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ENZIMAS
OBJETIVO:
Especificidad: Como consecuencia de la estructura del sitio activo las enzimas presentan
un alto grado de especificidad por el sustrato, puesto de manifiesto por su habilidad para
discriminar entre moléculas muy similares.
Reversibilidad: Reversibilidad: Una enzima actúa igual sobre una reacción química sea
cual sea el sentido de la reacción. No modifican el sentido de la reacción.
Sacarosa + H2O glucosa + fructosa
Eficacia: Se necesitan en muy poca cantidad. Una sola molécula de enzima puede
catalizar la reacción de miles de moléculas de sustrato ya que la enzima no se consume
en el proceso sino que se recupera al final.
Gran poder catalítico: Multiplican la velocidad de las reacciones por un millón de veces o
más.
No se consumen en las reacciones.
Actividad o acción enzimática
En toda reacción enzimática el sustrato es transformado en producto para lo cual la
enzima se une al sustrato formando un complejo enzima-sustrato. Luego la enzima
permanece inalterado y el sustrato transformado en producto.
E+S [E + S] E+P
Enzima sustrato complejo enzima-sustrato enzima producto
Sitio activo:
Cada enzima independientemente de la reacción que catalice o de su estructura
particular contiene dentro de alguna parte de su estructura terciaria un grupo característico de
aminoácidos que forman el sitio activo donde ocurre el evento catalítico del cual esa enzima
es responsable. El sitio activo es un surco o bolsillo real con propiedades químicas y
estructurales que le permiten la acomodación adecuada y especifica al sustrato.
Inhibidores:
Son moléculas que impiden el normal funcionamiento de las enzimas o las inutilizan,
ya que disminuyen o anulan la actividad enzimática. Constituyen un mecanismo de control de
las reacciones metabólicas. La inhibición puede ser:
a) Inhibición irreversible: Envenenamiento del enzima. El inhibidor se une al centro activo
de la enzima de forma permanente mediante un enlace covalente, con lo que la enzima queda
inutilizada. Ej: fármacos y tóxicos. El ión cianuro se une a la citocromo-oxidasa que es clave
en la respiración.
b) Inhibición reversible: No se inutiliza el centro activo sino que impide temporalmente su
normal funcionamiento. No se une mediante enlaces covalentes. Puede ser de dos tipos:
MATERIALES
Amilasa salival, tubos de ensayo, vaso de precipitado, pipetas, baño maria, mechero de
alcohol almidón al 1%, sacarosa al 20 %, reactivo de Fehling, soluciones amortiguadoras con
pH 3, 6.8 y 9.8, lugol,. Muestra biológica: saliva
PROCEDIMIENTO
El método se basa en la hidrolisis del almidón (sustrato) en condiciones de pH y
temperatura fisiológicos, por acción de la amilasa presente en la saliva .Cuando se hidroliza
el almidón se rompen las uniones glucosídicas dando lugar a oligosacáridos de diferente
longitud (dextrinas). Las de mayor tamaño amilodextrinas dan azul con lugol, las siguientes
eritrodextrinas, dan coloración rojiza, y las acodextrinas, de menor tamaño, dan negativa a la
reacción de lugol. Si la hidrolisis prosigue, se forman maltotriosas, isomaltosas y maltosas,
productos de degradación no evidénciales con el reactivo de lugol (pero si con el Fehling).
A. RECOLECCION DE LA MUESTRA DE SALIVA Y PREPARACION DE LA SOLUCION
DE ENZIMA
Primero se tiene que recolectar la muestra de saliva para obtener una solución de
enzima. Para ello el alumno debe enjuagarse la boca varias veces con agua corriente y
proceda a recoger en un vaso de precipitado limpio aproximadamente 2 ml de saliva. Luego
adiciónele a la muestra recogida 10 ml de agua destilada y mezclar.
1. Especificidad enzimática
Los enzimas, además de ser unos catalizadores muy eficaces, presentan un alto grado
de especificidad química, es decir, son capaces de inducir la transformación de un sólo tipo
de moléculas y no de otros que también se encuentran presentes en el medio de reacción. Un
enzima es capaz de discriminar entre dos sustancias que potencialmente podrían actuar como
sustratos.
Escuela de Medicina Humana
Biología Celular y Molecular
1 2
Solución de almidón 3 ml
Solución de sacarosa 3 ml
Amilasa salival 2 ml 2 ml
Cloruro de sodio 0.5 ml 0.5 ml
Mezclar e incubar durante 20 min. En baño maría ( 37°C)
Lugol 5 gotas
Reactivo de Fehling 2 ml
Fundamento: Cada enzima tiene una temperatura óptima en la cual la velocidad de reacción
es máxima. Suele ser 40ºC. Si aumenta mucho, la enzima se desnaturaliza. El calor aumenta
la energía cinética con lo que aumenta la movilidad de las moléculas facilitando su encuentro.
1 2 3
Buffer 6.8 2 ml 2 ml 2 ml
Cloruro de sodio 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml
Amilasa salival 1 ml 1 ml 1 ml
Colocar c/ tubo durante 10 min. en sus diferentes baños: 1. Baño de hielo
2. baño maría 37°C
3. llevar a ebullición
Solución de almidón 3 ml 3 ml 3 ml
Incubar 20 min. mas en sus respectivos baños
lugol 3 gotas 3 gotas 3 gotas
Los tubos deben estar en sus respectivos baños por un laxo de 30 minutos en total
3. Sensibilidad al pH
Fundamento: Cada enzima presenta unos valores de pH entre los que son efectivos. Entre
ambos existe un pH óptimo en el que la velocidad de la reacción es máxima. Fuera de los
límites la enzima se desnaturaliza. Este efecto se debe a que, al ser los enzimas de naturaleza
proteica, al igual que otras proteínas, se desnaturalizan y pierden su actividad si el pH varía
más allá de unos límites estrechos.
Escuela de Medicina Humana
Biología Celular y Molecular
1 2 3
Buffer pH 3.8 2 ml
Buffer pH 6.8 2ml
Buffer pH 8.9 2 ml
Cloruro de sodio 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml
Solución de almidón 3 ml 3 ml 3 ml
Amilasa salival 1 ml 1 ml 1 ml
Mezclar e incubar durante 20´ en baño maria a 37° C
Lugol 3 gotas 3 gotas 3 gotas
Tejido donde se
Enzima Reacción que cataliza Aplicación clínica
localizan
Amilasa
Creatina quinasa
Alanina aminotransferasa
Lactato deshidrogenasa
Captopril
Lovastatin
Paracetamol
Ciprofloxacina
Cafalosporina