Venenos de serpiente: atractivos compuestos proteínicos

antimicrobianos con fines terapéuticos

Abstracto
Las bacterias Gram positivas y negativas son patógenos peligrosos que pueden causar
enfermedades de infección humana, especialmente debido a la prevalencia cada vez más
alta de resistencia a los antibióticos, que se está convirtiendo en uno de los problemas
clínicos más alarmantes. En la búsqueda de nuevos compuestos antimicrobianos, los
venenos de serpiente representan una fuente rica para tales compuestos, que son
producidos por glándulas especializadas en la mandíbula de la serpiente. Varios
compuestos de veneno se han usado para efectos antimicrobianos. Entre ellos se
encuentran las fosfolipasas A 2, que hidrolizan los fosfolípidos y podrían actuar sobre
las superficies de las células bacterianas. Por otra parte, metaloproteinasas YL-

aminoácidos oxidasas, que representan importantes clases de enzimas con propiedades

antimicrobianas, se investigan en este estudio. Finalmente, los péptidos antimicrobianos
de múltiples clases también se encuentran en los venenos de serpiente y se
mencionarán. Todas estas moléculas han demostrado una alternativa interesante para
controlar microorganismos que son resistentes a los antibióticos convencionales,
contribuyendo en medicina debido a sus diferentes mecanismos de acción y
versatilidad. En esta revisión, se enfocarán los compuestos antimicrobianos de veneno
de serpiente, incluidas sus enormes aplicaciones biotecnológicas para el desarrollo de
fármacos.

Introducción.

Las bacterias grampositivas y negativas son patógenos peligrosos que pueden causar
enfermedades de infección humana, especialmente en vista de la resistencia a los
antibióticos, que se está convirtiendo en un problema clínico alarmante [1, 2]. Para
encontrar nuevos compuestos antimicrobianos, se han explorado múltiples fuentes de
antibióticos en la naturaleza. Entre ellos, los venenos de los animales constituyen una de
las fuentes más ricas de sustancias farmacológicamente activas, ya que estos compuestos
pueden producirse por autodefensa, siendo útiles para el desarrollo de fármacos inusuales
[1].

Los venenos de serpiente se producen en las glándulas venenosas especializadas ubicadas

en la mandíbula superior [2]. toxinas venenosas, como otras proteínas secretadas, se
sintetizan y metabolizan en las células secretoras de la glándula venenosa y comúnmente
se transfieren al sistema endomembrana, donde los componentes del veneno son
transportados a la luz celular por los gránulos secretores (Fig. 1) [3]. Los venenos de
serpiente son una solución acuosa que contiene una mezcla de péptidos y proteínas, y
también poliamidas, histaminas y alcaloides utilizados en defensa propia y estrategias
depredadoras [2]. Sin embargo, todavía se desconocen los mecanismos que regulan la
concentración de estos compuestos, así como la regulación del pH y la fuerza iónica en
la glándula luminal [2]. las toxinas venenosas pueden causar una variedad de alteraciones
en un organismo, como desorganizar los canales iónicos, los receptores nicotínicos y las
enzimas, así como alterar los tejidos neurales y cardiovasculares y el sistema
neuromuscular [4]. Además, estas moléculas también pueden causar coagulación
sanguínea y homeostasis [4].

Por otro lado, no solo se han obtenido propiedades perjudiciales del veneno. Esta
secreción puede utilizarse como una herramienta farmacológica, y representa un enorme
campo potencial para el descubrimiento de nuevas moléculas que pueden curar
enfermedades, incluso aquellas que no responden a las terapias actuales [4]. Con este fin,
esta revisión se centrará en los compuestos antimicrobianos aislados de venenos de
serpiente que pueden utilizarse como nuevos fármacos contra enfermedades infecciosas
y como herramientas biotecnológicas que podrían ayudar a resolver problemas de salud.

Enzimas antimicrobianas del veneno de serpiente.

Fosfolipasas A2
Las fosfolipasas A2 (PLA2) son miembros de una superfamilia de enzimas que se ha
dividido en 11 grupos de acuerdo con la fuente, tamaños moleculares, efectos patológicos,
similitudes de secuencias de aminoácidos, homología estructural y patrón de puente
disulfuro [5]. Debido a estas características, los PLA2 también se han clasificado como
enzimas que hidrolizan los fosfolípidos en la posición sn-2 de una manera dependiente
del calcio, liberando ácidos grasos y lisofosfolípidos [6].

Las PLA2 de veneno de serpiente son proteínas con una longitud de 120- 130 residuos de
aminoácidos que están reticulados por siete enlaces disulfuro. Pueden clasificarse en el
grupo IA, representado por serpientes elapid, y el grupo IIA, caracterizado por serpientes
viperida y Crotalid [7, 8]. El último grupo (IIA) también se puede subdividir en dos
subgrupos principales. El primero presenta un ácido aspártico en la posición de
aminoácido 49 (Asp49), que tiene una carga negativa que potencia la unión de Ca2 + y
contribuye a la hidrofobicidad de Asp49 y, en consecuencia, a su actividad catalítica. El
otro subgrupo es Lys49, que tiene una lisina en la posición 49 y muestra una carga positiva
que impide la unión de Ca2 +, que muestra baja o nula hidrofobicidad, pero también
presenta actividad catalítica [8]. Además de su actividad catalítica, los PLA2 IIA también
pueden poseer actividades biológicas adicionales, como hemolítica [9], anticoagulante
[10], agregación plaquetaria [11], neurotoxicidad [12] y miotoxicidad [13]. Además,
algunos estudios han demostrado que los múltiples efectos farmacológicos, como las
actividades antitumorales [14] y antimicrobianas, también pueden correlacionarse con las
actividades de veneno de serpiente de PLA2.

