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Obtención de crudos de saponinas Articulo
hipocolesteromizantes del Chenopodium quinoa
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Willd
My. Ricardo Hernández Royero1 Referencias del artículo

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1. Licenciado en Bioquímica. Profesor Auxiliar.
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RESUMEN Indicadores
Para su empleo como agente hipocolesteromizante, se procedió a la
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obtención de crudos de saponinas a partir de la cascarilla de granos de
Chenopodium quinoa Willd (quinúa), mediante reflujo con etanol al 80 % Bookmark
v/v. Los diferentes lotes de saponinas brutas obtenidos presentaron un
rendimiento promedio de 37,12 %, sobre la base del total de cascarilla |
(8,03 % de la masa de granos) y de 2,98 % sobre la base del total de
granos. Estos productos reaccionaron fuertemente en las pruebas de
Liebermann-Burchard y Selivoflo, y su potencia hemolítica (H50 en mg/mL) se enmarcó en un recorrido de
42,6 hasta 28,4. Seis muestras de crudos fueron sometidas a saponificación sin que se observaron cambios
notables en la potencia hemolítica de los productos saponificados (H50 entre 37,2 y 22,7). Este hecho, unido
a que el total de los crudos obtenidos manifestaron una reacción negativa en las pruebas de Fehling y Molish.
Sugieren que los productos obtenidos se encuentran en forma de sapogeninas u otros derivados "no
saponificables".

Descriptores DeCS: SAPONINAS/aislamiento & purificación; ALCOHOL ETILICO; AGENTES

ANTICOLESTEREMIDOS/uso terapéutico; MEDICINA HERBARIA.

INTRODUCCIÓN
Las saponinas son metabolitos secundarios, ampliamente distribuidos en las plantas superiores, en las que se
presentan en forma de glucósidos. Sus soluciones acuosas al ser agitadas forman una espuma estable y
abundante, hecho este que dio origen etimológicamente, al nombre genérico de estas sustancias provenientes
del latín sapon (jabón).

Desde el punto de vista químico, las saponinas al ser hidrolizadas rinden de 2 a 6 residuos de monosacáridos y
una porción carbonada policíclica que es la aglicona del glicósido, a la cual se le denomina genéricamente
sapogenina. Pueden tener un esqueleto tipo esteroidal (de base gonano) o de tipo triterpenoide (derivados del
escualeno), las cuales dan lugar a las 2 grandes familias de estos metabolitos: las saponinas esteroidales y las
1,2
saponinas triterpénicas.

La solubilidad en agua de estos compuestos está facilitada por su alto peso molecular y la presencia de los
3,10
residuos de monosacáridos y de otros grupos polares en la agicona.

En ambas familias de saponinas el enlace glucosídico se establece a través del hidroxilo en posición 3 del anillo A
de la aglicona. Las esteroidales, se localizan en monocotiledonias principalmente de las familias de las liliáceas,
amarilidáceas y dioscoráceas y las triterpénicas en éstas y en algunas dicotiledóneas. Las sapogeninas
esteroidales siempre se encuentran en la naturaleza formando parte de una saponina, a pesar de la presencia de

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7,11,18
saponasas, en muchas de las plantas que sintetizan estos compuestos. Entre las saponinas esteroidales,
cabe destacar aquéllas que tienen como aglicona a la hecogenina y la diosgenina, compuestos vegetales que
sirven de base para la industria de hormonas esteroidales.

Las sapogeninas triterpénicas están ampliamente distribuidas en los reinos vegetal y animal y se presentan en 3
estructuras químicas diferentes (30-45 carbonos): aciclícas como el escualeno, considerado como el precursor
natural de esta familia: tetracíclicas como el panaxadiol y pentacíclicas como la estallogenina. Estas sustancias
pueden presentarse en sus fuentes naturales: en forma libre: formando ésteres, o como parte de un glicósido
(saponina). Las sapogeninas pentacíclicas se subdividen a su vez en 3 grupos: tipo lupane: tipo ursane (derivado
1
de la a amirina), ambos no están presentes en los forrajes y los de tipo oleanane (derivados de la ß amirina)
presentes en estos últimos.

