Sistema de Revisiones en Investigación

Veterinaria de San Marcos

Criopreservación de
semen en camélidos
sudamericanos

REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA - 2010

Autor:
Katherine Choez Aguilera
Universidad Nacional Mayor de San Marcos
Facultad de Medicina Veterinaria
 TABLA DE CONTENIDO
1. PRESENTACIÓN ...................................................................................................... 2
2. INTRODUCCIÓN ..................................................................................................... 2
3. PRINCIPIOS GENERALES DE LA CRIOPRESERVACIÓN DE SEMEN .......... 3
4. INTENTOS DE CRIOPRESERVACIÓN DE SEMEN EN CSA ............................. 5
5. CONCLUSIONES ..................................................................................................... 6
6. LITERATURA CITADA ........................................................................................... 6
 Criopreservación de semen en camélidos sudamericanos

Katherine Choez Aguilera (Kathyvet3@hotmail.com)

1. PRESENTACIÓN colección y procesos de conservación de

El objetivo de esta revisión es dar a espermatozoides en CSA.
conocer la técnica, implicancias,
alcances y limitaciones inherentes al 2. INTRODUCCIÓN
proceso de criopreservación del semen La criopreservación de semen y la
en camélidos sudamericanos (CSA). La utilización del semen congelado mediante
criopreservación permite el inseminación artificial han causado un gran
mantenimiento de la viabilidad y impacto sobre la reproducción animal y
funcionalidad celular a temperaturas humana, debido a que favorece el comercio
bajas, por lo que es posible detener el nacional e internacional de razas o líneas
proceso que sufre el espermatozoide genéticas, formación de bancos de
desde la eyaculación hasta la germoplasma, reserva genética,
fecundación y conservarlo en el tiempo conservación de especies amenazadas o en
potencialmente fértil. El fin de los peligro de extinción (Aller et al., 2003) . En
protocolos de criopreservación es el de camélidos sudamericanos existe muy poca
obtener mejores resultados en relación a información sobre inseminación artificial
la supervivencia espermática y fertilidad usando semen congelado (Bravo et al.,
del semen al descongelamiento. Las 1996); quizás debido a la falta de una
experiencias en criopreservación de metodología fiable de conservación de
semen en CSA hasta el momento no han semen en CSA.
sido satisfactorias, lo que conlleva a una
mayor investigación tanto de las La conservación de las estructuras
características del semen, proceso de espermáticas y de su capacidad fertilizante
exige la reducción o interrupción reversible
del metabolismo celular. Esto se consigue conservación de muchas especies y razas que
mediante el uso de dilutores y la están en extinción o cuentan con pocos
refrigeración o congelación que deprimen el ejemplares.
metabolismo. Durante el proceso de
criopreservación los espermatozoides se ven El proceso de refrigeración forma
sometidos a diversos tipos de estrés, los parte del proceso de congelación del semen;
cuales pueden inducir, en la célula sin embargo, también puede utilizarse como
espermática, daños letales o sub-letales los método de conservación a corto plazo para
cuales comprometen su funcionalidad. La lo que necesita medios diluyentes adecuados
optimización de protocolos de que deben contener componentes
criopreservación debe contemplar no solo la específicos, es decir, una solución tampón,
obtención de un alto número de sales, azúcares y sustancias que aporten una
espermatozoides sobrevivientes sino también cierta protección de la membrana contra el
la habilidad funcional de esta población. descenso de temperatura, como la yema de
Para lograr esto, es necesario comprender a huevo. A diferencia de la refrigeración del
que tipo de estrés se ven sometidos los semen, el proceso de congelación necesita
espermatozoides durante los procesos de también del empleo de un agente
congelación y descongelación así como la crioprotector que permita un descenso mayor
manera en que las células responden a las de la temperatura. Desde el descubrimiento
agresiones fisicoquímicas medioambientales. del glicerol como agente crioprotector
efectivo (Polge et al., 1949) y del
3. PRINCIPIOS GENERALES DE LA establecimiento de las técnicas básicas de
CRIOPRESERVACIÓN DE SEMEN criopreservación, el semen de una variedad
La preservación del semen en de especies se congela y utiliza con éxito en
diversas especies es un importante campo de la inseminación artificial. Sin embargo y con
investigación, tanto para facilitar las excepción de los bóvidos, la utilización
posibilidades de reproducción de diversos generalizada de semen congelado no se ha
individuos y así salvaguardar las extendido en las otras especies domésticas
características genéticas encaminadas a la (Parks y Graham, 1992; Holt, 2000), en parte
mejora de las especies, como para la porque los protocolos de congelación no
proporcionan resultados aceptables de hielo, de modo que habrá una considerable
fertilidad (Parks y Graham, 1992). concentración de sales en la porción
remanente del agua no-congelada. El
La reducción de la temperatura por aumento del gradiente osmótico a través de
debajo de los 37ºC y, principalmente, de los la membrana plasmática provoca la difusión
20ºC induce una serie de alteraciones de del agua intra-celular hacia el ambiente
naturaleza biofísica en el espermatozoide extra-celular, causando deshidratación de la
(Amann y Pickett, 1987). El mayor desafío célula y de la membrana plasmática (Amann
para las células en el proceso de congelación y Pickett, 1987). Por tanto la deshidratación
no es resistir a las bajas temperaturas del osmótica, más que la formación de hielo
