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PRESENTADO A:
EDGAR HERNÁN BELTRÁN
PRESENTADO POR:
CAROLINA GUZMAN
DIEGO MORENO
YURY MENDEZ
OBJETIVO GENERAL
Evaluar la eficiencia, facilidad y exactitud del método de filtración por
membrana, en la determinación de microorganismos indicadores de
contaminación para establecer un parámetro de la calidad del agua.
OBJETIVOS ESPECIFICOS
o Afianzar el conocimiento sobre la técnica de filtración por membrana,
con el fin de establecer diferencias, incluyendo ventajas y desventajas,
entre los métodos utilizados en clase para la determinación de
microorganismos indicadores de contaminación en aguas.
o Determinar las características microbiológicas, de las muestras de agua
seleccionadas por cada grupo de trabajo, mediante el método de
filtración de membrana.
o Comparar las mediciones obtenidas de las muestras de agua, con el
propósito de promover el análisis de resultados.
MARCO TEORICO
La presencia de Escherichia coli indica contaminación fecal en agua, ya que
este microorganismo es habitante normal del tracto digestivo de animales de
sangre caliente y rara vez se encuentra en agua o suelo que no haya sufrido
algún tipo de contaminación fecal, por ello se considera como indicador
universal. Este microorganismo genera una alerta a cualquier sistema de
suministro de agua ya que su presencia por si sola puede generar
gastroenteritis y causar la muerte como el caso de la cepa E coli O157:H7 o
puede sugerir la presencia de otros microorganismos altamente patógenos
como son la Salmonella, Shigella, Klebsiella, Listeria etc. La identificación de
Coliformes totales es más difícil ya que estos pueden provenir de suelo, y de
superficies de agua dulce por lo que no siempre son intestinales. La presencia
de Coliformes sugiere fallas en la eficacia del tratamiento y la integridad del
sistema de distribución. La identificación de las cepas aisladas puede a veces
dar una indicación sobre el origen.
La filtración por membrana es el mecanismo mediante el cual se atrapan en la
superficie de la membrana microorganismos cuyo tamaño es mayor que el
tamaño del poro 0.45 um, esto gracias a que una bomba eléctrica ejerce una
presión diferencial sobre la muestra de agua haciendo que se filtre. Los
contaminantes de tamaño menor que el específico del poro atraviesan la
membrana o se quedan retenidos en su interior, las bacterias quedan en la
superficie de la membrana y luego está es llevada a un medio de
enriquecimiento selectivo, el cual promueve el crecimiento y la identificación.
Según el Decreto número 1575 de 2007 “Por el cual se expiden normas
técnicas de calidad de agua potable”. ARTICULO 25. El agua para consumo
humano debe cumplir con los siguientes valores admisibles desde el punto de
vista microbiológico. FILTRACION POR MEMBRANA: Coliformes totales. 0
UFC/100mL y E. coli, 0 UFC/100mL.
Como se explicó anteriormente, la técnica tiene diversas aplicaciones a
variedad de productos, como: cerveza, vino, leche, alimentos, azúcar, fármacos
y cosméticos, entre otros.
Para el caso en particular del agua se usan discos nutrientes como:
Tipo de disco nutriente Detección de
ENDO, Tergitol TTC, Teepol o MFC E. coli y coliformes
Standard TTC o Standard Conteo de colonias
Cetrimida Pseudomonas aeruginosa
Azida Estreptococos fecales
Fórmula * en g / L
Peptona de carne 10,00
Extracto de carne 5,00
Lactosa 20,00
Extracto de levadura 6,00
Azul de bromotimol 0,05
Heptadecilsulfato de sodio 0,10
Agar 15.00
PH final 7,2 ± 0,2 a 25ºC
Descripción
Este medio está formulado para la identificación presunta de coliformes en
agua potable, mediante filtración por membrana.
Debido a la inestabilidad del trifeniltetrazolio, se proporciona en forma separada
En recipiente, esterilizado y listo para usar.
Las placas derramadas se pueden almacenar refrigeradas por hasta 8 días sin
perder su eficacia. No deben utilizarse si hay signos de deshidratación o
secado.