Además de los subgrupos Lys49 y Asp49, algunos estudios han sugerido que otros
subgrupos de IIA PLA2 se pueden encontrar en la naturaleza. Wei et al. [7] estudiaron un
nuevo subgrupo conocido como promutoxina, que contiene un Arg en la posición 49 (R49
PLA2) (Fig. 2a, b). Esta enzima se purificó en primer lugar a partir del veneno de
serpiente Protobothrops mucrosquamatus mediante el uso de métodos de cromatografía
líquida seguida de la determinación de la masa molecular SDSPAGe y MALDI-TOF. La
enzima se desafió adicionalmente contra bacterias Gram-positivas y negativas [7]. El
análisis de masa molecular mostró una banda única de 15 kDa en condiciones reductoras
y dos bandas de 15 y 24 kDa en condiciones no reductoras. El análisis MALDI-TOF
mostró un solo pico con una masa molecular de 13.656 kDa. Por otra parte, los estudios
estructurales que involucraron una combinación de diferentes tecnologías como MALDI-
TOF, edman secuenciación N-terminal y la clonación molecular también se realizaron
para determinar la estructura primaria de la promutoxina [7]. Se realizaron ensayos
antimicrobianos contra bacterias Gram-positivas y negativas que muestran que R49
PLA2, a 250 μg mL-1, pudo controlar Bacillus subtilis, Pseudomonas aeruginosa y
Salmonella typhimurium (Tabla 1) [7]. En estudios realizados con una fosfolipasa A2
homodimérica del veneno de serpiente Bungarus faciatus (BFPA), Chunhua Xu et al. [15]
purificado y caracterizado s-PLA2-I (BFPA), mostrando 15 medias-cisteínas [15].
También desafiaron a BFPA contra Staphylococcus aureus y Escherichia coli, mostrando
una actividad más fuerte contra bacterias Gram-positivas que Gram-negativas [15]. Estos
resultados pueden explicarse por las propiedades catiónicas generales de BFPA, que
facilita la penetración de la pared celular bacteriana Gram-positiva aniónica [16]. Parece
que la actividad reducida hacia bacterias Gram-negativas podría estar relacionada con la
ausencia de proteína bactericida / de penetración creciente (BPI), una proteína capaz de
unirse y penetrar lipopolisacáridos producidos por bacterias Gram-negativas [17, 18].

Metaloproteinasas.

Las metaloproteinasas de veneno de serpiente (SvMP) comprenden una subfamilia

compleja de enzimas dependientes de zinc que muestran una amplia variedad de
actividades biológicas tales como hemorragia [19], inhibición de la agregación
plaquetaria [19], coagulopatía [20], mionecrosis [21], y respuestas inflamatorias [21].
Todas estas actividades están, sin embargo, estrechamente relacionadas con cada función
de dominio SvMP multi-complejo. Estos dominios multi-complejos se organizan
fácilmente en tres clases diferentes denominadas PI, P-II y P-III, que se clasifican de
acuerdo con la presencia o ausencia de dominios adicionales tales como disintegrina y
dominio similar a desintegrina, un dominio de cisteína alto, y un dominio de unión a
lectina [22, 23]. El primero, P-I, es la clase SvMP más pequeña, que muestra masas
moleculares entre 20 y 30 kDa, que contiene un pro-dominio y el dominio de proteinasa
[24]. P-I por lo general muestra fibrinógeno o actividades fibrinolíticas [25]. La clase P-
II tiene masas moleculares intermedias de 30-60 kDa y contiene dominios P-I idénticos
además de un dominio desintegrina [25]. El último, P-III, es la clase SvMP más grande,
que tiene masas moleculares de 60-100 kDa y contiene una estructura de dominio pro-,
proteinasa, disintegrina y rica en cisteína [25]. Algunos autores sugieren una cuarta clase
SvMP, P-Iv, que tiene un dominio adicional similar a lectina unido por enlaces disulfuro
a una clase P-III SvMP. Sin embargo, existen algunas dudas sobre si P-Iv verdaderamente
representa una nueva clase o si se trata de una estructura P-III unida por un solo puente
disulfuro con proteínas de lectina tipo C disponibles durante la síntesis del veneno [21].

Aunque las SvMP son conocidas por sus capacidades de adhesión proteolítica, de matriz
celular y célula-célula, solo unos pocos estudios han relacionado estas enzimas para
dirigir las actividades antimicrobianas. Samy et al. [26] informó el aislamiento y la
caracterización de una metaloproteinasa de Agkistrodon halys (AHM), con el objetivo de
comprender cómo la permeabilidad de la membrana y las funciones antimicrobianas
podrían estar relacionadas con dichas proteinasas [26]. Se aplicaron métodos de
aislamiento y purificación basados en filtración en gel seguidos por HPLC de fase inversa,
MALDITOF y SDS-PAGe, dando como resultado una purificación de AHM que mostró
una masa molecular de 23 kDa. AHM mostró actividades inhibitorias contra Bacillus
pseudomallei, Proteus vulgaris y S. aureus (Tabla 1) [26]. De lo contrario, AHM no
mostró ninguna actividad perjudicial contra E. coli, P. aeruginosa o Enterobacter
aerogenis (Tabla 1) [26]. Además, se realizaron estudios de ultraestructura, utilizando
microscopía electrónica de barrido (SeM) y microscopía electrónica de transmisión
(TeM), para demostrar los daños celulares ocasionados por AHM, como perforación
celular y rugosidad de la pared celular sobre bacterias Gram positivas y negativas.

Para clasificar esta enzima, Samy et al. [26] también realizó un estudio comparativo de la
estructura primaria de AHM frente a otros SvMP como contortrostatin, bothrostatin y
elegantin-2a, que reveló altos niveles de similitud debido a un dominio conservado
constituido por dominios disintegrina / cisteína que son típico de la clase P-III SvMP.
Esta clase parece mostrar una acción bactericida mediante el reconocimiento de sitios
aniónicos bacterianos y también la degradación enzimática de las membranas de
fosfolípidos, por su perforación seguida de procesos de disrupción de la membrana,
eventos que se producen preferentemente en bacterias Gram-positivas [26].

L-Amino oxidasas

Otro componente antimicrobiano de varios venenos de serpiente es la l-aminoácido

oxidasa (Sv-LAAO), una flavoproteína clásica que se encuentra comúnmente en una gran
variedad de fluidos animales como la leche [27], el moco epitelial [28] y los venenos [29].
De acuerdo con Du y Clemetson [16], Sv-LAAOs son generalmente homodimerics, FAD
vinculante glicoproteínas, con masas moleculares alrededor de 110-150 kDa en
condiciones no desnaturalización [16]. cada monómero Sv-LAAO consta de tres
dominios, con toda la estructura compuesta por un total de 14 hélices α y 18 cadenas β.
Por otra parte, Georgieva et al. [30] también proponen que la estabilización de las
estructuras cuaternarias l-aminoácido oxidasa por un par de iones Zn2 + podría ser un
factor relevante para actividades biológicas [30], incluyendo la acción sobre plaquetas,
inducción de apoptosis, efectos hemorrágicos, citotoxicidad, y propiedades
antimicrobianas [31]. Además, Sv-LAAO también puede mostrar actividades
antimicrobianas, que están relacionadas con el control bacteriano por peróxido de
hidrógeno H2O2 generado como resultado de la oxidación de L-aminoácidos por LAAOs
[18], así como la unión de LAAO a membranas bacterianas [ 32].

