INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS

Métodos de análisis

Determinación de proteinas por el método de Lowry y Bradford

Elaboro: Chávez Vega Joel Daniel

Grupo: 4IM1

Seccion: 3

Maestro:

Fecha de entrega: 18/02/19

Resultados.
Lowry
Tubo No. Cantidad de poteina 𝑨𝟓𝟗𝟎
(µg) Serie a Serie b
1 25 0.081 0.059
2 50 0.109 0.109
3 75 0.147 0.152
4 100 0.185 0.204
5 125 0.208 0.235
Bradford
Tubo No. Cantidad de poteina 𝑨𝟓𝟗𝟓
(µg) Serie a Serie b
1 25 0.328 0.428
2 50 0.499 0.446
3 75 0.616 0.650
4 100 0.793 0.749
5 125 0.808 0.906

Tubo 1
𝑚𝑔
0.25 × 0.1 𝑚𝑙 = 0.025𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝑝𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎 0.025𝑚𝑔 = 25𝜇𝑔 𝑑𝑒 𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎
𝑚𝑙
Tubo 2
𝑚𝑔
0.25 × 0.2 𝑚𝑙 = 0.050𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝑝𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎 0.050𝑚𝑔 = 50𝜇𝑔 𝑑𝑒 𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎
𝑚𝑙
 Curva de calibración de Albumina
0.9

y = 0.0050x + 0.2456
0.8
R = 0.9758

0.7

0.6

Método de Lowry
0.5
A (nm)

Método de Bradford
Linear (Método de Lowry )
0.4
Linear (Método de Lowry )
Linear (Método de Bradford)
0.3
Linear (Método de Bradford)

0.2

0.1 y = 0.00155x + 0.03235

R = 0.9846

0
0 20 40 60 80 100 120 140
Concentración (µg)
• Replicas para el análisis estadístico y resultados del análisis estadístico

lowry Bradford
Tubo 𝐴590 Cantidad de proteína 𝐴595 Cantidad de proteína
No. (µg) (µg)
1 0.124 58.97 0.576 65.73
2 0.161 82.78 0.604 71.30
3 0.164 84.71 0.619 74.29
4 0.070 24.22 0.658 82.05
5 0.140 69.27 0.630 76.48
6 0.272 154.21 0.636 77.67
7 0.144 71.84 0.621 74.69
8 0.166 86.00 0.655 81.45
9 0.195 104.66 0.649 80.26
10 0.129 62.19 0.673 85.03

𝑦 = 𝑚𝑥 + 𝑏
𝑏 = 0.03235 𝑏 = 0.2456
𝑚 = 1.554𝑥10−3 𝑚 = 5.026𝑥10−3
𝑟 = 0.9846 𝑟 = 0.9757
𝑦−𝑏
𝑥=
𝑚
𝐴590 −0.03235 𝐴595 −0.2456
𝑥= 𝑥=
1.554𝑥10−3 5.026𝑥10−3
Tubo 1
(0.124)−0.03235 (0.576)−0.2456
𝑥= 𝑥=
1.554𝑥10−3 5.026𝑥10−3
𝑥 = 58.97 𝜇𝑔 𝑑𝑒 𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎 𝑥 = 65.73 𝜇𝑔 𝑑𝑒 𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎

Tubo 2
(0.161)−0.03235 (0.604)−0.2456
𝑥= 𝑥=
1.554𝑥10−3 5.026𝑥10−3
𝑥 = 84.71 𝜇𝑔 𝑑𝑒 𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎 𝑥 = 71.30 𝜇𝑔 𝑑𝑒 𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎

𝑿 S 𝑺𝟐 %C.V µ %Er
Lowry 79.885 33.7204 1137.06 42.21 55.7645 - 6.52
104.0054
Bradford 76.895 5.7077 32.5784 7.4227 52.7745 – 2.52
101.0154
 𝑋𝑖
𝑋= 𝑛

