resultados. Si no interfiere se deja registro en formato de
notas del caso ( ) de dicho artefacto. Si interfiere verificar que no existan burbujas
en los conductos de la bomba del analizador genético, remover dichas burbajas y
reinyectar las muestras.

 Todos los electroferogramas generados deben imprimirse para anexarse en el

expediente del caso y realizando el registro de todas las acciones tomadas en el
formato de notas del caso ( ).

Los electroferogramas obtenidos se diferencian con la condición relevante de

obtención y se almacenan de acuerdo a las políticas del sistema de gestión de
calidad del laboratorio.

4. Dye blobs (Gotas de tinte).

Los picos amorfos que ocurren cuando los tintes fluorescentes se separan de su primer
respectivo y migran durante la electroforesis capilar. Si la relación con la altura máxima de
la anchura de la base es muy baja, entonces no es probable que el resultado sea un pico
real.

 Verificar que efectivamente se trata de un dye blobs y realizar el registro en el

formato de notas del caso ( ).

5. Off ladder (OL).

Son alelos que quedan fuera de los bins de la escalera alélica, generalmente si el alelo cae
dentro del bin, que es la categoría definida por la escalera alélica el software lo etiquetara
según su tamaño, pero si no es así se etiquetara como OL que serian, como alelos virtuales
que previamente han sido caracterizados pero que no están en la escalera presentes. En
caso de presentarse O.L., realizar un segundo corrimiento, en dado caso que la presencia
de O.L persista, se realizará una segunda amplificación para confirmar que se trata de una
microvariante verdadera, si está presente nuevamente se realiza el cálculo de la
microvariante. Verificar si se presentan en uno o más marcadores, así como el número en
pares de bases en la base de datos de STR’s, y si es un alelo nuevo, asignarlo de acuerdo a
lo siguiente:
Identificar el tipo de STR´ donde se presenta la variante o microvariante y el analizador
genético que da como respuesta “OL”, los cuales pueden ser: STR’s trinucleotido, STR’s
tetranucleotido, STR’s pentanucleotido.

 Heterocigoto

 = S -L = 244.34 - 244.46 = -0.12 bp

1 25 25
 =S - L = 257.51-256.64 = +0.87 bp
2 OL 28
c = | - | = |-0.12-0.87| = 0.99 bp
1 2

Figura 2. Imagen tomada de 6.6, J.M. Butler (2005) Forensic DNA Typing, 2nd Edition ©
2005 Elsevier Academic Press, se muestras la diferencia de tamaño entre el alelo de la
muestra 25 y el alelo de la escalera 25, que es -0,12 pb (δ1), mientras que el alelo fuera
de escalera "se diferencia del alelo de la escala 28 por 0,87 pb (δ2). El cambio de pico
relativo entre los dos alelos en esta muestra es heterocigótico 0,99 pb (| δ1-δ2 |) y por lo
tanto el alelo 'fuera de escalera' es 1 pb más grande que el alelo 28 por lo que es un
verdadero 28,1 microvariante en el locus FGA. La presencia de una microvariante STR en
un locus particular, por lo general se hace evidente a raíz de una comparación con una
escalera alélica compuesta de alelos caracterizados para ese locus. Sin embargo, no todos
los alelos (particularmente alelos raros microvariantes) se pueden incorporar en la
escalera alélica utilizado para marcadores STR genotipo. Por lo tanto, se puede realizar la
interpolación de los datos de picos que migran entre dos alelos o extrapolación de datos
caracterizados a partir de picos que caen fuera del rango del alelo esperado. Se tiene que
tener precaución, ya que aunque los alelos 'fuera del ladder' son más de una o dos
repeticiones de distancia del alelo más cercano en la escala desde repite el
tetranucleotido no siempre el tamaño es exactamente 4,0 pb (ver Gill et al. 1996, Applied
Biosystems 1999, Butler et al., 2004). Si un pico de alelo cae entre los alelos nominales
presentes en la escalera alélica, la muestra puede ser designada por el número de alelo
seguido por un '.x' (Crouse et al. 1999). Por ejemplo, el alelo más grande FGA mostrado
en la Figura 6.6 se designa como un alelo '28 .x '. Sin embargo, es más común etiquetar
alelos variantes por su contenido calculado de repetición (por ejemplo, 28,1). Si un alelo
migra por encima o por debajo de la escalera alélica definida, el alelo se puede describir
como ">" o "<' que el alelo más cercano (Crouse et al., 1999).

 Homocigoto ó heterocigoto
 = L -L = 260.74 – 256.64 = 4.1 bp Tetranucleótido
1 29 28
 = L28- SOL= 256.64 – 257.51 = -0.87 bp es igual a un par base ± 0.5pb
2

Figura 3. En esta imagen se realiza otra fórmula donde se calcula sólo la diferencia que
existe entre un alelo y otro de la escalera, para determinar de qué tipo de unidad de
repetición se trata, posterior mente se calcula la diferencia entre el alelo más cercano y el
OL de la muestra, teniendo en cuenta que tiene una variación de ±0.5pb, siempre que se
trate del mismo sistema de amplificación.

