Listeria ISP PDF

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PROCEDIMIENTO PARA IDENTIFICACION

27-03-2009
BIOQUIMICA DE CEPAS DE LISTERIA
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MONOCYTOGENES AISLADAS EN
ALIMENTOS Y AMBIENTE
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27-03-2009
Sección Microbiología PRT-712.03-086 Página 1 de 15
de Alimentos
1. OBJETIVO
Obtener confirmación mediante la caracterización bioquímica de cepas aisladas y presuntivas
de Listeria monocytogenes.
2. CAMPO DE APLICACIÓN Y ALCANCE

Aplicable a todas las cepas aisladas de muestras de alimentos y ambientales.
3. FUNDAMENTO
Las pruebas o ensayos bioquímicos, son pruebas simples que se han desarrollado para demostrar
en forma clara una determinada característica bioquímica como presencia o ausencia de una
determinada actividad enzimática, grupo de enzimas o determinada vía metabólica, crecimiento a
una determinada temperatura, crecimiento en presencia de inhibidores, etc. No significan de
ninguna manera un estudio profundo del metabolismo bacteriano.
Para la identificación presuntiva del género Listeria aislados de muestras de alimentos y
ambiente puede usar ensayos convencionales o kit bioquímicos comerciales. Estos últimos
basados en la demostración o verificación mediante respectivos análisis de laboratorio de una
adecuada correlación entre el kit comercial y las pruebas bioquímicas convencionales.
Los kits comerciales se basan en las propiedades enzimáticas que contiene el microorganismo y
su actuar en los substratos deshidratados que permite que sean convertidos en productos
metabólicos finales los cuales son detectados por el sistema al producir un cambio visible de
color.
Los ensayos bioquímicos tradicionalmente utilizados, llamadas pruebas bioquímicas
convencionales, generalmente determinan la actividad de una vía metabólica (conjunto de
reacciones químicas) a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la
bacteria al crecer transforma o no.
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4. REFERENCIAS
4.1 Bacteriological Analytical Manual online. Carpeta 10, enero 2003.
4.2 Official Methods of Analysis AOAC. Capìtulo 17, subcarpeta 10 edición 18, 2005.
4.3 Sistema de identificación API Listeria®, bioMérieux® SA.
5. TERMINOLOGÍA
No Aplica
6. MATERIALES, INSUMOS Y EQUIPOS

6.1 Reactivos y Medios de cultivo
6.1.1 Agar sangre Nº 2
6.1.2 Sangre de cordero defibrinada
6.1.3 Kit tinción Gram
6.1.4 Solución de peróxido de hidrógeno al 3% (test catalasa)
6.1.5 Solución de KOH al 40% (test acetoína)
6.1.6 α- naftol al 5% en alcohol (test acetoína)
6.1.7 Medio Reducción nitrato
6.1.8 Caldo nutritivo
6.1.9 Solución salina 0,85%
6.1.10 Caldo base de fermentación púrpura de bromocresol
6.1.11 SIM o medio prueba motilidad.
6.1.12 Reactivo ácido sulfanílico al 0,8% (test nitratasa)
6.1.13 Reactivo de α- naftol al 0,5% en ácido acético al 5N o Reactivo de N-(1 naftil)
etilendiamina al 0,125% en ácido acético al 5N (test nitratasa)
6.1.14 Sistema API Listeria ( opcional)
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6.2 Materiales y equipos

