Replicación del DNA

Replicación cromosoma circular E.coli

Replicación cromosoma circular E.coli
OriC E. coli

Secuencia rica en T-A

 Mutantes termocondicionales

control
40oC
dnaB, dnaC

dnaA wt
H3 T

30oC b
a
30oC

t
1) Nucleasa + DNA Ori
2) pp dna A + DNA Ori 1 2 3 4
3) pp dnaB + DNA Ori
4) pp dnaC + DNA Ori 245

Conclusión: Dna A reconoce el sitio de inicio de la replicación

Secuencia del origen de replicación bacteriano

Región de los treceámeros

(tres repeticiones de 13 4 Nonámeros o cajas dnaA
nucleótidos), 70% AT
 Proteína DnaA

• Monómero 52kDa
• Se une con alta afinidad y de forma cooperativa a las cajas
dnaA
• Estequiometria de 20 subunidades de DnaA por oriC
• Une ATP y lo hidroliza a ADP en forma dependiente de DNA
• Complejo DnaA-ATP mayor afinidad por el DNA
• Una vez abiertos los treceámeros DnaA se sienta en las
cadenas sencillas
Reconocimiento del oriC

DnaA reconoce el origen, lo activa

y lo protege
 DnaB Dna C
• Monómeros de 50kDa que • Dna C homohexámero que
forman un homohexámero permite la llegada de DnaB
• Actividad de helicasa • ATPasa: al hidrolizar ATP
• Dominios para : pierde afinidad por DnaB

Unión a DNA de cadena
doble

Unión a DNA cadena sencilla

Interacción con la proteína
DnaC

Hidrólisis de ATP
La helicasa rodea una de las hebras del DNA dúplex y se desplaza rompiendo
puentes de hidrógeno, logrando la apertura de la doble hélice por exclusión
estérica. Una hebra es retenida en el interior del anillo y la otra es excluida.
DnaB -DnaC
 SSB

Las proteínas SSB se unen con alta

afinidad al DNA de cadena sencilla y lo
protegen de nucleasas y de asociaciones
intracatenarias
Reconocimiento y
activación del oriC
Resumen
La replicación del DNA requiere un cebador

• Dna G. Primasa

• RNA polimerasa

• Sintetiza cebador de
≈ 12nt

• Primasa reconoce a DnaB

 DNA Pol I
• A. Kornberg

• primera polimerasa descrita

• Péptido de 103 kDa

• Dependiente de molde de
• DNA

• Dirección de la síntesis 5´-3´

• Requiere extremo 3 ´OH

Actividades de la DNA polimerasa I
• Mutantes de E.coli en el gen de la Pol I son “viables” por lo
tanto la DNA polI no es la principal enzima replicativa

• La DNApolIII es la principal enzima en la replicación del DNA

 DNA polimerasas bacterianas
Enzima gen Polimerización Actividad Actividad Función
5´-3’ exonucleasa3´-5´ exonucleasa principal
5´-3´

I polA + + Reparación
+

II polB + + - Reinicio de la
replicación,
reparación
III polC + + - Replicasa
Subunidades de la DNApolimerasa III de E.coli
sub # por Mr Función
holoenzima
dnaE α 2 132,000 Subunidad catalítica
Núcleo de la
dnaQ ε 2 27,000 Proofreading polimerasa
holE θ 2 10,000 Acoplador
dnaX τ 2 71,000 Dimerización
dnaX γ 1 52,000 Abrazadera que
holA δ 1 35,000 carga las
subunidades β al
holB δ´ 1 33,000
DNA
holC χ 1 15,000 Complejo γ ó
holD ψ 1 12,000 complejo τ
dnaN β 4 37,000 Procesividad
DNA polimerasa III
• Fidelidad se refiere al seguimiento exacto de la secuencia
de DNA que sirve como molde
• La fidelidad de la replicación en bacterias: ≈10-8 a 10-10
• Procesividad # de nucleótidos que se sintetizan en un
solo evento de unión. Una enzima procesiva agrega muchos.
• Distributividad. Se refiere a la síntesis que avanza
agregando pocos nucleótidos por evento de unión
Formación de la
holoenzima
Procesividad de la DNApolimerasa III

L a procesividad de la DNApolII aumenta de

50nts a más de 50,000nts gracias a las
subunidad β
 La replicación es semidiscontinua

Fragmentos de Okazaki 1200-2000 nt

Interrupción de la replicación de la cadena retrasada
El molde de la cadena
retrasada se debe doblar
para parecer que va en la
misma dirección que la
cadena adelantada
RNasa H ayuda a remoción del cebador pero
no es eficiente eliminando desoxinucleótidos
(el último del cebador)

DNA polimerasa I ayuda a remover el

cebador, actividad exonucleasa 5´-3´
Actividad de polimerasa reemplaza los
nucleótidos eliminados ≈17

DNA ligasa cataliza la

formación de enlace
fosfodiéster
DNA ligasa
 Topoisomerasas

Topoisomerasa I
Topoisomerasas I
Topoisomerasa III

Topoisomerasa II
Topoisomerasas II (DNA Girasa)
Topoisomerasa IV
Toposiomerasas I
• Topoisomerasas II
Girasa
• Topoisomerasas II
Topo IV Decatenasa
Termino de la replicación
 Síntesis del DNA

• Semiconservativa

• Dependiente cebador de RNA

• Semidiscontinua

• Bidireccional
Inicio de la replicación en eucariotes
Inicio de la replicación en eucariotes
 Polimerasas de eucariotes
DNA polymerases undertake replication or repair
DNA polymerase Function Structure
α High fidelity replicases 350kDa tetramer
Nuclear replication
Polimerasa-primasa
δ Nuclear replication 250kDa tetramer
Cadena discontinua
ε Nuclear replication 350kDa tetramer
Cadena continua
γ Mitochondrial replication 200kDa dimer
β High fidelity repair 39kDa monomer
Base excision repair
ζ Low fidelity repair Heteromer
Thymine dimer bypass
η Base damage repair Monomer
ι Requiered in meiosis Monomer
κ Deletion and base substitution monomer
Cdt1
 Proliferating Cell Nuclear Antigen
PCNA

Proteína 29kDa

Incrementa procesividad
de la DNApol delta ≈ 40

Forma un trímero
alrededor del DNA
Pol ε
Polδ
 Terminación en eucariotes
El dilema de los cromosomas lineales
Terminación en eucariotes
Telomeros
Terminación en eucariotes
Telomerasa
Terminación en eucariotes
Telomerasa