Manualdepracticas16 1515

Manual de prácticas de la materia Enfermedades Bacterianas de los Animales Domésticos.
Julio 2007
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE AGUASCALIENTES
CENTRO DE CIENCIAS AGROPECUARIAS
MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
MANUAL DE PRÁCTICAS DE LA MATERIA

ENFERMEDADES BACTERIANAS DE LOS ANIMALES
DOMÉSTICOS
M. en C. LAURA ZEPEDA BARRIOS.

Profesor de asignatura
Di. Mauricio Ramírez Ruano

Coordinador de Elaboración de Manuales de Procedimientos
Jesús María, Aguascalientes. 3ª revisión Julio de 2007

Este documento cuenta con 119 hojas útiles incluyendo esquemas, dibujos y anexos.
M. en C. Laura Zepeda Barrios

Centro de Ciencias Agropecuarias
Manual de prácticas de la materia Enfermedades Bacterianas de los Animales Domésticos. Julio 2007
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE AGUASCALIENTES
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ÁREA PECUARIA
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ÁREA DE TECNOLOGÍA DE ALIMENTOS
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ÁREA ADMINISTRATIVA POSTA ZOOTÉCNICA
L. A. F. EDUARDO ARAIZA GONZÁLEZ

Índice 3
Introducción 7
Competencias 7
Niveles de Desempeño 9
Programa del sistema de prácticas 10
Prácticas Generales de Bioseguridad 11
Práctica 1. Medidas de bioseguridad en el laboratorio 15
Introducción 16
Criterios de desempeño 17
Resultados esperados 17
Desarrollo de la Práctica 16
Sistema de evaluación 17
Práctica 2. Control de agentes patógenos 18
Introducción 19
Normas de seguridad 20
Práctica 3. Recolección y conservación de muestras 25
para análisis bacteriológicos y micológicos
Introducción 26
Formato de historia clínica 30

Práctica 4. Uso de los medios de cultivo y su inoculación 31

Introducción 32
Práctica 5. Identificación bacteriana y uso de tinciones 37
Introducción 38
Práctica 6. Pruebas bioquímica como método de identificación 45
bacteriana
Introducción 46
Práctica 7. Antibiograma 52
Introducción 53

Práctica 8. AisIamiento e identificación de bacterias piógenas Gram positivas 57

Introducción 58
Práctica 9. Aislamiento e identificación de enterobacterias 62
Introducción 63
Práctica 10. Análisis bacteriológico de la leche 67
Introducción 68
Práctica 11. Análisis bacteriológico del agua 72
Introducción 73
Práctica 12. Urocultivo 78

Introducción 79
Práctica 13. Aislamiento e identificación de hongos 82
Introducción 83
Práctica 14. Caso clínico 86
Introducción 87
Bibliografía 93
Para saber más 93
Glosario de términos 94
Anexo 1 97
Anexo 2 100
Anexo 3 107

Introducción
La importancia de las enfermedades bacterianas en los animales domésticos radica en las
pérdidas económicas que ocasionan y la trascendencia que tienen como fuente de infección
para el hombre.
El estudio de características clínicas y patológicas de cada enfermedad proporcionan un

arma importante para su diagnóstico, adicionalmente es de vital importancia la identificación
del agente causal, para que en conjunto sea posible proporcionar un diagnóstico oportuno y
veraz con el fin de controlar las enfermedades y en consecuencia la erradicación de las
mismas, con especial atención en el tratamiento y la prevención.
El uso de laboratorios de diagnóstico clínico para la detección de enfermedades bacterianas

en animales domésticos, proporciona detalles valiosos para la confirmación de la enfermedad
sospechosa a través de la identificación del agente etiológico y herramientas importantes
para el tratamiento de las mismas.
Competencias
Conocimientos
C-1. Identificará las características biológicas y fisicoquímicas de los agentes etiológicos y

las relacionará con las lesiones y las alteraciones que estos le infringen al organismo animal
y a sus productos.
C-2. Distinguirá las características de las técnicas diagnósticas, físicas e instrumentales,
aplicables a la valoración clínica de los animales.
C-3. Analizará los fundamentos farmacológicos y terapéuticos que lo facultan para
intervenir en la resolución de problemas de salud animal.
C-4. Reconocerá las características epidemiológicas de los métodos de control, prevención
y erradicación de las enfermedades de los animales y las zoonosis.

Habilidades
H-1. Planeará las estrategias e implementará las técnicas de prevención y control de las
enfermedades de los animales domésticos y de la zoonosis.
H-2. Detectará las características de los principales agentes causales de enfermedades así
como las alteraciones anatómicas y funcionales que provocan.
H-3. Aplicará los procedimientos para identificar y valorar las desviaciones de la normalidad
anatómica y fisiológica de los órganos, los aparatos y los sistemas para integrar un
diagnóstico clínico y diferencial, así como realizar un pronóstico médico.
H-4. Aplicará los recursos terapéuticos contra los padecimientos de los animales.
Actitudes
A-1. Valorará las repercusiones sociales y económicas de las enfermedades de los

animales domésticos y se procurará por proteger la salud del hombre de las enfermedades
que los animales le puedan trasmitir.
A-2. Respetará la vida de los animales útiles al hombre y evitará el sufrimiento innecesario
de los mismos.

Niveles de desempeño
Nivel 1.- Se realizan funciones rutinarias de baja complejidad. Se reciben

instrucciones. Se requiere baja autonomía.
Nivel 2.- Se realizan un conjunto significativo de actividades de trabajo, variadas y
aplicadas en diversos contextos. Algunas actividades son complejas y no rutinarias.
Presenta un bajo grado de responsabilidad y autonomía en las decisiones. A menudo
requiere colaboración con otros y trabajo en equipo.
Nivel 3.- Se requiere un importante nivel de toma de decisiones. Tiene bajo su

responsabilidad recurso materiales con los que opera su área. Así como control de
recursos financieros para adquisición de insumos.
Nivel 4.- Se desarrollan un conjunto de actividades de naturaleza diversa, en las que
se tiene que mostrar creatividad y recursos para conciliar intereses. Se debe tener
habilidad para motivar y dirigir grupos de trabajo.
Nivel 5.- Se desarrollan un conjunto de actividades de naturaleza diversa, en las que

se tiene que mostrar un alto nivel de creatividad, así como buscar y lograr la
cooperación entre grupos e individuos que participan en la implantación de un
problema de magnitud institucional.
Nivel de desempeño propuesto 3. Tomará decisiones que le permitan llegar al diagnóstico

de las enfermedades a través de la observación de signos y lesiones presentes, y a la vez
determinar los métodos para la identificación del agente causal a través del envío de
muestras representativas a un laboratorio de diagnóstico junto con la historia clínica del
caso. Puede hacer uso de los insumos disponibles y además la posibilidad de disponer de
recursos adicionales de manera responsable para realizar la identificación del agente causal
y proponer el tratamiento adecuado a través del uso de antibiogramas. O puede realizar
todas las funciones si se cuenta con todo la infraestructura necesaria para hacerlo.

Programa del sistema de prácticas
TEMA PRÁCTICA ÁMBITO DE DURACIÓN Y SEMANA

PROGRAMADA DESARROLLO DE REALIZACIÓN DE
LA PRÁCTICA
Enfermedades 1. Medidas de Aula/ 1 hora
bacterianas de los bioseguridad en el Laboratorio 1ª semana
animales laboratorio
domésticos (EBAD)
EBAD 2. Control de agentes Laboratorio 2 horas
patógenos. 2ª. Semana
EBAD 3. Recolección y Laboratorio 2 horas
conservación de 3ª. Semana
muestras para análisis
bacteriológicos y
micológicos.
EBAD 4. Uso de los medios Laboratorio 3 horas
de cultivo y su 4ª. Semana
inoculación
EBAD 5. Identificación Laboratorio 2 horas
bacteriana y uso de 5ª. Semana
tinciones
EBAD 6. Pruebas Laboratorio 3 horas
bioquímicas. 6ª. Semana
EBAD 7. Antibiograma. Laboratorio 3 horas
7ª. semana
EBAD 8. Aislamiento e Laboratorio 4 horas
identificación de 8ª. Semana
bacterias piógenas
EBAD 9. Análisis Laboratorio 4 horas
bacteriológico de la 9ª. Semana
leche
EBAD 10. Aislamiento e Laboratorio 4 horas
identificación de 10ª. Semana
enterobacterias
EBAD 11. Análisis Laboratorio 4 horas
bacteriológico del agua 11ª. Semana
EBAD 12. Urocultivo Laboratorio 4 horas
12ª. Semana
EBAD 13. Aislamiento e Laboratorio 10 días
identificación de 13ª. semana
hongos
EBAD 14. Caso clínico Laboratorio 10 horas
14ª. a 16ª. Semana
Prácticas generales de bioseguridad. Reglamentos y procedimientos

generales
• El acceso al laboratorio es limitado o restringido a criterio del responsable del
laboratorio cuando se están llevando a cabo las prácticas u otros trabajos con cultivos
y especimenes. En general, no se permite dentro del laboratorio o en salas de
animales la presencia de personas que tienen un mayor riesgo de adquirir la infección
o para quienes la infección puede tener graves consecuencias.
• El acceso al laboratorio es únicamente con bata blanca de algodón a fin de evitar que
la ropa de calle se pueda contaminar y ensuciar, y no debe ser usada fuera del
laboratorio.
• Las puertas y ventanas deben permanecer cerradas mientras se este trabajando.
• Debe haber orden, limpieza y respeto durante las prácticas.
• Se utiliza una protección facial (anteojos, máscaras, protecciones faciales u otra
protección) para las probables salpicaduras o aerosoles de materiales infecciosos u
otros materiales peligrosos para el rostro cuando se deben manipular.
• Esta prohibido manipular lentes de contacto. Las personas que usan lentes de
contacto en laboratorios deben también utilizar un protector facial.
• Se deben usar guantes si existen lastimaduras en las manos o si la piel presenta
alguna erupción. Deben existir alternativas disponibles al uso de guantes de látex
empolvados.
• Tras quitarse los guantes, se realizará un lavado de manos con un jabón antiséptico y
el secado se realizará con papel. Nunca usar solventes orgánicos para lavarse.
• Se dispondrá de recipiente de descarte en el lugar de trabajo a no más de 30 cm del
personal.
• Se descartan los guantes cuando están manifiestamente contaminados, y se retiran
cuando se completa el trabajo con los materiales infecciosos o cuando está
comprometida la integridad del guante. Los guantes desechables, no se vuelven a
usar ni se utilizan para tocar superficies “limpias” (teclados, teléfonos, entre otras), y
no se deben usar fuera del laboratorio.
• Debe usarse cuando es necesario cubre bocas.

• Evitar distracciones y juegos.

• El cabello largo debe llevarse recogido.
• Comer, beber, fumar y aplicarse cosméticos esta formalmente prohibido en el área de
trabajo del laboratorio.
• Prohibido el almacenamiento de comida o bebida.
• Todos los procedimientos deben ser realizados cuidadosamente para evitar derrames,
salpicaduras y la formación de aerosoles.
• Está rigurosamente prohibido pipetear con la boca. Se realizará pipeteo automático
con material adecuado.
• Escurrir las pipetas apoyando la punta en la pared interna del recipiente, produciendo
una presión leve.
• No burbujear aire en recipientes abiertos, por ejemplo para lograr una descarga total
de los tips de pipetas automáticas.
• Los cultivos, tejidos, fluidos corporales, o desechos potencialmente infecciosos se
colocan en un recipiente con tapa que evita las filtraciones durante la recolección,
manejo, procesamiento, almacenamiento, transporte o envío.
• Todo material contaminado, sólido o líquido, deberá ser descontaminado antes de su
desecho.
• Todos los cultivos, stocks y otros desechos reglamentados se descontaminan antes
de ser desechados mediante un método de descontaminación aprobado, como por
ejemplo, mediante autoclave. Los materiales que se deben descontaminar fuera del
laboratorio inmediato son colocados en un recipiente duradero, estanco y cerrado para
su transporte desde el laboratorio.
• El trabajo con los artículos punzantes o cortantes contaminados, incluyendo las agujas
y jeringas, portaobjetos para microscopio, pipetas, tubos capilares y escalpelos deberá
restringirse tanto como sea posible, de lo contrario se debe siempre tener un alto
grado de precaución.
• Deberá usarse un descartador rígido para agujas y otros elementos punzantes.
• No reencapuchar las agujas, pues es una fuente importante de accidentes cortó
punzantes.

• El material de vidrio debe ser sustituido por material plástico, en la medida de lo

posible.
• Las agujas desechables no se deben doblar, cortar, romper, recubrir o retirar de las
jeringas desechables, o de otra forma manipular manualmente antes de su
disposición; más bien, se deben colocar con cuidado en recipientes resistentes a
punciones para la disposición de objetos punzantes ubicados en un lugar conveniente.
• Los objetos punzantes o cortantes no desechables se deben colocar en un recipiente
de paredes duras para su transporte al área de procesamiento para su
descontaminación, preferentemente en autoclave.
• No se deben manipular directamente con las manos los artículos de vidrio rotos, sino
que deben retirarse por medios mecánicos como un cepillo y pala, pinzas o fórceps.
• Los recipientes de agujas contaminadas, objetos punzantes y vidrio roto deben
descontaminarse antes de desecharlos y se deben descartar de acuerdo a las
reglamentaciones federales, estatales y locales.
• Las agujas desechables utilizadas no se deben doblar, cortar, romper, recubrir o retirar
de las jeringas desechables, o de otra forma manipular manualmente antes de su
• Todas las superficies de trabajo se limpiarán y desinfectarán diariamente luego de
finalizar el trabajo o al fin del día y luego de cada derrame o salpicadura de material
viable con desinfectantes efectivos contra los agentes en cuestión.
• En la zona de trabajo no debe colocarse material de escritorio ni libros ya que el papel
contaminado es de muy difícil esterilización.
• No encender mecheros cuando se encuentres solventes cerca.
• Siempre rotular el material utilizado en una práctica.
• No utilizar ningún equipo sino se sabe su funcionamiento.
• Conocer la localización y uso de extintores.
• Nunca desechar nada al drenaje.
• Seguir ordenadamente los procesos para el desarrollo de los experimentos
• Reportar cualquier anomalía al responsable del laboratorio.

• Aquellos laboratorios que desarrollen actividades con microorganismos que no sean

del grupo 1, deben exponer en la puerta, durante el tiempo que duren las tareas, el
signo de riesgo biológico, la especie con la que se trabaja, el nombre y forma de
ubicar al profesional responsable en caso de accidente y los requerimientos que
deben cumplir las personas que ingresen al laboratorio.
• Como medida de seguridad es importante conocer las medidas a tomar en caso de
emergencia, las reglas relacionadas con la bioseguridad y respetar y hacer cumplir
todo lo anterior.
CLASIFICACIÓN DE LOS AGENTES BIOLÓGICOS POR GRUPO DE

RIESGO
Agente biológico del grupo 1.