6.2.1 Incubadora a 30º C y a 35º C ± 1 ºC
6.2.2 Microscopio binocular
6.2.3 Tubos de fermentación (Durham)
6.2.4 Asas de inoculación
6.2.5 Asas de punta para inoculación
6.2.6 Tubos de 16 x 160 mm con tapa a rosca
6.2.7 Tubos de 12 x 120 mm con tapa a rosca
6.2.8 Placas de Petri
7. DESARROLLO
7.1 Perfil bioquímico convencional
7.1.1 De los cultivos de colonias presuntivas de Listeria monocytogenes puras y aisladas en
placa de agar Soya tripticasa con extracto de levadura 6% a 30º C por 24 a 48 h ,
examinar sus características y realizar las pruebas siguientes:
7.1.1.1 Motilidad: Picar colonias típicas y examinar motilidad formando una suspensión usando
solución salina al 0,85%, emulsionar bien y observar al microscopio con objetivo de
inmersión de fase de contraste.
Observar: bastones delgados cortos, con suave rotación o no móviles.
7.1.1.2 Catalasa: En un tubo estéril agregar 0,3 mL de peróxido de hidrógeno al 3% y suspender
una colonia con aplicador de madera o asa de platino ( no utilizar asa de nicrom-níquel).
Observar la formación de burbujas indica prueba positiva.
7.1.1.3 Tinción Gram: Todas las Listerias spp son bacilos cortos Gram positivos. Sin embargo
algunos cultivos pueden presentar una morfología variable y algunas pueden observarse
en forma de cocos. También pueden presentar una distribución en empalizada similar a
células difteriodes.
7.1.1.4 Hemólisis: Preparar placas de agar sangre de cordero al 5%, que contengan
aproximadamente 15 mL de agar, lo ideal es obtener una profundidad inferior a 5 mm,
esto se puede lograr efectuando superposición del agar en 1-2 mm. Utilizar la placa con
agar sangre bien seca (comprobar que están libre de humedad antes de usar). Se puede
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confeccionar una red de cuadrantes para sembrar en cuñas. Siempre considerar controles
positivos: Listeria monocytogenes y Listeria ivanovii y control negativo: Listeria
innocua. Incubar por 24-48 h.
Observar las placas con luz brillante y evidenciar la presencia de hemólisis. Listeria
monocytogenes y Listeria seeligeri presenta una suave hemólisis (β- hemólisis). Al
contrario Listeria ivanovii, presenta una hemólisis fuerte e intensa y Listeria innocua no
presenta hemólisis. Resolver hemólisis dudosas con prueba de CAMP (Christie- Atkins-
Munch-Peterson test) si fuera necesario.
7.1.1.5 Prueba de reducción nitratos a nitritos: esta prueba es opcional .Inocular en caldo
nitrato e incubar por 5 días a 35ºC. Agregar 0,2 mL del reactivo de α –naftilamaina y del
ácido sulfanílico.
Observar la formación anillo rojo, reacción positiva. Si no se forma anillo rojo-violeta
agregar polvos de zinc y mantener durante una hora, si se forma anillo rojo-violeta, la
reacción es negativa y si no se forma color la reacción es positiva. Listeria
monocytogenes no reduce nitratos a nitritos.
Si utiliza α- naftol y ácido sulfanílico, la coloración que se observa es anaranjada para la
reacción positiva y si no se forma color agregar polvos de Zinc y la presencia de color
naranjo indica reacción negativa y la ausencia de color indica reacción positiva.
7.1.1.6 Movilidad: Inocular agar SIM o MTM e incubar por 7 días a temperatura ambiente.
Observar diariamente. Listeria spp son móviles, dando un crecimiento en paraguas
como patrón típico de crecimiento. El agar MTM es mejor para observar la movilidad.
Si no dispone de estos agares observar la emulsión preparada a partir del agar TSA con
extracto de levadura incubado a 30º C, con microscopía de contraste de fases (x 1000) .
Ver 7.1.1.1.
7.1.1.7 Fermentación de carbohidratos: Inocular caldo base de púrpura de bromocresol con
0,5% de carbohidrato (el uso de campanas Durham es opcional): dextrosa, esculina,
maltosa, ramnosa, manitol y xilosa. Se puede hacer una batería corta sólo con manitol,
ramnosa y xilosa cuando se utilizan otras pruebas adicionales y complementarias como
sistema API. Incubar por 7 días a 35ºC.
Observar la producción de ácido sin gas. Todas las especies son positivas a dextrosa,
esculina y matosa. Si en Palcam, OXA, LPM, en la prueba de esculina se observa una
pigmentación inequívoca, puede omitir la prueba de esculina en caldo. Listeria
monocytogenes es manitol negativo, ramnosa positiva y xilosa negativa.
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7.1.1.8 Test de CAMP: Esta prueba es útil cuando las hemólisis son ambiguas. Para realizar la
prueba inocular por estría una cepa de S. aureus β- hemolítico y en paralelo y
diametralmente opuesto una cepa de Rhodococcus equi en un aplaca de agar sangre de
cordero. Siembre por estría varios cultivos de ensayo en paralelo el uno del otro en forma
uniforme pero en ángulo recto hacia y entre S. aureus y Rhodococcus. Incube a 35º C por
24- 48 h.
Observar después de la incubación examine las reacciones hemolíticas de L.
monocytogenes y L. seeligeri las que se incrementan en la zona influenciada por la
hemólisis de S. aureus. Siguen siendo las otras especies no hemolíticas. La reacción de
Listeria monocytogenes suele ser óptima a las 24 h en lugar de las 48 h.. Para obtener
suficiente R. equi para proporcionar un buen equilibrio, incubar el cultivo inclinado 48 h
en lugar de 24 h. Se recomienda el uso de las cepas conocidas de control de Listeria spp.
sobre una placa de agar sangre de cordero. Placas de agar sangre de cordero debe ser lo
más fresca posible.
7.1.1.9 Se pueden usar kits comerciales (pruebas complementarias pueden ser necesarias) como
Vitek o API Listeria el cual no requiere un aprueba adicional de CAMP.
7.2 Perfil Bioquímico comercial