Okubo et al. [29] demostraron que los LAAO del veneno de Bothrops mattogrosensis
(Bm-LAAO) (figura 2c, d) presentaban actividad antimicrobiana contra múltiples
bacterias, mostrando una probable función protectora inusual. Con el objetivo de
identificar y aislar Bm-LAAO, se utilizó la cromatografía de filtración en gel, que dio
como resultado tres fracciones con actividades antimicrobianas. La fracción con la
actividad más alta se aplicó sobre un cromatógrafo de HPLC de fase inversa, produciendo
una especie de enzima Bm-LAAO purificada. Bm-LAAO mostró la mayor actividad
antimicrobiana, con CMI entre 2 y 8 μg mL-1 cuando se enfrentaba a bacterias
Gramnegativas como Klebsiella pneumoniae, E. coli y P. aeruginosa y MIC entre 8-32
μg mL-1 cuando era desafiado Gram-positivas bacterias tales como S. aureus y
Streptococcus pyogenes (Tabla 1] [29].

Otros estudios han demostrado que LAAO es una enzima que es capaz de catalizar la
oxidación de una gran cantidad de aminoácidos [29], generando aminoácidos y peróxido
de hidrógeno, H2O2. Esta habilidad parece estar esencialmente involucrada en la
actividad antibacteriana. Con el objetivo de comprender el mecanismo de acción
bactericida H2O2, Zhang et al. [33] demostraron que LAAO del veneno de serpiente de
A. halys (AHP-LAAO) fue capaz de inhibir el crecimiento bacteriano tanto Gram-
positive como-negative debido a la producción mejorada de H2O2 [33]. Para relacionar
la presencia de H2O2 y la actividad antimicrobiana, AHP-LAAO fue desafiado contra S.
aureus y E. coli, en presencia y ausencia de catalasa, una enzima que cataliza la
descomposición del peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno. Curiosamente, los efectos
inhibidores cesaron tras la adición de catalasa. La catalasa fue capaz de destruir el H2O2
producido durante las reacciones enzimáticas AHP-LAAO, lo que sugiere que la
actividad antimicrobiana de AHP-LAAO podría atribuirse directamente al H2O2
producido [33].

Péptidos antimicrobianos.

Los péptidos antimicrobianos se definen como moléculas que tienen una defensa crítica
contra todo tipo de microorganismos, protegiendo al huésped de la invasión de bacterias,
hongos y virus [34]. Además, los péptidos antimicrobianos se han enfocado como un
nuevo enfoque para el desarrollo de fármacos contra infecciones [35]. Son parte del
sistema inmunitario innato y juegan un papel en la defensa contra la infección por
microorganismos. También son capaces de inactivar agentes infecciosos y son un fuerte
candidato para combatir la resistencia a los medicamentos [36]. Desafortunadamente,
solo un número seleccionado de AMP se ha descrito como adecuado para aplicaciones
farmacológicas [37]. Una de las mayores dificultades en el diseño de AMP útiles es la
comprensión poco clara de sus determinantes estructurales para el reconocimiento de
compuestos de membrana [38]. La estructura, la hidrofobicidad, el plegamiento, las
cargas y los ángulos de enlace dinámico y AMP parecen ser factores cruciales que pueden
influir en su selectividad y actividades [39, 40]. En este contexto, una amplia variedad de
estudios bioquímicos y biofísicos han reportado mecanismos de biodisponibilidad,
alteración de la membrana y actividades sinérgicas de estas moléculas [41].

Los péptidos antimicrobianos se pueden dividir en cuatro grupos estructurales conocidos

como α-helicoidal, β-hoja, α-horquilla, y péptidos extendidos [37, 42]. Además, además
de su diversidad en secuencias y estructuras de aminoácidos, también es muy común que
los AMP compartan propiedades anfipáticas [43, 44]. Esta característica anfipática les
permite unir membranas de microorganismos y se ha pensado que causa lisis celular por
interacción con lípidos. Además, los AMP pueden autoasociarse y formar poros o
posiblemente pueden actuar en membranas que se desintegran de manera similar a un
detergente [37, 42]. Aunque un pliegue en la estructura anfipática parece ser un requisito
previo para la lisis celular, los mecanismos exactos de acción de la mayoría de los AMP
aún no están claros [42]. Las membranas citoplásmicas bacterianas grampositivas y
negativas presentan predominantemente fosfolípidos con cargas negativas que dan lugar
a una atracción electrostática a los AMP altamente catiónicos [45].

En este contexto, el fosfatidilglicerol (PG) y la cardiolipina (CL) consisten en lípidos

aniónicos que son más abundantes en las membranas bacterianas Gram positivas y
negativas. La interacción entre los AMP y los lípidos parece ser esencial para comprender
el proceso de disrupción de la membrana [46]. Dos estudios recientes desarrollados por
epand et al. [47] muestran que las actividades de cinco AMP (MSI-78, MSI103, MSI-
469, MSI-843 y MSI-1254) podrían promover la agrupación de lípidos en contraste con
la magainina 2, que no puede hacerlo [47]. Además, todos los péptidos demostraron la
formación de una fase cristalina en presencia de dimiristoil fosfatidilglicerol (DMPG), un
fosfolípido con carga negativa [46]. Por lo tanto, los compuestos catiónicos como la
mayoría de los AMP probablemente se agruparán con membranas lipídicas [46].

Además de su membrana interna, las bacterias Gram-negativas también tienen una

membrana externa predominantemente compuesta de lipopolisacárido aniónico (LPS),
que proporciona una barrera fuerte que debe ser superada por los compuestos de AMP
[48-50]. Dado este hecho, los estudios han demostrado que, cuando se evalúan algunos
AMP frente a bacterias Gram-negativas, se requieren concentraciones de péptido más
altas para el proceso inhibidor, en comparación con los Gram-positivos [51]. El LPS
anfifílico está constituido por tres dominios distintos, que se conocen como un resto de
lípido A bien conservado, un oligosacárido central y un dominio de polisacárido
hidrofílico altamente variable [52, 53]. Debido a estas características, se sabe que el LPS
sirve como una barrera permeable que puede desempeñar un papel importante en la
regulación de antibióticos hidrófobos bacterianos y agentes antimicrobianos, modulando
la entrada y la inserción de AMP en la membrana plasmática interna [49, 54, 55]. De
acuerdo con este hecho, algunos estudios han demostrado que las cecropinas, temporinas,
catelicidinas, protegrinas y algunas defensinas de insectos son todas activas contra
bacterias Gram-positivas, pero no contra microorganismos Gram-negativos [49, 55].
Teniendo esto en cuenta, se necesitan estudios sobre el papel del colesterol en diferentes
tipos de bicapas de membrana con diferentes AMP, para ayudar a comprender el papel
exacto del colesterol en la selectividad de los AMP [56].

