Resultados:

1. A partir de las extracciones de DNA del laboratorio anterior se hicieron diluciones en Solución C
para medir al espectrofotómetro a una absorbancia de 260 nm, obteniendo:

Dilución 1/10 Concentración 1/3

DNA Animal 0.294 2.940
DNA Vegetal 0.144 1.440 0.561

La segunda dilución de DNA Vegetal (1/3) se realizó para poder obtener un mayor valor de
absorbancia en el rango de 0.500, logrando una muy buena cifra (0.561). Si una nueva dilución
no se realizó en el DNA Animal fue por la fragilidad de este, por lo que se prefirió utilizar una
absorbancia inicial baja (0.294).

2. Se continuó el proceso añadiéndole a las diluciones de DNA Animal y DNA Vegetal anteriores
tanto agua destilada como hidróxido de sodio (NaOH) a 1N. Se obtuvo:

A 260 nm A 280 nm
Agua Destilada
0.214 0.132
(Error)
NaOH 1N
0.188
(Error)
DNA Animal
Agua Destilada
0.154 0.102
(Nueva Prueba)
NaOH 1N
0.181
(Nueva Prueba)
Agua Destilada 0.275 0.169
DNA Vegetal
NaOH 1N 0.285

La solución de DNA Vegetal resultó dentro de lo esperado, con una reducción de alrededor del
50% en la lectura con agua destilada (puesto que al agregar esta se diluyó en ½) y con una
mayor lectura en la lectura con NaOH 1N (por la desnaturalización del DNA y exposición de sus
bases, aumentando la absorbancia).

Contrariadamente nos resultaron las lecturas de DNA Animal, obteniendo lecturas

incoherentes con una mínima reducción en la medición del DNA con agua destilada (dilución
½) y una reducción relativa a la primera al agregar NaOH 1N y “denaturar”. Por ello se realizó
nuevamente las mismas diluciones pertinentes y se obtuvieron resultados que se acomodaban
a la tendencia de lo esperado, semejante a lo obtenido con la solución de DNA Vegetal.

Las respectivas lecturas a 280 nm fueron para poder posteriormente determinar los
contaminantes proteicos de la extracción inicial.

3. Se evaluó el efecto hipercrómico mediante la siguiente tabla:

Experimental Denaturado Incremento por Efecto Hipercrómico (%)

 DNA Animal
0.214 0.188 -12.15%
c/H2O(Error)
DNA Animal
c/H2O 0.154 0.181 17.53%
(Nueva Prueba)
DNA Vegetal 0.275 0.285 3.64%

Sin considerar la solución errónea de DNA Animal, se obtuvieron efectos hipercrómicos

positivos (como era lo esperado), pero inferiores al 30%. Esto nos indicaba que en realidad en
la extracción de DNA Animal y DNA Vegetal solo se pudo obtener DNA en su mayoría
denaturado.

4. Se cuantificó la cantidad de DNA en las diluciones anteriores, considerando 27 unidades de

absorbancia por cada mg/mL de DNA, puesto que estaba denaturado:

DNA mg/mL μg/mL

DNA Animal
0.008 7.93
(Error)
DNA Animal
0.006 5.70
(Nueva Prueba)
DNA Vegetal 0.010 10.19

Se evidenció una mayor cantidad de DNA Vegetal, coherente con el hecho de una mayor
absorbancia inicial de este. Se puede además calcular que en la extracción original, sin las
diluciones se habría obtenido:

De la Extracción μg/mL
DNA Animal (Error) 158.6
DNA Animal (Nueva Prueba) 114
DNA Vegetal 61.14

De esta manera se puede cuantificar la extracción original, donde resultó prácticamente

duplicar la cantidad de DNA Animal extraída en comparación con la cantidad de DNA Vegetal.

5. Se determinó la relación entre las absorbancias a 260 y 280 nm:

A 260 nm / A 280 nm
Agua Destilada
1.621
(Error)
DNA Animal
Agua Destilada
1.510
(Nueva Prueba)
DNA Vegetal Agua Destilada 1.627

Siendo el valor ideal alrededor de 2.0 y considerando contaminación por proteínas inferior a
1.8 y contaminación por RNA superior a 2.2, se obtuvo una contaminación proteica para ambas
extracciones.

6. Se determinó la cantidad de proteína contaminante según: P = 1.55(Abs280)-0.76(Abs260)

 Proteína (mg/mL) = 1.55(Abs280)-0.76(Abs260)
Proteína (mg/mL)
DNA Animal (Error) 0.042
DNA Animal
0.041
(Nueva Prueba)
DNA Vegetal 0.053

Estos valores son para las diluciones finales, estimándose así que para la extracción original, la
cantidad de proteínas contaminantes fueron:

Proteínas (mg/mL) en la Extracción Original

DNA Animal (Error) 0.8392
DNA Animal
(Nueva Prueba) 0.8212
DNA Vegetal 0.3177