7.2.1 Sistema API Listeria
7.2.1.1 La galería API es un sistema estandarizado para la identificación de Listeria que utiliza
ensayos miniaturizados, así como una base de datos específica. El sistema consta de 10
microtubos que contienen los sustratos deshidratados y permiten la realización de
ensayos enzimáticos o de fermentación de azúcares.
7.2.1.2 Las reacciones que se producen durante la incubación se traducen en cambios de color,
bien espontáneos o bien provocados mediante la adición de reactivos.
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7.2.1.3 La lectura de estas reacciones se realiza con la ayuda de la Tabla de Identificación y la

interpretación se realiza tras consultar la lista de perfiles de la ficha técnica o con la
ayuda de un software de identificación.
7.2.1.4 La composición de la galería API Listeria está conformada por: Galería API Listeria,
Ampollas de suspensión medium (agua desmineralizada), ampolla de Reactivo ZYM,
cámaras de incubación, hoja de resultados y ficha técnica.
7.2.1.5 Material necesario adicional: McFarland Standard 1, programa apiweb™, pipetas o
PSIpettes, protege –ampollas, gradillas para ampollas, equipo general de laboratorio.
7.2.1.6 Reactivo complemetario: Agar Ottaviani Agosti (OAA) o chromagar Listeria.
7.2.1.7 Precauciones: No emplear los reactivos después de su fecha de caducidad, antes de su

utilización verificar la integridad del envase y sus componentes, no utilizar galerías que
hayan sufrido alguna alteración física: cúpula deformada, bolsa de deshidratante abierta,
etc.; antes de su utilización permitir que los reactivos alcancen la temperatura ambiente.
7.2.1.8 Abrir las ampollas: en forma delicada realizar lo siguiente:

7.2.1.8.1 Introducir la ampolla en el protege-ampolla.
7.2.1.8.2 Sujetar verticalmente el conjunto en una mano (tapón blanco hacia arriba).
7.2.1.8.3 Presionar a fondo el tapón.
7.2.1.8.4 Luego cubrir la parte inclinada del tapón con la primera falange del pulgar.
7.2.1.8.5 Ejercer una presión con el pulgar en la base de la tapa inclinada del tapón para romper
la extremidad de la ampolla.
7.2.1.8.6 Otra alternativa es ejercer una presión horizontal con el pulgar en la parte estriada del
tapón para romper la extremidad de la ampolla.
7.2.1.8.7 Retirar la ampolla del protege-ampolla y conservarlo para un próximo uso.
7.2.1.8.8 En el caso de la ampollas sin tapón cuentagotas, retirar delicadamente el tapón.
7.2.1.8.9 En el caso de ampolla con tapón cuentagotas, invertir la ampolla y mantenerla en
posición vertical. Aplicar una presión lateral sobre el tapón para transferir la totalidad
del reactivo al frasco cuentagotas. Para usar posteriormente se recomienda apretar el
tapón antes de invertir la ampolla con el fin de aspirar todo el resto de reactivo y
evitar que se derrame por el exterior del tapón.
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7.2.1.9 Condiciones de almacenamiento: las galerías se conservan a 2-8º C hasta la fecha límite
de utilización indicada en el envase.
7.2.1.9.1 Los medios se conservan a 2-30º C hasta la fecha límite de utilización indicada en el
envase.
7.2.1.9.2 Conservar los reactivos en la oscuridad a 2 -8º C hasta la fecha límite de utilización
indicada en el envase.
7.2.1.9.3 Tras la apertura de las ampollas y transferir los reactivos a los frascos cuentagotas, los
reactivos pueden conservarse un mes (o hasta la fecha límite de su utilización si ésta
fuera anterior): anotar la fecha de apertura sobre la etiqueta de los frascos.
7.2.1.9.4 Como el reactivo ZYM B es muy sensible a la luz verificar el aspecto del reactivo
antes de transferirlo al cuentagotas.
7.2.1.9.5 El reactivo ZYM B presenta en su estado normal una coloración amarilla a ámbar.
Eliminar el reactivo si se observa una coloración rosa (alteración).Una exposición
corta a la luz del laboratorio (alrededor de 1 hora) entraña una degradación del
reactivo.
7.2.1.10 Utilización del reactivo ZYM B: abrir ampolla sin lo descrito en numeral 7.2.1.8.
7.2.1.10.1 Agregar una gota de reactivo.
7.2.1.10.2 Volver a cerrar bien el frasco después de su uso y conservar según el punto 7.2.1.9.
7.2.1.11 Muestras: Recogida y Preparación: la galería API Listeria no debe ser utilizada
directamente a partir de muestras de origen clínico o de otro tipo.
7.2.1.11.1 En una primera fase, los microorganismos a identificar deben aislarse sobre un medio
de cultivo apropiado siguiendo las técnicas usuales en bacteriología.
7.2.1.12 Modo operativo

7.2.1.12.1 Selección de las colonias
7.2.1.12.1.1 Verificar que la cepa a estudiar pertenezca al género Listeria (bacilos cortos,
Gram- positivos, polimorfos, móviles a 25º C pero no a 37º C, catalasa positivos y
oxidasa negativos).
7.2.1.12.1.2 Dado que las muestras contienen con frecuencia una mezcla de varias especies de
Listeria, resulta preferible realizar un subcultivo sobre agar con sangre a partir de una
colonia bien aislada.
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7.2.1.12.1.3 Incubar la placa a 24 h a 36º C ± 2º C.

7.2.1.12.1.4 Se pueden usar los siguientes medios para aislar las colonias antes del empleo
galería API Listeria: medios a base de agar con sangre no selectivos, tipo Columbia o
TSA, con o sin antibióticos; medios selectivos para Listeria con excepción del medio
McBride que inhibe la expresión enzimática de bacterias sobre la galería API Listeria.
Si se empleara este medio para aislamiento, realizar un subcultivo sobre agar con
sangre.
7.2.1.13 Preparación de la galería
7.2.1.13.1 Reunir fondo y tapa de un cámara de incubación y repartir aproximadamente 3 mL de
agua destilada o desmineralizada (o cualquier agua sin aditivos ni derivados
susceptibles a liberar gases (Ej: Cl2, CO2 …) en los alvéolos del fondo para crear una
atmósfera húmeda.
7.2.1.13.2 Escribir la referencia o la identificación de las muestras o cepas en la lengüeta lateral
de la cámara (no escribir la referencia o identificación sobre la tapa, ya que ésta puede
resultar extraviada durante la manipulación.
7.2.1.13.3 Sacar una galería de su envase individual.
7.2.1.13.4 Colocar la galería en la cámara de incubación.
7.2.1.13.5 Eliminar la bolsita antihumedad.
7.2.1.14 Preparación del inóculo