STR’s TETRANUCLEOTIDO
L28 + 1pb Alelo = 28.1
L28 + 2pb Alelo = 28.2
L28 + 3pb Alelo = 28.3
L28 + 4pb Alelo = 29
En este caso sería 28.1 SOL

Tipos de Unidades de Repeticiones de STR Ejemplo

• Dinucleótido (CA)(CA)(CA)(CA)
• Trinucleótido (GCC)(GCC)(GCC)
• Tetranucleótido (AATG)(AATG)(AATG)
• Pentanucleótido (AGAAA)(AGAAA)
• Hexanucleótido (AGTACA)(AGTACA)
Tabla 2. Repeticiones de STR

STR’s TETRANUCLEOTIDO
L23 + 4pB Alelo = 24
L23 + 8pB Alelo = 25
L23 + 12pB Alelo = 26
L23 + 16pB Alelo = 27

STR’s Alelo pb Suma pb Desviación

TETRANUCLEOTIDO Real Teórico Estándar
L23 23 236.43 236.43 - 0.01
L23 + 4pb 24 240.44 236.43 + 4 240.43 0.02
L23 + 8pb 25 244.46 236.43 + 8 244.43 0.05
L23 + 12pb 26 248.50 236.43 + 12 248.43 0.09
L23 + 16pb 27 252.56 236.43 + 16 252.43 0.15
L23 + 20pb 28 256.64 236.43 + 20 256.43 0.22
L23 + 24pb 29 260.74 236.43 + 24 260.43 0.01
Para los estudios de precisión: Los tamaños de pares de Media 0.09
bases calculados para productos de amplificación de los Desviación
alelos STR se miden. La variación entre las pares de base Estándar
calculados por las repeticiones de todos los alelos medidos,
tienen que estar en un rango de ± 0.5pb, que es la 0.08
desviación aceptable, medido para el alelo correspondiente
en la escalera alélica. J.M. Butler (2005) Forensic DNA
Typing, 2nd Edition © 2005 Elsevier Academic Press.
Tabla 3. Variaciones de STR´s

En la página siguiente se pueden consultar las trisomias, variantes y microvariantes que

se han reportado en otros Laboratorios en varias partes del mundo.

http://www.cstl.nist.gov/biotech/strbase/var_tab.htm

 La manera de reportar los alelos OL en caso de ser un heterocigoto es en pares de

base por ejemplo: 25, (257.51 pb)* y en caso de ser homocigoto sólo se agregan
 los pares de base, ejemplo: (257.51 pb)* y agregar en ambos casos una anotación
en el pie de la tabla del dictamen así como realizar el registro en el formato de
notas del caso ( )“Existe la presencia de una microvariante” y reportarla en N
pares de bases o el número del alelo obtenido después de la interpretación del OL .

6. Patrones Trialélicos.

En algunas ocasiones se observan “tres picos” en algún marcador genético, fenómeno

muy frecuente que aparece en un solo locus. Cuando esto suceda primero deberá
evaluarse el control de calidad del laboratorio y descartar una posible contaminación, una
mezcla de perfiles genéticos, o si realmente se trata de alguna duplicación de cromosomas
lo que podría concebirse como un patrón trialélico.

Los Patrones trialélicos generalmente caen en uno de dos grupos diferentes en función de
las alturas relativas de los picos:

Figura 4. Patrones trialélicos de Tipo 1: La Figura 5. Patrones trialélicos de Tipo 2:

suma de las alturas de dos de los picos es altura de los picos equilibrados
igual a la tercera.
http://www.cstl.nist.gov/div831/strbase/tri_tab.htm

Tipo 1: Suelen ser el resultado de una mutación somática en un locus heterocigoto

durante el desarrollo del individuo. Se produce una quimera con algunas células con el
alelo original y otras con el mutado.
Tipo 2: Suelen ser el resultado de un evento de duplicación localizado, de una aneuploidia
cromosómica o de reordenamientos cromosómicos.

En caso de presentarse patrones trialélicos, realizar una segunda amplificación para

confirmar que es un trialélo, si está presente en el resultado del primer electroferograma,
ambos electroferogramas generados se imprimen para anexarse en el expediente del
caso y realizar el registro de todas las acciones tomadas en el formato de notas del caso (
), si en dado caso que en la segunda amplificación no persiste el resultado del primer
electroferograma, se realizará una tercera amplificación para corroborar los dos
resultados previos y poder realizar un consenso.

Los electroferogramas obtenidos se diferencian con la condición relevante de obtención y

se almacenan de acuerdo a las políticas del sistema de gestión de calidad del laboratorio.

7. Mutaciones.

Es el cambio o cambios ocurridos en la secuencia del ADN, este fenómeno es muy

frecuente que aparece en un solo locus. Los cuales pueden ser de la siguiente manera:

Figura 6. Expresión de mutaciones en electroferogramas

Únicamente se verifica una mutación en casos de paternidad. En caso de presentarse una

mutación, corroborar que efectivamente se trata de una a través de una segunda
amplificación o bien si se da el caso que en la segunda amplificación se obtenga un
resultado diferente al obtenido de la primera amplificación, se realizará una tercera
amplificación para poder realizar un consenso, guardando en todo momento registro de lo
realizado en el formato de notas del caso,

Durante el cálculo de relación de parentesco es probable que encontremos situaciones

donde el genotipo del padre alegado coincide con el hijo en todos los marcadores,
excepto en uno de los loci. Este tipo de situaciones puede ser explicado debido a una
mutación. Una vez corroborado se utiliza el método de AABB (American Association of
Blood Banks).

 Método AABB.

Establece que una exclusión de paternidad puede ser considerada si se encuentran

discordancias en dos o más locis evaluados. En caso contrario deberá ser calculado
mediante la taza de mutación del marcador o AMPI (Average Mutation Paternity Index)
para el locus en el cual se considera la mutación. Dicho promedio de mutación se
encuentra mostrada en la siguiente tabla

STR System Mutation Rate

CSF1PO 0.20%
FGA 0.37%
TH01 0.01%
TPOX 0.01%
VWA 0.32%
D3S1358 0.16%
D5S818 0.17%
D7S820 0.13%
D8S1179 0.20%
D13S317 0.17%
D16S539 0.11%
D18S51 0.25%
D21S11 0.17%
Penta D 0.02%
Penta E 0.02%
D2S1338 0.15%
D19S433 0.07%
SE33 (ACTBP2) 0.64%
Tabla 4. Frecuencia de mutación calculada en pruebas de parentesco (μ)*. *Data used
with permission from American Association of Blood Banks (AABB) 2008 Annual Report.