Se refiere a aquél que resulta poco probable que cause una enfermedad en el hombre.
Es aquél que puede causar una enfermedad en el hombre y puede suponer un peligro para
los trabajadores, siendo poco probable que se propague a la colectividad y existiendo
generalmente profilaxis o tratamiento eficaz.
Aquél que puede causar una enfermedad grave en el hombre y presenta un serio peligro
para los trabajadores, con riesgo de que se propague a la colectividad y existiendo frente a él
generalmente profilaxis o tratamiento eficaz.
Se refiere a aquél que causando una enfermedad grave en el hombre supone un serio
peligro para los trabajadores, con muchas probabilidades de que se propague a la
colectividad y sin que exista generalmente frente a él profilaxis o tratamiento eficaz.
Los grupos de microorganismos se muestran en el anexo 1

Medicina veterinaria y zootecnia
Práctica # 1
Medidas de bioseguridad en el laboratorio

Introducción
El tema de bioseguridad incluye tres aspectos, él más importante es la seguridad humana

con el fin de preservar la salud además de conservar las condiciones adecuadas de trabajo.
El segundo aspecto es el cuidado del medio ambiente, por lo tanto el manejo de desechos es
un punto clave. El tercer aspecto es proteger las instalaciones, equipo y materiales. La
finalidad de cumplir las medidas de bioseguridad es evitar accidentes en el laboratorio. Hay
que tomar en cuenta que las enfermedades infecciosas no solo afectan a las personas que
trabajan con microorganismos, estas también pueden afectar a terceras personas. La
persona responsable de la bioseguridad es cada uno de nosotros y la mejor forma de
prevenir accidentes es prevenirlos.
Seguridad humana
Manejo de desechos Protección de materiales e instalaciones
Criterios de desempeño
La persona será competente para trabajar en el laboratorio cuando:
1. Respete las medidas de bioseguridad mencionadas en el manual
2. Aplique las medidas de bioseguridad.
3. Realice una reflexión al respecto de las medidas de bioseguridad

Resultados esperados
Resultado Tiempo
Reporte de práctica: reflexión sobre las medidas de 1 días
bioseguridad y cuestionario.
Lectura de las medidas de bioseguridad 1 hora
Aplicar con las medidas de bioseguridad Todo el semestre
Desarrollo de la práctica
1. Contestar la evaluación diagnóstica
2. En equipo discute las medidas de bioseguridad generales y particulares y manifiesten
porque es importante cumplirlas.
3. Realiza de manera individual una reflexión sobre las medidas de bioseguridad.
Sistema de evaluación
Evidencias de desempeño
Trabaja en equipo para discutir las medidas de bioseguridad
Cuestionario contestado
Realiza una reflexión sobre las medidas de bioseguridad
Evaluaciones intermedias con recomendaciones
Se realizan de acuerdo a las dudas que el alumno tenga durante el transcurso de la práctica
o de acuerdo a lo observado durante los procedimientos que el alumno lleve a cabo.
También se realiza la revisión de la práctica, indicándole al alumno lo que debe mejorar.
Métodos de asignación de calificaciones
Reflexión 60%, se toma en cuenta la redacción y la ortografía
Cuestionario 40%
Formatos para portafolio de evidencias
Para esta práctica únicamente se requiere:
1. Contestar cuestionario 1 (anexo 3)
2. Reflexión, incluir:
a. Portada con el nombre y número de práctica, fecha de elaboración
b. Actividad realizada, las expectativas a corto y largo plazo y lo que más gusto.

Práctica # 2
Control de agentes patógenos

Introducción
Desde hace mucho tiempo es un reto el control de enfermedades infecciosas por
destrucción, disminución de su número o inhibición de microorganismos.
Los métodos de esterilización fueron desarrollados como norma esencial para la preparación
de cultivos puros en el laboratorio y fueron adoptados en medicina y cirugía para evitar la
extensión de las enfermedades infecciosas.
Existen varios métodos de esterilización y desinfección, los cuales recurren a procedimientos
físicos, mecánicos y químicos que se emplean en función del lugar a aplicar y el grado de
erradicación microbiana que se pretende conseguir (anexo 2).
Es importante conocer las diferencias entre desinfección y esterilización, con la finalidad de
determinar su uso dentro de los laboratorios que trabajan con agentes patógenos, evitando
su propagación y de esta manera proteger la salud humana y animal.
¿Es posible la pérdida de la capacidad de las bacterias de reproducirse de forma indefinida?
¿O solamente disminuyen en su número? ¿De que depende?
La persona será competente para manejar los métodos de esterilización para el control de
microorganismos in vitro cuando:
1. La utilización de equipo de seguridad lo realiza durante la práctica

2. Los métodos de control de agentes patógenos los realiza de acuerdo a las

características generales de resistencia de los agentes patógenos.
3. El uso de los materiales y sustancias, para el control de los agentes patógenos, lo
realiza de acuerdo a las características de los mismos.
4. Identifica los procesos de esterilización y desinfección existentes en el laboratorio.

5. Después de la esterilización, realiza el manejo adecuado de los materiales
esterilizados para que no se contaminen.
6. Un proceso de esterilización lo realiza por medio del autoclave.
Resultado Tiempo
Reporte de práctica 2 días
Manejo de autoclave 1 hora
Manejo de las sustancias químicas de desinfección 30 minutos
disponibles en el laboratorio
Crecimiento positivo y negativo en las placas y tubos 26 horas
donde se utilizaron métodos de control de patógenos.
Normas de bioseguridad
• Se debe poner especial cuidado en evitar quemaduras con el autoclave y materiales
recién esterilizados. Con este fin deben usarse guantes especiales.
• Se deben usar guantes para el manejo de soluciones desinfectantes y cultivo de

microorganismos.

• Tras quitarse los guantes, se realizará un lavado de manos con un jabón antiséptico y
el secado se realizará con papel.
• Tener conocimiento de los agentes, sustancias y productos peligrosos que existen en
el laboratorio.
• Los cultivos y sustancias que se hayan utilizado se deben colocar en un recipiente
especial indicado por el responsable del laboratorio para su esterilización y desecho.
• Esta prohibido manipular lentes de contacto. Las personas que usan lentes de
contacto en laboratorios deben también utilizar un protector facial.
Es importante siempre el uso de

guantes y mantener el mechero
encendido mientras se trabaja
Materiales
1. Autoclave
2. Formaldehído u otro desinfectante disponible
3. Cultivo bacteriano
4. Solución salina
5. Nefelómetro de Mac Farland
6. 2 cajas de agar MacConkey o XLD
7. Asa microbiológica
8. Mechero
9. Lápiz graso
10. Tubos estériles
11. Pinzas estériles

12. Pipeta estéril o jeringa

13. Hisopos estériles
Desinfección
Técnica de dilución en tubo
1. Primero realiza diferentes diluciones del agente químico 1/1, 1/5 y 1/10, 1/20.
2. El mismo volumen de cada dilución se dispensa en tubos estériles.
3. A cada tubo añade la misma cantidad de una suspensión del microorganismo utilizado
como prueba (utiliza el nefelómetro de Mac Farland).
4. Divide en 4 una caja con agar e inocula con un hisopo en cada parte, empezando por la
dilución más pequeña, una dilución de los tubos. Utiliza el asa para la siembra.
5. No olvides marcar cada tubo y caja.
6. Los medios inoculados incúbalos a 37ºC 24 a 48 horas.
7. Al cabo de este tiempo se examina el crecimiento del microorganismo y reporta
crecimiento (+) o crecimiento (-)
8. Aquellos tubos que presenten crecimiento negativo indican la dilución a la cual ese
agente químico mata al microorganismo.
Esterilización
1. En un tubo con solución salina realiza una dilución del microorganismo utilizando el
nefelómetro de Mac Farland.
2. Divide una caja con agar en 2 partes.
3. A partir de la solución con el microorganismo siembra 1/2 de la caja (testigo).
4. Esteriliza el tubo de vidrio con la dilución en el autoclave.

5. Coloca agua en la caldera, procurando que su nivel (hasta la marca) no alcance a los
objetos que se disponen sobre una rejilla de metal.
6. Cierra asegurando la tapa y sin ajustar los bulones enciende el autoclave.
7. Deja abierta la válvula de escape hasta que todo el aire se desaloje y comience la salida
de vapor en forma de chorro continuo y abundante.
8. Ajusta los bulones y esteriliza a 121°C por 15 minutos.
9. Una vez esterilizada siembra la otra mitad de la caja (no olvides marcar la caja).
10. Los medios inoculados incúbalos a 37ºC 24 a 48 horas.
11. Al cabo de este tiempo se examina el crecimiento del microorganismo y reporta
crecimiento (+) o crecimiento (-)
Coevaluación: ver formato (anexo 3)
Autoevaluación: ver formato (anexo 3)
Reporte de práctica
Reflexión sobre la práctica, debe incluir :
o Número, nombre de la práctica y fecha de realización
o Objetivo
o Actividades realizadas
o Expectativas a corto y largo plazo
• Reflexión sobre correcciones, indicando:
o Nombre y número de práctica
o Medidas de mejora

1. A través de las autoevaluaciones
2. De acuerdo a las dudas que el alumno tenga durante el transcurso de la práctica o de
acuerdo a lo observado durante los procedimientos que el alumno lleve a cabo.

3. Se realiza revisión del reporte escrito de la práctica, se dan recomendaciones y el alumno

realiza una reflexión al respecto. Las prácticas siguientes deben observar las
recomendaciones, ya que serán devueltas si las observaciones no fueron corregidas.
Coevaluación: 10%
Reporte escrito: 90% donde: breve introducción* 5%, materiales y métodos 5%, resultados
20%, uso de diagramas, dibujos y/o fotografías 10%, conclusión 15%, discusiones 20%,
bibliografía 5% y reflexiones 20%
*máximo una cuartilla
Formato para el portafolios de presentación
1. Portada
2. Presentación
3. Índice
4. Evidencias numeradas con su respectiva reflexión
Formato para la realización de reportes:
1. Portada: debe incluir fecha, nombre y número de práctica
2. Introducción: Puede ser realizado por el propio alumno de acuerdo a una o varias lecturas
previas o referenciada.
3. Materiales y métodos: debe contener únicamente los materiales y procedimientos
utilizados durante la práctica
4. Resultados. Los resultados se deben realizar paso por paso y con detalle de acuerdo a la
metodología.
5. Se debe hacer uso de diagramas, cuadros, dibujos o fotografías que representen el
resultado obtenido, los cuales deben ser con calidad y limpieza (de manera opcional
también sobre la metodología).
6. Conclusión. Consecuencia sacada de un razonamiento
7. Discusión. Análisis o comparación de los resultados, a la luz de otros existentes o
posibles.
8. Referencias: incluir autor, nombre del libro, tema, revista y/o artículo, editorial, año y
páginas.

Práctica # 3
Recolección y conservación de muestras para análisis

bacteriológicos y micológicos

Introducción
La bacteriología y micología clínica veterinaria permiten, a través de técnicas de laboratorio,
confirmar un diagnóstico presuntivo y sugerir la quimioterapia. Sin embargo no solo depende
de estas técnicas, sino también de una correcta toma y envío de muestra, la cual va a
depender de los conocimientos que el médico veterinario tenga en relación con este tema.
Para realizar un diagnóstico correcto es necesario una analítica detallada y específica de
acuerdo a la sintomatología observada y es absolutamente necesario remitir junto con la
muestra una ficha completa con toda la información del caso. También es necesario que la
muestra sea tomada del sitio anatómico más representativo del problema, las muestras
deben tomarse dentro de las 3 primeras horas de la muerte o sacrificio del animal y bajo las
más estrictas condiciones de asepsia, etc. El médico veterinario debe contar con un
protocolo que le permita colectar y enviar las muestras de manera adecuada al laboratorio
clínico.
Es importante que las muestras sean manejadas con precaución debido a que muchas
enfermedades infecciosas de los animales, constituyen un peligro para el clínico y
bacteriólogo. Por lo anterior es necesario que el clínico remita las muestras al laboratorio
indicando el microorganismo sospechoso.
¿Inadecuada? ¿Qué presupone la anterior pregunta?
La persona será competente para aplicar las técnicas de recolección y conservación de
muestras biológicas para remitirlas de manera adecuada a un laboratorio de diagnóstico
clínico cuando:
1. Sospecha de alguna enfermedad y realiza una historia clínica.
2. Identifique los procedimientos para el diagnóstico.
3. Sepa que el éxito del diagnóstico depende de una adecuada toma de muestra
4. La recolección y conservación la realiza con los materiales adecuados
5. La colección de la muestra la realiza con asepsia.
6. La colección de la muestra la realiza sin estresar o dañar al animal.
7. Tome una muestra representativa del proceso patológico.
8. Envíe y conserve la muestra según su origen y procesamiento.

9. El envío de la muestra lo realiza en el tiempo adecuado, desde la toma de muestra hasta

el procesamiento de la misma.
10. Junto con la muestra realiza la identificación de la misma.
11. Solicite al laboratorio los estudios correspondientes a la enfermedad sospechosa.
Resultado Tiempo
Obtener una muestra clínica 30 minutos
Conservación, envío e identificación de la muestra 30 minutos
Realizar una historia clínica 1 hora
• No se permite la presencia en el laboratorio de animales que no se están utilizando en el
trabajo que se está realizando.
• Se requiere el uso de guantes.
• Se retiran los guantes cuando se completa el trabajo con los materiales infecciosos o
cuando está comprometida la integridad del guante.
• Los guantes desechables no se lavan, no se vuelven a usar ni se utilizan para tocar
superficies “limpias” (teclados, teléfonos, entre otras).
• Tras quitarse los guantes, se realizará un lavado de manos con un jabón antiséptico y el
secado se realizará con papel.
• El material de vidrio debe ser sustituido por material plástico, en la medida de lo posible.
Para la toma de la muestra es recomendable el uso de recipientes de plástico.
Historia clínica
Crea una historia clínica sobre una enfermedad bacteriana, utiliza el formato al final de la
práctica.

Toma de muestra
Material por equipo
9 *Hielera con refrigerantes
9 *Un lazo (aproximadamente 5 metros)
9 Un tubo de medio de transporte Stuart
9 Un hisopo estéril
9 *Un sobre de papel nuevo
9 Pinzas
9 *Alcohol al 70%
9 Yodo al 2%
9 *Algodón
9 1 frasco estéril
9 *Overol y botas
9 *Guantes *Material que lleva el alumno
Método
1. Utilizar material estéril para la toma de muestra
2. No estresar al animal
3. Hacer una breve historia clínica

4. Realizar la asepsia antes de la toma de muestra
5. Obtener una muestra de exudado, leche, heces, orina o pelo
Exudado Pelo Orina

6. Conservar y enviar la muestra.
Se realiza igual a la práctica # 2

Datos de la Muestra
Fecha____________________
Remitente __________________________ Dirección _____________________________
Especie ________________ Raza _____________ Sexo ___________ Edad _________
Número del animal ________________________
Muestra__________________________________________________________________
Diagnóstico presuntivo ______________________________________________________
Quimioterapéuticos aplicados _________________________________________________
Historia clínica
Fecha____________________
Nombre de del propietario ___________________________________________________
Dirección ________________________________________________________________
Especie ________________ Raza _____________ Sexo ___________ Edad _________
Estado reproductivo __________________
Peso aproximado __________________
Quimioterapéuticos aplicados __________________
Historia clínica*:
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
*Se debe incluir todos los signos y lesiones presentes (incluidos los de la necropsia si
se realiza), tiempo que han estado presentes y fechas.