7.2.1.1.4.1Abrir una ampolla de API Suspensión Medium (2 mL) como se indica en el punto
7.2.1.8.
7.2.1.1.4.2Con la ayuda de una pipeta o PSIpette, coger colonias bien aisladas. Se recomienda
utilizar cultivos jóvenes (18 a 24 h).
7.2.1.1.4.3Realizar una suspensión de turbidez igual a 1 de McFarland. Esta suspensión debe ser
utilizada de inmediato. Observar el tipo de hemólisis y anotarlo en la hoja de
resultados, ya que esta característica constituye un ensayo adicional al API pero de
gran importancia.
7.2.1.15 Inoculación de la galería

7.2.1.15.1 Repartir la suspensión bacteriana precedente, en los tubos evitando la formación de
burbujas (para ello inclinar la cámara de incubación hacia delante y colocar la pipeta
o la PSIpette en un lado de la cúpula).
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7.2.1.15.2 Llenar el tubo y la cúpula del ensayo DIM (100 µL aprox.) cuidando que no se
produzca un menisco convexo.
7.2.1.15.3 Llenar solamente la parte del tubo de los ensayos ESC a TAG (50 µL aprox.).
7.2.1.15.4 La calidad del llenado es muy importante ya que los tubos con excesiva o
insuficientemente llenos originan resultados falsos positivos o negativos.
7.2.1.15.5 Cerrar la cámara de inmediato.
7.2.1.15.6 Incubar de 18-24 horas a 36º C ± 2º C en atmósfera aerobia.
PI Listeria Cerrar
PRUEBAS NEGATIVAS
PRUEBAS POSITIVAS
7.2.1.16 Lectura
7.2.1.1.6.1 Agregar una gota de reactivo ZYM al ensayo DIM.
7.2.1.1.6.2 Pasados 3 minutos leer todas las reacciones haciendo referencia a la Tabla de
identificación de la ficha técnica.
7.2.1.1.6.3 Anotar las reacciones +/ - en la hoja de resultados.
7.2.1.1.6.4 Anotar igualmente el tipo de hemólisis.
7.2.1.1.6.5 El resultado de este ensayo no se tiene en cuenta en la interpretación de la galería.
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7.2.1.17 Interpretación
7.2.1.17.1 La identificación se obtiene a partir del perfil numérico.
En la hoja de resultados, los test están separados en grupos de 3 y se asigna para cada
uno un valor 1, 2 ó 4. Para ello, las pruebas de la galería se separan en grupos de tres
y se da a cada reacción positiva un valor igual a 1, 2 ó 4 dependiendo de la posición
de la prueba en su grupo, 1ª, 2ª, 3ª respectivamente.
7.2.1.17.2 El principio de codificación es condensar la información binaria (+, -) en un perfil
numérico.
7.2.1.17.3 La suma de los 3 valores obtenidos (0 para reacciones negativas) dan una cifra entre 0
y 7 para cada grupo.
7.2.1.17.4 Colocar el cursor en el campo que usted desee rellenar.
7.2.1.17.5 Sumando en el inferior de cada grupo los números que corresponden a reacciones
positivas, se obtiene 4 cifras que constituye el perfil numérico.
7.2.1.18 Identificación
7.2.1.18.1 Se realiza mediante la base de datos (V 1.2)
7.2.1.18.2 Con la ayuda del perfil numérico en la lista de la ficha técnica; esta lista no
exhaustiva, en caso de un perfil inexistente, consultar uno de los programas citados o
con la Asistencia técnica de bioMerieux.
7.2.1.18.3 Por medio del software de identificación apiweb™ .
7.2.1.18.4 Introducir manualmente por teclado el perfil numérico de 4 cifras.
7.2.1.18.5 Es posible introducir directamente: - "+", "-" o "?" en los campos superiores de la
galería. Las cifras correspondientes se visualizarán en los campos inferiores.
- las cifras (0-7) en los campos inferiores.
7.2.1.18.6 La tecla (tab) del teclado permite pasar de un campo a otro.