𝑋 = 79.885 𝑋 = 76.895

2
(𝑋𝑖 − 𝑋)
𝑠=√
𝑛−1

𝑠 = 33.7204 𝑠 = 5.7077
𝑆 2 = 1137.06 𝑆 2 = 32.5784

𝑆
%𝐶. 𝑉 = 𝑥 100
𝑋
33.7204 5.7077
%𝐶. 𝑉 = 𝑥 100 %𝐶. 𝑉 = 76.895 𝑥 100
79.885

%𝐶. 𝑉 = 42.21 %𝐶. 𝑉 = 7.4227

(𝑆)(𝑡95 )
𝜇=𝑋 ±
√𝑛
(33.7204 )(2.262) (5.7077)(2.262)
𝜇= 79.885 ± 𝜇 = 76.895 ±
√10 √10

𝜇= 55.7645 - 104.0054 𝜇 = 52.7745 – 101.0154

Pruebas de exactitud y precisión

∑𝑛
𝑖=1 𝐷𝑖
𝐷= 𝑛

26.9
𝐷= 10
= 2.96

SD=26.81
tcal=0.3491
𝑆𝐵2 1137.06
𝐹𝐶𝐴𝐿 = = = 34.9022
𝑆𝐴2 32.5784
 ● Efecto de algunas sustancias no proteicas que interfieren en los metodos

Lowry Bradford
Tubo Sustancia 𝐴590 Cantidad de Interferencia 𝐴595 Cantidad de Interferencia
No. proteina(µg) proteina (µg)

6 Fenol 1% 1.728 1091.15 Positiva 0.634 121.25 Positiva

7 Mercaptoetanol 0.272 142.21 Positiva 0.779 150.10 Positiva
8 Tris 1M 0.200 107.88 Positiva 0.676 129.61 Positiva
9 Urea 0.336 195.39 Positiva 0.823 158.86 Positiva
10 (NH4)2S04 0.232 128.47 Positiva 0.562 106.93 positiva

Discusiones.

Lowry Bradford
𝝀 590 595
Numero de reacciones 2 1
Color Azul claro Azul fuerte
Tiempo de reaccion 40 min 10 min
Tiempo estable 120 min 40 - 60 min
Temperatura Temperatura ambiente
Materia - Tiñe el plastico
Costo Alto Bajo

El procedimiento de Lowry está sujeto a la interferencia por compuestos como el ion

potasio, magnesio, EDTA, Tris, reactivos con grupos tiol y carbohidratos. Requiere de
más tiempo que otros ensayos.
En el método de lowry el fenol como el Mercaptoetanol presentaron una interferencia
positiva esto se debe a que el grupo r de la tirosina es igual al fenol, y el Mercaptoetanol
tiene un grupo tiol.
La desventaja es que depende de las concentraciones de ciertos aminoácidos presentes
como la tirosina y el triptófano lo contrario al método de Bradford.
En el metodo de Bradford los tubos 1 y 2 tenían espuma los cuales contenían detergente
y el SDS el cual está presente en detergentes, ambos presentaron concentraciones bajas
e incluso negativas esto se debe a que los detergentes las van a precipitar.
Conclusiones.

● El método de Bradford es mucho más sensible que el método de Lowry.

● El coeficiente de variación es la precisión del analista la cual es de un valor
máximo de 4.55%
● El método de Lowry y Bradford métodos útiles para la determinación de
proteínas

Referencias.

● http://www.iib.unsam.edu.ar/archivos/docencia/licenciatura/biotecnologia/2017/Qui
micaBiol/1489768358.pdf
● http://www3.uah.es/bioquimica/Sancho/farmacia/practicas/Lowry.pdf
● http://sgpwe.izt.uam.mx/files/users/uami/jaislocr/BIOQUIMICA_I/PRACTICA_6.pdf
● Lowry, O. H.; N. J. Rosebrough; A. L. Farr and R. J. Randall. 1951. “Protein
Measurement with the Follin-Phenol Reagent”. J. Biol. Chem. 193:265-257