UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO

PROGRAMA DE MAESTRÍA Y DOCTORADO EN INGENIERÍA

INGENIERÍA AMBIENTAL– AGUA

TEMAS SELECTOS DE AGUA: MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL.

TAREA 1:
MÉTODOS DE ESTERILIZACIÓN

PRESENTA:
GAMALIEL RAMÍREZ RAMÍREZ

QUERÉTARO, QUERÉTARO,05 DE ENERO DEL 2019

 Esterilización

La esterilización es un proceso donde se busca la eliminación total de

microorganismos y la forma de resistencia en forma de esporas. La utilización de
este proceso es asegurar que yo hay riesgo de infecciones en caso de aplicación
sanitaria y en laboratorios la contaminación cruzada de microorganismos que se
puedan encontrar en el área de trabajo. Cuando un objeto se encuentra esterilizado
se dice que es aséptico. En la figura1 podemos ver la clasificación de los métodos
de esterilización.

Figura. 1 Clasificación de métodos de esterilización.

Métodos físicos.

CALOR HÚMEDO O VAPOR SATURADO.

• Principio del método

Es el método mas utilizado en los laboratorios y hospitales para materiales de vidrio
y medios de cultivos, el método se basa principalmente que destruye a los
microorganismos por coagulación (desnaturalización) de proteínas, causa por
ruptura de los puentes de hidrogeno que son los que mantienen a las proteínas en
su forma tridimensional; las proteínas por lo tanto regresan a su estructura
secundaria, se coagula y se convierte en proteínas no funcionales.

• Condiciones del método.

El calor húmedo puede penetrar más rápidamente que el calor seco porque las
moléculas de agua conducen mejor el calor que las moléculas de aire. Por ello el
calor húmedo puede ser usado a temperaturas más bajas y menor tiempo de
exposición que el calor seco. En la tabla 1 podemos observar las temperaturas y
tiempo requeridos para llevar la esterilización correcta.

Tabla 1. Tiempos y temperaturas en autoclave de vapor.

Temperatura Tiempo

115 °C 30 minutos

121 °C 15 minutos

126 °C 10 minutos

134 °C 3 minutos

• Ejemplo de utilización.
Unos de los equipos que utilizan este método que generalmente utilizan en
cualquier laboratorio son las autoclaves de vapor que son aparatos cerrados
con las paredes gruesas y una bandeja donde
colocamos el material a esterilizar. El proceso
básico esta sustentado en la eliminación de aire por
desplazamiento por gravedad. Secuencia se dan
los siguientes pasos:
a) Tiempo de preparación. El agua se
calienta hasta su temperatura de ebullición (100 °C)
durante esta fase el aire esta siendo desplazado de
la cámara. Para mejorar la eliminación del aire se
 deja que el agua hierva durante algún tiempo después que haya alcanzado los
100 °C.
b) Aumento de la presión. La temperatura aumenta hasta la temperatura de
esterilización indica. Cerrando la válvula se cierra el recipiente, permitiendo que
la temperatura y la presión aumente hasta el nivel requerido.
c) Tiempo de exposición. Durante este tiempo, se mantiene la temperatura y la
presión al nivel necesario para la esterilización el tiempo varía según la
temperatura, pero la más frecuente es 15-20 minutos para 1221°C. en estas
condiciones se utiliza 1 atmosfera de presión, que es sufriente para eliminar todo
tipo de microorganismos y formas resistencia
d) Tiempo de desvaporización. Es la etapa donde se elimina la presión dentro
de la auto clave dejando enfriar el equipo y posteriormente abriendo la válvula.

La principal desventaja que tiene la utilización de temperaturas levadas se corroe el

material con lo que se deterioran los filos cortantes y el material termolábil como
aceites, Grass y polvos se destruyen por las altas temperaturas.

• Materiales que se pueden esterilizar por calor húmedo.

o Material de vidrio.
o Jeringas.
o Frascos.
o Instrumental quirúrgico de acero inoxidable.
o Agua o soluciones acuosas.
o Material textil (gasas, ropa, vendas).