Técnica
Mientras se utiliza la técnica de filtración por membrana para la presunta
identificación de los coliformes en el agua, debe tenerse en cuenta que el
volumen mínimo a filtrar depende del tipo de agua que se esté probando.
Si es necesario, diluir con tampón fosfato estéril para obtener el número de
colonias en la membrana apropiada para el recuento.
Para cada muestra de agua se deben filtrar dos volúmenes sobre dos
membranas y e incubarse en Agar Chapman TTC a 35ºC y 44ºC
respectivamente.
1
Consultado (13/04/17). Tomado de:
http://www.ideam.gov.co/documents/14691/38155/Coliformes+totales+y+E.+coli+en+Agua+Filtraci%C
3%B3n+por+Membrana.pdf/5414795c-370e-48ef-9818-ec54a0f01174
Este sistema emplea Pads absorbentes humedecidos con medio de cultivo
estériles y deshidratados. Una vez que se humedecen con 3,0 - 3,5 ml de agua
estéril y desionizada (o destilada), están listos para usar de inmediato. Todos
los tipos de conjuntos de almohadillas de nutrientes se suministran con los
filtros de membrana de 47 mm, con un tamaño de poro de 0,45 mm, que
también se embalan de manera individualmente estéril.
Cada caja NPS contiene 100 almohadillas de nutrientes estériles, cada una de
las cuales se inserta individualmente en una placa petri y se esteriliza. Diez
platos Petri se sellan en una bolsa de aluminio. Este embalaje especial en
bolsas protege los componentes sensibles de la fórmula de la almohadilla de
nutrientes durante el transporte y almacenamiento de las fluctuaciones de la
humedad y la temperatura. Como resultado, tienen una vida útil que oscila
entre 18 y 24 meses desde la fecha de fabricación.
2
Instituto de Hidrología, Meteorología y Estudios Ambientales Ministerio de Ambiente,
Vivienda y Desarrollo Territorial - República de Colombia SUBDIRECCIÓN DE HIDROLOGIA –
GRUPO LABORATORIO DE CALIDAD AMBIENTAL COLIFORMES TOTALES Y E. COLI POR EL
MÉTODO DE FILTRACIÓN POR MEMBRANA EN AGAR CHROMOCULT Código: TP0314 Fecha:
30/08/2007 Versión: 03 Página: 5 de 17
PROCEDIMIENTO
RESULTADOS
1 36
Control E.feacalis
Potable 20 de Julio 9
ANÁLISIS DE RESULTADOS
Los resultados muestran recuento en todas las muestras, se puede asumir que
el recuento hace referencia a la presencia de coliformes y E.coli, ya que el
medio (Standard TTC) usado para incubar la membrana de nitrocelulosa tras la
filtración, era específico para el aislamiento de este tipo de microorganismos.
La presencia de Escherichia coli indica contaminación fecal en agua, ya que
este microorganismo es habitante normal del tracto digestivo de animales de
sangre caliente, mientras que los coliformes totales sugieren fallas en la
eficacia del tratamiento y la integridad del sistema de distribución, su presencia
acciona los mecanismos de control de calidad y de procesamiento dentro de la
planta de tratamiento de agua, e intensifica la vigilancia en la red de
distribución.
Las bacterias coliformes que la lluvia arrastra por el suelo, usualmente quedan
atrapadas en las rocas y a medida que el agua pasa por las rocas llega a los
sistemas de agua subterránea. sin embargo, los pozos que no están bien
construidos, que están rajados o que no están bien sellados, pueden proveer
una puerta para que las bacterias coliformes entren al agua y la contaminen.