El AMPI es calculado mediante la frecuencia de mutación del marcador “µ” sobre la

probabilidad de exlcusión del padre alegado.

𝜇
𝑃𝐼 =
𝑃𝑟𝑜𝑏𝑎𝑏𝑖𝑙𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑑𝑒 𝑒𝑥𝑐𝑙𝑢𝑠𝑖ó𝑛

3.4. Interpretación de las muestras (Fuente única).

3.4.1. Resultados de amelogenina.

En raras circunstancias el resultado de la amelogenina del cromosoma Y no

apareciera. Por lo tanto, si el kit cuenta con otra región Y-STR esta podrá ser empleada
para determinar si el perfil genético proviene de un hombre o una mujer.
 3.4.2. Relación Altura de Picos (PHR).

Las muestras se examinarán para revisar el equilibrio en cada locus. Basado en estudios de
validación y los valores establecidos por el proveedor, las muestras de una sola fuente
deberán mostrar relaciones de altura del pico de heterocigotos (PHR) mayor o igual a 70%
cuando los dos picos estén por encima del umbral estocástico. Sin embargo si esta
relación se encuentra por debajo del 70%, el PHR se puede considerar mayor al 60%,
únicamente en muestras de una sola fuente, que todos los picos sobrepasen el umbral
estocástico y que esta relación de 60% se encuentre en 5 marcadores o menos. Un valor
bajo de PHR puede indicar un alelo nulo, una mutación en el sitio de unión del iniciador,
degradación, o la presencia de inhibición.

3.4.3. Perfil genéticos compuestos.

Está permitido combinar los resultados de diferentes amplificaciones del mismo extracto
(ADN Purificado) de una misma muestra para determinar un perfil genético final de
ADN. Los resultados de las tres diferentes amplificaciones deben ser consistentes para los
diferentes locus.

Cada conjunto de datos de fuentes con bajas copias de ADN pueden producir resultados
interpretables ligeramente diferentes ya que cada una de las amplificaciones puede
contener una dosis diferente de cada fragmento de blancos de ADN.

El analista debe tener cuidado de la interpretación de los datos de todas las

amplificaciones. Si todas las amplificaciones se han hecho desde el mismo extracto
entonces un resultado de consenso puede alcanzarse usando uno de dos métodos:

 Sólo los alelos comunes a todas las amplificaciones pueden ser incluidos en la tabla
de resultados.

En caso de presentarse dicha situación, todos los electroferogramas generados deben

imprimirse para anexarse en el expediente del caso y realizando el registro de todas las
acciones tomadas en el formato de notas del caso ( ). Si no se obtiene un perfil completo
con los perfiles de consenso se reporta como perfil parcial.

Los electroferogramas obtenidos se diferencian con la condición relevante de obtención y

se almacenan de acuerdo a las políticas del sistema de gestión de calidad del laboratorio.
 3.4.4. Perfil genéticos completo o de fuente única

En general se considera que la muestra se originó a partir de un solo individuo por lo que
no se deben presentar más de dos alelos en todos los loci de los cuales se obtuvieron
resultados de tipificación (aunque puede ocurrir un loci tri-alélico).

 Las relaciones de altura de pico PHR para todos los heterocigotos deben cumplir o
superar el determinado en los estudios validación y los valores establecidos por el
proveedor.

 Las alturas de los picos en alelos homocigotos suelen ser aproximadamente el

doble de la altura de los alelos heterocigotos y estos deben de estar por arriba del
umbral estocástico.

Verificar que no exista un exceso de ADN a través de los datos crudos, ya que podrían
producirse ausencia de picos (alelos). Si esta es alta, se realiza una dilución del amplicón
con agua libre de nucleasas, agua destilada o TE en el área de electroforesis capilar
tomando como referencia el pico de altura más bajo. Tomando en cuenta si se realiza una
dilución de 1:10 los picos resultantes tendrán una altura menor del 10%
aproximadamente de los picos detectados con anterioridad (Ver Anexo 5).

 Las altas cantidades de ADN pueden producir también la adenilación, ya que las
adeninas se pueden limitar o que no hay suficiente tiempo para adicionar una “A”
a todos los productos. Lo cual produce un fragmento amplificado incompleto en
ciertos marcadores.

 Si, esto ocurre realizar una incubación Post PCR 60°C da mayor tiempo para
la adición de “A”. El tiempo de extensión en el ciclo final de la PCR será de 40
min.

Cuando los picos se encuentren por debajo del umbral estocástico se podrá realizar una
evaluación por consenso de tres amplificados del mismo extracto como mínimo, donde
serán validos dos de tres repeticiones y cuando se encuentren por arriba del umbral
analítico.

3.4.5. Resultados y comparación

Para reportar un perfil genético como perfil completo deberá contener todos los alelos de
los 16 a 24 marcadores empleados por el kit. Se reportará como perfil parcial aquellos que
contengan menos de 16 a 13 locus empleados por el kit utilizado. En caso de que no se
obtengan trece marcadores se reportará que no se obtuvo perfil genético.
En caso de que un alelo perteneciente a un locus se encuentre por debajo del umbral
estocástico, no se considerara el marcador en el análisis estadístico y se realiza una
anotación en el pie de la tabla del dictamen y reportar la ausencia del alelo con un guión.
Ejemplo: 12, - .

3.4.6. Concordancia

Si existe concordancia entre perfiles genéticos obtenidos a partir de una muestra de

referencia con los encontrados en indicios, siempre y cuando exista una total
correspondencia en todos los loci, se calcula el inverso de la frecuencia del perfil genético
en la población para determinar el Random Match Probability (RMP).