CALOR SECO
• Principio del método

Este método se basa en el calentamiento del interior de un aparato de acero

inoxidable, en el que se eleva la temperatura, por energía eléctrica, que controla un
termostato. El mecanismo de este agente esterilizante implica la desnaturalización,
la fusión y desorganización de membranas por procesos oxidativos irreversibles. En
la actualidad este método se encuentra en grandes partes del mundo en
descontinuación debido a que el método es difícil de certificar, así como asegurar
que se al alcanzó las temperaturas adecuadas en los equipos que lo utilizan

• Condiciones del método.

Las variables principales de un proceso de esterilización por calor son las

temperaturas y el tiempo de exposición. La destrucción de los microorganismos por
el calor no se produce en forma instantánea, existe una relación tiempo-
temperatura- condiciones generales del producto a esterilizar. En la tabla 2
podemos dar un resumen general de la relación entre el tiempo y temperatura para
llevar acabo la esterilización. Para medir el tiempo de explosión, es necesario
esperar hasta que la cámara alcance la temperatura programada.

Tabla 2. Condiciones para estufa Pasteur.

Temperatura Tiempo
180 °C 30 minutos

170 °C 60 minutos

160°C 120 minutos

150 °C 150 minutos

140 °C 180 minutos

121 °C 360 minutos

Las duraciones de tiempo presentadas en la tabla anterior a la exposición al calor

para saturar todos los materiales, se determino mediante pruebas experimentales y
se llegaron a las siguientes conclusiones que se deben tomar en cuenta al emplear
este tipo de método de esterilización:

❖ Cuando mayor es el volumen del material, mayor es el tiempo de

calentamiento.
 ❖ Cuando menor es la conductividad del material (talco, caolín, vaselina,
aceites, etc.) mayore es el tiempo de calentamiento.
❖ Cuando mas aplanado y achatado es el volumen la masa del material a
esterilizar, menor es el tiempo de esterilización.

Ejemplo de utilización
El horno Pasteur o estufa poupin elle: se basa en la circulación de aire caliente en
el interior del aparato a elevada temperatura regulada. El material limpio y seco se
coloca en unas bandas a diferentes alturas. El material sufre por las altas
temperaturas como el vidrio que puede alterar si calibración.

Etapas del proceso de esterilización en un horno

Pasteur:

a) Calentamiento: es el tiempo desde que se

conecta hasta que llega la temperatura de
esterilización.
b) Compensación: es el tiempo que se
necesita toda la carga para alcanzar la
temperatura.
c) Esterilización: es el tiempo necesario
para la destrucción de todos los microorganismos y formas resistencia.
d) Seguridad: es el tiempo que se añade para asegurar la eliminación de las
formas de resistencia como las endosporas.
e) Enfriamiento: es el tiempo necesario que debe pasar hasta que la temperatura
nos permita abrir la estufa sin problemas.

Materiales que se pueden esterilizar por calor seco.

o Instrumentos cortantes y de acero inoxidables.
o Líquidos y sustancias liposolubles e hidrofugas tales como aceites, silicona,
parafina, vaselina, cremas y polvos de talco.
 o Agujas, jeringas de cristal, tubos, pipetas de vidrio, polvos estables al calor.

Calor directo.
• El flameado consiste en exponer a la llama del mechero hasta alcanzar el
rojo vivo aquello que vayamos a esterilizar. Eliminamos todos los
microorganismos patógenos y no patógenos de aquel material se
acostumbra a usar en los laboratorios de biología y microbiología, para
esterilizar asas de platino para siembras, tubos de vidrio o pipetas Pasteur,
etc. No se utiliza para material susceptibles de perder el filo y la calibración.
• La incineración es una forma de destruir la carga microbiana por combustión.
Mas que un medio de esterilización, se utiliza para eliminación de residuos
biopeligrosos mediante su combustión en hornos crematorios o incineradores
de características especiales.

Congelación.
Es una técnica basada en la capacidad de formación de estructuras cristalización
que tienen algunas sustancias de los microorganismos al someterse a procesos de
congelación. Estos cristales ocasionan rupturas de las membranas nucleares y
celulares de los microorganismos, incompatibles con la vida. Este sistema de
esterilización en la actualidad está en desuso.

Método de filtración.