Las 2 familias de saponinas referidas presentan un grupo de características generales que sirven de base para su
identificación rápida: a) producción de espuma al ser agitadas sus soluciones acuosas, lo cual es la base de la
reacción de selivoflo empleada en el tamizaje fitoquímico; b) producción de hemólisis de los glóbulos rojos por la
mayoría de ellas, propiedad que se aprovecha en las técnicas en que se cuantifica la potencia de estas
substancias; c) toxicidad en animales poiquilotérmicos, en especial los peces (sapotoxinas), a los cuales provocan
parálisis de las agallas (se emplean en formas destructivas de pesca "pescar embarbascado"; d) producción de
una reacción positiva en la prueba de Liebermann-Burchard. Por lo general, las esteroidales en esta prueba
manifiestan colores que van desde el azul hasta el verde y las triterpénicas, rosado, rojo o violeta. Además, la
mayoría de las saponinas son solubles en diferente grado en soluciones de etanol al 80 %, propiedad que se
emplea en diversas técnicas para su extracción y purificación.

En la literatura científica se ofrece una abundante información acerca del papel de la fibra dietética "no digerible",
en el secuestro de ácidos biliares y esteroles neutros en el tracto digestivo, mecanismo por el cual producen una
2,8,9,14
disminución en la concentración del colesterol plasmático. Se destacan en este sentido las fibras de la
alfalfa, las de la paja del trigo y las de las pulpas de la caña y de la remolacha azucareras, entre otras, cuyo
4,9
efecto en la acción referida se ha probado que está mediado por las saponinas presentes en ellas.

La planta objeto de extracción de saponinas en el presente trabajo; el Chenopodium quinoa Willd, se cultiva
tradicionalmente en países sudameri-canos, a una altitud de 2 000-4 000 metros sobre el nivel del mar, en Chile,
Argentina, Ecuador y Colombia, en pequeñas parcelas, y en Perú y Bolivia en grandes extensiones con un
11
rendimiento de hasta 3 Ton métricas por hectárea. También se cultiva en Asia, principalmente en Viet-Nam.

En los países mencionados el principal empleo de esta quenopodiácea es como fuente alimentaria para los
humanos, muy reputada por su valor nutritivo, fundamentalmente el de su proteína, considerada superior a la de
los cereales, las leguminosas de granos y otras de origen vegetal. Se destacan en ella, el elevado contenido en
1
lisina, metionina y triptófano. El mayor factor limitante en el consumo de la quinúa, es su elevado contenido de
saponinas en el endospermo del grano que le transfiere un fuerte sabor amargo. Para obviar este inconveniente,
las antiguas culturas de los Andes desarrollaron un método sencillo para la extracción de las saponinas, que
consiste en lavar sucesivamente las semillas con agua fría hasta obtener un agua de lavado libre de espuma.
Este proceder se emplea como paso inicial en algunas de las técnicas en que se extraen las saponinas a partir de
los granos enteros.

En Cuba ha sido introducido el cultivo de Chenopodium quinoa Willd, denominado comúnmente quinúa a través
del Instituto de Ciencia Animal, con vista a su empleo en la alimentación de aves y monogástricos y se ha
recomendado por especialistas de esa institución el estudio de los aspectos de medicina humana relativo a las
saponinas y el colesterol sérico, objeto del presente trabajo emprendido por el Laboratorio de Medicina Herbaria
del ISMM.

MÉTODOS
Se utilizó la cascarilla obtenida en la pulidura industrial de granos de quinúa que no están fumigados con
pesticidas. El material de cada una de las 5 puliduras fue tamizado y subdividido en 2 subfracciones; una
llamada "fina" con diámetro de partículas < 0,420 mm y otra "gruesa" con partículas > 0,420 < 1,000 mm de
diámetro.

Para la extracción de saponinas se siguió el proceder de M. E. Wall et al. (1958) mediante el cual el material es
extraído con etanol acuoso al 80 % v\v. (300 mL de etanol/ 50 g de droga seca) y se hace el reflujo durante 1
hora. El extracto se concentró por sequedad, y se disolvió en etanol acuoso al 50 % v\v. Se le añadió igual
volumen de benceno saturado con etanol al 50 % (25 mL/g del extracto bruto); se agitó vigorosamente y se
centrifugó la mezcla.