Práctica # 4
Uso de los medios de cultivo y su inoculación

Introducción
El crecimiento bacteriano in vitro requiere de diferentes sustancias y compuestos, además de
condiciones fisicoquímicas como temperatura y atmósfera. Hay que considerar que cada
microorganismo requiere de diferentes condiciones, siendo unos más exigentes que otros,
por lo que los medios de cultivo se clasifican de acuerdo a su utilidad diagnóstica, basada en
los requerimientos nutrimentales de cada bacteria:
Medios de cultivo generales, enriquecidos, selectivos, diferenciales, de enriquecimiento y de
transporte.
Los medios también son divididos de acuerdo a sus características físicas y la consistencia
de estos va en relación con el método de siembra que debe utilizarse (figura 1) y con el fin
que pretenda obtenerse (ejemplo: aumentar la posibilidad de crecimiento, detección de
motilidad bacteriana, etc.): Medios líquidos, semisólidos, sólidos y duros.
Anexo 1 (cuadro 2)
Medios sólido
No hay que olvidar que la selectividad también se logra modificando las condiciones
fisicoquímicas. También es importante considerar la forma de inoculación dependiendo del
medio utilizado.

La persona será competente para utilizar los medios de cultivo según su uso específico para
inocularlos de acuerdo a sus características físicas y funcionales, cuando:
1. Valore la utilidad diagnóstica de los medios.
2. El cultivo bacteriano lo realiza de acuerdo a las características nutricionales y
fisicoquímicas de las bacterias.
3. La técnica de siembra la realiza de acuerdo a las características físicas de los medios.
4. El estriado lo realiza sin romper el agar
5. Logre el aislamiento y crecimiento de la bacteria en cuestión
6. Al obtener crecimiento bacteriano realiza la descripción de los cambios en el medio
provocados por la bacteria aislada.
Resultado Tiempo
Inoculación en diferentes medios de 1 hora
cultivo
Crecimiento bacteriano 24 horas
Descripción de los cambios en los 26 horas
medios provocados por las bacterias
aisladas
• Se debe poner especial cuidado en evitar el contacto de la piel con materiales
potencialmente infecciosos. Con este fin deben usarse guantes cuando se manipulen
muestras o cultivos que contengan posibles patógenos.
secado se realizará con papel. Nunca usar solventes orgánicos para lavarse.


desecho.
• Todos los cultivos, stocks y otros desechos reglamentados se descontaminan antes de
ser desechados mediante un método de descontaminación aprobado, como por ejemplo,
mediante autoclave. Los materiales que se deben descontaminar fuera del laboratorio
inmediato son colocados en un recipiente duradero, estanco y cerrado para su transporte
desde el laboratorio. Los materiales que se deben descontaminar fuera del laboratorio
inmediato se embalan de conformidad con las normas locales, estatales y federales
aplicables antes de retirarlos del establecimiento.
Practica el estriado
1. Elabora 4 gelatinas utilizando grenetina.
2. Las gelatinas deben ser elaboradas en cajas de petri*
3. En dos cajas realiza el estriado por cuadrante y en las otras dos estriado completo
*Deben ser traídas por los alumnos
Inoculación en diferentes medios de cultivo
Materiales
9 3 cajas de petri con agar nutritivo
9 Agar nutritivo en medio inclinado
9 Medio semisólido
9 Caldo nutritivo
9 Asa bacteriológica convencional
9 Asa recta
9 Mechero
9 Cultivo mixto bacteriano
9 Cultivo bacteriano
Procedimiento

1. Antes de realizar la inoculación de los medios observa sus características y anótalas.

2. Realiza la inoculación en medio líquido utilizando una asada del cultivo bacteriano.
Hazlo por medio de agitación con asa convencional.
3. Realiza la inoculación en medio semisólido utilizando una asada del cultivo bacteriano.
Hazlo por picadura con asa recta.
4. Realiza la inoculación en medio sólido con superficie inclinada, utilizando una asada
del cultivo. Realízalo por picadura y estriado en la superficie con asa recta.
5. Realiza la inoculación en las cajas de agar utilizando una asada de cultivo mixto, hazlo
utilizando la técnica de aislamiento en cultivo puro, la cual se realiza por estría en
cuatro cuadrantes.
6. Identifica las cajas inoculadas e incúbalas a 37 °C durante 24 horas.
7. Después de la incubación observa el crecimiento obtenido y los cambios en los
medios
FIGURA. 1 Métodos de siembra
Medio líquido Medios semisólidos Medio sólido

Agitación Picadura Picadura y estriado

Estriado completo Estriado a 4 cuadrantes
Igual a la práctica #2

Práctica # 5
Identificación bacteriana y uso de tinciones

Introducción
Para identificar una bacteria es necesario tener un cultivo puro de la misma, por lo tanto la
primera fase de trabajo consiste en aislar a la bacteria y comprobar su estado de pureza. Lo
anterior se explica porque aunque el microorganismo sea el agente causal de la enfermedad
nunca se presenta solo, sino que viene acompañado de otros considerados microbiota
normal o agentes secundarios.
La identificación inicial del microorganismo se basa en los caracteres morfológicos, los
cuales se pueden observar utilizando un frotis fresco o diferentes tinciones, que nos van a
permitir observar a través de un examen microscópico el tamaño, forma, disposición,
presencia de cápsula, formación de esporas, disposición y número de flagelos, así como la
estructura de la pared celular por su comportamiento frente a la tinción de Gram o de Ziehl-
Neelsen. (fig. 2)
Otra de las etapas que no orienta a la identificación bacteriana es el aspecto de las colonias
en placas de agar donde se puede apreciar la forma, elevación, bordes, tamaño, superficie,
estructura, consistencia, color y transparencia. (Fig. 3)
La persona será competente para relacionar las características generales de las bacterias y
formas de tinción para su identificación, cuando:
1. Realiza un frotis fijo.
2. Como primer paso para la identificación realiza tinción de Gram.
3. Identifique la función de cada técnica de tinción.
4. Dependiendo del agente etiológico realiza la tinción correspondiente a lo que desee
observar (cápsula, esporas, motilidad).
5. Diferencie entre Gram + y Gram –
6. Al observar al microscopio realiza la descripción de las características morfológicas de las
bacterias, su agrupación y tamaño (figura 1).
7. Identifica la morfología de la colonia.
8. La identificación de estructuras en diferentes microorganismos la realiza utilizando la
tinción correspondiente a los que desea observar.
9. Al observar las bacterias enumera todas las características observadas.

Resultado Tiempo
Un frotis fijo 10 minutos
Poner de manifiesto la cápsula a través de la tinción 30 minutos
negativa de tinta china
Realizar tinción de Gram y observar la diferencia entre 20 minutos
Gram (+) y Gram (-)
Descripción de la morfología bacteriana, tamaño y
agrupación
Descripción de la morfología de las colonias 20 minutos
Poner de manifiesto las esporas a través de la tinción de 30 minutos
Schaeffer y Fulton
Observar estructuras fúngicas a través de la tinción de 20 minutos
azul de lactofenol
• Deben usarse guantes cuando se manipulen muestras o cultivos que contengan posibles
patógenos.
• Se deben usar guantes si existen lastimaduras en las manos o si la piel presenta alguna
erupción. Deben existir alternativas disponibles al uso de guantes de látex empolvados.
secado se realizará con papel.
• Tener conocimiento de las sustancias y productos peligrosos que se usan durante la
práctica.
• El trabajo con los artículos punzantes o cortantes contaminados, incluyendo portaobjetos
para microscopio, pipetas, deberán restringirse tanto como sea posible, de lo contrario se
debe siempre tener un alto grado de precaución.
• Deberá usarse un descartador de elementos punzantes.

• No se deben manipular directamente con las manos los artículos de vidrio rotos, sino que
deben retirarse por medios mecánicos como un cepillo y pala, pinzas o fórceps.
Materiales generales
9 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
9 *Lápiz graso
9 Asa bacteriológica
9 Mechero
9 Microscopio
9 Toallas de papel
*Lo debe traer el alumno
Realiza un frotis fijo
Materiales
9 Agua destilada
Procedimiento
1. Marca una laminilla con un círculo utilizando lápiz graso (donde colocarás la muestra)
2. Coloca una pequeña gota de agua destilada y mezcla una asada de cultivo bacteriano
(no olvides esterilizar el asa)
3. Deja secar a temperatura ambiente.
4. Una vez seca la laminilla fija la muestra pasando tres veces sobre la flama del
mechero con la muestra hacia arriba (procura no aplicar mucho calor ya que puedes
destruir las estructuras bacterianas). Realiza la tinción de Gram y de Schaeffer y
Fulton.
Tinción de Gram
Materiales
9 Frotis fijo
9 Solución de cristal violeta
9 Solución de lugol

9 Solución alcohol- acetona

9 Solución de fuscina básica
Procedimiento
1. Colorea el frotis fijo con cristal violeta (colorante primario) durante 1 minuto
2. Lava con agua corriente y sacude la laminilla
3. Cubre el frotis con lugol (mordente) durante 15 segundos
4. Lava con agua corriente
5. Aplica alcohol-acetona (decolorante) por 3 a 5 segundos
6. Lava con agua corriente
7. Aplica la fucsina básica por (colorante de contraste) y deja actuar por 1 minuto.
8. Lava con agua corriente y seca a presión con una toalla de papel secante.
9. Observa al microscopio con objetivo 100X (no olvides utilizar el aceite de inmersión)
Tinción negativa con tinta china

Materiales
9 Tinta china
Procedimiento
1. En una laminilla coloca dos gota por separado de tinta china.
2. Con el asa mezcla homogéneamente en una gota de tinta china un poco de
cultivo.

3. Coloca un cubreobjetos sobre cada mezcla y cuida que no se formen burbujas.

4. Observa al microscopio el microorganismo rodeado de un halo refringente.
Tinción de Schaeffer y Fulton

Materiales
9 Frotis fijo
9 Verde malaquita
9 Safranina
Procedimiento
1. Cubre el frotis con verde malaquita y calienta hasta la emisión de vapores
durante un minuto o 10 minutos en frío, el frotis no debe secarse y lavar con
agua.
2. Aplica la safranina y deja actuar por 15 segundos. Lava el frotis.
3. Seca el frotis, agrega una gota de aceite de inmersión y observa al microscopio
(100X). La esporas se observan de color verde.
Tinción de lactofenol azul de algodón

Materiales
9 Lactofenol azul de algodón

9 Diurex
9 Cultivo de hongos
Procedimiento
1. Sobre una laminilla coloca una gota de lactofenol azul de algodón
2. Con un pedazo de diurex (6 cm. aprox.) toma un poco del cultivo de hongo.
3. Coloca el diurex con la muestra en la laminilla. Procura extender la preparación y
no formar burbujas.
4. Observa al microscopio con el objetivo 10X y 40X las estructuras.
Se realiza igual a la práctica # 2

Figura. 2 Morfología bacteriana
Cocos Bacilos y cocobacilos Espirilos
Figura. 2 Morfología de la colonia.

Elevación: 1-Plana, 2- Elevada, 3- Convexa, 4- Umbilicada, 5- Mamelonada, 6- Papilar
Figura. 3 Morfología de la colonia.

Forma y borde: 1. Circula, borde continuo, 2. regular festoneado, 3. Regular dentado, 4.
Regular lobulado, 5 irregular ondulado, 6. Irregular lobulado, 7. Irregular filamentoso, 8.
Irregular arborescente, 9. Irregular ondulado (como cabello rizado).
1 2 3 4 5
6 7 8 9

Práctica # 6
Pruebas bioquímicas como método de identificación

bacteriana

Introducción
Otras pruebas que deben llevarse a cabo para concluir la identificación del microorganismo
problema son las bioquímicas. Estas pruebas ponen de manifiesto reacciones metabólicas
de las bacterias, incluyen la acción fermentativa sobre diversos “azúcares”, determinación de
las propiedades proteolíticas y aminolíticas, reducción de colorantes, utilización de ciertas
sales, hidrólisis de la urea y comprobación de otras reacciones bioquímicas. También se
observa la capacidad de crecimiento con presencia o no de oxígeno y la motilidad de las
bacterias (Anexo 2, Pruebas bioquímicas)
De esta forma las pruebas bioquímicas sirven para la identificación del género y la especie
bacteriana mediante sus reacciones químicas que se manifiestan en cada una de las
pruebas como positivas o negativas a través de los cambios en los medios.
Dependiendo del microorganismo a identificar existen pruebas selectas que permiten acotar
su utilización, además de la existencia de un sin fin de tablas con resultados de las pruebas
bioquímicas que permiten la identificación de manera sencilla y rápida del microorganismo en
cuestión.
La persona será competente para utilizar las pruebas bioquímicas para la identificación del
género y especie bacterianos cuando:
1. Identifica una cepa pura y los cambios en los medios.