En estudios recientes sobre las correlaciones en la estructura-actividad de los AMP, se ha

observado que la oligomerización de LPS puede hacer inactiva a las temporáneas de rana
europea [49]. En estudios que examinan formas de superar los problemas de inactivación
de AMP, se ha propuesto que los AMP pueden causar desarreglos estructurales en la
membrana externa de las bacterias Gram negativas mediante un mecanismo de captación
autoinfligido basado en la interacción de los residuos catiónicos del péptido con los
grupos fosfato de LPS [55, 57]. Bhattacharjya et al. [58] mostró que un péptido hemolítico
de un veneno de abeja llamado melitina fue capaz de adoptar una estructura helicoidal
parcial restringida al extremo C catiónico en las micelas de LPS [58]. De lo contrario, se
descubrió que el terminal N melittin no está estructurado y es dinámico en LPS. Estos
datos sugieren que C-termini podría actuar como una región de anclaje que altera la
estructura de LPS, haciendo posible la inserción hidrofóbica de la región N-terminal en
la membrana interna. Además, los estudios de Matsuzaki et al. [59] demostraron que la
magainina y sus análogos podían inducir fugas y crear lesiones en la membrana externa
de bacterias Gram negativas al adquirir un pliegue helicoidal cuando estaban en contacto
con LPS, lo que causaba una alteración de cadenas de acilo del dominio de lípido A de
LPS [55, 59].

Conectada a la capacidad multifuncional de los AMP, en membranas ricas en LPS y

lípidos aniónicos, la pardaxina es un péptido derivado de las glándulas mucosas del pez
Pardichirus, cuyos estudios han demostrado cómo estos péptidos interactúan con las
membranas bicapa [60, 61]. Hallock et al. [62] describió el mecanismo de pardaxina (P1a)
en membranas bicapa. En resumen, estos estudios muestran el comportamiento de la
pardaxina en componentes de bicapa lipídica como 1-palmitoil-2-oleoil-fosfatidilcolina
(POPC), 1,2-dimiristoil-fosfatidilcolina (DMPC), 1-palmitoil2-oleoil-
fosfatidiletanolamina (POPe) y 1 -palmitoil-2-oleoil-fosfatidilglicerol (POPG). Los datos
indicaron que las bicapas construidas con componentes POPC y POPe redujeron la
capacidad de P1a de causar disrupción de la membrana. Además, el componente POPG
altera la interacción péptida / membrana, lo que sugiere que P1a tiene una preferencia y
selectividad con respecto a la composición bicapa, lo que demuestra que el mecanismo
peptídico es extremadamente complejo y que la interrupción bicapa depende de la
composición.

En otro estudio, Porcelli et al. [63] mostró que la pardaxina sintética, llamada P4a,
demuestra una curva-hélice-hélice en presencia de dodecilfosfocolina sódica. P4a podría
inducir un trastorno en DMPC y en un núcleo bicapa hidrofóbico. Además, la pardaxina
C-terminal hélice adopta una conformación transmembrana en DMPC bicapa. De lo
contrario, en las bicapas de POPC, la pardaxina mostró una orientación de la superficie
lipídica y no una orientación transmembrana. Estos datos sugieren que P4a altera la
dinámica del grupo principal. Bhunia et al. [39] desarrollaron un estudio que explica un
P4a formador de poros en micelas de LPS, demostrando su eficacia en la
permeabilización del exterior además de la membrana interna. Este estudio también
demuestra que P4a asume conformaciones aleatorias en el tampón acuoso, pero esta
conformación se modificó a estructuras helicoidales en presencia de una micela de LPS.
La RMN y la espectroscopía infrarroja confirmaron que P4a muestra la presencia de
hélices y lazos / vueltas y conformaciones extendidas en los extremos en un entorno de
micelas de LPS. Ramamoorthy et al. [38] mostró que la dinámica de la pardaxina se
volvió desordenada en presencia de colesterol. Este mismo estudio también mostró que
una reducción en la temperatura podría reducir la movilidad de la hélice pardaxina.
Además, la presencia de colesterol disminuye el trastorno de hélice C-terminal, ya que el
colesterol aumenta el orden de las cadenas de acilo en bicapas; en consecuencia, el
aumento de las cadenas de acilo es una de las causas de la reducción de la motilidad de la
hélice C-terminal de pardaxina. Estos resultados implican que el colesterol puede influir
en la formación de barriel-stave realizada por pardaxina.

Un trabajo previo desarrollado por wang et al. [36] aislaron y caracterizaron un péptido
antimicrobiano catelicidina del veneno de B. fasciatus. La familia de catelicidina se
caracteriza por sus dominios de catelinina, que son un dominio conservado aniónico con
una secuencia N-terminal conservada para aproximadamente 100 residuos [64, 65]. El
precursor de catelicidina muestra un dominio de catelin altamente conservado compuesto
de 100 residuos de aminoácidos, que está flanqueado por un fragmento de péptido señal
con aproximadamente 30 residuos en el extremo N y también un péptido antimicrobiano
en el péptido antimicrobiano catiónico C-terminal [65]. La catelicidina aislada por wang
et al. [36] se denominó catelicidina-BF con una masa molecular de 3,637.5 Da y punto
isoeléctrico a 11.79. Esta catelicidina está compuesta de 30 residuos de aminoácidos,
incluidos 12 residuos básicos (9 lisinas y 2 argininas), 5 fenilalaninas y un solo residuo
ácido (16 ácido glutámico) [36]. Los elementos de la estructura secundaria se predijeron
mediante espectroscopia de CD, lo que indica una conformación altamente α-helicoidal,
aunque no se elucidó una estructura tridimensional [36]. Sin embargo, los datos de CD
indicaron que la porción N-terminal de catelicidina-BF adopta una conformación
anfipática α-helicoidal como la de cualquier otra catelicidina [36]. El péptido
antimicrobiano catelicidina-BF demostró fuertes actividades antimicrobianas contra
varios microorganismos, siendo más eficiente frente a bacterias Gram-negativas, y
también contra bacterias resistentes a fármacos clínicamente aisladas, incluyendo K.
pneumoniae, E. coli y aislados clínicos de Salmonella typhi (Tabla 1). ) Cathelicidin-BF
también fue efectivo contra los patógenos fúngicos Candida albicans ATCC2002 y Pichia
pastoris (Tabla 2). Además, algunos hongos saprófitos también se vieron afectados por
este péptido, incluidos Aspergillus terreus, A. niculans y Haetomium globosum (Tabla 2)
[36].