Se repitió 2 veces el proceso de extracción y se eliminó en cada paso la fase bencénica con las grasas y
pigmentos extraídos. La fase hidroalcohólica se evaporó hasta la sequedad y se obtuvo un material de color
pardo oscuro, que es el crudo de saponinas.

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La saponificación de saponinas se realizó según el proceder descrito por R. Segal et al. (1966) que consiste en
200 mg del crudo de saponinas que se disolvieron en 10 mL de etanol al 50 %. A esta disolución se añadió 1 mL
de solución de KOH 1mol/L en metanol, y se hizo el reflujo durante 2 horas. La solución se refrescó y se acidificó
ligeramente con solución de CLH 0,5 mol\litro y se evaporó el solvente con una corriente de aire a temperatura
ambiente. El residuo se lavó 2 veces con pequeños volúmenes de agua y se cristalizó en metanol.

La potencia hemolítica se cuantificó según el proceder de R. Segal et al. para saponinas y sus derivados.

• Suspensión de glóbulos rojos: se utilizó sangre humana citratada, y se separó el plasma por
centrifugación. El botón de eritrocitos se lavó 3 veces con buffer isotónico, hasta obtener un
sobrenadante claro en la centrifugación. A partir de ese material se preparó una suspensión al 2 % de
eritrocitos, disueltos en buffer isotónico.
• Buffer isotónico: Se disolvieron 3,95 g de PO4HNa2. 2H20: 0,76 g de PO4H2K y 7,20 de ClNa, para 1l
de solución a PH 7,4.
• Muestras de saponinas: Se prepararon por disolución de los crudos en buffer isotónico, a una
concentración inicial de 2 mg/mL.

Para la prueba hemolítica se utilizaron volúmenes de 2 mL de suspensión de eritrocitos, se añadieron

cantidades variables del agente hemolítico y se ajustó el volumen final de cada prueba a 4,0 mL, con buffer
isotónico. Después de 3 horas de incubación a temperatura ambiente, las muestras se centrifugaron a 4500
rpm durante 15 min. Dos mililitros del sobrenadante obtenido se disolvieron con igual volumen de buffer
isotónico, se estimó la densidad óptica del hemolizado a una longitud de onda de 540 nm, y se leyó utilizando
el buffer como valor de referencia cero. Se preparó una muestra patrón de hemólisis total, y se trató con agua
destilada.

Para la estimación de la potencia hemolítica (valor H50 expresado en mg\mL, que es la concentración de
saponinas que hemoliza el 50 % de los glóbulos), se calculó la ecuación de la recta de mejor ajuste, para 5
puntos de concentraciones diferentes y se dedujo de ello el valor H50.

RESULTADOS
A partir de la cascarilla procesada, se extrajeron y purificaron un grupo de crudos de saponinas, con un
rendimiento comparable con otras preparaciones elaboradas en el laboratorio del ISMM a partir de granos
enteros de quinúa. Los productos obtenidos, tienen la apariencia de gruesos cristales o grumos, de color
pardo obscuro, sin olor característco, y en concentraciones similares a las utilizadas en la prueba hemolítica
manifestó una fuerte positividad en la prueba de Selivoflo y en la reacción de Liebermann-Burchard, en la que
el producto formado es de una coloración rojo obscuro, sugerente de saponinas triterpénicas. Esos crudos al
ser reducidos a polvo, toman una tonalidad clara.

Del grueso del material obtenido, aproximadamente el 70 %, correspondió a las 2 primeras puliduras; en tanto
que el rendimiento relativo en saponinas fue muy similar en las 4 primeras. El total de saponinas obtenidas,
calculado en forma proporcional a la cuantía de granos procesados (2,38 %) fue muy similar al rendimiento
obtenido cuando se parte directamente de estos para obtener los crudos (rendimiento de alrededor del 2 %). En
tanto, cuando se realizó este cálculo sobre la base del total de cascarilla, el rendimiento fue de aproximadamente
el 30 %; valor alto pero en concordancia con el material de partida para las extracciones; la cascarilla, que es el
sitio de concentración de las saponinas en el grano. (tabla 1).