2. Sospecha de algún agente etiológico de acuerdo a los agares utilizados y los cambios
en estos y realiza las pruebas bioquímicas correspondientes.
3. Al obtener los resultados de las pruebas bioquímicas realiza la interpretación de las
mismas
4. La identificación bacteriana la realiza de acuerdo a tablas de identificación bacteriana
dependiendo del género a identificar.
Resultado Tiempo
Inoculación en los medios 30 minutos
Identificación de los cambios en los medios 26 horas
Interpretación de los cambios 26 horas
Identificación del agente etiológico 26 horas
• Los cultivos potencialmente infecciosos se colocan en un recipiente con tapa que evita las
filtraciones durante la recolección, manejo, procesamiento, almacenamiento, transporte o
envío.
desecho.
• Está rigurosamente prohibido pipetear con la boca. Se realizará pipeteo automático con
material adecuado.
• Escurrir las pipetas apoyando la punta en la pared interna del recipiente, produciendo una
presión leve.
• No burbujear aire en recipientes abiertos, por ejemplo para lograr una descarga total de
los tips de pipetas automáticas.
Materiales
9 Cultivos puros en agar

9 Reactivos para tinción de Gram

9 Portaobjetos
9 Solución salina
9 Asa recta
9 Medio triple azúcar hierro (TSI)
9 Medio SIM (ácido sulfhídrico, indol y motilidad)
9 Citrato de Simmon
9 Medio LIA (descarboxilación de la lisina)
9 Medio MIO
9 Peróxido de hidrógeno al 3% (prueba de catalasa)
9 Plasma citratado y solución salina: 1:1 (prueba de coagulasa)
9 Agar DNAsa
9 Agar sangre
9 Taxo A y P
Procedimiento
1. Realiza un frotis fijo
2. Realiza tinción de Gram para cada cultivo
3. Esteriliza el asa y deja que enfríe
4. Toma una asada del cultivo puro: Utiliza esta asada para realizar todas las
inoculaciones
5. Inocula en medio TSI por picadura y estría en la superficie
6. Inocula el medio SIM por picadura
7. Inocula el medio Citrato de Simmon por estría en la superficie
8. Inocula el medio LIA por doble picadura paralela y estriado
9. Inocula el medio MIO por picadura.
10. Incuba las pruebas a 37 °C por 24 horas y observa los resultados

11. Utilizando una tabla identifica el agente etiológico
Medio TSI: producción de ácido

sulfhídrico
12. Realiza la prueba de catalasa

Deposita una gota del peróxido de hidrogeno en una laminilla
Toma una asada del cultivo y mézclalo con el peróxido
Observa la reacción

Nota: Si es utilizado agar sangre no toque es medio, ya que pueden presentarse falsos
positivos
13. Realiza la prueba de coagulasa
Coloca una asada en el tubo y mezcla
Deja incubar a 37°C por 3 horas y posteriormente 24 horas a temperatura
ambiente
Observa la formación de un coágulo
14. Realiza la prueba de DNAsa

Inocula el medio por estriado completo
Incuba la caja por 24 horas a 37°C
Observa los cambios en el medio
15. Realiza la prueba de taxo

Realiza una estriado completo en agar sangre de una cm2
aproximadamente
Coloca en medio del estriado el taxo correspondiente
Incuba la caja por 24 horas a 37°C

Observa la sensibilidad o resistencia del microorganismo al antibiótico.
Se realiza de acuerdo a la práctica # 2

Práctica # 7
Antibiograma

Introducción
Es difícil predecir la susceptibilidad a los antibióticos basado en la experiencia clínica, esto
debido al uso indiscriminado de antimicrobianos que han originado la selección de cepas
bacterianas multirresistentes. Debido a esto es necesario el uso de pruebas a nivel
laboratorio que permitan evaluar la susceptibilidad de los microorganismos a diferentes
antibióticos.
El antibiograma es una prueba que valora la susceptibilidad in vitro de los microorganismos
presentes en un proceso infeccioso. De mabnera rutinaria los laboratorios de diagnóstico
veterinario utilizan esta prueba a través de discos impregnados con antibióticos, que
permiten valorar el grado de resistencia o susceptibilidad de un microorganismo para de esta
manera proporcionar la quimioterapia basada en un diagnóstico clínico y microbiológico
definitivo.
Agar Mueller Hilton/antibiograma utilizando discos individuales
La persona será competente para realizar la prueba de sensibilidad a los antibióticos para
ofrecer el tratamiento eficaz cuando:
1. Este convencida que el uso indiscriminado de antimicrobianos provoca resistencia
2. Cuenta con un cultivo puro.
3. Determina con que multidiscos o disco antimicrobianos realizará las pruebas
4. Ajusta la turbidez al estándar 0.5 de Mac Farland (108 microorganismos/ml) y realiza
la inoculación en agar Mueller-Hinton

5. La colocación de los discos impregnados con antibiótico, en los medios la realiza con
asepsia
6. Determina el tiempo de incubación para realizar la lectura.
7. Mida los halos de inhibición.
8. Realiza la interpretación de los resultados.
9. De acuerdo a los resultados obtenidos realiza una propuesta de tratamiento
Resultado Tiempo
Tinción de Gram y Selección de los 20 minutos
discos a utilizar
Medición de los halos inhibitorios 26 horas
Determina el patrón de sensibilidad y 26 horas
resistencia del microorganismo
• Los cultivos potencialmente infecciosos se colocan en un recipiente con tapa que evita las
filtraciones durante la recolección, manejo, procesamiento, almacenamiento, transporte o
envío.
Materiales
9 Hisopo estéril
9 Solución salina estéril
9 Nefelómetro de Mc Farland
9 Caja con agar Mueller Hinton
9 Sensidiscos para Gram positivos y negativos
9 Pinzas
9 Mechero

9 Tubo
9 Pipeta estéril
9 Alcohol
9 Regla
Procedimiento
Técnica de Bauer Kirby
1. Selecciona de 4 a 5 UFC del cultivo bacteriano y transfiérelas a un tubo con 4 ml
de solución salina.
2. Estandariza el inoculo hasta alcanzar una turbiedad equivalente al tubo 0.5 del
nefelómetro de Mc Farland.
3. Después de ajustada la turbiedad del inoculo, humedece un hisopo estéril en la
suspensión y gíralo sobre las paredes hasta quitar el exceso de líquido. No deben
pasar más de 15 minutos después de ajustada la turbidez.
4. Inocula la caja de agar Mueller Hinton frotando el hisopo por estría completa en
toda la caja.
5. Deja secar la placa inoculada por 3-5 minutos e inmediatamente coloca los discos
impregnados con los antibióticos, utiliza pinzas (flaméalas en alcohol) para
colocarlos y procura que estos queden perfectamente adheridos. Puedes colocar
las letras hacia abajo para una mejor lectura.

6. Si utilizas discos individuales procura que queden bien separados unos de otros
para que no interfieran las zonas de inhibición y que queden a 15 mm de las orillas
de la placa.
7. Incuba las placas invertidas a 37 °C por 24 horas

8. Examina las placas y mide los halos de inhibición.
9. Interpreta los tamaños de las zonas de inhibición de acuerdo a las tablas
respectivas y reporta al microorganismo como sensible, intermedio y resistente.
Se realiza de acuerdo al formato de la práctica # 2

Práctica # 8
Aislamiento e identificación de bacterias piógenas Gram
positivas

Introducción
Los procesos piogénicos se definen como aquellas infecciones asociadas a ciertos
microorganismos que estimulan la formación de pus. En estos procesos se encuentran
involucrados varios géneros bacterianos: Staphylococcus, Streptococcus, Corynebacterium y
Erysipelothrix
Para la identificación de estos microorganismos es necesario el conocimiento de sus
características morfológicas y bioquímicas, además de conocer los procesos piogénicos en
los que están involucrados.
Staphylococcus sp: Son microorganismos que se agrupan generalmente en racimos, son
anaerobios o aerobios facultativos, sin cápsula, no forman esporas y son catalasa positivo.
Se asocian a varios procesos supurativos como mastitis, endometritis, cistitis piodermas,
heridas, otitis, conjuntivitis y ostiomielitis.
Streptococcus sp: Son microorganismos que se agrupan en cadenas, aerobios y anaerobios

facultativos, inmóviles, algunos poseen cápsula, no forman esporas y son catalasa negativo.
Son bacterias parásitas de las mucosas de los animales y el hombre. Se asocian a metritis,
abortos, poliartritis, mastitis, linfadenitis y varios procesos piógenos en bovinos, porcinos y
perros.

Corynebacterium sp: Son microorganismos que producen agrupaciones angulares “letras

chinas” o en empalizada. Son aerobios, inmóviles, no poseen cápsula y no forman esporas.
Producen infecciones en heridas, poliartritis, mastitis supurativa, abortos, onfalitis,
pielonefritis, abscesos renales, linfadenitis caseosa, metritis y cistitis.
Erysipelothrix sp: Microorganismo pleomórfico que tiende a formar largos filamentos, aerobio
(aunque crece mejor en microaerobiosis), inmóvil, no posee cápsula y no forma esporas. Es
catalasa negativo. Se asocia a la erisipela de los cerdos, y produce poliartritis crónica en
bovinos y ovinos.
La persona será competente para será competente para describir las características de
cultivo y morfológicas para la identificación de agentes piogénicos cuando:
1. Identifique un proceso patológico relacionado con agentes piogénicos
2. Previamente realiza un cuadro con las características de cada genero bacteriano
relacionado con estos procesos.
3. Para la identificación morfológica, grupal y de afinidad tintorial realiza tinción de Gram.
4. El aislamiento de estas bacterias lo realiza en un medio común para este tipo de
bacterias
5. Para la identificación del género bacteriano realiza la observación de las
características de la bacteria y de las colonias.
6. Para corroborar el género y la especie bacteria realiza las pruebas bioquímicas

correspondientes.
7. Identifica el género y la especie bacteriana.
Resultado Tiempo
Recolección de una muestra de un proceso piógeno 20 minutos
Descripción de la morfología bacteriana 25 horas
Identificación de los cambios en el medio. 25 horas
Interpretación de las pruebas bioquímicas 25 horas
Identificación del genero y la especie involucrada en el proceso 26 horas
colocan en un recipiente especial que evita las filtraciones durante la recolección, manejo,
procesamiento, almacenamiento, transporte o envío.
• Nada debe desecharse al drenaje o basura. Primero debe ser esterilizado.
• El trabajo con los artículos punzantes o cortantes contaminados como portaobjetos para
microscopio y pipetas, debe ser con un alto grado de precaución.
Materiales
9 Medio de cultivo agar sangre
9 Medio de cultivo agar sal y manitol
9 Solución salina
9 Peróxido de hidrógeno al 3%
9 Portaobjetos
9 Muestra representativa de un proceso piógeno
9 Cultivo de Staphylococcus spp en agar
Procedimiento
1. Realiza tinción de Gram para las dos muestras
2. Realiza el registro sobre las características morfológicas observadas
3. Inocula la muestra de proceso piógeno en el agar manitol sal por estriado completo
4. Con la misma muestra Inocula el agar sangre por estría en 4 cuadrantes y una
picadura al final del estriado para observar la hemólisis.
5. Incuba las placas a 37 °C por 24 horas o 48 horas si es necesario
6. Registra los cambios en los medios y las características de las colonias.
7. Realiza la prueba de catalasa con cultivos obtenidos y anota los resultados
8. Realiza pruebas bioquímicas necesarias para identificar el género
9. Concluye con la identificación del género
En las evidencias se debe incluir una tabla completa sobre las pruebas bioquímicas para la
identificación de bacterias causantes de procesos piógenos.

__________________________________________________________________________
Práctica # 9
Análisis bacteriológico de la leche

Introducción
La mastitis es la enfermedad más costosa en un hato lechero y aunque muchos casos no
son detectados, siempre ve afectada la producción y la calidad de la leche por aumento de la
cantidad de células somáticas. La leche se ve afectada en sus características físico-químicas
provocando pérdidas en calidad de leche, además se deben considerar costos en
medicamentos, control de calidad, etc.
La mastitis se define como la inflamación de la glándula mamaria que generalmente es
originada por bacterias que invaden y se multiplican en la ubre, las cuales pueden provenir
de la vaca, el ordeñador, el medio, insectos, roedores, suciedad y lodo. Existen muchas
bacterias que pueden producir mastitis, sin embargo los más frecuentes son Staphylococcus
aureus, Staphylococcus epidermidis, Streptococcus agalactiae, Streptococcus dysgalactiae,
Streptococcus uberis, Escherichia coli, Actinomyces pyogenes, Bacillus cereus y Nocardia
asteroides.
El diagnóstico de mastitis incluye el análisis de los procesos patológicos y funcionales de la
glándula afectada y el análisis bacteriológico para determinar el agente infeccioso
involucrado y la susceptibilidad del mismo con el fin de controlar adecuadamente la
incidencia del problema en el hato.
La persona será competente para identificar a los agentes etiológicos involucrados en
muestras de leche para el diagnóstico de mastitis cuando:
1. Al identificar casos de mastitis realiza la toma de la muestra de leche adecuadamente
2. Conozca a los agentes involucrados en muestras de leche
3. El aislamiento de las bacterias involucradas lo realiza en los medios de cultivo
adecuados.
4. Identifica la morfología de las colonias aisladas.
5. Observa los cambios en los medios y realiza el registro de los mismos
6. Determina el número relativo de microorganismos.
7. Al aislar microorganismos realiza tinción de Gram y observa la morfología bacteriana.
8. Realiza prueba de catalasa

9. De acuerdo a la tinción de Gram, prueba de catalasa y cambios en los medios realiza

las pruebas bioquímicas correspondientes
10. Determina el género y la especie bacteriana causante del proceso de mastitis.
Resultado Tiempo
Reporte de práctica 1 semana
Muestra de leche de un posible problema de 30 minutos
mastitis
Número de microorganismos 24 horas
Registro de las características fisicoquímicas 1-2 días
Identificación del género y especie bacteriana 1-2 días
Iguales a la práctica anterior
Toma de muestra
Materiales
9 Envase estéril
9 Alcohol al 70% o solución yodada
9 Un trapo y agua limpios
Procedimiento

1. Recolecta una muestra de leche de una vaca sospechosa de un proceso de mastitis,

cuidando de no tocar la piel con el frasco
2. Trae la muestra en una hielera con refrigerante al laboratorio ( no debe tener mas de 24
horas de colectada).
3. Realiza la prueba de california
Aislamiento e identificación
Materiales
9 Muestra de leche (10 ml).
9 Placa de agar sangre
9 Placa de agar manitol sal
9 Placa con agar MacConkey
9 Placa de agar Nickerson
9 Asa calibrada
9 Roja 0.001 ml (x 1000 =UFC/ml)
9 Negra 0.01 ml (x 100 =UFC/ml)
9 Pruebas bioquímicas mínimas necesarias para la identificación de los microorganismos
aislados.
Procedimiento
1. Incuba la muestra a 25°C durante 10 a 15 minutos, agita la muestra vigorosamente
para homogenizarla y liberar las bacterias que se encuentran atrapadas en la grasa.
2. Utiliza el asa calibrada para tomar la muestra e inocula la placa de agar sangre por
estriado a 4 cuadrantes y picadura en el agar para la demostración de la hemólisis
3. También con el asa calibrada inocula el agar MacConkey, manitol sal y Nickerson por
estriado completo.
4. Incuba a 37 °C por 24- 48 horas

5. Observa los cultivos y describe las características de las colonias y realiza el conteo
relativo de acuerdo al asa utilizada.
6. Registra los cambios en los medios
7. Realiza tinción de Gram de una colonia y describe las características morfológicas de
las bacterias aisladas.
8. Realiza la identificación bioquímica para identificar el género.
En las evidencias debe incluirse un esquema para la identificación bioquímica de las
bacterias relacionadas con procesos de mastitis.