Teniendo en cuenta esta información, el péptido antimicrobiano catelicidina BF-30 y

otros dos antibióticos comerciales (gentamicina y bacitracina) se evaluaron frente a 23
aislados clínicos de cepas bacterianas. Los datos indican que la catelicidina muestra una
mayor eficacia en comparación con los otros dos antibióticos, especialmente contra E.
coli, P. aeruginosa y S. aureus. [66]. Cathelicidin BF-30 también se evaluó in vivo para
la acción intraderrmal en un modelo de rata quemada infectada con cepa de P. aeruginosa
[66]. El número de UFC de órganos de rata infectados, incluidos los pulmones y el hígado,
mostró una reducción notable con el tratamiento con BF-30, lo que sugiere que el péptido
podría evitar los efectos sistémicos de P. aeruginosa [66]. En resumen, BF-30 demuestra
actividad bactericida in vitro e in vivo, incluso contra cepas resistentes, que representan
una potente actividad antibacteriana, y es un candidato importante para el tratamiento
local de las quemaduras infecciosas [66].

Crotamina consta de un miotoxina de péptido de veneno de serpiente de cascabel con los

residuos 42 amino-ácidos, una carga positiva neta de 8 y pI 9,5, con alta similitud con
mamíferos del ß-defensinas formados por 2-3 ß-láminas antiparalelas, y seis residuos de
cisteína conservados implicados en la formación de enlaces disulfuro [67]. La crotamina
muestra actividad antibacteriana contra las cepas de E. coli O157: H7, ML-35p y ATCC
25922 (Tabla 1). Algunos análisis de la acción del mecanismo demuestran que la
crotamina mata a las bacterias al penetrar primero en la membrana [67]. Con el fin de
evaluar la importancia de los enlaces disulfuro en la actividad antibacteriana crotamina,
la molécula se redujo y se ensayó adicionalmente contra cepas de E. coli, lo que demuestra
un aumento tenue en la actividad contra todas las cepas en comparación con crotamina
nativa (Tabla 1). Además, la crotamina reducida también mostró un aumento en la
resistencia a la sal en comparación con la no reducida, lo que sugiere que el enlace
disulfuro es prescindible para estas propiedades [42]. Por lo tanto, también se sugirió que
los disulfuros son importantes en el veneno de serpiente, proporcionando estabilidad in
vitro; de hecho, el efecto de letalidad miotóxica mostró una disminución de
aproximadamente el 50% [67, 68].

Por otra parte, Gomes et al. [69] informó el aislamiento y la caracterización de un nuevo
péptido (PepBj) de Bothropos jararaca veneno de serpiente. PeBj fue desafiado aún más
contra diferentes hongos. Los métodos de purificación se basaron, en primer lugar, en la
cromatografía de filtración en gel, que dio como resultado la separación del veneno crudo
en ocho fracciones. Se analizaron varias fracciones contra Colletotrichum
lindemuthianum, Fusarium oxysporum, Saccharomyces cerevisiae y C. albicans, pero
solo una fracción mostró actividad antifúngica significativa (Tabla 2) [69]. Esta fracción
se aplicó además en un cromatógrafo de fase inversa, produciendo el PepBj purificado.
El análisis de espectrometría de masas mostró un pico principal con una masa molecular
de 1.370 Da. Además de los ensayos antifúngicos, Gomes et al. [69] realizó microscopía
óptica y de barrido electrónico, que muestra que PepBj indujo varias alteraciones
morfológicas de las hifas junto con la formación de pseudohifas en hongos evaluados.
Además, utilizando el ensayo verde SYTOX, se observó que PepBj también podía inducir
la permeabilidad de la membrana hifal, mostrando una fuerte fluorescencia verde SYTOX
en el citosol y el núcleo [69], sugiriendo que las acciones del péptido se basan en daños
intercelulares.

Otra clase importante de péptidos antimicrobianos aislados de venenos de serpiente

consiste en waprin (wAP) [70]. El primer miembro de una familia de waprin, llamado
nawaprin, se aisló del veneno de serpiente Naja nigricollis (Fig. 2e) [70]. En este estudio,
se determinó una estructura tridimensional de nawaprin mediante espectroscopia de
resonancia magnética nuclear. Los datos estructurales mostraron que la nawaprina es
relativamente plana y tiene forma de disco, caracterizada por una configuración de
columna vertebral espiral, compuesta de segmentos circulares proyectados a la molécula
en el exterior, que contiene una cadena β corta antiparalela, así como segmentos circulares
proyectados a la molécula en el interior , conectado por cuatro enlaces disulfuro (Fig. 2e)
[70]. Aunque los residuos de cisteína se conservan, se pueden observar diferentes
matrices estructurales entre los miembros de la familia waprin. Además, después de
nuevos estudios sobre waprin (wAP), se supo que el dominio wAP se encuentra en
proteínas con diferentes funciones, como la elafina y el inhibidor de proteinasa
leucocitaria secretora (SLPI), que son inhibidores de proteinasas con altas actividades
antimicrobianas [71, 72]. ], ps20 con actividad inhibidora del crecimiento [73], y las
proteínas 1 y 2 con motivo wAP simple (SwAM1 y SwAM2), que presentaron actividades
antimicrobianas cuando se evaluaron contra E. coli y S. aureus (Tabla 1) [74].

Otro miembro de la familia waprin, una proteína pequeña de 50 residuos de aminoácidos,

se aisló de Oxyuranus microlepidotus y se denominó omwaprin (figura 2f). Primero, el
péptido muestra actividad antimicrobiana contra bacterias Gram-positivas, tales como
Bacillus magaterium y Streptococcus warneri (Tabla 1). Además, se construyó un modelo
de homología tridimensional de omwaprin (figura 2f). Este modelo reveló que la
estructura de omwaprin consiste en una conformación de columna vertebral en espiral
con dos segmentos circulares conectados por cuatro enlaces disulfuro, así como tres
cadenas β en una composición de estructura de bucle con proyecciones de N-terminal y
C-terminal a la molécula externa (Fig. 2f) [31]. El modelo estructural de omwaprin mostró
que su parte N-terminal tiene cuatro residuos positivos de carga, lo que parece esencial
para las actividades antimicrobianas de omwaprin [31]. Con el fin de confirmar esta
hipótesis, se llevó a cabo la mutagénesis por deleción, dando como resultado una proteína
con deleciones de seis aminoácidos, así como una estructura secundaria, que se sometió
a análisis de espectroscopia de dicroísmo circular (análisis de CD), mostrando estructuras
similares a omwaprin. El segmento catiónico mutante sin N-terminal no mostró actividad
antimicrobiana contra B. magaterium y S. warneri (Tabla 1), incluso a una alta
concentración, sugiriendo claramente que las cargas positivas de los residuos N-
terminales son importantes en las actividades antimicrobianas de omwaprin [31 ].