nitrógeno líquido, sino mantener la intra-celular, es la principal causa de las
viabilidad en un rango de temperaturas, entre alteraciones ultraestructurales de la
o
los –15 y –60 C, que las células membrana y una de sus consecuencias es la
experimentan por dos ocasiones, es decir, pérdida de la selectividad de la membrana
durante la congelación y durante la (Parks y Graham, 1992).
descongelación. A –196oC no se producen
reacciones térmicas, puesto que debajo de Cuando las células están sujetas a
los –130oC no existe agua en el estado temperaturas inferiores a 0oC, inicialmente
líquido (Mazur, 1984). “súperrefrigeran”. El modo en que recuperan
el equilibrio depende del ritmo de
Con el enfriamiento de la suspensión refrigeración y de su permeabilidad al agua.
celular por debajo de los 0oC, se producen Si el ritmo de enfriamiento es lento o si la
una serie de procesos nocivos para la célula permeabilidad al agua es elevada, las células
que comienzan con la formación de hielo en se equilibran por la transferencia del agua
el compartimento extra-celular. La intra-celular hacia el hielo externo, o sea, se
membrana plasmática actúa como barrera, equilibran por deshidratación; pero si son
impidiendo la expansión de los cristales de refrigeradas rápidamente o si su
hielo del medio exterior hacia el permeabilidad al agua es baja, éstas se van
compartimento intra-celular (Watson, 1979). equilibrar, en parte, por congelación intra-
Las sales no forman parte de los cristales de celular (Mazur, 1970). El ritmo de
enfriamiento debe, por tanto, tener en cuenta rápidamente a fin de evitar la re-
estos fenómenos (Amann y Pickett, 1987). cristalización de estos pequeños cristales, en
grandes cristales que pueden dañar las
La presencia de hielo extra-celular, células (Amann y Pickett, 1987).
aunque puede deformar las células, no causa
ruptura de la membrana plasmática ni La refrigeración y la congelación son
tampoco daños irreversibles (Watson, 1979). acontecimientos que pueden conducir a la
Por el contrario, la formación intra-celular muerte o bien a alteraciones funcionales del
de cristales de hielo provoca lesión y muerte espermatozoide. Las lesiones causadas en la
de la célula. Dado que la formación de hielo membrana y en los distintos orgánulos del
intra-celular es dependiente del ritmo de espermatozoide derivan de dos de los
congelación y descongelación, el estricto principales motivos de estrés de la
control del ritmo del descenso y del aumento criopreservación: -las alteraciones de la
de la temperatura puede minimizar las temperatura y - la formación y disolución de
lesiones celulares causadas por el hielo intra- los cristales de hielo (Watson, 1995).
celular. Sin embargo, si el ritmo de Además de la cristalización, también están
congelación es extremamente rápido el hielo implicadas alteraciones osmóticas, que
intra-celular constituye micro-cristales y los conducen a daños celulares evidentes
daños derivados son muy reducidos (Amann (Hofmo y Berg, 1989). En consecuencia, la
y Pickett, 1987). motilidad y la integridad acrosómica
disminuyen de modo significativo, tras la
El éxito final de un procedimiento de congelación y la descongelación.
congelación está condicionado por el
proceso de descongelación. Si el ritmo de 4. INTENTOS DE
enfriamiento es rápido, el de calentamiento CRIOPRESERVACIÓN DE SEMEN
también lo debe ser; alternativamente, si el EN CSA
ritmo de enfriamiento es lento también debe Los intentos de criopreservar semen
serlo el de calentamiento. Las células que en camélidos sudamericanos han sido hasta
contienen micro-cristales de hielo intra- la fecha insatisfactorios, debido a las
celulares deben ser re-calentadas muy características propias del semen de
camélidos, la técnica de colección (Ferré y 5. CONCLUSIONES
Werkmeister, 1996), falta de conocimiento
sobre su composición, viscosidad y uso de El semen congelado ofrece distintas
dilutores (Bustinza, 2001). posibilidades para el avance tecnológico en
la explotación de los CSA y brindaría una
Entre los mas estudios mas mayor rapidez al progreso genético en estas
importantes realizados en criopreservación especies.
de semen de camelidos sudamericanos esta
el trabajo de Bravo et al., (1996) usando Debido a la poca información existente sobre
semen de alpaca obtuvo un porcentaje de colección y manejo del semen en CSA, es
motilidad post descongelamiento de 46.7% y necesario centrar esfuerzos en la realización
en llama de 45%, siendo estos los mayores de estudios al respecto, e iniciar una
obtenidos hasta la fecha, sin embargo no ha investigación sistemática de los efectos de la
sido posible reproducir la metodología. congelación y los diversos procesos de
Estudios posteriores reportaron tasas descongelación que experimentan los
inferiores de motilidad post espermatozoides de los CSA para el
descongelamiento tales como las desarrollo de procedimientos eficaces para la
mencionadas por Vaughan et al. (2003) que preservación de semen.
obtuvo porcentajes de 17.4%; Pérez, (2005),
usando diferentes concentraciones de
crioprotectores, reportó motilidades de 22.5 6. LITERATURA CITADA
a 41%; Santiani et al., (2005), reportó la
obtención de motilidades que iban desde 4 a 1. Aller J, Rebuffi G, Cancino K, Alberio
20%, Burgel et al., (2001), obtuvo una R. 2003. Influencia de la
motilidad post descongelamiento menor a criopreservación sobre la motilidad,
10% y Aller et al., (2003), obtuvo un 20% de Viabilidad y fertilidad de
motilidad postdescongelamiento. espermatozoides de llama (Lama glama)
Arch Zootec 52: 15 – 23.
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cryopreservation procedures on sperm Industries Research and Development
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