LABORATORIO DE BIOLOGÍA

ACTIVIDAD DE LAS ENZIMAS

DAMARIS LIZBET LANCACHO LANCACHO

MARIA JOSE PULGARIN URIBE

DOCENTE

SANDRA LILIANA VERA VELASQUEZ

UNIVERSIDAD DE PAMPLONA

FACULTAD DE INGENIERÍAS Y
ARQUITECTURAS

PRIMER SEMESTRE

PAMPLONA- NORTE DE SANTANDER

2018
1. TÍTULO DE LA PRÁCTICA: ACTIVIDAD DE LAS ENZIMAS

2. OBJETIVOS

 Determinar la presencia de la enzima catalasa en tejidos animales y vegetales

 Observar el efecto de diferentes factores sobre la actividad enzimática

 Comprobar la acción hidrolítica de la amilasa

3. INTRODUCCIÓN

El término cinética enzimática implica el estudio de la velocidad de una reacción

catalizada por una enzima y los efectos que pueden tener factores como los inhibidores.
Uno de los principales estudios que se realizan en una enzima es medir el efecto en la
velocidad de la reacción cuando se modifican las concentraciones del sustrato y se
mantienen constantes la concentración de enzima, el pH, la fuerza iónica del medio, la
temperatura, entre otros.

Se evalúa la influencia de estos factores en la reacción catalizada por enzimas con la

finalidad de determinar los intermediarios en una reacción y el papel que juegan en la
reacción enzimática, es decir, para predecir mecanismos de reacción. Es esencial
entender estos mecanismos para desarrollar nuevas herramientas moleculares, por
ejemplo, para combatir enfermedades en las que se conoce a la enzima que la produce.
También es usual medir la actividad enzimática con diferentes sustratos para entender su
especificidad o bien, medir la actividad de la enzima de diferentes tejidos u organismos
para entender cómo las diferencias en actividad están relacionadas con la función y/o la
fisiología del organismo del que proceden.

4. MARCO TEORICO

Las enzimas constituyen la clase más numerosas y especializada de proteínas y catalizan

toda la interminable serie de reacciones químicas que conforman el metabolismo
celular. Son en fin, los catalizadores biológicos. Como todas las proteínas, son
elaboradas por las células y tienen una única misión dentro de este mecanismo celular.

Las enzimas actúan como cualquier otro catalizador químico, excepto en dos
diferencias:

1. Son muy específicas. Cada enzima cataliza un tipo particular de reacción, mientras
que un catalizador no biológico cataliza gran variedad de reacciones. Este
mecanismo de acción enzimática, tan especifico, lo realizan interactuando junto
con las moléculas con que reaccionan, formando un complejo transitorio llamado
Enzima-sustrato, el cuál es libremente reversible. Esta reversión es rápida, de tal
 manera que la enzima queda libre sin alterarse y puede una vez recuperada,
combinarse con otra molécula de sustrato.
2. Todas son de constitución proteica, Lo cual determina una estructura espacial dada,
permitiendo su especificidad como catalizadores. Esta especialidad varía de una
enzima a otra. Por esta segunda cualidad, son extremadamente sensibles al calor,
debido a la desnaturalización de sus componentes. También son afectadas por el
pH, mostrando mayor actividad a un pH determinado; por encima o debajo de este
nivel óptimo, la actividad enzimática disminuye o desaparece.

Existen enzimas cuya actividad depende exclusivamente de su estructura como

proteínas. Otras enzimas, sin embargo, están formadas por dos componentes: uno
proteico, llamado coenzima y otro orgánico, no proteico, llamado coenzima que son,
ambos, fundamentales para la acción enzimática. Su disociación da lugar a una
pérdida de actividad en este sentido.