 Trío estándar

Este cálculo se basa en el hecho de que en ausencia de mutación, el descendiente recibe

un alelo igual al de cada uno de sus padres biológicos en cada uno de los locus
examinados.

Si existe una concordancia de parentesco y se cuenta con el trío estándar (Padre, madre e
hijo) se utilizaran las siguientes formulas para los cálculos estadísticos (IP, CPI Y W) (Tabla
5).

HIJO MADRE PADRE ALEGADO PI

P p p 1⁄
𝑝

pq 1⁄
2𝑝
Pq pp 1⁄
𝑝

pq 1⁄
2𝑝
pz 1⁄
2𝑝
pq P pq 1⁄
2𝑞
qq 1⁄
𝑞

qz 1⁄
2𝑞
 Pq pp 1⁄
(𝑝 + 𝑞)
pq 1⁄
(𝑝 + 𝑞)
pz 1⁄
[2(𝑝 + 𝑞)]
Pz pq 1⁄
2𝑞
qq 1⁄
𝑞

qz 1⁄
2𝑞
qm 1⁄
2𝑞
Tabla 5. Formulas para trío estándar.

Ejemplo: Llegan al laboratorio tres muestras de referencia con la finalidad de determinar

la paternidad de un individuo. Los genotipos obtenidos son los siguientes:
Consideraciones: Madre (M), Padre Alegado (PA) e Hijo (C).

MARCADOR: D7S820

F16 = 0.1684
F17 = 0.2168

Hipótesis de la fiscalía

P (Hp /E) = ¿Cuál es la probabilidad de tener

el perfil genético del hijo dado que el Padre
Alegado (PA) es el padre biológico?

P (Hd /E)= ¿Cuál es la probabilidad de tener el perfil genético del hijo dado que cualquier
otro individuo de la población es el padre biológico?

PI (Índice de Paternidad)

1
⁄ 1
𝑞 = 0.1684 = 5.93
Interpretación
La probabilidad de obtener este genotipo es 5.93 veces más probable si el padre alegado
es el padre biológico contra otra persona no relacionada, no muestreada y tomada al azar
de la población.

Probabilidad de Paternidad

𝐶𝑃𝐼 5.93
𝑊= = = 0.85
𝐶𝑃𝐼 + 1 5.93 + 1
Interpretación

La probabilidad de que el padre alegado sea el padre biológico es del 85% dado el perfil
genético del hijo.

 Paternidad con un solo progenitor.

En algunas ocasiones es solicitado el estudio de paternidad, no se tiene a la madre

disponible para realizar el estudio. No obstante, la hipótesis se puede conservar de la
misma manera:

Hp= El padre alegado es el verdadero padre e hijo;

Hd= El verdadero padre es una persona no relaciona elegida al azar.

Si existe una concordancia con y se cuenta únicamente con un solo progenitor (Padre e
hijo o Madre e hijo) se utilizaran las siguientes formulas (Tabla 6).

HIJO PADRE ALEGADO PI

p P 1⁄
𝑝

pq 1⁄
2𝑝
pq P 1⁄
2𝑝
pq 𝑝+𝑞
⁄4𝑝𝑞

pz 1⁄
4𝑝
Tabla 6. Formulas para “Un solo progenitor”.

Ejemplo: Llegan al laboratorio de genética dos muestras de referencia con la finalidad de

determinar la paternidad de un individuo. Los genotipos obtenidos son los siguientes:
 MARCADOR: D7S820

F16 = 0.1684
F17 = 0.2168

Hipótesis de la fiscalía

P (Hp /E) = ¿Cuál es la probabilidad de tener

el perfil genético del hijo dado que la
Madre Alegado (MA) es el padre biológico?

PI (Índice de Paternidad)

1 1 1
𝑃𝐼 = = = 2.96
2𝑝 2 (𝑓16) 2 (0.1684)
Interpretación

La probabilidad de obtener este genotipo es 2.96 veces más probable si la madre alegada
es la madre biológica contra otra persona no relacionada, no muestreada y tomada al azar
de la población.

Probabilidad de Paternidad

𝐶𝑃𝐼 2.96
𝑊= = = 0.74
𝐶𝑃𝐼 + 1 2.96 + 1
Interpretación

La probabilidad de que la madre alegada sea la madre biológica es del 74% dado el perfil
genético del hijo.

 Paternidad reversa

La identificación de restos retos humanos como parte de la investigación de personas

desaparecidas o en desastres masivos, presenta diferentes cuestionamientos respecto a la
identidad de las personas y la relación filiar con su madre y padre muestreados. Esta es
básicamente la hipótesis opuesta a la considerada inicialmente en las pruebas de
paternidad: “Dado el genotipo de hijo, ¿Quiénes son los padres?” las muestras
examinadas serían las mismas que en un trío standard en donde tenemos las figuras de la
Madre alegada (MA), Padre alegado (PA) e hijo. A partir de estos se plantearían las
hipótesis:

Hp= Los restos óseos provienen del hijo desaparecido si el padre alegado y la madre
alegada son los biológicos;
Hd= Los restos óseos no provienen del hijo desaparecido.

Ejemplo: Para establecer cualquier relación de parentesco tenemos que identificar los
alelos que comparten entre padres y los restos o indicio. Y establecer las hipótesis que se
van a incluir en el cálculo del Índice de paternidad.

MARCADOR: D7S820

F16 = 0.1684
F17 = 0.2168

Hipótesis de la fiscalía

P (Hp /E) = ¿Cuál es la probabilidad de que el perfil genético provenga del hijo
desaparecido dado que el Padre Alegado y la Madre Alegada son los padres biológicos?