TABLA 1. Cantidad de cascarilla y rendimiento de saponinas según las puliduras

Cascarilla (%) Rendimiento en saponinas

Pulidura No. Absoluto Relativo (g) % relativo

1 3,61 44,9 1,38 38,3

2 2,12 26,4 0,75 35,5

3 1,13 14,1 0,44 39,1

4 0,74 9,3 0,30 40,4

5 0,43 5,3 0,11 26,1

Total 8,03 100 2,98

Rendimiento bruto de 100 g de granos: 2,98 % (desengrasado 2,38 %)

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Rendimiento bruto de la cascarilla de las 5 puliduras: 37,12 % (desengrasado 29,70 %).

La potencia hemolítica de los crudos fue evaluada con muestras en un recorrido de concentraciones de 5 a 50
mg\mL, y en pocos casos, con recorridos de 5-100 mg\mL (tabla 2).

TABLA 2. Potencia hemolítica de productos extraídos de la cascarilla de granos quinua. (Valores H50 en mg/mL)

Pulidura Saponinas Saponinas saponificadas

*
No.

1 Fina 33,8

Gruesa 39,8 33,3

2 Fina 28,7 24,7

Gruesa 37,5

3 Fina 28,4

Gruesa 30,7 29,5

4 Fina 28,8 28,3

Gruesa 42,6

5 Fina 33,7 22,7

Gruesa 33,0 37,2

*
Fina: partículas < 0,420 mm. Gruesa: partículas > 0,420 <= 1,000 mm

La variabilidad de esas actividades oscilaron en un recorrido estrecho, con un valor de potencia máxima de 28,7
para la subfracción 2 fina, y mínimo de 42,6 para la 4 gruesa. Valorando esas cifras se pudo apreciar que la
presencia de saponinas evaluadas desde el ángulo de su potencia fue bastante uniforme en las 5 puliduras, y por
lo tanto, en trabajos futuros se pueden procesar como una muestra única a los efectos de la extracción. La
potencia hemolítica de 6 de las subfracciones sometidas a proceso de saponificación con KOH metánolico se
investigó con el objetivo de conocer la magnitud de la pérdida de la actividad hemolítica como consecuencia de
esta transformación.

En el trabajo de R. Segal et al. se demuestra que la parte aglicona de las saponinas es la principal portadora de
la actividad hemolítica y que por otro lado, el proceso de saponificación de éstas conlleva una pérdida notable de
la potencia hemolítica de esas substancias. Esto se ejemplifica (tabla 3) con algunos datos de estos autores, en
particular los referidos a las saponinas del Styrak officinalis.

TABLA 3. Potencia hemolítica de algunas saponinas, sapogeninas y derivados. (Valores H50 mg/mL)

(Datos de R. Segal et al.) (Datos del Lab. de Herbaria, ISMM)

Medicina

Droga H50 Droga H50

Saponinas de styrax 1,47 Saponina blanca BDH 6,95

Saponinas de styrax > 1000 Saponina de quinúa LMH 34,2

saponificadas

Digitonina 3,7 Saponina de quinúa ICA- 44,1

1

Sapogenina de styrax 0,4

Digitogenina 27 Saponinas de quinúa ICA 30,4

-2

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Diosgenina 52 Saponinas de quinúa- 32,8

CAA

Diosgenina acetato 42 Saponinas de quinúa 36,3

saponificada
Se observó que el grupo de saponinas de quinúa sometidos a saponificación sólo muestra un cambio muy
ligero en su potencia hemolítica y en el sentido del incremento de ésta, en 5 de las 6 subfracciones
saponificadas (tabla 2) lo que sugiere la presencia de los compuestos considerados, ya bien en forma de
agliconas libres (sapogeninas triterpénicas), o en forma de algún derivado "no saponificable". A favor de esta
hipótesis está el hecho de que en numerosas muestras de las saponinas obtenidas sometidas a hidrólisis ácida
no ha sido posible constatar la presencia de azúcares reductores y que por otro lado, el total de crudos
obtenidos presentaron una reacción negativa en la prueba de Molish.