Práctica # 10
Aislamiento e identificación de Enterobacterias

Introducción
La familia Enterobacteriaceae se compone de varias especies bacterianas muy relacionadas
y que son huéspedes naturales del tracto gastrointestinal de los animales. En la actualidad
las enterobacterias están asociados con muchos tipos de infecciones como neumonías,
abscesos, meningitis, septicemia e infecciones intestinales y urinarias.
Las enterobacterias se eliminan por las heces y contaminan el medio, siendo los indicadores
del grado de contaminación fecal en alimentos y agua.
Son bacilos medianos, Gram negativos, aerobios o anaerobios facultativos y sin agrupación
definida. Catalasa positivo, no esporulados, varios tienen movimiento y poseen cápsula.
Es un grupo muy amplio y a sufrido modificaciones a lo largo de la historia en cuanto a
nomenclatura y clasificación. Se conocen unos 20 géneros y más de 100 especies, las más
importantes son: E. coli, Enterobacter, Shigella, Salmonella, Citrobacter, Klebsiella, Serratia
Yersinia y Proteus.
La persona será competente para emplear la técnica de aislamiento de enterobacterias para
la obtención de una cepa bacteriana cuando:
1. Conozca la morfología microscópica, afinidad tintorial y agrupación de las
enterobacterias
2. Al tener un diagnóstico presuntivo realiza la recolección de una muestra sospechosa
3. Al obtener la muestra realiza el envío en el medio y condiciones adecuadas
4. Utiliza caldos de enriquecimiento para un mejor aislamiento del enterobacterias
5. El aislamiento de las enterobacterias lo realiza en medios selectivos y diferenciales
6. Conoce las características bioquímicas de las enterobactrerias que permiten su
identificación
7. Para la identificación posible del género realiza la caracterización morfológica de las
colonias e identifica los cambios en los medios.
8. Para identificar el género y la especie realiza las pruebas bioquímicas
correspondientes.

Resultado Tiempo
Obtener una muestra sospechosa 30 minutos
Aislamiento de una enterobacteria 24 horas
Identificación del género a través de la morfología 1 días
de la colonia y cambios en los medios
colocan en un recipiente especial que evita las filtraciones durante la recolección, manejo,
procesamiento, almacenamiento, transporte o envío.
• Nada debe desecharse al drenaje o basura. Primero debe ser esterilizado
Toma de muestra
Materiales
9 Hisopo estéril
9 Tubo con medio de transporte Stuart
9 Hielera con refrigerantes
9 Guantes
9 Alcohol al 70% o solución yodada
9 Bolsa de plástico o frasco
Procedimiento
1. Obtén una muestra de heces de un animal del cual sospeches alguna enfermedad
gastrointestinal.
2. Si la muestra es tomada de una especie pequeña se toman las heces con hisopo, en
caso de grandes especies tomar las heces directamente del recto y colócala en una bolsa
nueva o frasco estéril.
3. Si la muestra es tomada con hisopo colócala en el medio Stuart y consérvala hasta su
llegada al laboratorio (recuerda la metodología para la toma y envió de muestras)

Aislamiento
Materiales
9 Muestra sospechosa
9 Caldo tetrationato o selenito
9 Lugol
9 Agar MacConkey
9 Agar XLD
9 Agar Salmonella-Shigella
9 Agar EMB (eosina azul de metileno)
9 Agar verde brillante
9 Tubos de ensaye
9 Hisopos estériles
Procedimiento
1. Si se sospecha de salmonelosis Inocula la muestra en el caldo tetrationato posteriormente
agrégale 3 gotas de lugol y agítalo gentilmente.
2. Incuba el caldo tetrationato por 24 horas a 37 °C.
3. Una vez transcurridas las 24 horas inocula los medios por estría en 4 cuadrantes
4. Incuba a 37 °C por 24 horas.
5. Posteriormente observa y registra los cambios en los medios y las características de las
colonias.
6. Realiza tinción de Gram y anota las características morfológicas de las bacterias
7. Identifica el posible género bacteriano utilizando la tabla de identificación a través de la
morfología de las colonias (anexo 3)
8. Concluye con la identificación del género bacteriano.

9. Identifica las pruebas bioquímicas para la identificación de la especie

Agar EMB
Agar Salmonella-
Shigella
Agar MacConkey
se realiza de acuerdo al formato de la práctica # 2
Se debe incluir en las evidencias un cuadro que incluya las principales enterobacterias y las
pruebas bioquímicas que las diferencian.

Práctica # 11
Análisis bacteriológico del agua

Introducción
La contaminación del agua es considerada un problema de salud pública. Esta puede
contaminarse indirectamente por el aire y suelo o directamente por contacto con heces o
animales infectados. Esto hace que el agua sea un transmisor de enfermedades
principalmente de tipo entérico. Las bacterias patógenas que más frecuentemente son
encontradas en el agua son: Salmonellas, Vibrio spp, E. coli, Proteus spp, Yersinia
enterocolitica, Shigella spp, Leptospira spp, enterococos, Bacillus spp y Clostridium
perfringens.
En México, la Secretaría de Salud se encarga del establecimiento de las normas sobre el

control sanitario del agua, mismas que se encuentran en el Reglamento Federal de Dirección
de Ingeniería Sanitaria sobre el agua potable y que para su aceptación se establecen
parámetros físicos, químicos y microbiológicos. Los parámetros establecidos son:
1. Número máximo de 20 coliformes/l de muestra (organismo aerobio o anaerobio no
esporulado, Gram negativo, que fermenta el caldo lactosado con producción de gas).
Esta regla se basa en demostrar la contaminación con materia fecal.
2. Número máximo de 200 bacterias/ml a 37 °C por 24 horas de incubación en agar
nutritivo. Esta regla se basa en que los tratamientos utilizados para potabilizar el agua
deben destruir en gran cantidad la carga bacteriana.

3. El agua no debe contener bacterias licuantes de la gelatina, ni cromógenas, ni fétidas.

Esta regla se basa en que en el agua pueden existir bacterias indeseables que
pueden alterar las características organolépticas del agua.
La técnica microbiológica usada para el primer reglamento es la del número más probable
(NPM), para el segundo una cuenta en placa, y para el tercero la siembra en gelatina
nutritiva.
Cuadro 1. NMP limites de confianza para la valoración de coliformes presentes en agua
No. Tubos positivos a NMP de coliformes NMP / litro NMP / litro

la presencia de gas por litro Limite inferior Limite superior
0 0 0 60
1 22 1 126
2 51 5 192
3 92 16 294
4 160 33 529
5 ∝ 80 ∝
La persona será competente para identificar a los agentes etiológicos involucrados en
muestras de agua para su determinar el riesgo en el consumo animal cuando:
1. Conozca los parámetros bacteriológicos establecidos por la Secretaría de Salud
2. Obtenga una muestra de agua que cumpla con los requisitos adecuados
3. A partir de muestras de agua realiza el aislamiento de los agentes contaminantes
4. Realiza el recuento de coliformes por litro de muestra utilizando las pruebas presuntiva
y confirmativa
5. Realiza conteo bacteriano de coliformes por litro de agua utilizando la técnica del
número más probable (NMP)
6. Determina la calidad sanitaria del agua
7. Identifica las bacterias involucradas en la muestra de agua
Resultado Tiempo
Conocimiento sobre los parámetros bacteriológicos 1 hora

establecidos por la SS
Fermentación en los tubos Durham y determinación 24 a 48 horas
de coliformes por litro
Aislamiento e identificación bacteriana 4 días
material adecuado.
presión leve.
• No deben desecharse las muestras al drenaje ni a la basura.
Toma de muestra
Toma una muestra representativa de agua para consumo animal en un frasco estéril, no
deben pasar más de tres horas desde la toma de la muestra hasta el procesamiento de la
misma. Se requieren mínimo 100 ml.
Recuento de coliformes por litro de muestra
Materiales
9 Muestra de agua
9 5 Tubos con caldo lactosado y rojo de fenol
9 5 Tubos de fermentación (tubos Durham)
9 Tubos de caldo verde brillante c/bilis al 5%
9 Placas con agar MacConkey, Salmonella-Shigella, verde brillante, EMB y XLD
Procedimiento
Prueba presuntiva
1. Siembra cada uno de los tubos de caldo lactosado/tubos Durham con 10 ml de muestra
2. Incúbalos a 37 °C por 24 horas

3. Pasadas 24 horas evalúa turbidez y presencia de gas, si no existe gas incúbalos 24 horas
más. Las pruebas positivas son las que muestran formación de gas.
4. Determina el número de coliformes por litro de muestra (cuadro 1)

Prueba confirmatoria
1. Inocula con 3 asadas el caldo verde brillante e incuba a 37 °C por 24 horas (utiliza los
tubos positivos)

2. Si existe turbidez en los tubos con caldo verde brillante, inocula en las placas de agar
3. Incuba a 37 °C por 24 horas
4. Identifica las colonias típicas de las bacterias coliformes y los cambios en los medios
5. Concluye identificando el género bacteriano
6. Si es necesario realiza las pruebas bioquímicas correspondientes
7. Identifica el género y especie.

Práctica # 12
Urocultivo

Introducción
La orina es un producto de excreción corporal, en la vejiga se contiene como un líquido
aséptico en un organismo sano, sin embargo el tracto urinario consta de una microbiota
normal que puede alterarse en individuos inmunosuprimidos, además que puede
contaminarse con otras bacterias patógenas. Existen varias bacterias involucradas en estos
procesos que varían según la especie animal: E. coli, Klebsiella spp, Enterobacter spp,
Proteus spp, Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium, Staphylococcus aureus,
Pseudomona spp, Corynebacterium spp, Leptospira interrogans, Candida spp, Citrobacter
spp, Edwarsiella spp, Providencia spp, Corynebacterium renale, Baculobacterium suis.
La persona será competente para aislar e identificar agentes etiológicos involucrados en
muestras de orina para determinar bacteriuria cuando:
1. Conozca cuales son los agentes involucrados en muestras de orina
2. Para el aislamiento bacteriano realiza la toma de la muestra adecuadamente
3. Directamente de la muestra realiza tinción de Gram e identifica formas características
4. Realiza el conteo por campo visual
5. Realiza la siembra en medios adecuados
6. Aísla al agente causal y lo identifica de acuerdo a sus características fisicoquímicas
7. Determina el número de microorganismos presentes
8. Realiza la prueba de susceptibilidad a antibióticos y sugiere el tratamiento.
Resultado Tiempo
Cuadro con las características fisicoquímicas de las
bacterias involucradas en infecciones urinarias
Obtención de una muestra de orina 30 minutos
Identificación fisicoquímica de las bacterias 26 horas
Identificación del género y especie 26 horas

• No desechas nada al drenaje o basura. Se requiere de previa esterilización de las
muestras antes de su desecho.
Toma de muestra
Obtén una muestra de orina de cualquier especie con sospecha de infección urinaria. La
muestra no debe tener mas de 2 horas de recolectada
Materiales
9 Muestra de orina
9 Asa calibrada (0.001 ml o 0.01 ml)
9 Asa convencional
9 Placa con medio Cled
9 Agar sangre
9 Agar MacConkey
9 Pruebas bioquímicas
Procedimiento
Demostración directa

1. Realiza un frotis fijo y tíñelo con Gram

2. Determina el número de microorganismos por campo visual en el microscopio
3. Describe su morfología.
Aislamiento
4. Homogeniza la muestra y mediante el asa calibrada inocula una asada trazando una sola
línea central en todo el diámetro de la placa con medio Cled y agar sangre.
Medio Cled
5. Con una asa convencional realiza estrías perpendiculares a la línea central por estriado
completo y posteriormente paralelas.
6. En el agar Mac Conkey realiza el estriado a 4 cuadrantes
7. Incuba a 37 °C por 24 a 48 horas
8. Realiza el recuento de colonias y su descripción.
9. Realiza nuevamente tinción de Gram
10. Describe la morfología bacteriana.
11. Realiza la identificación bioquímica y la susceptibilidad a quimioterapeúticos.

Práctica # 13
Aislamiento e identificación de hongos

Introducción
Dermatofitosis es el término utilizado para la designación de las infecciones causadas por
especies de los géneros Microsporum, Trichophyton o Epidermophyton y se refiere a las
infecciones que afectan a las células queratinizadas del estrato córneo, el pelo y las uñas; en
los animales el pelo es un sitio muy frecuente infección.
En perros y gatos el 99% de las infecciones se deben a M. canis (65%) y T. mentagrophytes ,
en caballos T. equimun, ganado bovino T. verrucosum y cerdo T. mentagrophytes.
Los géneros Sporothrix, Blastomyces, Criptococcus, Histoplasma, Coccidioides,
Paracoccidioides y Aspergillus son los hongos causantes de micosis subcutáneas y
profundas, son en su mayoría saprofitos del suelo y producen enfermedad en el hombre y
animales cuando penetran a través de heridas o por vía respiratoria.
La persona será competente para aislar hongos involucrados en muestras de piel y pelo para
su identificación mediante la observación macro y microscópica cuando:
1. Enliste cuales son los microorganismos involucrados
2. Al obtener la muestra realice la inoculación en medios adecuados
3. Realiza el método de siembra de acuerdo al medio utilizado.
4. Identifica las esporas en muestras de pelo tratadas con KOH
5. Realiza la tinción de azul de algodón
6. A través de la observación microscópica realiza la identificación del género y especie
aislado.
7. Toma las medidas de bioseguridad para evitar posibles infecciones.
Resultado Tiempo
Reporte de práctica 2 Semanas
Aislamiento de un hongo 7- 10 días
Identificación de las estructuras 7- 10 días
Identificación del género 7- 10 días
comprometida la integridad del guante. Los guantes desechables no se lavan, no se
vuelven a usar ni se utilizan para tocar superficies “limpias” (teclados, teléfonos, entre
otras), y no se deben usar fuera del laboratorio.
protección) para las probables salpicaduras o aerosoles de materiales infecciosos u otros
materiales peligrosos para el rostro cuando se deben manipular.
• Se utiliza cubrebocas para evitar la inhalación de posibles agentes infecciosos.
Toma de muestra
Obtén una muestra de piel y pelo del un animal con lesiones características de infecciones
causadas por hongos
Materiales
9 Muestra de piel y pelo
9 Portaobjetos
9 Cubreobjetos

9 Solución de hidróxido de potasio (KOH) al 10%

9 Pinzas
9 Placa con agar Sabouraud dextrosa
9 Placa con medio Nickerson
9 Azul de algodón
9 Diurex
Procedimiento
1. En el portaobjetos deposita una pequeña cantidad de pelo y coloca una gota de KOH y
coloca el cubreobjetos.
2. Deja reposar la muestra por 15 minutos.
3. Observa al microscopio con objetivo 10X y 40X
4. Toma una cantidad suficiente de muestra con las pinzas e inocula el medio Sabouraud en
la parte media.
5. Igualmente inocula el medio Nickerson , realiza la inoculación dispersando la muestra en
todo el medio.
6. Incuba a 37 °C por 24 horas
7. Posteriormente incuba por 5 a 10 días a temperatura ambiente
8. Realiza tinción de Lactofenol azul de algodón
9. Identifica el género.