También se ha demostrado que los fragmentos peptídicos de las proteínas del veneno
superior son eficaces para controlar los microorganismos. Okudo et al. [29] demostraron
que los fragmentos de Bm-LAAO también podrían mostrar actividad antimicrobiana
contra múltiples bacterias. Se identificaron tres fragmentos, llamados Bm-LAOf1 (Fig.
2g), Bm-LAOf2 (Fig. 2h) y Bm-LAOf3 (Fig. 2i), y se sintetizaron y evaluaron
adicionalmente contra bacterias grampositivas y negativas, contra las cuales mostró
actividad (Tabla 1). Los análisis de modelado molecular sugirieron que Bm-LAOf1
presentó una región de hélice α con una carga neta de +3 así como una conformación de
la bobina con secuencias C-terminales hidrófobas y catiónicas (Fig. 2g) [29]. Bm-LAOf2
estructuralmente presentó una conformación hélice hidrofóbica con una carga negativa
de -1 y una definición de una hélice dipolo (Fig. 2h) [29]. Además, Bm-LAOf3 presentó
estructuralmente una conformación de la bobina debido a la presencia de dos residuos de
prolina, que dificultan la formación de la hélice (figura 2i) [29]. También se observaron
residuos hidrófobos en el N-terminal y el C-terminal, lo que podría contribuir a la
interacción péptido-lípido en los tres péptidos evaluados aquí. Sin embargo, cuando se
comparó con la proteína natural BmLAAO (figura 2c, d), los tres fragmentos peptídicos
mostraron inhibiciones de desarrollo microbiano más bajas [29], a pesar de los claros
beneficios de las masas moleculares inferiores.

Perspectivas para posibles aplicaciones terapéuticas e industriales.

El aumento de la resistencia bacteriana causada por el uso indiscriminado de antibióticos

está creciendo cada año. Por lo tanto, también se está llevando a cabo una investigación
centrada en organismos resistentes a los antibióticos con el fin de encontrar nuevas
fuentes alternativas para combatirlos [75]. Los compuestos proteínicos catiónicos, por
ejemplo, han surgido durante los últimos años para la terapéutica contra parásitos y
microorganismos [76]. Estos compuestos, además de la actividad antimicrobiana directa,
podrían mediar en una serie de actividades de inmunomodulación, proporcionando
oportunidades para desarrollar nuevos productos terapéuticos [76]. Se denominan
proteínas de defensa del huésped ya que están relacionadas con las actividades del sistema
inmunitario, incluida la modulación de la producción de citocinas proinflamatorias y de
quimioquinas y también la estimulación de la proliferación de activación de los
macrófagos, neutrófilos y linfocitos T [77]. Sin embargo, algunos obstáculos se
encuentran comúnmente en el desarrollo de componentes antimicrobianos viables. Una
de ellas es la determinación de la farmacocinética del fármaco, que relaciona cómo las
dosis y las concentraciones de los compuestos pueden administrarse en un paciente. Sin
embargo, el mayor desafío es descubrir la mejor forma de administrar el fármaco [76, 78],
como se observó anteriormente para algunos antibióticos, como los aminoglucósidos y la
capreomicina, que se administra por vía intravenosa [79, 80]. Es importante tener en
cuenta que una dosis más baja podría ser lo mejor para el tratamiento, ya que las
reacciones alérgicas a ciertos tipos de medicamentos y antibióticos podrían ocurrir como
un efecto secundario. Además, un tiempo de tratamiento corto o un número menor de
dosis sería más apropiado ya que los tratamientos largos y las dosis altas pueden mejorar
la selección de la presión y conducir a una mayor resistencia a los microorganismos [81].
La administración oral es claramente preferencial para los antibióticos [82]. Sin embargo,
las proteínas y los péptidos pueden degradarse fácilmente por las enzimas proteolíticas
digestivas, y los tractos gastrointestinales pueden no ser capaces de adsorber la proteína
y los péptidos [76]. Este proceso de digestión podría afectar los procedimientos
terapéuticos y así dificultar el uso de compuestos proteináceos para aplicaciones
sistemáticas. Por otra parte, existe una dependencia de las condiciones fisiológicas
ideales, como el pH y la sal para alcanzar altas actividades antimicrobianas [76]. Por lo
tanto, la solución para administrar fármacos es por administración directa en vasos
sanguíneos. Este tipo de administración hace que el compuesto se absorba más
rápidamente, evitando así la pérdida por degradación o excreción, lo que lleva a una
rápida distribución del fármaco por todo el cuerpo. Sin embargo, es importante recordar
que algunos antibióticos deben someterse al metabolismo en el cuerpo para activarse.

Aunque hasta ahora no se había autorizado el uso de un compuesto antimicrobiano

proteínico a partir del veneno de serpiente, los estudios actuales continúan generando
nuevas expectativas sobre su viabilidad como una nueva clase de medicamentos. Una
alternativa para eludir estos problemas puede ser el uso de la nanotecnología, el envío de
compuestos recubiertos de nano que pueden pasar directamente a la ubicación de
infección adecuada. Se han investigado varias proteínas y péptidos nanoencapsulados
para la aplicación de fármacos [83]. Esta técnica ofrecería protección y mejoraría la
farmacocinética frente a la degradación fácil y reduciría el rechazo y el daño del tejido
[78]. Un enorme desafío del uso de proteínas y péptidos como herramienta biotecnológica
implica la producción en sí misma, que generalmente es muy costosa y larga, y necesita
nuevas tecnologías para el desarrollo y la producción de estas moléculas. Algunas
técnicas se han utilizado para obtener compuestos proteináceos, incluido el aislamiento
natural, la expresión recombinante y la síntesis química [77]. La primera es una técnica
común en la academia, pero no a nivel industrial, debido a los mayores costos, la menor
reproducibilidad y el tiempo necesario [77]. La técnica de síntesis química se usa
comúnmente para producir compuestos proteináceos derivados de fuentes naturales como
el veneno de serpiente, pero es extremadamente costosa para la síntesis que involucra
proteínas de más de 30 residuos de aminoácidos de longitud. Otro problema es el hecho
de que la mayoría de las moléculas del veneno de serpiente tienen enlaces disulfuro y
modificaciones postraduccionales, lo que aumenta los costos y las dificultades de la
síntesis [84-86]. con la limitación de estas técnicas descritas anteriormente, el sistema de
expresión heterólogo se ha usado ampliamente en las últimas décadas, porque implica la
fusión de proteínas transportadoras que contienen un sitio de escisión química y
enzimática, permitiendo que se libere el objetivo del péptido [77] . Algunas de estas
proteínas actúan en la estabilización, neutralizando la carga del péptido y generando una
expresión no tóxica y un péptido soluble, siendo una solución clara en la producción de
las proteínas y péptidos descritos aquí [87].