El pequeño incremento de la potencia hemolítica de los materiales sometidos a saponificación podría explicarse
por una mayor purificación de estos a través de ese proceso.

Conocer la posibilidad y magnitud del cambio en actividad hemolítica de los crudos saponificados obtenidos
resulta de gran importancia, tomando en consideración el hecho ampliamente informado en la literatura científica
acerca del papel que desempeñaron las saponinas presentes en la fibra dietética "no digerible" en el secuestro de
ácidos biliares y esteroles neutros, uno de cuyos efectos principales es la disminución de la concentración del
2,5,7,9,12,14
colesterol sérico, y que la mayor limitante en el empleo de estos compuestos (para saponinas que se
absorban en el tracto digestivo) es precisamente la toxicidad asociada con su potencial hemolítico.

Según los datos anteriores, los crudos de "saponinas" de quinúa, no modifican favorablemente su capacidad
hemolítica mediante el proceso de saponificación, aunque los datos obtenidos en el laboratorio del ISMM de su
toxicidad aguda y los correspondientes a un modelo experimental de hipercolesterolemia, apoyan el empleo de
las referidas substancias con los fines señalados.

Los datos correspondientes a los valores de potencia hemolítica de un grupo de crudos (tabla 3) algunos
elaborados en el Instituto de Ciencia Animal y otros en el laboratorio del ISMM diferentes metodologías y
utilizando como fuente de extracción los granos de quinúa o su cascarilla determinaron que el entorno de
variabilidad es muy similar al de los datos correspondientes a crudos obtenidos de la cascarilla mediante una
técnica diferente (tabla 2) todo lo cual expresa la confiabilidad de los diferentes métodos y la semejanza en
contenido de las diversas fuentes empleadas. A fines de comparación de los crudos obtenidos en este trabajo se
ofrece el valor de potencia a partir de un producto comercial (saponina blanca BDH) y algunos de los informados
por Segal et al. Así se puede concluir expresando que se pudo corroborar que la cascarilla obtenida en el proceso
industrial de la pulidura de los granos de quinúa, considerada un desecho, constituye una fuente para la
obtención de saponinas. Los crudos obtenidos presentan características comparables con las de productos
hipocolesteromizantes informados en la literatura científica.

Las experiencias preclínicas realizadas en el Laboratorio de Medicina Herbaria del ISMM con los materiales
referidos corroboraron el efecto hipocolesteromizante de los mismos y que además la dosis letal media es muy
superior a las dosis farmacológicas necesarias para lograr el efecto referido.

Con los crudos saponínicos extraíbles de la quinúa se pueden substituir medicamentos actualmente deficitarios y
además con un alto rendimiento, ya que se pueden obtener alrededor de 300 g de saponinas por Kg de cascarilla
procesada.

SUMMARY
Crudes of saponins were obtained from the small thin shell of grains of Chenopodium Quinoa Willd (quinúa) by
reflow with ethanol at 80 % v/v in order to use them as anticholesteraemia agents. The different batches of
gross saponins obtained showed an average yield of 37.12 % on the basis of the total amount of small thin
shell (8.03 %) and of 2.98 % on the basis of the whole number of grains. These products reacted strongly in
the tests of Liebermann-Burchard and Selivoflo, and their hemolytic potency (H50 in mg/mL) was in the run
from 42.6 to 28.4. 6 samples of crudes were subjected to saponification and no significant changes were
observed in the hemolytic potency of the saponified products (H50 between 37.2 and 22.7). This fact, and the
fact that the total of crudes had a negative reaction in the Fehling and Molish's tests, suggest that the
products obtained are in the form of sapogenins or other non-saponifiable derivatives.

Subject headings: SAPONINS/isolation & purification; ALCOHOL ETHYL; ANTICHOLESTERAEMIA

AGENTS/therapeutic use; MEDICINE HERBAL.

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