Práctica # 14
Caso clínico

Introducción
En muchos casos de enfermedades bacterianas el diagnóstico se realiza a través de la
anamnesis, exploración física y signos clínicos observados. Sin embargo esto no es
suficiente, lo anterior se debe complementar con exámenes de laboratorio bacteriológicos,
Estas pruebas se convierten en un gran apoyo para el clínico para que pueda confirmar o
descartar un diagnóstico presuntivo, sugerir alternativas de tratamiento y colaborar para
control y prevención de las enfermedades bacterianas.
Todos los pasos que el estudiante debe seguir para realizar un diagnóstico correcto han sido
estudiados en cada una de las prácticas, y para este momento, él debe ser capaz de llevar a
cabo los procedimientos para tal objetivo. Desde una historia clínica correcta, una buena
toma y envío de muestra, hasta los procedimientos a seguir en el laboratorio para el
aislamiento e identificación del agente etiológico causal.
La persona será competente para diagnosticar una enfermedad de acuerdo a un caso clínico
determinado para corroborar los conocimientos aprendidos cuando:
1. Determina un caso clínico
2. Sospecha de una enfermedad en particular y sabe hacia donde dirigir la investigación.
3. Realiza la toma de muestra de acuerdo a los criterios ya mencionados.
4. Conserva y transporta la muestra adecuadamente.
5. Realiza la solicitud de los materiales con anticipación(incluye medios, pruebas
bioquímicas, antibiograma, etc.)
6. Tiene conocimiento de la morfología de la bacteria sospechosa y realiza las tinciones
adecuadas para corroborarlo.
7. La inoculación de los medios la realiza de acuerdo a los procedimientos aprendidos
8. Observa y anota las características morfológicas de las bacterias y las colonias.
9. Realiza las pruebas bioquímicas necesarias
10. Interpreta los resultados
11. Identifica el género y la especie del microorganismo involucrado
12. Realiza la prueba de sensibilidad a antibióticos y propone un tratamiento.
13. Proporciona el tratamiento adecuado

14. Realiza una discusión sobre los resultados.
Resultado Tiempo
Reporte de práctica 2- 3 semanas
Una caso clínico real 1 día
Aislamiento e identificación del agente 2- 3 días
causal
Quimioterapia 3-4 días
• No se permite la presencia en el laboratorio de animales que no se están utilizando en el
trabajo que se está realizando.
comprometida la integridad del guante. Los guantes desechables no se lavan, no se
vuelven a usar ni se utilizan para tocar superficies “limpias” (teclados, teléfonos, entre
otras), y no se deben usar fuera del laboratorio.
• Se deben usar guantes si existen lastimaduras en las manos o si la piel presenta alguna
erupción. Deben existir alternativas disponibles al uso de guantes de látex empolvados.
secado se realizará con papel. Nunca usar solventes orgánicos para lavarse.
• Se dispondrá de recipiente de descarte en el lugar de trabajo a no más de 30 cm del
personal.
protección) para las probables salpicaduras o aerosoles de materiales infecciosos u otros
materiales peligrosos para el rostro cuando se deben manipular.

• Tener conocimiento de los agentes, sustancias y productos peligrosos que existen en el

laboratorio, la metodología de trabajo del laboratorio y su equipamiento.
material adecuado.
presión leve.
desecho.
• Todos los cultivos, stocks y otros desechos reglamentados se descontaminan antes de
ser desechados mediante un método de descontaminación aprobado, como por ejemplo,
mediante autoclave. Los materiales que se deben descontaminar fuera del laboratorio
inmediato son colocados en un recipiente duradero, estanco y cerrado para su transporte
desde el laboratorio. Los materiales que se deben descontaminar fuera del laboratorio
inmediato se embalan de conformidad con las normas locales, estatales y federales
aplicables antes de retirarlos del establecimiento.
• Si la descontaminación debe realizarse fuera del laboratorio, el material debe ser
trasladado en cajas cerradas a prueba de roturas, en lo posible que pueda ser introducido
sin abrir dentro del autoclave u otro equipo descontaminador. Se deberán extremar los
esfuerzos para contar con autoclave dentro del sector y así evitar los traslados de
material contaminado.
• El trabajo con los artículos punzantes o cortantes contaminados, incluyendo las agujas y
jeringas, portaobjetos para microscopio, pipetas, tubos capilares y escalpelos deberá
restringirse tanto como sea posible, de lo contrario se debe siempre tener un alto grado
de precaución.

• No reencapuchar las agujas, pues es una fuente importante de accidentes cortó

punzantes.
• El material de vidrio debe ser sustituido por material plástico, en la medida de lo posible.
• Se utilizan solamente jeringas con trabas para agujas o unidades de jeringa y aguja
desechables (es decir, la aguja está integrada a la jeringa) para las inyecciones o
aspiración de materiales infecciosos.
• Las agujas desechables utilizadas no se deben doblar, cortar, romper, recubrir o retirar de
las jeringas desechables, o de otra forma manipular manualmente antes de su
• Los objetos punzantes o cortantes no desechables se deben colocar en un recipiente de
paredes duras para su transporte al área de procesamiento para su descontaminación,
preferentemente en autoclave.
• Los recipientes de agujas contaminadas, objetos punzantes y vidrio roto deben
descontaminarse antes de desecharlos y se deben descartar de acuerdo a las
reglamentaciones federales, estatales y locales.
Las técnicas, los métodos y los materiales serán desarrollados por el alumno de acuerdo a
un diagnóstico presuntivo.
Procedimiento
1. Para la realización de esta práctica es necesario que identifiques un caso clínico de
acuerdo a lo visto durante el curso.
2. Realiza una historia clínica del caso
3. Haz una breve introducción
4. Realiza un listado de los materiales utilizados
5. Explica toda la metodología usada para el diagnóstico: proceso para la obtención,
conservación y envío de la muestra, el aislamiento e identificación de agente etiológico
y las pruebas de sensibilidad.

6. Todos los procedimientos tienen que ser explicados minuciosamente

7. Realiza la conclusión y discusión de tus resultados.
Solicitud de materiales con por lo menos 4 días de anticipación
Caso Clínico de acuerdo al formato de evidencias
Entrevista (examen oral)
Únicamente se realiza la revisión escrita del caso clínico.
El alumno aplica los conocimientos aprendidos durante el semestre, por lo que durante el
desarrollo del caso clínico no hay evaluaciones intermedias.
Examen oral sobre el caso clínico 20%
Reporte escrito: 80% donde:
1. Portada (-3% al no incluirla)
2. Introducción 5%
3. Historia clínica 15%
4. Materiales 10%
5. Métodos 15%
6. Esquema, dibujos o fotografías 5%
7. Resultados 20%
8. Conclusiones 10%
9. Discusiones 20%
10. Referencias (completa y mínimo 3 referencias de libros*) (-10% al no incluirla)
La entrega del caso clínico debe incluir:
11. Portada.
12. Introducción. Máximo 1 cuartillas (sobre la enfermedad y agente etiológico identificados).
13. Historia clínica. Completa
14. Materiales. NO omitas nada de lo que utilizaste

15. Métodos. Paso por paso todo lo que realizaste, puedes incluir dibujos y/o diagramas
16.
17. Resultados. Reporta paso a paso de acuerdo a la metodología e incluye dibujos o
diagramas
18. Conclusiones. Se concluye sobre los resultados obtenidos
19. Discusiones. Las discusiones pueden ser incluidas en los resultados (resultados y
discusión). Se realizan de acuerdo a cada resultado obtenido
20. Referencias. En caso de libros incluir nombre del libro, autor, editorial y año de edición.
Las revistas deben incluir autor, título del artículo, nombre de la revista, año, volumen,
número y paginas.
Nota: Los dibujos y diagramas tiene que ser elaborados con calidad, de los contrario no
serán tomados en cuenta.

Bibliografía
1. Antimicrobial, Therapy in Veterinary Medicine. Prescot, J. F. 3a. Edición

2. Bacteriología y Virología veterinarias. Merchant I. A. 3ª edición, Acribia. 1995
3. Bacteriología y Micología Veterinarias. Aspectos esenciales. Carter. G. R. El Manual
Moderno. 1982
4. Bioseguridad en Laboratorios de Microbiología y Biomedicina. CDC y NIH. 4ª. edición
5. Diagnostic Procedures in Veterinary Bacteriology and Micology. Carter, G. R. 1985.
6. Laboratory Biosafety Manual. World Health Organization. Third edition. Geneva. 2004
7. El Manual Merck de Veterinaria. 4ª. edición, 1991
8. Manual de prácticas de laboratorio de bacteriología y micología veterinarias. UNAM.
Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia.
9. Microbiología médica de Divo. Carmona O. 5ª edición, McGraw-Hill. 1997
10. Norma Oficial Mexicana NOM-166-SSA1-1997, para la organización y funcionamiento de

los laboratorios clínicos.
11. Norma Oficial Mexicana NOM-065-SSA1-1993, que establece las especificaciones

sanitarias de los medios de cultivo.
12. Norma Oficial Mexicana NOM-077-SSA1-1994, que establece las especificaciones
sanitarias de los materiales de control (en general) para laboratorios de patología clínica.
Para saber mas

Literatura recomendada: Cazadores de microbios

Glosario de Términos
Aerobios facultativos. El que puede vivir en presencia de oxígeno, pero no lo requiere.
Agentes quimioterapeúticos. Sustancias químicas empleadas en el tratamiento de
enfermedades infecciosas o enfermedades causadas por la proliferación de células malignas.
Agentes terapéuticos. Antimicrobianos empleados en el tratamiento de infecciones.
Aislamiento. Propagación sucesiva de un crecimiento de microorganismos hasta obtener un
cultivo puro.
Anaerobio. Organismo que vive y crece en ausencia de oxígeno.
Antibiograma. Información sobre la sensibilidad a los antibióticos.
Antimicrobiano. Agente que mata microorganismos o suprime su multiplicación o
crecimiento.
Antibióticos. Sustancias producidas por un ser vivo que se oponen a la vida de otro ser vivo.
Antibiosis. Fenómeno biológico en el que existe una detención o destrucción del crecimiento
microbiano debido a sustancias producidas por otro ser vivo.
Antimicrobianos. Son sustancias químicas producidas por microorganismos o sintetizadas
químicamente que a bajas concentraciones son capaces de inhibir e incluso de destruir
microorganismos sin producir efectos tóxicos en el huésped.
Antisépticos. Son agentes desinfectantes que se utilizan sobre superficies corporales con el
fin de reducir la cantidad de flora normal y de contaminantes microbianos de carácter
patógeno. Tienen un menor grado de toxicidad que los desinfectantes y generalmente menor
grado de actividad. Determinados preparados pueden utilizarse como antisépticos o como
desinfectantes indistintamente, pero a diferentes concentraciones en cada caso.
Asepsia. Término que se aplica a los procedimientos utilizados para prevenir que los
microorganismos progresen en un medio determinado (quirófano, laboratorio. etc.)
Aséptico. Decimos que algo esta aséptico (material), cuando no contiene gérmenes
patógenos con vitalidad para desarrollarse.
Cápsula bacteriana. Capa gelatinosa de polisacáridos que rodea a una célula bacteriana,
normalmente polisacáridos pero a veces polipéptidos en el medio ambiente. Se asocia a la
virulencia de las bacterias patógenas.
Coliforme. Relativo a los bacilos entéricos fermentativos Gram negativos; algunas veces se
restringe a aquello que fermentan la lactosa.
Colonia. Grupo discreto de organismo con el acumulo de bacterias en un cultivo.

Contagio. Transmisión de enfermedades.
Contaminación. Es la transmisión de microorganismos entre personas, animales ú objetos
Cultivo bacteriano. Propagación de microorganismos en medios especiales que favorecen
su crecimiento.
Desinfección. Tiene por objeto la destrucción de microorganismos mediante agentes de
naturaleza química (desinfectantes), con el fin de disminuir el número de formas vegetativas
a niveles mínimos.
Desinfectante. Es la sustancia química que inhibe o destruye microorganismos al aplicarla
sobre material inerte sin alterarlo significativamente.
Espora. Cuerpo refringente oval o esférico que se forma dentro de algunas bacterias,
normalmente en condiciones adversas tales como carencias nutricionales, y que se
considera como un estado de reposo plenamente infeccioso durante la vida de la célula.
Esterilización. Proceso físico o químico que destruye toda forma de vida de vida microbiana,
incluidas las esporas.
Estrés. La suma de las reacciones biológicas frente a estímulos adversos, físicos, mentales
o emocionales, internos o externos, que tiende a alterar la homeostasis de un organismo. Si
estas reacciones son inadecuadas, pueden llevar a estados de enfermedad.
Fermentación. Conversión enzimática anaerobia de compuestos orgánicos principalmente
carbohidratos, en compuestos más simples, produciendo energía en forma de ATP.
Fétido. Con olor rancio o desagradable.
Filamento. Fibra o hilo delicado.
Flagelo. Apéndice largo, móvil, con forma de látigo que se origina a partir de un cuerpo basal
de la superficie celular y sirve como organelo locomotor.
Frotis. Muestra para estudio microscópico.
Infección. Es la entrada de gérmenes patógenos en el organismo, capaces o no de producir
enfermedad, dependiendo de su virulencia, la puerta de entrada, la cantidad y el estado
defensivo del organismo.
Hidrólisis. División de un compuesto mediante la adición de agua, siendo incorporado el
grupo hidroxilo en un fragmento y el átomo de oxígeno en el otro.
Huésped. Animal que alberga y proporciona sustento a otro organismo (parásito)

in vitro. Literalmente, dentro de un cristal, es decir, fuera del cuerpo vivo.

Inmunosupresión. Respuesta inmune disminuida; puede ocurrir siguiendo a ciertas
infecciones.
Inoculación. Introducción de microorganismo patógenos en medios de cultivos.
Metabolismo. Suma de procesos físicos y químicos por los cuales se construye y mantiene
la sustancia viva organizada, y por el que las macromoléculas se rompen en moléculas más
pequeñas, aportando energía al organismo.
Microaerófilo. Dícese de las bacterias que requieren oxígeno para crecer pero a
concentraciones menores a las de la atmósfera.
Microbicidas. Sustancias que matan las formas vegetativas, pero no necesariamente las
esporas de un microorganismo (bactericida, fungicida, etc.).
Microbiostáticos. Sustancias que inhiben el crecimiento de microorganismos
(bacteriostáticos, fungistáticos, etc.).
Muestra. Pequeña porción que se toma para exponer la naturaleza del conjunto.
Patógeno. Capaz de producir enfermedades.
Piógeno. Que produce pus.
Pleomórfico. Asunción de varias formas distintas por un organismo solo o dentro de una
especie.
Queratinización. Desarrollo o transformación en queratina.
Resistencia. Capacidad adquirida de una bacteria, helmito o artrópodo o parásito para
sobrevivir en presencia de concentraciones de un fármaco que son normalmente letales para
los organismos de su especie.
Salud pública veterinaria. Se encarga de salvaguardar y mejorar la salud de la comunidad
humana mediante el control de las enfermedades animales que puedan afectar al hombre o a
la cadena alimenticia de este en detrimento de su salud.
Séptico. Todo aquello que potencialmente puede transmitir gérmenes patógenos.
Susceptibilidad. Grado de susceptibilidad de un aislamiento bacteriano a los antibióticos
individuales.