7.2.1.18.7 El botón Reinicializar permite cancelar la introducción anterior.
7.2.1.18.8 Una vez rellenos los campos, pulsar el botón Validar para visualizar los resultados.
Pueden añadirse una referencia y comentarios a la página de los resultados.
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- + + + - + + - - -
1 2 4 1 2 4 1 2 4 1
DIM ESC MAN DARL XYL RHA MDG RIB G1P TAG
HEM
6 5 1 0
Validar
BUENA IDENTIFICACION
Galería API LISTERIA V1.2

Perfil 6510
Nota
Taxón significativo % ID T Pruebas en contra

Listeria monocytogenes 98.6 1.0
Taxón siguiente % ID T Pruebas en contra

Listeria innocua 1.3 0.58 DIM 99%
7.2.1.19 Control de calidad

7.2.1.19.1 Los medios y reactivos son objeto de controles de calidad sistemáticos durante las
diferentes etapas de su fabricación.
7.2.1.19.2 El usuario debe realizar además un control bacteriológico de los ensayos de la galería,
utilizando las cepas: Listeria innocua ATCC 33090 preferentemente o una de las
cepas siguientes: Listeria ivanovii ATCC BAA-139 o Listeria monocytogenes ATCC
19115.
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7.2.1.19.3 Los resultados esperados se resumen el cuadro siguiente:
Cepa DIM ESC αMAN DARL XYL RHA MDG RIB G1P TAG
L. innocua + + + + - + + - - -
L.ivanovii + + - + + - V - +* -
L. monocytogenes - + + + - + + - - -
• * Ocasionalmente (-).
• Perfiles obtenidos después de cultivo sobre agar Columbia con sangre de cordero.
7.2.1.20 Límites de ensayo

7.2.1.20.1 El sistema API Listeria está destinado únicamente a la identificación de bacterias del
género Listeria presentes en la base de datos (tabla de identificación).
7.2.1.20.2 No puede utilizarse para identificar otros microorganismos ni para excluir su
presencia.
7.2.1.20.3 Sólo se pueden utilizar medios puros que contengan un solo tipo de microorganismo.
7.2.1.21 Eliminación de desechos

7.2.1.21.1 Eliminar el Reactivo ZYM B no utilizando siguiendo los procedimientos relativos a
los desechos químicos peligrosos.
7.2.1.21.2 Eliminar todos los reactivos utilizados o no utilizados (diferentes al ZYM B), así
como el material de un solo uso contaminado siguiendo los procedimientos relativos a
los productos infecciosos o potencialmente infecciosos.
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8. REGISTROS
Identificación Almacenamiento Protección Recuperació Tiempo retención y

del registro n disposición
Hoja Registro Archivador rojo Acceso Papel 5 años y disposición
resultados análisis rotulado Registros restringido al en basura normal
Listeria resultados análisis personal Sección partidos en trozos
monocytogenes Listeria Microbiología
RG-712.00-077 monocytogenes
Laboratorio 338
9. TABLA DE MODIFICACIONES
Revisión Nº Pág. Motivo del cambio Fecha Aprobación