ENZIMA REACCIÓN QUE CATALIZA

A. Oxidorreductoras Reacciones de oxido
B. Transferasas Transferencia de grupos funcionales
C. Hidrolasas Reacciones de hidrólisis
D. Liasas Adición a los dobles enlaces
E. Isomerasas Reacciones de isomerización
F. Ligasas Formación de enlaces con ruptura de ATP

5. MATERIALES, INSUMOS O EQUIPOS

 MATERIALES: 2 gradillas, 1 beaker de 50 ml, 1 mechero, churrasco para tubos,

15 Tubos de ensayos, 2 Pipetas de 10ml, 1 Pinza de madera, Fruta madura, cinta
de enmascarar, guantes, bolsa negra, trozos de hígado, trozos de tomate.

 REACTIVOS: 2ml Benedict, 2ml de Lugol, 6ml de agua oxigenada, 2ml Buffers
fosfato 0.1m a pH de 3, 7,11.

 SOLUCIONES: 20ml de solución de almidón 1%.

6. PROCEDIMIENTO

Reconocimiento de la catalasa en tejidos animales

1. Coloque un tubo de ensayo unos trozos pequeños de hígado

2. Añada 2 mililitros de agua oxigenada

3. ¿Qué observa? ¿Según la reacción 1 que sucede? Interprete los resultados

 En el primer tubo pusimos el hígado, al agregar el peróxido de hidrógeno se vio
un burbujeo abundante que se da por la descomposición del peróxido por medio
de la catalasa, lo cual libera oxígeno, con abundante producción de burbujas de
oxígeno, se obtiene una mayor concentración de catalasa por lo cual la actividad
enzimática es mayor.

Reconocimiento de la catalasa en tejidos vegetales

1. Haga el mismo reconocimiento anterior, con trozos de tomate para observar la

acción de la catalasa sobre los tejidos vegetales, ¿Qué observa? Interprete los
resultados

Desnaturalización de la catalasa

1. Coloquen en un tubo de ensayo unos trozos pequeños de hígado

2. Añada agua, hierva la muestra durante unos minutos

3. Después de este tiempo retire el agua sobrenadante

4. Añada agua oxigenada hasta cubrir los trozos de hígado

Hidrólisis del almidón

1. Coloque una gradilla con 6 tubos de ensayo numerados del 1-6 adicione en cada
uno las cantidades que se indican a continuación

2. Coloque los tubos en baño maría a 37 °C, durante 10 min

3. En los tubos 1,3,5 adicione 1 gota de lugol (Prueba para almidones)

4. En los tubos 2.4.6 adicione 1 ml e reactivo de benedict (Prueba para azucares

reductores)

5. Interprete los resultados ¿Qué tubos se pueden tomar como control (Patrón) en
las pruebas de almidones y azucares? ¿En cuál de los tubos hubo acción
enzimática? ¿Por qué hubo o no acción enzimática?

Influencia del pH en la actividad enzimática

1. Recoja 6 ml de saliva en un beaker de 50 ml

2. Coloque una gradilla con 3 tubos de ensayo numerados del 1-3

3. Adicione en cada uno las cantidades que se indican

4. Agite vigorosamente, adiciones 2 ml de almidón al 1% en cada tubo. Agite

nuevamente y agregue una gota de lugol
 5. Anote el tiempo de desaparición del color en cada pH. Justifique la desaparición
del color

6. ¿En qué tubo fue más actividad la enzima sobre el almidón? ¿Cuál es el pH
óptimo para la amilasa? ¿Por qué los otros valores de pH son inadecuados?
¿Cuál es el pH óptimo de la saliva humana? Explique los resultados

7. MUESTRA PROBLEMAS

8. CONCLUSIONES

9. RECOMENDACIONES

10. ANEXO
1. Describa el efecto de la temperatura en la acción enzimática
2. ¿A qué valores de pH y temperatura es estable la actividad enzimática de la
catalasa?
3. ¿A qué pH teórico es más activa la amilasa? Compare este valor con el obtenido
en el laboratorio

11. BIBLIOGRAFÍA