La esterilización por filtración se logra por el paso de un líquido o un gas a través

de un material capaz de retener los microorganismos presentes. La esterilización
por filtración se emplea para materiales sensibles al calor, tales como ciertos
medios de cultivo, azúcares, soluciones de antibióticos y otros medicamentos, etc.

Existen tres tipos básicos de filtros:4

• Filtros de profundidad: Consisten de un material fibroso o granular prensado,

plegado, activado, o pegado dentro de los canales de flujo. En este tipo de filtros
 la retención de las partículas se produce por una combinación de absorción y de
retención mecánica en la matriz.
• Membranas filtrantes: Tienen una estructura continua, y la retención se debe
principalmente al tamaño de la partícula. Partículas más pequeñas al tamaño del
poro quedan retenidas en la matriz del filtro debido a efectos electrostáticos.
• Filtros de huella de nucleación (Nucleoporo): Son películas muy delgadas de
policarbonato que son perforadas por un tratamiento conjunto con radiación y
sustancias químicas. Son filtros con orificios muy regulares que atraviesan la
membrana verticalmente. Funcionan como tamices, evitando el paso de toda
partícula con un tamaño mayor al del poro.

Ejemplo de utilización
Se utiliza para el recuento de microorganismos cuando están presentes en baja
concentración. Una aplicación es el análisis bacteriológico de aguas, en la industria
farmacéutica y en soluciones termolábiles que no pueden sufrir la acción del calor.

Materiales que se pueden esterilizar por calor seco.

La filtración se utiliza para emulsiones oleosas o soluciones termolábiles. Su usa
para esterilizar aceites, algunos tipos de pomadas, soluciones oftálmicas,
soluciones intravenosas, drogas diagnósticas, radiofármacos, medios para cultivos
celulares, y soluciones de antibióticos y vitaminas.

Radiación

NO IONIZANTES

• Principio del método

Aportan la energía necesaria para ocasionar a nivel atómico en el material, la

excitación de electrones que acceden a orbitales superiores, y se liberan del átomo
producción como resultado iones con carga positiva igual al numero de electrones
desprendidos. Las mas representativas son la gama y la beta.

La radiación gamma y beta solamente se utilizan a nivel industrial debido a su alto

coste. Su principio se basa en destruir los microorganismos al producir en su
material genético alteraciones que producen la muerte. Son muy penetrantes y
letales por lo que su manipulación se utilizan estrictas medidas de seguridad.

Ejemplo de utilización

Usan en la industria de artículos médicos, odontológicos y farmacéuticos, debido a

su altos costos e instalaciones especiales para su aplicación.

Materiales que se pueden esterilizar radiación no ionizante.

• Gamma: termosensible de plástico, jeringas, agujas, catéteres, sondas,

preparados farmacéuticos, cultivos de tejidos, huesos, cartílagos, etc.
• Beta: se utiliza material de aluminio.

Ionizantes

• Principio del método

No forma iones cuando inciden sobre la materia. El efecto genéticas se basa en el

calor, que produce mutaciones genéticas en los microorganismos y esto los lleva a
la muerte. En entre las mas utilizadas encontramos la radiación ultravioleta y
infrarroja.

Los microorganismos se desactivan por medio de la luz UV como resultado del daño
a los ácidos nucleicos. El ADN y el ARN celular absorben la energía alta asociada
con la energía UV de longitud de onda corta, principalmente a 254 nm. Con
absorción de energía UV se forman nuevos enlaces entre nucleótidos adyacentes
creando dobles enlaces o dímeros. Dicha dimerización de las moléculas
adyacentes, especialmente de las timinas, constituye el daño foto químico más
frecuente ya que impide en las bacterias y virus su capacidad de replicación y, por
tanto, la capacidad de infectar. La mayoría de los microbios. Mientras la
esterilización infrarroja se basa en su poder en el efecto del calor, alcanzando
temperaturas próximas a los 280 °C incinerando la materia orgánica.

• Condiciones del método.