𝐻𝑃
𝑃 ( ) = 𝑃(𝑀𝐴 → 16)𝑃 (𝑃𝐴 → 17) + 𝑃(𝑀𝐴 → 17)𝑃(𝑃𝐴 → 16)
𝐸

Hipótesis de la fiscalía

P (Hp /E) = ¿Cuál es la probabilidad de tener el perfil genético obtenido no provenga del
hijo desaparecido?

𝐻𝑑
𝑃( ) = 𝑃(𝑅𝑊 → 16)𝑃 (𝑅𝑀 → 17) + 𝑃(𝑅𝑊 → 17)𝑃(𝑅𝑀 → 16)
𝐸

PI (Índice de paternidad)

𝐻
( 𝐸𝑃 ) 𝑃(𝑀𝐴 → 16)𝑃 (𝑃𝐴 → 17) + 𝑃(𝑀𝐴 → 17)𝑃(𝑃𝐴 → 16)
𝑃 =
𝐻 (𝑅𝑀 → 17) + 𝑃(𝑅𝑊 → 17)𝑃(𝑅𝑀 → 16)
( 𝐸𝑑 ) 𝑃(𝑅𝑊 → 16)𝑃

𝐻 1 1⁄
( 𝐸𝑃 ) 0 ∗ 0 + 2 (1) 2 = 6.85
𝑃 = =
𝐻𝑑 (0.1684)(0.2168) + (0.2168)(0.1684) 0.073
(𝐸)
Interpretación

La probabilidad de que el genotipo provenga del hijo desaparecido es de 6.85 veces más
probable si el padre alegado y la madre alegada son los padres biológicos contra otras
personas no relacionadas, no muestreadas y tomadas al azar de la población

Probabilidad de Paternidad

𝐶𝑃𝐼 6.85
𝑊= = = 0.87
𝐶𝑃𝐼 + 1 6.85 + 1
Interpretación

La probabilidad de que el padre alegado y la madre alegada sean los padres biológicos es
del 87% dado el perfil genético de los restos.

 Hermandades

En estos casos se observa que no se cuentan con alelos obligados (Alelos de los padres),
por tanto se toman los alelos observados en ambos individuos como alelos IDÉNTICOS
POR DESCENDENCIA (IPD).

A partir de esto podemos tomar consideraciones las cuales podrán ser aplicadas
directamente en las formulas, tales como:

a) Se considerará al Individuo 1 como “C1”

b) Se considerará al individuo 2 como “C2”
c) Se describirá a la madre con la letra M y al padre con la letra P

Tomando en cuenta el perfil de uno de los descendientes, se puede inferir al menos el

50% del perfil de los padres, y es a partir de esto donde podemos presentar cuatro
diferentes posibilidades.
 Los hermanos:
 Comparten ambos alelos ej. (C2= 15, 18)

 Comparten solo el alelo p ej. (C2=15, 20)

 Comparten solo el alelo q ej. (C2=18, 20)

 No comparten ningún alelo ej. (C2=

20,23)

A estas cuatro posibilidades de que C2” pueda heredar los mismos alelos que C1 de los
padres se denominan COEFICIENTE DE PARENTESCO.

Entonces, la probabilidad de observar el genotipo C2 es la suma de todas las

probabilidades en las que C1 puede compartir alelos con C2.

 Abuelidades

En algunas situaciones no se cuenta con familiares directos que puedan proveer

información para la identificación de las personas, no obstante se puede realizar los
cálculos estadísticos para sustentar una relación de abuelidad. Sin embargo, cuando
solamente se analiza un solo abuelo y se identifica una relación de parentesco, es
importante resaltar que los resultados son significativamente menores que si se realizaran
los cálculos estadísticos con los padres.

Se toman algunas consideraciones que podrán ser aplicadas directamente en las formulas,
tales como:

a) Se definirá como “UM” a la Madre Desconocida

b) definirá como “ABa” a la Abuela Materna
 Para poder determinar la relación de
parentesco que se presenta entre la abuela
y el descendiente, primeramente se debe
estimar los posibles genotipos de la madre
desconocida, para lo cual se deben
considerar los alelos conocidos (Aba y C).

Así mismo consideramos a “X”, como todos los posibles alelos no considerados. O bien,
diferentes a 9, 13 y 15.

9 13 15 X
9 9, 9 9, 13 9, 15 9, X
13 9, 13 13, 13 13, 15 13, X
15 9, 15 13, 15 15, 15 15, X
x 9, x 13, x 15, x x, x

Las combinaciones obtenidas son todos los posibles genotipos de la madre desconocida,
de los cuales, podemos descartar algunos genotipos debido a que, si suponemos que la
Abuela es la madre biológica de la madre desconocida, entonces debería tener en su
genotipo al menos un alelo 9 o 13.

9 13 15 X
9 9, 9 9, 13 9, 15 9, X
13 9, 13 13, 13 13, 15 13, X
15 9, 15 13, 15 15, 15 15, X
x 9, x 13, x 15, x x, x

Del mismo modo, podemos identificar genotipos iguales, permitiéndonos resumir todos
los posibles genotipos en los siguientes.