Cuando se utiliza como medio de eliminación de excretas y otros desechos
orgánicos, el agua es una fuente de transmisión de numerosos
microorganismos, entre los que prevalecen los de origen intestinal. Los agentes
patógenos transmitidos por el agua constituyen un problema mundial que
demanda un urgente control implementando medidas de protección ambiental a
fin de evitar el aumento de las enfermedades relacionadas con la calidad del
3
agua tanto en humanos como en animales . Según la normatividad colombiana
4
por medio de la Resolución 2115 de 2007 se estipula el valor de referencia en
cuanto a los indicadores microbiológicos como son el recuento de coliformes
totales y E.coli, los cuales deben ser de 0 UFC/100mL en agua para consumo
humano utilizando el método de filtración por membrana, por lo tanto el agua
de red de los barrios “20 de Julio y del C.C. Plaza Central” presentó resultados
mayores a lo permitido, lo que indica que el recurso hídrico no es apto para su
consumo.
Los resultados obtenidos se pueden comparar con lo reportado en el estudio
“Contaminación microbiológica en aguas de pozo. Partido Gral, Pueyrredon.
Provincia de Buenos Aires. Argentina” su objetivo fue determinar el grado de
contaminación microbiológica en aguas para consumo humano no potables en
diferentes barrios buscando así la presencia de coliformes totales, E.coli entre
otros microorganismos patógenos. Los puntos de muestreo fueron los grifos y
bombas inmediatas a la fuente de agua estos presentaban E. coli en diferentes
porcentajes en todos los barrios y la contaminación por coliformes totales
5
superó el 92.9% en todos los barrios en estudio.
Se realizó un análisis de reconocimiento de factores y puntos de contaminación
que pueden afectar la red de distribución, como resultado se pudo determinar
que las posibles causas de contaminación en los diferentes puntos pueden ser:
1) perforaciones, que aumentan el posible ingreso de microorganismos
externos del medio ambiente
2) componentes de desecho
3) material orgánico o partículas extrañas
Otro factor es el material inadecuado presente en algunos tramos de la tubería
como es el galvanizado, la inadecuada infraestructura, la falta de lavado o
desinfección, proliferación de algas que puede afectar la calidad del agua,
ausencia de malla de protección y estancamiento del agua.
3
Vargas C, Rojas R, y Joseli J. 1996. Control y Vigilancia de la Calidad del Agua de Consumo
humano. Textos Completos. CEPIS. 27p
4
Colombia. Ministerio de Protección Social, Ministerio de Ambiente, Vivienda y Desarrollo
Territorial. Resolución 2115 de 2007.por el cual se señalan características, instrumentos
básicos y frecuencias del sistema de control y vigilancia para la calidad del agua para consumo
humano. Bogota: El Ministerio; 2007.
5
Zamora A, Folabella A, Pérez Guzzi J, Domínguez S, De Lucha L. Contaminación microbiológica
en aguas de pozo. Partido GRAL. Pueyrredon. Provincia de Buenos Aires. Argentina. GAHD. [En
línea] 2002. [Fecha de acceso 16 Mayo de 2009]. Disponible en: http://www.
alhsud.com/public/articulos/Zamora.pdf
Igualmente, las cámaras de aquietamiento, que hacen parte de las plantas de
purificación del agua, presentan factores de contaminación como: la carencia
de malla de protección, la insuficiente limpieza o desinfección, la acumulación
de algas y las tapas no selladas permitiendo evacuar agua de la válvula con
recipientes no adecuados.
A causa de todas las posibles fallas y factores que puede presentar la red de
distribución, se puede establecer que esta tiene falencias tanto en su
mantenimiento, infraestructura y malas reparaciones del sistema, esto se
puede relacionar con el estudio “Microorganismos indicadores de la calidad de
agua de consumo humano en Lima Metropolitana” que describe que el agua
para consumo humano que entra a un sistema de distribución puede
contaminarse por rotura de las tuberías del sistema de distribución, reservorios
defectuosos, construcción de nuevas tuberías o reparaciones realizadas sin las
mínimas medidas de seguridad. Así mismo, defectos en las estructuras de
pozos, depósitos, ausencia o irregular mantenimiento de dichas instalaciones,
de igual manera factores secundarios que permiten el crecimiento de
microorganismos en el agua dentro de los sistemas de distribución y
almacenamiento como: cantidad y tipo de nutrientes, pH, oxigeno, temperatura
y material de las tuberías; todos estos factores permiten el crecimiento de
6
organismos bacterianos patógenos .