Para utilizar la radiación ultravioleta para agente de esterilización se debe tomar en

cuenta las siguientes consideraciones:

• longitud de onda: el rango germicida se encuentra entre 240 y 280

nanómetros y se obtiene la máxima eficiencia cerca de los 260 nanómetros.
• Tiempo de microorganismo: la radiación ultravioleta se mide en
microvatios por centímetro cuadrado. La resistencia al efecto de la radiación
dependerá del tipo de microorganismos. No obstante, la dosificación de la luz
ultravioleta requeridas para destruir lo microorganismos mas comunes
(coliformes, pseudomonas) varia entre 6000 y 1000 microvatios segundo por
centímetro cuadrado.
• Tiempo de exposición: las exposiciones normales son del orden 10 a 20
segundos.

Ejemplo de utilización

Esterilización del agua: En el agua suele haber virus, bacterias, esporas, protozoos
y mohos que causan diversas enfermedades. La desinfección de líquidos mediante
uso de luz ultravioleta tiene muchas ventajas, ya que no deja residuos y tampoco
altera su composición o propiedades como hacen otros tratamientos de carácter
químico. La aplicación más común consiste en la colocación de un filtro UV en un
tramo del conducto por donde circula el líquido. Al tratarse de una parte del proceso
tampoco se invierte tiempo extra en tratamientos especiales ni pasos intermedios.

Materiales que se pueden esterilizar

principalmente en la industria alimentaria para esterilizar medios de producción tales

como cintas transportadoras o clasificadoras, máquinas envasadoras, recipientes
de fermentación, así como láminas y tapas de cierre.
Químico

OXIDO DE ETILENO

• Principio del método

Es un gas incoloro, soluble en disolventes orgánicos, inflamables y explosivo

mezclado con aire. Los aparatos que se utilizan con este sistema se llama autoclave
de oxido de etileno. El mecanismo de acción se debe al efecto de alquilación que
modifica la estructura molecular de las proteínas y ácidos nucleico de los
microorganismos a través de reacciones químicas irreversibles, fenómeno que ve
facilitado por ser el óxido de etileno una molécula inestable que reacciona fácilmente
con sustancias orgánicas.

• Condiciones del método.

Si bien todos los microorganismos son susceptibles a la acción del oxido de etileno,
es indispensable optimizar las condiciones de concentración, temperatura,
humedad relativa y tiempo de exposición a fin de lograr una correcta esterilización.

• Concentración: se recomienda la utilización de entre 400 y 800 mg/l de est

gas, debido que a mayores concentraciones son inútiles y sumamanete
riesgosas, además que no lograrn disminuir el tiempo de exposición del
material a esterilizar.
• Temperatura: con aumentos de temperatura se lograr disminuir los tiempos
de exposición del material a esterilizar.
• Humedad: es uno de los factores mas importante debido que con menos
20% de humedad el oxido de etileno no es efectivo; la humedad relativa debe
estar por encima del 50% de preferencia cercano al 70%.
• Tiempo: el tiempo requerido para exposición puede variar debido a las
condiciones de temperatura, humedad y concentración utilizada
generalmente se utilizan tiempos de exposición de entre 3- 6 horas. mientras
 para el tiempo detoxificación es entre 6 y 10 horas debido que se debe
asegurar una eliminación total ya que es alta mente toxico y cancerígeno.

Ejemplo de utilización

Se utiliza en la industria de productos médicos y odontológicos para esterilizar

productos termolábiles como plástico, drogas, equipamiento electrónico, etc.

Materiales que se pueden esterilizar

• Instrumental óptico (broncoscopios, laringoscopios, etc.).

• Instrumental delicado (neurocirugía u oftalmología).
• Implantes y prótesis vasculares.
• Marcapasos.
• Materiales poliméricos que no soportan temperaturas ni presión.

Formaldehido.

• Principio del método

Es un gas incoloro de olor fuerte y con propiedades germicidas sin tener efectos
totalmente esterilizantes, su mecanismo de acción es que produce inactivación de
microorganismos por alquilación del grupo amino y sulfhidrilo de proteínas y del
anillo nitrogenado de bases purinicas lo que hace alterar la síntesis de los ácidos
nucleicos y daños en la membrana celular. En la actualidad muchos países esta en
desuso debido que es altamente cancerígeno tanto em personas como en animales.