9, x A partir de estos posibles genotipos de la madre, se determina la

9, 9 probabilidad de cada uno de estos genotipos. Para determinar esa
9, 13 probabilidad, debemos definir las frecuencias de los alelos 9, 13, 15 y
9, 15 “X”.
 13, 13 F9 = 0.01276
13, 15 F13=0.33930
13, x F15=0.10970
Fx= 1-( F9 + F13+ F15) = 0.53824

Genotipo UM P (UM) 𝒑(𝟗, 𝒙) = 𝒑(𝑨𝑩𝒂 → 𝟗) ∗ 𝒇𝒙

9, X 0.26912 𝒑(𝟗, 𝒙) = 𝟎. 𝟓(𝟎. 𝟓𝟑𝟖𝟐𝟒) = 𝟎. 𝟐𝟔𝟗𝟏𝟐
9, 9 0.00638 𝒑(𝟗, 𝟏𝟑) = 𝒑(𝑨𝑩𝒂 → 𝟗) ∗ 𝒇𝟏𝟑
9, 13 0.17603 𝒑(𝟗, 𝟏𝟑) = 𝟎. 𝟓(𝟎. 𝟑𝟑𝟗𝟑𝟎) = 𝟎. 𝟏𝟕𝟔𝟎𝟑
9, 15 0.05485 𝒑(𝟏𝟑, 𝟏𝟓) = 𝒑(𝑨𝑩𝒂 → 𝟏𝟑) ∗ 𝒇𝟏𝟓
13, 13 0.16965 𝒑(𝟏𝟑, 𝟏𝟓) = 𝒑(𝑨𝑩𝒂 → 𝟏𝟑) ∗ 𝒇𝟏𝟓
13, 15 0.05485 𝒑(𝟑, 𝟏𝟓) = 𝟎. 𝟓(𝟎. 𝟏𝟎𝟗𝟕𝟎) = 𝟎. 𝟎𝟓𝟒𝟖𝟓
13, x 0.26912 𝒑(𝟗, 𝒙) = 𝒑(𝑨𝑩𝒂 → 𝟗) ∗ 𝒇𝒙

A partir de las frecuencias calculadas de los diferentes genotipos podremos determinar la

frecuencia de que la madre desconocida haya heredado el alelo 13 y 15 al Hijo mediante
los siguientes supuestos:

Dado el genotipo 9, x; la probabilidad de que la madre desconocida haya heredado el alelo

13 es cero. Así mismo, la probabilidad de que la madre desconocida haya heredado el
alelo 15 también es cero.

Genotipo p (UM) P (13/UM) p (13) p (15/UM) p (15)

UM
9, x 0.26912 0 0 0 0

Dado el genotipo 9, 13; la probabilidad de que la madre desconocida haya heredado el

alelo 13 es 1/2. Por tanto para determinar la frecuencia del alelo 13, se deberá multiplicar
la frecuencia del genotipo 9, 13 por la probabilidad de heredar el alelo 13.

13
𝑝(13) = 𝑝(𝑈𝑀) ∗ 𝑝 ( )
𝑈𝑀

𝑝(13) = 0.17603 ∗ 0.5 = 0.088015

Genotipo p (UM) P (13/UM) p (13) p (15/UM) p (15)

UM
9, 13 0.17603 0.5 0.088015 0 0
Por otro lado, dado el genotipo 9, 13; la probabilidad de que la madre desconocida haya
heredado el alelo 15 es de cero.

Esta determinación de la frecuencia para cada uno de los alelos 13, 15 se realiza para cada
uno de los genotipos de la madre desconocida, de tal forma que es la suma de las
frecuencias de cada uno de los genotipos considerados permitirá establecer la
FRECUENCIA AJUSTADA de los alelos 13 y 15.

Genotipo p (UM) P (13/UM) p (13) p (15/UM) p (15)

UM
9, x 0.26912 0 0 0 0
9, 9 0.00638 0 0 0 0
9, 13 0.17603 0.5 0.088015 0 0
9, 15 0.05485 0 0 0.5 0.027425
13, 13 0.16965 1 0.16965 0 0
13, 15 0.05485 0.5 0.027425 0.5 0.027425
13, x 0.26912 0.5 0.13456 0 0
1 0.41965 0.05485
Frecuencias ajustadas para los alelos 13 y 15

Una vez determinadas estas frecuencias ajustadas. Estas serán utilizadas para calcular la
probabilidad de maternidad considerando las dos hipótesis.

Hipótesis de la fiscalía

P (Hp /E) = ¿Cuál es la probabilidad del perfil genético del hijo dado la relación de
abuelidad entre ABa y C?

PI (Índice de paternidad)

𝐻
( 𝐸𝑃 ) 𝑃(𝑈𝑀 → 13)𝑃 (𝑃𝐴 → 15) + 𝑃(𝑈𝑀 → 15)𝑃(𝑃𝐴 → 13)
𝑃 =
𝐻 (𝑅𝑀 → 15) + 𝑃(𝑅𝑊 → 15)𝑃(𝑅𝑀 → 13)
( 𝐸𝑑 ) 𝑃(𝑅𝑊 → 13)𝑃

𝐻
( 𝐸𝑃 ) (0.41965 ∗ 𝐹15 ) + (0.05485 ∗ 𝐹13 )
𝑃 = =
𝐻𝑑 2 𝐹 13 𝐹15
(𝐸)

𝐻
( 𝐸𝑃 ) (0.41965 ∗ 0.10970) + (0.05485 ∗ 0.33930)
𝑃 = = 0.8684
𝐻 2 (0.10970)(0.33930)
( 𝐸𝑑 )
 Interpretación

La probabilidad del genotipo del hijo es 0.8684 veces más probable si están relacionados
como abuela y nieto, contra que no estén relacionados.

Probabilidad de Paternidad

𝐶𝑃𝐼 0.8684
𝑊= = = 0.46
𝐶𝑃𝐼 + 1 0.8684 + 1
Interpretación

La probabilidad de que exista una relación abuela – nieto es de 46% dado el perfil genético
del hijo.

3.5. Mezclas de perfil genéticos.

3.5.1. Se considera que una muestra se originó a partir de más de un individuo si

tres o más alelos están presentes en dos o más loci (exceptuando loci tri-
alélico) o las proporciones de altura de pico entre un par de picos
heterocigóticos de uno o más loci están por debajo de 60%.