Además de los focos de contaminación mencionados anteriormente, es posible
que se encuentren otros, asociados a la población aledaña de la fuente, tales
como:
✓ La eliminación de aguas residuales mencionada en el documento
7
“Aspectos biológicos de la calidad del agua” , es otro posible factor de
contaminación, pues la presencia de pozos sépticos cercanos a la
fuente, conducen a deterioro de la calidad del agua, ya que estos no han
tenido nunca una limpieza o eliminación de cieno que por su
acumulación durante demasiado tiempo, ocasiona la ausencia de
separación de materia sólida de las aguas negras y pasan directamente
al suelo corriendo el riesgo que sean arrastradas por aguas de lluvia
hasta la quebrada.
En la práctica además de realizar el recuento en UFC/100mL de los
indicadores de calidad bacteriológica en agua se realizó la presunta
identificación de algunos microorganismos como Escherichia coli, mediante el
6
. Marchand E. Microorganismos Indicadores de la calidad del agua de consumo humano en
Lima Metropolitana. [Proyecto de investigación]. Lima-Perú: Oficina general de Sistemas de
Biblioteca y Biblioteca Central; 2002. p.1 55. [En línea].PDF. Disponible en:
http://sisbib.unmsm. edu.pe/BibVirtualData/Tesis/Basic/Marchand_P_E/tesis_completo.pdf
7
Aurazo de Zumaeta M. Aspectos biológicos de la calidad del agua. [Proyecto de
investigación]. Disponible en: http://bvsde.per.paho.org/
bvsatr/fulltext/tratamiento/manualI/tomoI/dos.pdf
uso de medios específicos como el Standard TTC. Este mismo microorganismo
89101112
ha sido aislado de otras fuentes de agua en diferentes países ( ). En
general, la presencia del microorganismo anteriormente mencionado es
importante ya que este tiene la capacidad de producir enfermedades. E. coli
produce enfermedad diarreica aguda, infecciones urinarias, gastroenteritis,
infecciones en la piel, infecciones de las vías biliares, peritonitis, neumonía,
13
meningitis neonatal, abscesos hepáticos, bacteriemia, colitis hemorrágica y
14
síndrome urémico hemolítico (SUH) .
La dimensión del peligro que representa esta bacteria, se puede ver reflejado
en la epidemiología 2007 del municipio de San Antonio de Tequendama, en
donde son prevalentes las enfermedades diarreicas agudas; esto puede estar
debido a la presencia evidente del indicador E. coli que por sus características
15
puede causar enfermedades que ponen en riesgo la vida de la población .
Finalmente se puede concluir que la presencia de los indicadores de
contaminación representan un gran riesgo para la salud de los consumidores
que pueden padecer de algunas enfermedades por causa del agua que no
8
Chiroles S, González M, Torres T, Valdés M, Domínguez I. Bacterias indicadoras de
contaminación fecal en aguas del río Almendares (Cuba). HSA [En línea] 2007 [fecha de acceso
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http://www.inhem.sld.cu/Publicaciones/Hig%20Sanid%20Ambient%207%202
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9
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10
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14
Lound L, Tanaro J. Síndrome Uremico Hemolitico. [Sitio en Internet]. Disponible en:
http://intra.fb.uner.edu.ar/sindrome.pdf Consulta: 02 de Julio de 2009.
15
Vargas C, Rojas R, y Joseli J. 1996. Control y Vigilancia de la Calidad del Agua de Consumo
humano. Textos Completos. CEPIS. 27p.
cumple con las especificaciones de la normatividad vigente y además existen
distintas causas que afectan la calidad del agua y que en muchas ocasiones no
se les da la importancia necesaria siendo determinantes para la presencia de
diferentes microorganismos tanto patógenos como oportunistas. Se aconseja a
la comunidad utilizar medidas de prevención para el manejo correcto del agua
para su consumo y eliminación de desechos. Realizar el mantenimiento,
desinfección y limpieza de Control bacteriológico del agua de la red de
distribución del barrio 20 de julio y C.C.Plaza Central.
CONCLUSIONES