Condiciones del método

La esterilización con formaldehído se realiza en autoclaves a temperaturas entre 50

y 80°C. En la esterilización a temperaturas entre 50 y 60 °C existe el peligro de
formación de para formaldehído. La esterilización se produce por acción del
formaldehído en presencia de vapor saturado. La concentración del gas y la
humedad relativa son críticas y difíciles de mantener durante el ciclo de
esterilización. Como la esterilización se produce a bajas temperaturas, cuando la
presión del vapor baja, el vapor se condensa, arruinando y disminuyendo la cantidad
de formaldehído disponible para actuar.

PERÓXIDO DE HIDROGENO .

El peróxido de hidrógeno es un agente químico no tóxico que permite la destrucción

de los microorganismos por oxidación de sus componentes celulares. Cuando se
emplea este método de esterilización se pone en contacto el material con una
solución de peróxido de hidrógeno en agua bajo la forma de vapor.

Esta tecnología es particularmente útil para la esterilización de instrumentos

termolábiles y sensibles a la humedad dado que la temperatura de esterilización no
excede los 50°C, y el proceso ocurre en un ambiente de baja humedad. El tiempo
total del proceso es menor a una hora (45 a 55 minutos). El sistema ha sido validado
como un método capaz de asegurar esterilización con un nivel de seguridad (SAL)
de al menos 10-6, necesario para ser considerado un método de esterilización.

El proceso de esterilización ocurre de la siguiente manera: los artículos a ser

esterilizados son colocados en la cámara de esterilización, la cámara es cerrada y
se produce el vacío. Se inyecta y se vaporiza una solución acuosa de peróxido de
hidrógeno dentro de la cámara de tal forma que el vapor penetre el empaque y rodee
los artículos a esterilizar. Después de una reducción de la presión dentro de la
cámara de esterilización, se genera plasma de baja temperatura generada por la
aplicación de radiofrecuencia (RF 400W), esto genera un campo eléctrico el que
cuando se activa, inicia la generación del plasma. En estado de plasma, el vapor de
peróxido de hidrógeno es separado en especies activas que reaccionan entre sí y
matan microorganismos. Entre los microorganismos sobre los que actúa el PPH
están las esporas bacterianas, microbacterias, formas vegetativas, hongos y virus.
Después que se ha suspendido la emisión de radiofrecuencia, y los componentes
activados han reaccionado entre sí, ellos pierden su alta energía y se recombinan
para formar oxígeno y agua. El estado de plasma se mantiene por el tiempo
suficiente para asegurar la esterilización. Al término del proceso, la energía de RF
y el vacío se terminan y la cámara vuelve a la presión atmosférica por medio de la
introducción de aire filtrado con filtros HEPA. Este proceso de inyección de peróxido
de hidrógeno y la producción de plasma por acción de la RF, se produce dos veces
durante el ciclo de esterilización.

Esta nueva tecnología está diseñada para procesar la mayoría de los artículos
médicos, con excepción de géneros, otros elementos fabricados de celulosa, talco,
líquidos y artículos que tienen lúmenes largos que midan más de dos metros y
menores de 1 mm con extremo ciego. Los artículos esterilizados con plasma de
peróxido de hidrógeno están listos para ser usados en menos de una hora luego de
iniciar el ciclo de esterilización. El proceso no requiere aireación y no hay emisión
de residuos tóxicos.

GLUTARALDEHÍDO:
Consiste en preparar una solución alcalina al 2% y sumergir el material a esterilizar
de 20 a 30 minutos, y luego un enjuague de 10 minutos. Este método tiene la
ventaja de ser rápido y ser el único esterilizante efectivo frío. Puede esterilizar
plástico, goma, vidrio, metal, etc.

Este agente tiene como ventajas que no es corrosivo y prácticamente no tiene

ningún efecto dañino para los instrumentos, mantiene su actividad aun en presencia
de materia orgánica. Sin embargo, hay que tener en cuenta que el glutaraldehido
puede resultar irritante para los trabajadores y que las soluciones diluidas al 2%
pierden su efectividad aproximadamente en dos semanas (a menos que el
proveedor indique lo contrario).
BIBLIOGRAFÍA.

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Pan American Health Org.
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volumen I. Barcelona, España: Educàlia Editorial S.L.
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http://www. higiene. edu. uy/cefa/Libro2002/Cap, 2027.