3.5.2. Los alelos que se encuentren entre el umbral analítico (AT) y el umbral
estocástico (ST) pueden utilizarse en la evaluación del número de
contribuyentes.

3.5.3. La estimación del número mínimo de contribuyentes a una mezcla no debe

interpretarse como designación de un número absoluto de individuos a la
que han contribuido a una mezcla. Más bien proporciona esta estimación
para describir el menor número de individuos que pueden haber contribuido
a la mezcla.
 3.5.4. Pueden existir alelos compartidos entre múltiples contribuidores los cuales
pueden provocar que los valores de PHR varíen de acuerdo al esperado. Esto
puede ser visto como una sobre posición en el alelo que podría crear
desequilibrio entre picos heterocigóticos de un contribuyente mayoritario.

3.5.5. Alternativamente, el alelo atribuible a un contribuyente menor puede ser

enmascarado por el contribuyente mayoritario.

3.6. Determinación del número de contribuyentes en una mezcla

3.6.1. Cuando no existen más de 4 picos en cualquier locus (por encima del umbral
analítico) el perfil genético debe ser considerado una mezcla consistente de
dos contribuyentes.

3.6.2. Cuando 5 o 6 picos están presentes en cualquier locus (por encima umbral
analítico) el perfil genético debe ser considerado una mezcla consistente con
tres contribuyentes o una mezcla compleja.

3.7. Mezclas consistentes con dos contribuyentes

3.7.1. Indistinguibles.- El perfil genético se considerará una mezcla indistinguible si

un contribuyente mayoritario no puede ser determinado con claridad en la
mezcla a partir del estudio de las alturas de los picos o PHR.

3.7.2. Distinguibles (mayor / menor) - El perfil genético se considerará una mezcla

distinguible si un contribuyente mayoritario puede ser determinado con
claridad en la mezcla a partir alturas de los picos o PHR.

3.8. Mezclas consistentes con tres contribuyentes

3.8.1. Debido a un mayor número de contribuyentes se puede presentar un

aumento potencial de alelos compartidos o enmascaramiento por lo que el
laboratorio reportará que se obtuvo una mezcla de perfil genéticos, donde la
interpretación de mezclas a partir de 3 contribuyentes no serán
individualizadas y se reportaran como una análisis no incluido en los alcances
del laboratorio.

3.9. Resultados y comparación

3.9.1. Para reportar un perfil genético se debería obtener al menos los 13 locus
empleados por el CODIS con el kit utilizado. En caso de que no se obtengan
estos trece marcadores se reportará que no se obtuvo perfil genético.
3.9.2. El perito debe interpretar los resultados de la tipificación de ADN antes de
compararlos con otros resultados.

3.9.3. Correspondencia.

3.9.3.1. Existe correspondencia entre perfiles genéticos obtenidos a partir de

una muestra de referencia con los encontrados en indicios siempre y
cuando exista una total correspondencia en todos los loci, se calcula la
frecuencia (RMP) del perfil genético en la población. Se puede
establecer correspondencia entre perfiles parciales siempre y cuando
exista correspondencia total en los marcadores correspondientes.

3.9.4. Inclusión (no excluyente).

3.9.4.1. Un perfil genético completo obtenido a partir de muestras de

referencia o indicios no se puede excluir como contribuidor a una
mezcla de perfiles genéticos si el genotipo está presente en todos los
loci en el que los resultados de tipificación del ADN son considerados
interpretables sin diferencias inexplicables. La pérdida de un alelo
debido a la amplificación preferencial, los efectos estocásticos,
mutación u otros factores deben ser considerados y no indica
necesariamente una exclusión por lo cual se puede permitir hasta una
perdida alélica para considerar al genotipo como un contribuidor a una
mezcla de perfiles.

3.9.5. Exclusión.

3.9.5.1. No existe correspondencia entre perfiles genéticos o haplotipos de

cromosoma Y obtenidos a partir de una muestra de referencia con los
encontrados en indicios cuando el genotipo no se encuentre en
cualquier loci.

3.9.5.2. Un perfil genético obtenido a partir de muestras de referencia o indicios

se puede excluir como contribuidor a una mezcla de perfiles genéticos
si el genotipo no está presente en todos los loci en el que los resultados
de tipificación del ADN son considere interpretable sin diferencias
inexplicables.

3.9.6. No concluyentes.

3.9.6.1. Los resultados no concluyentes que no son adecuados para la

comparación pueden ser los siguientes:
 3.9.6.1.1. Perfiles genéticos que no se hayan obtenido el mínimo de locus
debido a dropout alelico, degradación, amplificación
preferencial o debido al enmascaramiento de alelos del
contribuidor minoritario.

3.9.6.1.2. Mezcla de perfiles genéticos en los que falten más de un locus

con relación a un perfil genético debido a dropout alelico,
degradación, amplificación preferencial o debido al
enmascaramiento de alelos del contribuidor minoritario.

3.9.6.1.3. La mezcla de perfiles genéticos es demasiado compleja debido al

número total de posibles contribuyentes, excepto en mezclas de
tres contribuidores cuando se tengan los tres muestras
indubitables y estén presentes en el 100% de los loci.

Base de datos del Laboratorio de Genética Forense.

Los criterios para ingreso de perfiles genéticos a la base de datos del laboratorio de
genética forense que son producto de los resultados de tipificación de STR autosómicos.

El Perito a cargo del caso ingresa a los perfiles generados a partir de las muestras
referentes a su caso a la base de datos.

3.10. Ingreso de perfiles genéticos.

3.10.1. El perito realiza que los informes o dictámenes periciales será responsable del
ingreso a la base de datos, siempre y cuando se cumpla con los requisitos de
umbral analítico, umbral estocástico y análisis de artefactos descritos en esta
guía y posteriormente el perito que realiza la revisión técnica administrativa
verifica la captura y registra esta revisión en el formato XXXX.