Modificada
10. ANEXOS
Anexo Nº 1 Tabla de identificación API Listeria.
Anexo Nº 2 Tabla diferenciación especies de Listeria BAM online.
Anexo Nº 3 Hoja Registro resultados análisis Listeria monocytogenes RG-712.00-077.
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ANEXO Nº 1
TABLA DE IDENTIFICCAIÓN API LISTERIA
Test Componente Cantidad Reacciones Resultados

s activos Mg/cúp. Negativo Positivo
DIM Substrato 0,106 Diferenciación ZYM B /< 3 min
enzimático L. innocua/ L. Naranja pálido Naranja
monocytogenes Rosa beige
Gris beige
ESC Esculina 0,16 Hidrólisis (ESCulina) Amarillo negro
citrato férrico 0,024 pálido
αMAN 4-nitrofenil- 0,045 Α- MANosidasa Incoloro Amarillo
αD-
manopiranosi
da
DARL D- Arabinol 0,4 Acidificación
(D-Arabinol)
XYL D-Xilosa 0,4 Acidificación ( Xilosa)
RHA L-Rhamnosa 0,4 Acidificación(RHAmnosa)
MDG Metil-αD- 0,4 Acidificación (Metil-αD- Rojo/ rojo Amarillo/
glucopiranosi Glucopiranosido) anaranjado amarillo
do anaranjado
RIB D-Ribosa 0,4 Acidificación (RIBosa)
GP1 Glucosa-1 0,4 Acidificación (Glucosa-1-
Fosfato Fosfato)
TAG D-Tagatosa 0,4 Acidificación (TAGatosa)
• Se pueden ajustar las cantidades en función de los títulos de las materias primas.
• Ciertas cúpulas contienen componentes de origen animal especialmente peptonas.
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ANEXO Nº 2
TABLA DIFERENCIACIÓN ESPECIES DE LISTERIA
Table 1. Differentiation of Listeria species

Acid produced from
Species -Hemolysisa Mannitol Rhamnose Xylose Virulenceb
L. monocytogenes + - + - +
L. ivanoviic + - - + +
L. innocua - - Vd - -
L. welshimeri - - Vd + -
L. seeligeri + - - + -
L. grayie - + Vd - -
a
Placa agar sangre cordero.
b
Ensayo en ratón.
c
Cepas fermentadoras de ribosa son clasificadas como Listeria ivanovii subsp. Ivanovii. Cepas
no fermentadoras de ribosa son clasificadas como .Listera ivanovii subsp. londiniensis.
d
V biotipos variables.
e
Incluye dos subespecies: L. grayi subsp. Murrayi que reduce nitratos a nitritos y L. grayi subsp.
grayi que no reduce nitratos a nitritos.

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PROCEDIMIENTO PARA IDENTIFICACION

2. CAMPO DE APLICACIÓN Y ALCANCE

6. MATERIALES, INSUMOS Y EQUIPOS

6.2 Materiales y equipos

7.2 Perfil Bioquímico comercial

7.2.1.3 La lectura de estas reacciones se realiza con la ayuda de la Tabla de Identificación y la

7.2.1.7 Precauciones: No emplear los reactivos después de su fecha de caducidad, antes de su

7.2.1.8 Abrir las ampollas: en forma delicada realizar lo siguiente:

7.2.1.12 Modo operativo

7.2.1.12.1.3 Incubar la placa a 24 h a 36º C ± 2º C.

7.2.1.14 Preparación del inóculo

7.2.1.15 Inoculación de la galería

7.2.1.18.6 La tecla (tab) del teclado permite pasar de un campo a otro.

Galería API LISTERIA V1.2

Taxón significativo % ID T Pruebas en contra

Taxón siguiente % ID T Pruebas en contra

7.2.1.19 Control de calidad

7.2.1.19.3 Los resultados esperados se resumen el cuadro siguiente:

7.2.1.20 Límites de ensayo

7.2.1.21 Eliminación de desechos

Identificación Almacenamiento Protección Recuperació Tiempo retención y

Revisión Nº Pág. Motivo del cambio Fecha Aprobación

Test Componente Cantidad Reacciones Resultados

Table 1. Differentiation of Listeria species

Species -Hemolysisa Mannitol Rhamnose Xylose Virulenceb

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