¿Cómo se realiza una curva de calibración y que tan confiable es este procedimiento

analítico?
Teoría
Curvas de calibración: El contenido de un analito en la muestra se obtiene a través de un
patrón o estándar de referencia certificado. A partir de éste, es posible preparar una disolución
de concentración exactamente conocida denominada solución madre. Luego, utilizando la
solución madre, se preparan un conjunto de soluciones a distinta concentración para la
obtención de una curva de calibración.
En este sentido, para un análisis instrumental, lo que se busca es obtener una respuesta
instrumental proporcional a la concentración del analito, de esta forma, una curva de
calibración es la representación gráfica que relaciona una señal instrumental en función de la
concentración de un analito y define un intervalo de trabajo en el cual, los resultados a
informar tienen una precisión y exactitud conocida que ha sido documentada en la validación
de cada método.
Curva de calibración con adición estándar: La preparación de estándares que reproduzcan la
composición de la muestra cuando se trata del análisis de muestras ya que en este tipo de
muestras, usualmente, los componentes de la matriz afectan las medidas de la señal analítica
ya sea por exceso o por defecto. Con el objetivo de minimizar los efectos de la matriz, se
utiliza el método de adición de estándar el cual consiste en la adición de un volumen fijo de
la muestra, a las soluciones estándares diluyendo a un volumen final constante.
Posteriormente, se procede a determinar la señal de los estándares así como de una muestra
preparada de la misma forma, en ausencia de estándar añadido. En cada solución, las señales
son afectadas de manera similar por los interferentes de la matriz
Este método no elimina las interferencias, solo las compensa ya que se obtienen todas las
señales analíticas bajo las mismas condiciones.
Calibración con estándar interno: La calibración con estándar o patrón interno se utiliza para
compensar errores aleatorios y sistemáticos como interferencias no espectrales de
componentes de la matriz, dudas debidas del método y errores instrumentales .Entre estas se
tiene tamaño de gota, incertidumbres de las presiones gaseosas, de la viscosidad y tensión
superficial. Se selecciona como estándar interno, una sustancia diferente del analito que
presente propiedades similares a las del analito, tal que ambos sean afectados similarmente
durante el análisis.
Hipótesis:
 al realizar el método de calibración se puede determinar la concentración de un analito
en una muestra con concentración desconocida.
 Al preparar estándares que contienen la muestra y representar la concentración de
dichos estándares versus la señal obtenida al medirlo, se obtiene una curva de
calibración en la cual el intercepto de x corresponde la concentración desconocida.
  Al adicionar un estándar interno, no debe causar ningún tipo de interferencia en el
análisis, y debe proporcionar una señal analítica similar al analito en el análisis pero
distinguible del mismo.
Preguntas
 ¿Qué tipos de requisitos o propiedades debe tener el estándar interno?
R: Para elaborar una curva de calibrado se parte de varias disoluciones con una concentración
conocida de analito, así mismo se han de elaborar una batería de patrones suficiente para
cubrir un rango que incluya la concentración esperada en las muestras desconocidas. Las
concentraciones utilizadas en los patrones también han de estar dentro del rango válido para
la técnica analítica que se va a utilizar. Es decir, han de estar por encima del mínimo de
concentración de analito cuantificable por la técnica utilizada.
 ¿Por qué es necesario el uso de un estándar interno?
R: Es necesario el uso de un estándar interno para construir la curva de calibración, se utilizan
disoluciones que contienen concentraciones conocidas de analito. Los estándares o
disoluciones patrón para construir la recta de calibrado deben ser preparadas en forma
independiente, a partir de una o varias soluciones madre; el número de puntos a escoger
dependerá del uso que se dé a la recta de calibrado
 ¿Que pasara si se agrega un elemento con diferente concentración a las muestras
dadas?
R: El intervalo de concentraciones debe estar similar a la concentración del analito en la
muestra problema, si se excede por el encima del límite cuantificable, no sería posible la
regresión lineal en la curva de calibrado.
 ¿Con cuántos datos es posible construir una curva de calibración y que tan confiables
son?
R: El número de puntos mínimo será de cinco o seis para que la variabilidad sea mínima
y el intervalo lineal sea suficiente. Hay que considerar que un aumento en el número de
puntos experimentales implicara mayor fiabilidad en la recta de calibrado. La verificación
del comportamiento de un analito mediante una curva de calibración requiere un mínimo
de cinco puntos para un intervalo de confianza del 95 %
 ¿Qué se puede deducir a partir de una curva de calibración?
R: La curva de calibración es un método grafico donde encontramos la absorbancia contra
una concentración de un analito, la obtención de una curva de calibración, nos permite
cuantificar la concentración de muestras problema con cierto grado de certidumbre.
Conceptos
 Estándar: Un estándar es una preparación que contiene una concentración conocida
de un elemento específico o sustancia. Un estándar simple será la dilución del
elemento o substancia en un disolvente neutro.
 Analito: Es una especie química cuya presencia o contenido se desea conocer,
identificable y cuantificable, mediante un proceso de medición química.
 Solución estándar: Una solución estándar es una disolución que contiene
una concentración conocida de un elemento o sustancia específica, llamada patrón
primario que, por su especial estabilidad, se emplea para valorar la concentración de
otras soluciones, como las disoluciones valorantes.
 Adición estándar: Son cantidades fijas de analito que se añaden a cada muestra,
después de una medida inicial, la medida se vuelve a realizar después de cada adición.
 Calibración: Es el proceso que permite confirmar que la señal medida por un
instrumento es correcta. Se refiere al aseguramiento de que un instrumento y/o
aparato funciona correctamente.
Bibliografía
o https://agqlabs.cl/wp-content/uploads/Analisis-quimico-medir-es-comparar.pdf
o Harris Daniel C. “Análisis Químico Cuantitativo”, 2ª edición. Editorial Reverte,
España 2001. [archivo PDF] Recuperado de:
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/CURVASDECALIBRACION_23498.p
df
o http://webdelprofesor.ula.ve/ciencias/angelisa/Downloads/tecnicascalibracio_vr1.pd
f
o http://xml.cie.unam.mx/xml/ms/Doctos/FRX_CUANTITATIVO.pdf

