PRÁCTICA 12: HIDROLISIS DE UNA PROTEÍNA Y ENSAYOS PARA PROTEÍNAS Y AMINOÁCIDOS

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL 1 “PREPARACIÓN DE DISOLUCIONES”:

I. HIDRÓLISIS DE GRENETINA (DISOLUCIÓN “A”)

Colocar en un matraz balón de fondo plano Adaptar un refrigerante en posición de reflujo y

de 200 mL, 1 g de grenetina, 10 mL de ácido calentar suavemente por 35 minutos. Después
clorhídrico concentrado (líquido altamente de este tiempo agregar 0.5 g de carbón activado,
corrosivo) y 10 mL de agua destilada continuar calentando por 2 minutos y filtra

II. DISOLUCIÓN NEUTRALIZADA DE HIDROLIZADO III. DISOLUCIÓN DE GRENETINA SIN HIDROLIZAR (DISOLUCIÓN “C”).

DE GRENETINA (DISOLUCIÓN “B”)

Colocar en un vaso de precipitados de 100
mL, 0.5 g de grenetina, agregar 20 mL de agua
Tomar 5 mL de disolución. “A” y neutralizarla
destilada y agita
con hidróxido de sodio al 10% (determinar el
punto de neutralización empleando papel
pH); filtrar.

IV. DISOLUCIÓN DE ALBÚMINA (DISOLUCIÓN “D”)

Preparar una disolución de albúmina, agitando

clara de huevo por 1.0 minuto. Agregar 100 mL
de agua, agitar y filtrar a través de un trozo de
manta de cielo o gasa. 3. Utilizar el filtrado
(disolución “D”) para efectuar las siguientes
pruebas.
 PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL 2 “REACCIONES DE IDENTIFICACIÓN”:

1) REACCIÓN XANTOPROTEÍCA:

Colocar en un tubo de ensayo 2 mL de Agregar a cada tubo 5 mL de ácido nítrico Enfriar cada tubo de ensayo y agregar a cada
disolución de grenetina hidrolizada concentrado (líquido altamente corrosivo), agitar uno, gota a gota, una disolución de hidróxido
(disolución “A”) y en otro, 2 mL de disolución con ayuda del agitador de vidrio. Calentar de sodio al 10% hasta pH básico. Observar el
de albúmina (disolución “D”). suavemente a baño María y observar la coloración. cambio de color

2) REACCIÓN DE PRECIPITACIÓN:

Colocar en un tubo de ensayo 2 mL de Agregar a cada uno 5 mL de la disolución de

grenetina hidrolizada (disolución “A”), en hidróxido de sodio al 10% y 1.0 mL de
otro 2 mL de disolución de albúmina disolución de acetato de plomo al 10%,
(disolución “D”); y en un tercer tubo de Calentar a ebullición con agitación, por
ensayo, colocar 2 mL de agua destilada cinco minutos y observar los resultados.

3) REACCIÓN DE BIURET:

3. 0.5 mL de la disolución de albúmina (disolución

En seis tubos de ensayo, colocar las siguientes “D”).
disoluciones:
4. 0.5 mL de la disolución de grenetina hidrolizada
1. 0.5 mL de agua destilada + 0.5 mL de sin neutralizar (disolución “A”) + 0.5 mL de la A cada tubo, agregar 2 mL de la
sol. de hidróxido de sodio al 10%
disolución de hidróxido de sodio al 10%. disolución de sulfato de cobre al 2
(tubo testigo).
5. 0.5 mL de la disolución de albúmina + 0.5 mL de %. Agitar, observar y concluir.
2. 2. 0.5 mL de la disolución de
grenetina sin hidrolizar (disolución la disolución de hidróxido de sodio al 10%.
“C”) + 0.5 mL de hidróxido de sodio al
6. 0.5 mL de grenetina hidrolizada sin neutralizar
10%,
(disolución “A”)
 4) REACCIÓN CON NINHIDRINA:
En cinco tubos de ensayo, colocar las siguientes
soluciones:
1. 0.5 mL de agua destilada.
2. 0.5 mL de la disolución de grenetina
hidrolizada a pH neutro (disolución “B”)
5) REACCIÓN CON ÁCIDO NITROSO
En cuatro tubos de ensayo, colocar 3 mL de HCl
concentrado (líquido altamente corrosivo) y
enseguida agregar:
1. 2 mL del hidrolizado de grenetina (disolución
“A”)
6) ACCIÓN REGULADORA DE AMINOÁCIDOS
En tubo de ensayo colocar 2 mL de
hidrolizado de grenetina a pH neutro
(disolución “B”) y en otro 2 mL de agua
destilada. Agregar a cada tubo 0.3 mL (6
gotas) de disolución indicadora de rojo
Congo.
3. 0.5 mL de la disolución de grenetina sin
hidrolizar (disolución “C”)
Agregar a cada tubo 0.5 mL de la
4. 0.5 mL de la disolución de albúmina disolución de ninhidrina al 3% y
(disolución “D”) calentar a baño María por cinco
minutos. Observar y concluir
5. 0.5 mL de la disolución al 1% de un
aminoácido patrón.
2. 2 mL de grenetina sin hidrolizar (disolución.
“C”)
Enfriar y agregar a los cuatro tubos
3. 2 mL de la disolución de albúmina de ensayo, 1 mL de la disolución
(disolución. “D”) acuosa de nitrito de sodio al 5%.
Observar y concluir
4. Tubo testigo sin proteína.
Agregar a cada tubo, gota a gota HCl 0.1N, hasta un
cambio de coloración. Observar y concluir. Efectuar
el mismo ensayo empleando fenolftaleína al 0.1%
como indicador, y agregando disolución de
hidróxido de sodio 0.1N de igual forma, hasta
cambio de coloración. Observar y concluir