Sin embargo, se deben tomar algunas precauciones al elegir un sistema heterólogo de

proteínas a péptidos, ya que las bacterias no pueden producir proteínas muy extensas, con
un plegamiento y patrones de glucosilación adecuados [88]. Para la producción de AMP,
el sistema heterólogo más utilizado es la bacteria (E. coli) y la levadura (S. cerevisiae),
que representa aproximadamente el 97% [89]. Sin embargo, las plantas y las plantas
transgénicas han recibido más atención en esta área por su capacidad para producir
proteínas más grandes que los sistemas bacterianos [88]. El sistema heterólogo de E. coli
es el microorganismo más utilizado debido a su rápido crecimiento, amplia disponibilidad
de expresiones vectoriales comerciales, y el amplio conocimiento en genética, bioquímica
y fisiología [90]. A pesar de esto, hay algunos desafíos que superar. El primero consiste
en evitar que los AMP destruyan el sistema heterólogo bacteriano del huésped en uso. El
segundo es el tamaño y las propiedades químicas de los AMP, ya que algunos estudios
demuestran que los AMP son un objetivo de las proteasas sintetizadas por bacterias, y
también el sistema bacteriano a veces no puede llevar a cabo modificaciones
postraduccionales [91, 92]. Por lo tanto, para el éxito de la expresión, los AMP deben
fusionarse con un portador que tenga propiedades aniónicas [91].

De lo contrario, las levaduras como S. cerevisiae y P. pastoris para sistemas de expresión

heteróloga son las más utilizadas [92]. Algunas ventajas se observan claramente en el
sistema de levadura sobre el sistema procariótico, incluidas las modificaciones
postraduccionales y transcripcionales, como la glucosilación [93]. Ambos sistemas de
levadura permiten la secreción de proteína recombinante, dando como resultado menos
pasos de purificación y facilitando el proceso de ampliación [94]. Con respecto a la
producción de AMP, varios casos no requieren proteínas transportadoras, como se
describe en el sistema de E. coli, para facilitar los procesos de ampliación [92]. Las
plantas modificadas genéticamente se han usado durante mucho tiempo como plataformas
de expresión para péptidos [88]. Estos sistemas se desarrollan principalmente para la
mejora de cultivos, pero las plantas también se pueden utilizar como bioindustrias,
demostrando su enorme potencial como plataforma para la expresión de proteínas y
péptidos, incluso si el huésped debe usarse principalmente para la mejora de los cultivos
[92].

Con el fin de completar las lagunas en el conocimiento sobre proteínas y péptidos donde
no existe una estructura derivada experimental, las metodologías que se centran en la
predicción de la estructura tridimensional impulsada por el cálculo se han utilizado con
éxito. Sin embargo, cuando existe una estructura determinada experimentalmente, los
métodos in silico también pueden ser útiles para predecir las superficies de unión de otras
moléculas, estimar la energía de unión y predecir los movimientos y la flexibilidad que
se requieren para algunos eventos, incluido el mecanismo de acción [95]. ] Muchas
estrategias de modelado han usado ab initio para predecir algunas estructuras de proteínas.
Ab initio consiste en caracterizar una estructura de proteína 3D utilizando solo la
secuencia primaria de la proteína como entrada [95]. De lo contrario, además de ab initio,
se ha realizado un modelo de homología, utilizando similitudes estructurales y evolutivas
por medio de una plantilla, que es una estructura de proteína, previamente elucidada, con
identidad para el objetivo de proteína. En contraste, los métodos de enhebrado pueden ser
utilizados por modelos que no están evolutivamente relacionados porque usan proteínas
que tienen el mismo pliegue, pero no necesariamente tienen proteínas homólogas [95].
La construcción de modelos implica en primer lugar identificar la mejor plantilla para la
alineación. Las plantillas se eligen según la mayor identidad / homología entre el objetivo
y la plantilla [95]. Algunos enfoques para la conservación de secuencias también se
pueden utilizar, y para un refinamiento, las estructuras de bucle y las cadenas laterales se
pueden refinar mediante la dinámica molecular [20, 95]. En resumen, a pesar de algunas
limitaciones, como un costo computacional elevado para cachear el espacio energético y
también la complicación de seleccionar con precisión la estructura nativa de una amplia
gama de conformaciones alternativas, estos análisis in silico también son prometedores
para predicciones de proteínas y péptidos derivados de los venenos de serpiente.

Como se describió anteriormente [29], el análisis in silico de tres fragmentos de L-

aminoácido oxidasa de B. mattogrosensis se realizó por modelado de homología. Okubo
et al. [29] utilizaron una plantilla de Vipera ammodytes LAO que se caracterizaron por
difracción de rayos X (PDB 3kve) [27]. Los tres fragmentos aislados en el estudio
mostraron 100% de identidad con la secuencia adquirida. BmLAO-f1 mostró una
conformación en espiral con un extremo C con características hidrofílicas y catiónicas
compuestas de Lys10, Lys11 e His13. Además, la predicción APD describió la estructura
de la región α-helicoidal que contiene una carga +3. La región central se caracterizó por
una región rica en prolina con residuos hidrófobos (Phe3 y Leu7) que confiere un 30% de
relación hidrofóbica, lo que probablemente favorece la interacción con los fosfolípidos
de la membrana celular. Además, BmLAO-f2 presentó una conformación helicoidal
hidrofóbica con una carga negativa (-1), que se caracteriza por residuos de Lys1, Lys2,
Glu5, Asp6 y Asp7, y también una formación de hélice dipolo. En este péptido, los
residuos Phe3 y Trp4 (relación hidrofóbica del 25%) proporcionan una posible
interacción con las membranas lipídicas. Finalmente, BmLAO-f3 presentó residuos de
Pro4 y Pro5 que probablemente dificultan la formación de hélice, presentando así una
conformación de espiral. Este péptido presenta un 22% de relación con un Ile1 y Phe8 en
los extremos N y C, respectivamente, lo que puede contribuir a la interacción péptido-
lípido. Como se demostró por Okubo et al. [29], el análisis in silico puede proporcionar
una amplia gama de información sobre los AMP y sus estructuras, lo que sugiere qué
residuos podrían ser importantes para las interacciones de la membrana bacteriana.