METODOLOGÍA
Curva de calibración de adición estándar
Aserciones
 Se obtuvo una concentración de la muestra problema de níquel con un valor de
0.283mg/L, lo que nos indica una baja concentración al ser comparada con la
concentración conocida de la adición estándar, mostrando así gran sensibilidad en el
método empleado.
 La curva de calibración se obtuvo de forma lineal, como lo establecido. Apoyándonos
en la ecuación de la recta para la extrapolación de x en la determinación de la
concentración de la muestra problema.
Transformaciones

Determinación de Ni
0.4
y = 0.0882x - 0.01
0.35
0.3
Absorbancia

0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5
Concentración (ppm)

Gráfica 1. Representación gráfica para la determinación de níquel por medio de adición estándar

A continuación se muestra la concentración de la muestra problema, tomando en cuenta la

ley de Lambert-Beer, en dónde la ordenada al origen determinada por el método de adición
estándar es la absorbancia de Ni en la muestra y la pendiente es una constante que implica la
absortividad.
𝑦 = 0.0882𝑥 − 0.01
0.01
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝑁𝑖 = = 0.1133 𝑚𝑔/𝐿
0.0882
𝑚𝑔 5𝑚𝑙
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝑁𝑖 = 0.1133 𝑥 = 0.283 𝑚𝑔/𝐿
𝑙 2𝑚𝑙
Registros
Tabla 1. Preparación de disoluciones estándar de níquel a partir de una solución patrón de concentración conocida de
níquel

Estándar Volumen de solución Volumen de la Volumen total

número patrón muestra problema para cada
muestra
1 0 ml 2 ml 5 ml
2 1 ml 2 ml 5 ml
3 2 ml 2 ml 5 ml
4 3 ml 2 ml 5 ml

A continuación, se muestran los resultados obtenidos durante la experiencia a partir de la

adición estándar, las concentraciones de las disoluciones estándar se determinaron de la
siguiente forma siguiendo lo estipulado en la tabla 1.
Ejemplo de cálculo de concentraciones para los estándares del Ni (Estándar 2)
28.77𝑥104 𝑚𝑔 2 𝑚𝑙 1 𝑚𝑙 1000 𝑚𝑙
𝑥 𝑥 𝑥 = 23.016𝑥103 𝑚𝑔/𝐿
1000 𝑚𝑙 5 𝑚𝑙 5 𝑚𝑙 1𝐿

Del mismo modo, se realizaron los cálculos para las demás disoluciones estándar.
Tabla 2. Organización de datos obtenidos por el método de calibración con adición estándar

Concentración (mg/L) Absorbancias con un λmax= 395nm

0 0.082
23.06x103 0.170
46.032x103 0.236
69.048x103 0.354

Curva de calibración estándar interno:

Aserciones
 No se pudo realizar la curva de calibración para el método de estándar interno debido
a que no se midió la concentración de las muestras del analito lo cual era crucial a la
hora de graficar en la abscisa.
 Teóricamente se debía obtener una gráfica lineal en el cual a través de una regresión
lineal se obtenía la ecuación de la recta y a partir de ella se calculaba la concentración
del analito.
Transformaciones

Gráfica 2. Curva de calibración esperada de estándar interno

Calculo de la concentración del estándar interno:

799 𝑚𝑔
𝑝𝑝𝑚 =
0,01 𝐿
 𝑝𝑝𝑚 = 79,900 𝑚𝑔/𝐿

Registros

Primero se realizó un barrido para determinar la longitud de onda adecuada para hacer la toma de
las señales el cual se obtuvo una longitud de onda de 797 nm.
Tabla 3. Datos obtenidos de las señales de estándar interno

Soluciones Señal (Abs)

Estándar 1 2,887
Estándar 2 1,714
Muestra 1 0,542
Muestra 2 0,441

Curva de calibración añadidos

Aserciones
 No se pudo realizar la curva de calibración correspondiente debido a que no se
determinó la concentración de la muestra desconocida, lo cual se esperaba una gráfica
con tendencia lineal.
 Al momento de realizar la gráfica de la curva de calibración solo obtuvimos un punto
correspondiente a la concentración del estándar vs la señal del analito junto con el
estándar.
 Al no medirse la concentración de la muestra la cual era determinante para realizar la
curva de calibración no se pudo hacer la comparación entre el cambio de
concentración real y el esperado de 1 ppm.
Transformaciones
Curva de calibración con añadidos:

Curva de calibracion añadidos

1.1

0.9

0.8

0.7

0.6

0.5
41000 41500 42000 42500 43000

Gráfica 3. Curva de calibración de añadidos

Calculo para la determinación de la concentración del estándar:
  6,3 mL → 6,3*10-3 L
 0,268 g → 268 mg
268 𝑚𝑔
𝑝𝑝𝑚 =
6,3 ∗ 10−3
𝑝𝑝𝑚 = 42,539 𝑚𝑔/𝐿
Registros
Tabla 4. Datos obtenidos de la práctica de añadidos

Solución sulfato de cobre

Concentración del estándar 42,539 ppm
Longitud de onda usada para el análisis 747 nm
Solución Señal (Abs)
Sustancia desconocida 0,718
Sustancia desconocida + estándar 1,016