Anexo 1
Cuadro 1. Clasificación de microorganismos según su riesgo biológico
Bacterias Parásitos Hongos
Agentes de clase 2 Agentes de clase 2 Agentes de clase 2
Acinetobacter calcoaceticus
Entamoeba histolytica Blastomyces dermatitidis
Actinimicetos (incluye todas
las especies de Nocardia, Leishmania spp Cryptococcus neoformans
Actinomyces y Arachnia
Naegleria gruberi Paracoccidioides brasiliensis
propionica).
Aeromonas hydrophila Schistosoma mansoni Sporothrix schenkii
Bacillus anthracis
Taenia solium (huevecillos)
Bordetella spp. Todas las
especies. Toxoplasma gondii
Chlamidophyia psittaci
Toxocara canis
Clostridium botulinum
C. tetani Trichinella spiralis
Corynebactrium diphteriae
Trypanosoma cruzi
Escherichia coli. Todas las
cepas enteropatogénicas,
enterotoxicas,
enteroinvasivas y aquellas
que portan el antígeno K1
Klebsiella spp. Todas las
especies y todos los
serotipos.
Legionella pneumophila
Leptospira spp. Todas las
serovariedades patógenas.
Lymphogranuloma venereum
Listeria spp. Todas las
especies
Mycobacterium spp. Todas
las especies excepto las
mencionadas en clase 3.
Salmonella spp. Todas las
especies y serotipos.
Shigella spp. Todas las
especies y serotipos.
Fusobacterium necrophorum
Staphylococcus aureus
Streptococcus pneumoniae
Treponema pallidum
Vibrio cholerae

Agentes de clase 3 Agentes de clase 3 Agentes de clase 3
Barttonela spp. Todas las Ninguno Coccidioides immitis

especies. Histoplasma capsulatum
Brucella spp. Todas las
especies. H. capsulatum var. duboisii
Franciscella tularensis
Mycobacterium avium
M. bovis
M. tuberculosis
Orden Rickettsiales. Todas
las especies, excepto Vole
ricketsia.
Pasteurella multocida tipos B
y E (búfalo y otras cepas
virulentas).
Burkholderia mallei
Pseudomonas pseudomalei
Fuente. Manual de prácticas de laboratorio de bacteriología y micología veterinarias. UNAM. Facultad de
Medicina Veterinaria

Cuadro 2. Medios de cultivo

Medios de cultivo
Medios liquido
Son medios que no contienen agentes solidificantes y son envasados en tubos, botellas o
matraces. Se inoculan por medio de agitación del asa, por medio de una pipeta pasteur, por
medio de hisopos o depositando una porción de una muestra clínica. La utilidad de estos
medios es aumentar las posibilidades de crecimiento cuando las bacterias no son muy
abundantes en el inóculo. También pueden utilizarse para diluir los efectos de sustancia
tóxicas, así como para observar la motilidad bacteriana por medio de preparaciones
húmedas.
El crecimiento bacteriano en este tipo de medios se manifiesta por turbidez.
Medios semisólidos
Estos medios contienen de 0.5% a 0.75% de agar. Son envasados en tubos y son
sembrados por picadura con asa recta. La utilidad de estos medios es detectar la motilidad
bacteriana, la cual se manifiesta por una turbidez hacia los lados de la línea de inoculación.
La consistencia suave de estos medios permite que las bacterias móviles se desplacen,
mientras que las inmóviles crecen solamente sobre la línea de inoculación. Las reacciones
negativas a motilidad en estos medios deben ser confirmadas mediante preparaciones
húmedas a partir de cultivos en caldo.
Otra utilidad de estos medios es la conservación de cepas bacterianas.
Medios sólidos
Existen dos tipos de estos medios, los que contienen 1.5% de agar y aquellos que contienen
de 3 a 7% de agar; a estos últimos se les conoce como “medios duros”.
Los medios sólidos pueden ser envasados en cajas de petri, botella o tubos de cultivo y son
utilizados para la conservación de cepas, pruebas de susceptibilidad a quimioterapeúticos o
realizar aislamientos en cultivo puro.

Anexo 2
Métodos de esterilización y desinfección
Agentes físicos
I. Calor Húmedo
La esterilización con calor húmedo (vapor de agua) es mucho más rápida y eficaz que el
calor seco debido a que las moléculas de agua desnaturalizan las proteínas de forma
irreversible mediante rotura de las uniones Hidrógeno entre los grupos peptídicos a
temperaturas relativamente bajas.
1. Autoclave. Se emplean generalmente a una presión de vapor de una atmósfera por
encima de la presión atmosférica lo cual corresponde a una temperatura de 120 °C
2. Tindalización. Se utiliza cuando las sustancias químicas no pueden calentarse por
encima de 100 °C sin que resulten dañadas.
3. Pasteurización. La leche, nata y ciertas bebidas alcohólicas (cerveza y vino) se
someten a tratamientos de calor controlado que sólo matan a ciertos tipos de
microorganismos pero no a todos.
4. Ebullición: Se utiliza agua hirviendo a 100 ° C para desinfectar jeringas, agujas y otros
instrumentos usados en cirugía menor.
II. Calor seco
1. Horno Pasteur. Se utiliza principalmente para esterilizar material de vidrio y otros
materiales sólidos estables al calor.
2. Incineración es el mejor sistema para esterilizar todas aquellos productos en los que no
importe su destrucción, p. ej. material biológico
3. Flameado. Consiste en la exposición de un objeto a efecto de la llama hasta la
incandescencia.
III. Radiaciones
1.- Radiaciones ionizantes: actúan lesionando ácidos nucleicos. Se la utiliza sobre todo en
procesos industriales para esterilizar dispositivos quirúrgicos, guantes, jeringas, etc. Estas
radiaciones incluyen:
- Rayos gamma: pueden penetrar los materiales por lo que un producto se
puede empaquetar primero y después esterilizar.

- Rayos catódicos: Se usan para esterilizar material quirúrgico, medicamentos y

otros materiales. Una ventaja es que el material se puede esterilizar después de
empacado.
2. Radiaciones no ionizantes
- Luz ultravioleta: Se usan para reducir la población microbiana, tiene poca
capacidad para penetrar la materia por lo que sólo los microorganismos que se
encuentran en la superficie de los objetos que se exponen directamente a la acción de
la luz UV son susceptibles de ser destruidos.
IV. Filtración
Algunos materiales como los líquidos biológicos (suero de animales, soluciones de enzimas,
algunas vitaminas y antibióticos) son termolábiles, por lo que se recurre a la filtración a través
de filtros (Filtros de membrana, Filtros HEPA ) capaces de retener los microorganismos.
V. Desecación
La desecación de las células vegetativas microbianas paraliza su actividad metabólica. Las
endoesporas bacterianas son muy resistentes a la desecación pudiendo permanecer viables
indefinidamente.
Agentes químicos
1. Oxido de etileno. Es un líquido que hierve a 10.7 °C. Se usa en la industria para la
esterilización de placas Petri, jeringas y otros objetos de plástico que se funden a
temperaturas superiores a los 100 °C. Debido a su alto poder de penetración estos
objetos se empaquetan primero y después se esterilizan.
2. Formol o formaldehído. Es un gas fácilmente soluble en agua que se utiliza al 40%
(formalina). Usado en forma gaseosa y en cámara cerrada se emplea en la esterilización
hospitalaria y en la industria farmacéutica. También es muy utilizado como desinfectante
ambiental de salas altamente contaminadas que una vez tratadas deben airearse.

3. Gluteraldehído. Se emplea sumergiendo el material limpio en una solución al 2%, es

efectivo frente a virus, células vegetativas y esporas de bacterias y hongos. Se usa en
medicina para esterilizar instrumentos urológicos y ópticos.
Desinfectantes y antisépticos
Inorgánicos
1.- Metales (mercurio, plata, cobre y zinc). Actúan inactivando las proteínas celulares al
combinarse con ellas. Ej: mercurocromo, nitrato de plata, sulfato de cobre.
2.- Acidos y álcalis. Actúan alterando la permeabilidad y coagulando las proteínas. Ej.: ácido
sulfúrico (H2SO4), nítrico (HNO3), hidróxido sódico (NaOH) e hidróxido potásico (KOH).
Tienen aplicación limitada debido a su naturaleza cáustica y corrosiva.
3.- Compuestos inorgánicos oxidantes. Actúan oxidando los componentes de la membrana y
enzimas. Ej.: agua oxigenada, permanganato de potasio
4.- Halógenos. son agentes fuertemente oxidantes por lo que son altamente reactivos y
destructivos para los componentes vitales de las células microbianas. Ej. cloro y yodo
Orgánicos
1.- Alcoholes. Actúan desnaturalizando las proteínas, disolviendo las capas lipídicas y como
agentes deshidratantes. Ej.: etanol al 96% alcohol etílico al 70%.
2.- Fenol y compuestos fenólicos. Actúan alterando la permeabilidad de la membrana
citoplásmica así como desnaturalizando proteínas, actúan precipitando proteínas. Ejem.:fenol
al 5% mata rápidamente a las células vegetativas de los microorganismos no esporulados.
Los cresoles, lysol, clorohexidina son menos tóxicos que el fenol por lo que son mas
utilizados.
3.- Detergentes aniónicos. Actúan desorganizando las membranas citoplasmáticas. Tienen
escaso poder bacteriostático.
4.- Detergentes catiónicos. Tienen acción antiséptica, se inactivan en contacto con jabón,
algodón y materia orgánica. Son poco usados.
5.- Glicoles. Propilenglicol y Etilenglicol, se aplican por medio de unos aparatos llamados
glicosatos o en forma de aerosoles para desinfección ambiental

Pruebas bioquímicas
1. ACIDO SULFHÍDRICO
Aplicación
Esta prueba es particularmente útil para la identificación de bacterias de los géneros
Salmonella, Campylobacter y Brucella; permite además diferenciar especies de Proteus.
Objetivo
Determinar la capacidad bacteriana de producir ácido sulfhídrico
Medios y reactivos
Se utilizan medios que contengan aminoácidos sulfurados o peptonas adicionadas con sales
de azufre, como el tiosulfato de sodio (SIM y TSI).
Mecanismo
Algunas bacterias reducen aminoácidos sulfurados hasta ácido sulfhídrico, el cual se
transforma en sulfito de fierro formando un precipitado negro.
Método de siembra
El medio de SIM de siembra por picadura y el medio de TSI por picadura y estría.
Incubación
24 a 48 horas a 37°C
Interpretación de resultados
La prueba positiva se manifiesta por la aparición de un precipitado negro a lo largo de la
picadura en los medios en tubo o sobre las colonias en el medio en caja.
2. UTILIZACIÓN DE CARBOHIDRATOS
Aplicación
Determinar la capacidad bacteriana para utilizar (acidificar) los carbohidratos
Objetivo
Detección de la oxidación o fermentación de los carbohidratos mediante acidez de los
mismos.
Medios y reactivos
Generalmente se utilizan un caldo peptonado, libre de carbohidratos, al que se le adiciona el
carbohidrato que desea probarse como sustrato de la reacción en una concentración de
0.5%, además de un indicador de pH (rojo de fenol), para detectar los cambios de pH en el
medio.
Mecanismo
Las bacterias que utilizan los carbohidratos por oxidación o fermentación, acidifican el pH del
medio
Método de siembra
Se siembran mediante una suspensión bacteriana o colocando una colonia en el medio
mediante la agitación del asa.
Incubación
En ocasiones es necesario prolongar este periodo por 7 días, antes de considerar una
reacción negativa
La prueba se observa por el cambio de coloración de rojo a amarillo.
3. CATALASA
Aplicación
Permite diferenciar a los estreptococos de los estafilococos y micrococos ya que los primeros
no producen la enzima
Objetivo
Determinar la producción de la enzima catalasa.
Medios y reactivos
Se utiliza como reactivo el peróxido de hidrógeno (agua oxigenada) al 3%.
Mecanismo
El peróxido de hidrogeno en presencia de catalasa reacciona liberando oxígeno, dejando
H2O
Método de siembra
Colocar una gota de agua oxigenada al 3% en una laminilla, tomar con el asa una de las
colonias y colocarla en la gota de agua oxigenada.
Incubación
La lectura se hace inmediatamente.
Se produce un burbujeo como resultado del desprendimiento de O2
Nota: Si la prueba se realiza a partir de colonias crecidas en medios adicionados con sangre,
pueden presentarse reacciones falsa positivas, ya que la sangre reacciona con el agua
oxigenada, por lo que al tocar la colonia que se va ha probar se debe evitar enfriar el asa
enterrándola en el agar.

4. CITRATO DE SIMMON
Aplicación
Esta prueba es útil para diferenciar Enterobacter y Klebsiella (generalmente positivos de E.
coli.).
Objetivo
Determinar la capacidad bacteriana para utilizar el citrato de sodio como una fuente de
carbono.
Medios y reactivos
Se utilizan un agar que contiene 0.2% de citrato de sodio, al cual se le adiciona un indicador
de pH (azul de bromotimol). Es envasado en tubo con superficie inclinada.
Mecanismo
Las bacterias al utilizar el citrato, liberan residuos de sodio que al unirse con radicales OH
alcalinizan el medio. Bajo estas condiciones el indicador de pH cambia de color verde a azul.
Método de siembra
El medio se siembra por estría.
Incubación
24 a 48 horas a 37°C. En ocasiones es necesario prolongar este periodo hasta 7 días antes
de considerar una reacción negativa.
Prueba positiva: Cambio del medio a color azul.
Prueba negativa: el medio permanece verde.
5. PRODUCCIÓN DE INDOL
Aplicación
Diferenciar a E. coli de Enterobacter y Klebsiella, y a Proteus mirabilis de otras especies de
Proteus.
Objetivo
Determina la habilidad de la bacteria para producir triptofanasa y oxidar el triptofano con
producción de índol.
Medios y reactivos
Método estándar de Kovac’s: Se utiliza el medio de SIM, al cual después del desarrollo
bacteriano se le agrega el reactivo de Kovac’s.
Mecanismo

La triptofanasa hidroliza el triptofano con la liberación de anillo indólicos. La adición del

reactivo de Kovac’s detecta estos anillo indólicos libres y por lo tanto, la producción de la
enzima triptofanasa por parte de la bacteria.
Método de siembra
Inocular el medio de SIM por picadura con asa recta.
Incubación
La prueba positiva: anillo rojo en la superficie.
Prueba negativa: anillo de cualquier otro color.
6. Triple Azúcar Hierro (TSI)
Aplicación
Prueba para diferenciar entre géneros de bacilos Gram negativos entéricos (familia
Enterobacteriacea) y otras bacterias.
Objetivo
Determinar la capacidad para utilizar azúcares, producción de ácido sulfhídrico y producción
de gas por fermentación.
Medios y reactivos
El medio de TSI contiene agar, peptonas y sales minerales; tres azúcares (glucosa, lactosa y
sucrosa), tiosulfato de sodio, sulfato ferroso y rojo de fenol como indicador de pH.
Mecanismo
1. - Utilización de carbohidratos: el medio contiene lactosa, sucrosa y glucosa, que pueden
ser utilizados mediante oxidación con la producción de ácido. Los cambios de pH son
detectados por el rojo de fenol, dando amarillo con un pH ácido y rojo con un pH alcalino.
2. - Producción de gas: algunas bacterias producen gas como resultado de la fermentación
de carbohidratos. Esta reacción se observa en el medio por la presencia de huecos, burbujas
en el agar o inclusive el desplazamiento del agar en el tubo por acción del gas que lo empujo.
3. - Producción de ácido sulfhídrico H2S: algunas bacterias pueden reducir el tiosulfato de
sodio a sulfuro de hidrógeno, el cual reacciona con el sulfato ferroso del medio produciendo
sulfuro de hierro. Esto se observa en el medio como un precipitado de color negro.
Método de siembra
Por picadura en el fondo del tubo y estría continua en la superficie, el inoculo debe ser
abundante.
Incubación
18 a 24 horas como máximo.

