MICROSCOPIA DE FLUORESCENCIA: TECNICA DE

FRET (TRANSFERENCIA DE ENERGÍA DE RESONANCIA

FLUORESCENTE)

PROGRAMA DE BIOLOGÍA
¿ QUE ES ?

• Es una de las técnicas de fluorescencia mas utilizadas para estudiar las

interacciones moleculares. ("TIPOS DE MICROSCOPIA", 2018) Esta depende
de la transferencia de un fluoróforo a otro fluoróforo cuando dos
moléculas se encuentran cerca.
¿Cómo funciona?
• Cuando dos fluoróforos se encuentran muy cerca entre 1 a 10nm la energía
de la emisión de uno de ellos (el donador) es transferida al segundo
fluoróforo; esto ocurre solamente cuando la longitud de onda de la emisión
del donador coincide con la excitación del aceptor.

DONANTE – fluorocromo que se excita en una longitud de onda y emite una fluorescencia.
RECEPTOR- Fluorocromo que se excita con la fluorescencia emitida por el donante.
¿Cuales son las condiciones?

Las moléculas deben estar cerca de 10nm

https://bit.ly/2w21ekh

• A distancias < 10nm no se produce una transferencia

significativa.

El espectro del aceptor debe ser mayor que el

espectro del donador.

Extinguir la fluorescencia del aceptador para que

aumentar la del donador https://bit.ly/2w21ekh

https://bit.ly/2w21ekh
Usos

• INTERACCIONES MOLECULARES: Proteína-proteína, Proteína-Acido

1 nucleico.

• Plegamiento de proteínas.
2 • Replicación del ADN helicasa.

• Indicador del estado físico químico del citoplasma

• Estudio de la difusión de la membrana plasmática y el retículo
3 endoplasmático.

• La combinación de FRET y TIRF se han usado para monitorear la síntesis

4 del ADN en tiempo real.
EJEMPLO

• La célula de la parte superior esta quieta e

inmóvil, mientras que la célula de abajo se
desliza sobre una superficie.

• Con la técnica de FRET se puede descubrir la

parte donde se unen determinadas proteínas,
con los cambios de su estructura y
comportamiento en la célula.

• El azul muestra la zona donde muchas

proteínas estathamina se unen a las moléculas
de tubulina, este proceso ocurre con una
https://bit.ly/2M92Vr4 menor proporción en las zonas rojas.
BIBLIOGRAFIA:
• TIPOS DE MICROSCOPIA. (2018). Retrieved from
https://www.ipb.csic.es/servicios/Microscopia/uploads/3/6/2/2/3622788/mic
roscopia_a_grandes_rasgos.pdf
• Diez, J. (2004). Arbor , Técnicas de microscopia optica. Retrieved from
http://arbor.revistas.csic.es/index.php/arbor/article/viewFile/607/609
• FRET. (2018). Retrieved from
http://www.tecnicaenlaboratorios.com/Nikon/Info_fret.htm
• Alegre-Cebollada, J. (2013). TÉCNICAS DE MOLÉCULA INDIVIDUAL APLICADAS
AL ESTUDIO DE PROTEÍNAS. Retrieved from
https://www.cnic.es/sites/default/files/moleculaindividual.pdf