3.10.2. En la base de datos de perfiles genéticos de Personas No Identificadas (XXXX)

se podrán ingresar los siguientes datos:

a) Perfiles genéticos completos.

b) Perfiles genéticos parciales que cumpla con el número mínimo de locus (13).
c) NO se ingresan mezclas.

3.10.3. En la base de datos de Perfiles Genéticos de Chiapas (XXXX) se podrán ingresar

los siguientes datos:

a) Perfiles genéticos completos.

 b) Perfiles genéticos parciales que cumpla con el número mínimo de locus (13).
c) Perfiles genéticos a partir de mezclas.

3.11. Resultados de búsquedas de identidad en la base de datos de Personas No

Identificadas

3.11.1. Un “match” es la coincidencia del 50 o 100% entre un perfil genético

completo o parcial con un registro en la base de datos.

3.11.2. Una vez que se de esta coincidencia, se procederá a corroborar la

coincidencia en el expediente del caso de investigación.

3.11.3. En caso de corroborar dicha coincidencia se describirá en la coincidencia en

el informe/dictamen pericial correspondiente con el cálculo estadístico de
RMP en caso de ser una muestra de referencia o cálculos de parentesco si es
un familiar.

3.12. Resultados de búsquedas de relación de parentesco con STR autosómico.

3.12.1. Un “match” en la coincidencia en búsqueda de relación de parentesco entre

familiares se da con el 50% del perfil genético ingresado.

3.12.2. Una vez que se de esta coincidencia, se procederá a corroborar la

coincidencia en el expediente del caso de investigación y en caso de que se
cuente con más marcadores genéticos se debe realizar el cotejo para saber si
continua la coincidencia.

3.12.3. Se debe realizar la búsqueda con otro familiar para corroborar la coincidencia
de la relación de parentesco así como información adicional de fechas de
desaparición o sexo de las personas para descartar o confirmar la
coincidencia.

3.12.4. Cuando la coincidencia sea con un indicio, este resultado no se reportará.

3.13. Resultados no concluyentes.

3.13.1. Los resultados no concluyentes que no son adecuados para la comparación

pueden ser los siguientes:

3.13.1.1. Perfiles genéticos o haplotipos del cromosoma Y que no se hayan obtenido el

mínimo de locus debido a dropout alélico, degradación, amplificación
preferencial o debido al enmascaramiento de alelos del contribuidor
minoritario.
3.13.1.2. Se cuenta con un solo familiar y presenta alguna mutación o alelo silente.

4. ANEXOS

Anexo 1. WEN ILS 500

Anexo 2. Ladder PowerPlex® Fusion
Colección de
referencia USV MDL OGN DRH MPC RRG RGD FVN DPS
000000 000000 000000 010714 010314 010315 010416 160916 17
Marcador

X,Y X,Y X,X X,Y X,X X,Y X,Y X, Y X, Y

Amelogenina
D3S1358 17,18 15,16 15,17 15,15 15,18 16,17 15,16 15, 18 15, 15
D1S1656 14,15 11,15 16,16 16,18 13,14 14,16.3 15,18.3 15, 16 16.3, 17.3
D2S441 10,10 10,10 10,11 11,14 10,11 11,14 11,12 10, 12 10, 11.3
D10S1248 14,14 14,14 13,14 14,17 14,15 14,15 13,14 13, 13 14, 15
D13S317 10,14 9,12 12,14 11,11 10,13 8,12 11,11 12, 12 12, 13
PENTA E 8,12 13,21 12,13 16,18 11,12 12,13 18,19 15, 17 13, 14
D16S539 11,12 10,12 12,12 11,11 13,13 10,13 12,12 11, 12 10,12
D18S51 13,15 12,13 15,18 12,14 18,21 14,16 13,15 14, 15 13,22
D2S1338 17,23 23,23 19,19 19,23 23,23 17,23 23,24 17, 25 20, 23
CSF1PO 11,12 12,13 9,12 11,11 11,12 10,12 10,12 8, 10 10,11
PENTA D 10,10 2.2,7 11,12 10,13 10,14 10,12 9,12 9, 10 12, 13
TH01 6,6 7,9 7,8 6,6 6,9.3 6,6 6,6 6, 7 6, 7
vWA 15,16 16,17 14,17 17,18 16,19 15,19 17,18 17, 18 14, 16
D21S11 29,32.2 30,33.2 29,32.2 29,32.2 29,32.2 28,32.2 32.2,32.2 30, 30 30, 30
D7S820 9,11 11,12 11,13 8,12 10,10 8,12 12,13 11, 12 7, 10
D5S818 9,11 11,13 11,12 11,12 7,11 11,12 11,11 11, 13 11, 12
TPOX 8,11 8,12 8,12 8,9 8,11 11,12 8,8 8, 12 9, 9
DYS391 10 11 ---- 11 ---- 10 11 10 10
D8S1179 13,16 14,14 10,10 13,14 10,13 14,15 14,17 13, 14 11, 14
D12S391 19,20 16,20 19,21 18,19 19,19 17,18.3 19,20 20, 20 15, 21
D19S433 13.2,14 13.2,15 13,13 13,14 15,15 14,15 14,14 13.2, 15 12, 14
FGA 24,25 19,22 22,25 22,28 21,26 21,24 24,24 23, 26 21, 24
D22S1045 15,16 15,15 16,16 15,16 15,16 15,16 15,15 15, 15 16, 16
Anexo 4. Controles positivos empleados en el laboratorio de Genética Forense
Anexo 5. Criterios para realizar una dilución.