Anexo 3
Evaluación diagnóstica. Práctica #1. Medidas de bioseguridad en el

laboratorio
1. ¿Cuál es el significado de bioseguridad?

2. ¿Para que son las medidas de bioseguridad?
3. ¿Qué medidas de bioseguridad conoces?
4. ¿Quién es el responsable de la bioseguridad?
5. ¿Cuál es la mejor forma de prevenir accidentes?
Autoevaluación. Práctica # 2. Control de agentes patógenos
Conocimiento adquirido Totalmente De En Totalmente en

de acuerdo acuerdo desacuerdo desacuerdo
Distingue la diferencia entre
desinfección y esterilización
Describe las características
generales de los agentes
patógenos para su
destrucción.
Manipula de los materiales
esterilizados.
Interpreta el manómetro
Describe el manejo del
autoclave
Describe el uso de los
desinfectantes
Practica las medidas de
bioseguridad
Discute los resultados

Autoevaluación. Práctica # 3. Recolección y conservación de muestras

para estudios bacteriológicos y micológicos

Realiza una historia clínica
Manipula al animal
respetando su bienestar.
Identifica los procedimientos
para el diagnóstico
Enlista los materiales para
una adecuada toma de
muestra
Distingue la importancia de la
asepsia
Señala la importancia de
tomar una muestra
representativa de la
enfermedad
Identifica como conservar,
enviar e identificar la muestra
Señala la importancia sobre
el tiempo de envío de la
muestra

Autoevaluación. Práctica # 4. Uso de los medios de cultivo y su

inoculación

Práctica la inoculación en
los medios
Enlista la utilidad
diagnóstica de los medios
Realiza de acuerdo a las
características nutricionales
y fisicoquímicas de las
bacterias el cultivo
Práctica las diferentes
formas de inoculación de
acuerdo a las
características físicas de los
medios
Realiza el estriado sin
romper el agar
Describe los cambios en los
medios
Realiza la inoculación
adecuadamente

Autoevaluación. Práctica # 5. Identificación bacteriana y uso de tinciones

Realiza un frotis fijo
Identifica la utilidad de cada
tinción
Sabe realizar la tinción de
Gram
Realiza la tinción de azul de
lactofenol
Realiza la tinción de
Schaeffer y Fulton
Realiza la tinción de tinta
china
Distingue la diferencia entre
bacterias Gram positivas y
negativas
generales de las bacterias.
generales de las colonias.
Identifica las estructuras de
los hogos
Identifica la cápsula
Identifica la espora
Manipula el manejo del
microscopio

Autoevaluación. Práctica # 6. Pruebas bioquímicas como método de

identificación bacteriana

Identifica una cepa esta
pura
De acuerdo a los medios
utilizados y los cambios en
estos sabe que pruebas
bioquímicas realizar.
Realiza la inoculación en
cada prueba bioquímica.
Interpreta los resultados en
cada una de las pruebas
bioquímicas para Gram
negativos
Interpreta los resultados en
cada una de las pruebas
bioquímicas para Gram
positivos
Registra los resultados
obtenidos en las pruebas
bioquímicas.
Utilizar las tablas
especificas para identificar
el género y la especie
bacteriana.

Autoevaluación. Práctica # 7. Antibiograma

Identifica que causa el uso
indiscriminado de
antibióticos.
Identifica un cultivo puro
Interpreta que multidiscos o
discos antimicrobianos
deberá utilizar
Describe porque debe
ajustarse la turbidez con el
nefelómetro de Mac Farland
Describe la utilidad del agar
Mueller-Hinton
Describe la importancia de
colocar los multidiscos con
asepsia
Mide los halos de inhibición
Interpreta los resultados del
antibiograma
Señala el tratamiento
adecuado

Autoevaluación. Práctica # 8. Identificación de bacterias piógenas Gram

positivas

Identifica un proceso
patológico piógeno
Realiza la toma de la
muestra de un proceso
piógeno
Manipula al animal
Identifica las características
de las colonias de bacterias
piógenas
Realiza la tinción de Gram
Identifica las características
morfológicas de las bacterias
piógenas
Describe la utilidad de los
medios utilizados para
bacterias piógenas
Identifica las pruebas
bioquímicas para la
identificación del género y
especie bacteria
Realiza las pruebas
bioquímicas mencionadas en
la práctica adecuadamente.

Autoevaluación. Práctica # 9. Análisis bacteriológico de la leche

Describe la metodología para la
toma de muestras de leche
Manipula al animal respetando su
bienestar.
Enlista los microorganismos más
comunes involucrados en casos de
mastitis
Utiliza los medios adecuados para
el aislamiento de bacterias
causantes de mastitis
Explica la finalidad de utilizar asa
calibrada
Identifica los cambios en los
medios y los fundamentos sobre
los mismos
Identifica la morfología de las
colonias
Calcula el número de
microorganismos en caja
Realiza la tinción de Gram y su
interpretación
bacterias
Diferencia las pruebas bioquímicas
que debe realizar de acuerdo al
crecimiento bacteriano y la tinción
de Gram
Interpreta las pruebas bioquímicas
y los cambios en los medios
Identifica el género y la especie
bacteriana

Autoevaluación. Práctica # 10. Aislamiento e identificación de

Enterobacterias

Enlista las características
morfológicas, de agrupación y
tinto riales de las enterobacterias
Identifica una posible
enfermedad digestiva bacteriana
Realiza una adecuada toma de
muestra
Explica la utilidad de los medios
de transporte
Manipula al animal respetando
su bienestar.
Explica la utilidad del
preenriquecimiento (Ej. C.
tetrationato)
Describe la utilidad de cada
medio selectivo o diferencial para
enterobacterias
colonias.
Interpreta los cambios en los
medios y su fundamento
Identifica el género de acuerdo a
la morfología de la colonia y
cambios en los medios
Interpreta las pruebas
bioquímicas
Utiliza la tabla bioquímica para la
identificación de enterobacterias

Autoevaluación. Práctica # 11. Análisis bacteriológico del agua

Describe los parámetros
bacteriológicos establecidos por
la SS
Realiza una toma de muestra de
agua de acuerdo a las
características establecidas
Conoce los agentes etiológicos
contaminantes del agua
Realiza el conteo de coliformes
(NMP)
Realiza las pruebas presuntiva y
confirmatoria para el conteo e
identificación de coliformes
Describe la calidad sanitaria del
agua
Identifica el género bacteriano de
acuerdo a las características de
las colonias y cambios en los
medios
Enlista las pruebas bioquímicas
a realizar para la identificación
del género y especie bacteriana
Interpreta las pruebas
bioquímicas
Usa las tablas bioquímicas para
la identificación del género y
especie

Autoevaluación. Práctica # 12. Urocultivo

Enumera las bacterias
involucradas en infecciones
urinarias
Realiza la toma adecuada de
una muestra de orina
Manipula al animal respetando
su bienestar.
Realiza el conteo bacteriano
por campo visual
Identifica los medios
adecuados para el aislamiento
de bacterias presentes en
muestras de orina, así como su
utilidad
Identifica la morfología
bacteriana, utilizando tinción de
Gram
Calcula el número de
microorganismos presentes
Distingue las pruebas
bioquímicas que debe realizar
Identifica el agente etiológico
de muestras de orina
Diferencia la presencia o
ausencia de infección urinaria

Autoevaluación. Práctica # 13. Aislamiento e identificación de hongos

Enlista los microorganismos
involucrados en
dermatofitosis
Realiza una adecuada toma
de muestra.
Manipula al animal
Realiza el método de siembra
de pelos y piel de acuerdo al
medio utilizado.
Identifica las esporas en
muestras de pelo tratadas
con KOH
Realiza la tinción de azul de
algodón
Identifica las estructuras de
los hongos
Cumple con las medidas de
bioseguridad durante al
práctica
Identifica el género
bacteriano

A lu m n o :
C o e v a lu a c ió n . M e d id a s d e b io s e g u rid a d
M e d id a d e b io s e g u rid a d # d e p rá c tic a
fe c h a
2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
SI NO SI NO SI NO SI NO SI NO SI NO SI NO SI NO SI NO SI NO SI NO SI NO
1 U s o d e b a ta lim p ia y a b ro c h a d a
2 R e a lizó la s a c tivid a d e s c o n o rd e n y lim p ie za
3 R e a lizó la s a c tivid a d e s c o n re s p e to
4 R e a lizó a c tivid a d e s d ife re n te s a la p rá c tic a
5 T ra e e l c a b e llo re c o g id o
6 C o m ió o b e b io d u ra n te la p rá c tic a
7 R e a lizó lo s p ro c e d im ie n to s a d e c u a d a m e n te
8 P ip e te o c o n la b o c a
9 C o lo c ó lo s m a te ria le s e n e l lu g a r c o rre s p o n d ie n te
1 0 D e s c a rto la s a g u ja s e n e l re c ip ie n te a d e c u a d o
1 1 L im p io y d e s in fe c to la m e s a d e tra b a jo
1 2 C o lo c o m a te ria l d e p a p e l e n e l lu g a r d e tra b a jo
1 3 R o tu lo e l m a te ria l u tiliza d o
1 4 E n c e n d io e l m e c h e ro c u id a n d o
s u in te g rid a d y la d e lo s d e m á s
1 5 D e s e c h o m a te ria l b io ló g ic o a l d re n a je o la b a s u ra
1 6 U s o p ro te c c ió n p a ra lo s o jo s
(s o lo s i u s a le n te s d e c o n ta c to )
1 7 M o s tró te n e r c o n o c im ie n to s o b re s u s ta n c ia s
o p ro d u c to s p e lig ro s o s
1 8 U tilizó g u a n te s d u ra n te la p rá c tic a y a d e c u a d a m e n te
1 9 L a vó lo s m a te ria le s u tiliza d o s
2 0 D e s e c h o lo s g u a n te s e n e l c o n te n e d o r a d e c u a d o
2 1 S e la vo la s m a n o s c o n ja b ó n
2 2 E n g e n e ra l c u m p lió c o n la s m e d id a s d e b io s e g u rid a d
E v a lu a d o re s Fecha E v a lu a d o re s Fecha


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Manual de prácticas de la materia Enfermedades Bacterianas de los Animales Domésticos.

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE AGUASCALIENTES

CENTRO DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

MANUAL DE PRÁCTICAS DE LA MATERIA

M. en C. LAURA ZEPEDA BARRIOS.

Di. Mauricio Ramírez Ruano

Jesús María, Aguascalientes. 3ª revisión Julio de 2007

M. en C. Laura Zepeda Barrios

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE AGUASCALIENTES

DIRECCIÓN GENERAL DE DIFUSIÓN

DIRECCIÓN GENERAL DE FINANZAS

DIRECCIÓN GENERAL DE SERVICIOS

M. en C. Laura Zepeda Barrios 1

CENTRO DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

DIRECTORIO DEL CENTRO

M. en C. Laura Zepeda Barrios 2

M. en C. Laura Zepeda Barrios 3

Práctica 4. Uso de los medios de cultivo y su inoculación 31

M. en C. Laura Zepeda Barrios 4

Práctica 8. AisIamiento e identificación de bacterias piógenas Gram positivas 57

M. en C. Laura Zepeda Barrios 5

M. en C. Laura Zepeda Barrios 6

El estudio de características clínicas y patológicas de cada enfermedad proporcionan un

El uso de laboratorios de diagnóstico clínico para la detección de enfermedades bacterianas

C-1. Identificará las características biológicas y fisicoquímicas de los agentes etiológicos y

M. en C. Laura Zepeda Barrios 7

A-1. Valorará las repercusiones sociales y económicas de las enfermedades de los

M. en C. Laura Zepeda Barrios 8

Nivel 1.- Se realizan funciones rutinarias de baja complejidad. Se reciben

Nivel 3.- Se requiere un importante nivel de toma de decisiones. Tiene bajo su

Nivel 5.- Se desarrollan un conjunto de actividades de naturaleza diversa, en las que

Nivel de desempeño propuesto 3. Tomará decisiones que le permitan llegar al diagnóstico

M. en C. Laura Zepeda Barrios 9

Programa del sistema de prácticas

TEMA PRÁCTICA ÁMBITO DE DURACIÓN Y SEMANA

Prácticas generales de bioseguridad. Reglamentos y procedimientos

M. en C. Laura Zepeda Barrios 11

• Evitar distracciones y juegos.

M. en C. Laura Zepeda Barrios 12

• El material de vidrio debe ser sustituido por material plástico, en la medida de lo

M. en C. Laura Zepeda Barrios 13

• Aquellos laboratorios que desarrollen actividades con microorganismos que no sean

CLASIFICACIÓN DE LOS AGENTES BIOLÓGICOS POR GRUPO DE

Agente biológico del grupo 1.

Los grupos de microorganismos se muestran en el anexo 1

M. en C. Laura Zepeda Barrios 14

CENTRO DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

Medicina veterinaria y zootecnia

Medidas de bioseguridad en el laboratorio

M. en C. Laura Zepeda Barrios

M. en C. Laura Zepeda Barrios 15

El tema de bioseguridad incluye tres aspectos, él más importante es la seguridad humana

Manejo de desechos Protección de materiales e instalaciones

M. en C. Laura Zepeda Barrios 16

M. en C. Laura Zepeda Barrios 17

CENTRO DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

Medicina veterinaria y zootecnia

Control de agentes patógenos

M. en C. Laura Zepeda Barrios

M. en C. Laura Zepeda Barrios 18

M. en C. Laura Zepeda Barrios 19

2. Los métodos de control de agentes patógenos los realiza de acuerdo a las

Especie __________ Raza _ Sexo _ Edad _____

Tinción negativa con tinta china

Tinción de Schaeffer y Fulton

Tinción de lactofenol azul de algodón