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ESPECIALIDAD
LABORATORIO CLÍNICO
ALUMNA:
LUSY NILDA JUAPE TARRILLO
CICLO:
III- A
PROFESOR:
JOSEFITA AGREDA MATÍAS
INTRODUCCIÓN
Las bacterias Gram-negativas presentan dos membranas lipídicas entre las que
se localiza una fina pared celular de peptidoglicano, mientras que las bacterias
Gram-positivas presentan sólo una membrana lipídica y la pared de
peptidoglicano es mucho más gruesa. Al ser la pared fina, no retiene el colorante
durante la tinción de Gram.
Árbol filogenético de
los seres vivos
considerando que las
bacterias Gram-
positivas (Posibacteria)
se han originado a partir
de las Gram-
negativas (Negibacteria
), de acuerdo con las
ideas de Cavalier-
Smith.
III. MATERIALES Y REACTIVOS
Coloración:
a) 1 minuto en violeta de Genciana (colorante inicial)
b) se lava con agua destilada
c) 1 minuto en lugol (mordiente)
Siembra en estría: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo fundido
y se deja solidificar. Objeto es obtener colonias aisladas
Prepara las placas de Petri. Las placas de Petri son recipientes pequeños de
base plana que están hechos de plástico o vidrio transparente. Están constituidas
de dos mitades: una tapa y una base, las cuales encajan entre sí. Esto protege
el contenido del aire contaminado indeseable, pero también permite que escapen
los gases que producen las bacterias.
Las placas de Petri deben estar bien esterilizadas antes de usarlas para cultivar
bacterias; de otro modo, los resultados del experimento podrían verse afectados.
Las placas de Petri recién compradas deben venir esterilizadas y selladas en
empaques de plástico.
Saca la placa de Petri de su paquete y separa las dos mitades. Con mucho
cuidado, vierte la solución de agar caliente en la mitad inferior de la placa de
Petri, solo lo suficiente para formar una capa por encima del fondo de la placa.
Vuelve a colocar rápido la mitad superior de la placa de Petri para evitar que las
bacterias transmitidas por el aire contaminen el experimento. Reserva la placa
de Petri durante 30 minutos a 2 horas, hasta que la solución de agar se enfríe y
se endurezca (cuando esté lista, se parecerá a gelatina cuajada.
5.4 ESTERILIZACION, DESINFECCIÓN Y ANTISEPSIS
En el laboratorio de microbiología es imprescindible trabajar con material y
soluciones estériles con objeto de que los resultados que se obtengan
correspondan al microorganismo o microorganismos que están presentes en la
muestra en estudio y no a contaminantes que procedentes del medio o los
materiales, puedan desarrollarse y falsear las pruebas. Para ello antes de
comenzar el trabajo práctico se esterilizará, junto con los medios de cultivo, el
material que posteriormente va a ser utilizado. Asimismo, se aprenderán las
técnicas de laboratorio que nos permiten manejar esos medios e instrumental de
forma que se minimice el riesgo de contaminación.
5.5 AUTOCLAVADO
PREPARACIÓN DE AGRES
1. G de agar Mac conkey para una placa
20 ml de agua destilada
Fundamento
En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el
desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla
de sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el
desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva.
Por fermentación de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto
produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorción en las
colonias, y la precipitación de las sales biliares.
40 ml de agua destilada
Fundamento
PACIENTE 1.
10 ml de aguas destilada
1. Prueba de catalasa.
2. Prueba de oxidasa.
3. Prueba de oxidación/fermentación conocida como OF
4. Prueba de coagualasa
PRUEBA DE LA OXIDASA
Todas las bacterias aerobias obtienen su energía en forma de ATP a partir del
proceso de respiración también llamado cadena respiratoria, este se lleva a cabo
en la membrana celular bacteriana, en las siguientes líneas se dará una breve
explicación de la cadena respiratoria solo con la finalidad de entender de donde
proviene y que realiza la enzima citocromoC oxidasa, entiéndase que todo este
proceso tiene la finalidad de producir ATP.
Tetrametil-p-fenilendiamina.
Dimetil-p-fenilendiamina.
Indofenol.
El reactivo basado en una disolución acuosa de tetrametil-p-fenilendiamina al
1%, es el más común y recibe el nombre de reactivo de Kovacs. Este reactivo se
puede impregnar en discos o fragmentos de papel filtro grueso. En el comercio
ya se venden tiras o discos impregnados con el reactivo.
Como realizar la prueba de la oxidasa.
Se toma con un palillo grueso de madera una muestra bacteriana a partir de una
colonia aislada proveniente de un cultivo de 24h.
La muestra se pone en contacto con la tira o disco impregnado.
Se debe observar una coloración morada en un lapso no mayor a 30segundos
para que sea positivo, de lo contrario el resultado es negativo.
La acumulación del peróxido es muy toxico por lo que la mayoría de las bacterias
aerobias y anaerobias facultativas exceptuando a Streptococcus
sp. producen una enzima llamada catalasa que degrada el peróxido de
hidrógeno obteniendo agua y oxigeno gas.
ANTIBIOGRAMA DE
Agar TSI
Las pruebas bioquímicas son una serie de análisis clínicos que sirven a la Medicina
como apoyo a la hora de diagnosticar infecciones por bacterias.
Indol
Citrato
Observaciones
Finalmente una muestra se tornó rojo y la otra azul, así pudimos determinar
cuál era gram positiva y gram negativa, ya que la gram positiva es azul y la
gram negativa rojo.
VI. CONCLUSIONES
Tener cuidado al sellar con mechero, debe ser rápido el proceso pues
se puede correr el peligro que se queme la muestra.
VIII. ANEXOS
Aspergillus fumigatus
Descripción micológica
Ecología
Enfermedad humana
http://www.unavarra.es/genmic/microclinica/tema03.pdf
http://www.microcsalud.us.es/web/docencia/grado/temas-comunes-
grado/clasificacion_bacterias.pdf
http://www.higiene.edu.uy/cefa/Libro2002/Cap%209.pdf