Otra herramienta prometedora en un estudio de AMP del veneno de serpiente es la técnica

de espectrometría de resonancia magnética nuclear (RMN). La resonancia magnética
nuclear (RMN) consiste en otra tecnología que se usa mucho para el estudio de AMP. La
solución multidimensional de la técnica de RMN está bien establecida para elucidar las
proteínas globulares y para investigar los polipéptidos asociados a la membrana y su
relación con los complejos micelares y bicelulares [92, 93]. La RMN de estado sólido es
una técnica notable que podría usarse para estudiar las estructuras de AMP en presencia
de bicapas de fosfolípidos desordenadas en líquido [94]. Para comprender claramente la
RMN de estado sólido, se debe reconocer que la mayoría de las interacciones de RMN
pueden ser estrechamente dependientes de la alineación de la molécula en relación con la
dirección del campo magnético [94]. En los espectros de RMN de muestras sólidas y
semisólidas, y también de grandes complejos moleculares, las interacciones dipolares y
cuadripolares son anisotrópicas. Para restablecer los espectros bien resueltos, dos
enfoques están bien establecidos, girando rápidamente alrededor del ángulo mágico
(MAS) que promedia de manera inmutable las interacciones de RMN dependientes de la
orientación o la alineación uniaxial de la muestra, que es relativa a la dirección del campo
magnético [94]. Ambos dan como resultado una forma de proteína de línea relativamente
estrecha en el estado sólido o también cuando se asocian con bicapas lipídicas [94]. La
valorización de las líneas estrechas se ha utilizado para simplificar la interpretación de
los datos, porque los espectros de alta resolución son importantes para comprender los
sistemas que hasta ahora se han investigado [43]. Con el fin de determinar la
conformación de la cadena principal de AMP en vesículas multilamelares (MLvs), las
técnicas de RMN en estado sólido se utilizan para medir los acoplamientos dipolares bajo
MAS [43]. Los experimentos de RMN de estado sólido mostraron modificaciones claras
de la orientación de la membrana con composición variable cuando reaccionan con AMP,
incluyendo MSI-78 (también conocido como pexiganan, un aislado análogo de magainina
2 de Xenopus leavis) y MSI-594 (híbrido de MSI-78, análogo de magainina 2) [43].
Varios investigadores han demostrado cómo los diferentes AMP actúan sobre las
membranas, usando la técnica de RMN, como la pardaxina (de la planta del Mar Rojo de
Moses, Pardachirus marmoratus), MSI-594 y MSI367 [(KFAKKFA) 3-NH2] (péptido
sintético previamente formulada in silico) [38, 39, 46, 48, 55, 61-63, 96, 97], y también
se han publicado varios trabajos de revisión que demuestran la importancia de la RMN
en el estudio AMP [45, 98].

Con el fin de examinar cómo los AMP interactúan con LPS, Bhunia et al. [48] utilizaron
RMN para evaluar cómo el péptido MSI-594 interactúa con las micelas de LPS. El estudio
determinó la estructura tridimensional MSI-594 en un complejo con LPS y también en
una forma libre. En primer lugar, MSI-594 en solución gratuita está completamente
desestructurado. Sin embargo, en presencia de E. coli y S. typhimurium, los LPS de los
espectros tridimensionales Tr-NOeSY mostraron una gran cantidad de conectividad NOe,
lo que indica una estructura de plegado de péptidos. Sorprendentemente, el MSI-594 LPS
indujo estructuras de hélice corta (I2-K10) y largas hélice C-termini (I13-L24) que
estaban conectadas por un circuito corto (K11-G12). Esta nueva estructura parece ayudar
al MSI-594 a cruzar la barrera LPS de la membrana externa [48]. Al usar una estrategia
similar, Bhunia et al. [39] elucidado las interacciones de LPS y pardaxin (Pa4). Este
estudio se utilizó para la elucidación de la estructura tridimensional de Pa4 en el complejo
con LPS, que muestra la capacidad de Pa4 para romper la membrana externa. Durante
este proceso, Pa4 adopta una conformación helicoidal clara. La estructura proporcionada
en las micelas de LPS mostró dos residuos catiónicos (Lys8 y Lys16) en el medio de la
hélice N-terminal y al comienzo del extremo C, que puede interactuar con el grupo de
bisfosfato de lípido A en LPS. Estas interacciones facilitan que los residuos hidrofóbicos
entren en contacto con las cadenas de acil LPS, lo que facilita la alteración de la
membrana [39]. Además, con el objetivo de evaluar la selectividad de AMP, un péptido
sintético llamado MSI367 [(KFAKKFA) 3-NH2], que se formuló en silico, fue
sintetizado por Thennarasu et al. [96]. MSI-367 tiene ~ 48% de propensión helicoidal que
pliega un máximo de cinco vueltas helicoidales en condiciones favorables. Además,
MSI367 tiene nueve lisinas cargadas positivamente que posiblemente se unen a lípidos
cargados negativamente en las membranas bacterianas. Los datos de 31P NMR indicaron
modificaciones en la orientación de los lípidos y bicapas causadas por la unión del péptido
MSI-367. Los datos de RMN, también obtenidos en presencia de lípidos de E. coli,
mostraron la presencia de interacciones electrostáticas de lípidos-péptidos, que abarcaban
el péptido en la interfaz lípido-agua y proporcionaban la base para la selectividad de las
células bacterianas [96].

En resumen, la técnica de RMN podría arrojar algo de luz sobre cómo se comportan los
péptidos en las membranas bacterianas y eucariotas, mostrando qué tipo de interacciones
pueden desarrollar los AMP con estas bicapas lipídicas. Mediante el uso de prototipos de
veneno animal, los estudios con RMN han demostrado una mejora real en la
caracterización de los AMP derivados de los venenos de serpiente. Esta tecnología
también podría demostrar los tipos de modificaciones que los péptidos de veneno de
serpiente pueden causar en las membranas celulares de mamíferos, proporcionando
nuevos conocimientos sobre la especificidad de los péptidos. Sin embargo, por el
momento, los péptidos derivados de los venenos de serpiente no han sido ampliamente
evaluados por RMN en fase sólida, lo que también hace que esta técnica sea prometedora
para estudios de péptidos ofidios.

Parece cada vez más probable que muchos problemas de infección bacteriana se puedan
resolver con el uso de propiedades terapéuticas que pueden proporcionarnos los
compuestos proteínicos de serpiente, y la producción puede resolverse usando nuevas
tecnologías de síntesis química y expresión heteróloga. Por lo tanto, se deben realizar más
estudios para comprender mejor los mecanismos de acción de estos componentes y cómo
actúan realmente en el cuerpo humano, de modo que puedan mejorarse como nuevos
fármacos para combatir las infecciones resistentes a los microorganismos.
Como se describió previamente en esta revisión, los compuestos de veneno de serpiente
proteináceos podrían ser extremadamente valiosos para resolver los problemas de
infecciones hospitalarias, debido a su increíble versatilidad y modos de acción que
proporcionan un amplio espectro de actividades, funciones y bajas concentraciones para
ser activos.