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CITOPATOLOGIA E HISTOQÚMICA
Fontes: http://screening.iarc.fr/atlascyto.php?lang=4
https://www.eurocytology.eu/es/course/461
https://pathologika.com/citologia/citologia-cervico-vaginal/
UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ
CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE
CURSO DE BIOMEDICINA
Finalidade
Preparo de distensões e observação de diferentes células ao microscópio.
Técnica:
1. Preparo da distensão:
2. Coloração de Panótico
A coloração de Panótico é composta por 3 soluções: I - Solução alcoólica para fixação do
esfregaço; II - Corante Eosina; III - Corante Azul de Metileno. Para a coloração, mergulhar
5 vezes a lâmina em cada solução, sempre retirando o exesso de corante ao passar de um
recipiente para o outro. Lavar com água corrente e esperar secar.
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Observar as seguintes células:
3. Observação ao microscópio:
Finalidade
A coloração de Papanicolaou é considerada como padrão internacional de coloração cérvico-
vaginal, podendo ser usada igualmente em outros materiais. No esfregaço cérvico-vaginal
permite uma boa avaliação dos padrões inflamatórios, hormonais e oncológicos.
Reagentes
- Solução de Hematoxilina de Harris: hematoxilina de Harris (0,5%), alúmen potássico (10%)
e óxido de mercúrio (0,25%);
- Solução EA36: Verde Luz (0,2%), eosina amarela (0,2%) e marrom Bismark (0,05%);
- Solução de Orange G a 0,5%.
1. Etanol 70 = 2 minuto
2. Água: 2 minuto
3. Hematoxilina = 4 minutos
4. Água = 2 minuto
5. Álcool 95 = 2 minuto
6. Orange (OG6) = 3 minutos
7. Álcool 95 = 2 minutos
8. EA36 = 4 minutos
9. Álcool 95 = 2 minuto
10. Xilol = pingar 3 gotas e esperar secar
11. Montagem (Bálsamo do Canadá + lamínula)
http://screening.iarc.fr/atlascytostain.php?cat=A2c&lang=4
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3. Observação ao microscópio:
Intermediarias
As células intermediárias surgem geralmente na 2ª fase do ciclo (pós-ovulação) na
gravidez, na menopausa e na terapêutica com progesterona. São células da camada média,
com glicogénio abundante e podem aparecer isoladas (esfoliação fisiológica) ou agrupadas
(esfoliação traumática). Têm citoplasma vasto, translúcido, cianófilo, por vezes eosinófilo
(com a coloração de papanicolaou), podem apresentar os bordos enrolados, com grânulos
querato-hialinos ou com vacúolos. O núcleo pode ser redondo ou oval, maior que o das
células superficiais e a cromatina bem definida.
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Parabasais
Na camada profunda do epitélio encontram-se as células parabasais. São mais pequenas que
as naviculares, com os núcleos maiores, são redondas e regulares com 15 a 20 micra.
Possuem relação núcleo / citoplasma aumentada, o citoplasma é denso, acidófilo (ou
cianófilo), com a membrana citoplasmática bem definida e com vacúolos. O núcleo é
central, a cromatina é fina e granular de distribuição uniforme. Podem ser encontradas na
pré-puberdade, pós-parto, pós-menopausa, pós-irradiação ou por insuficiência de
estrogénio.
Basais
As células basais têm origem na camada basal do epitélio. Raramente são observadas,
exceto se existir uma esfoliação traumática (erosão ou ulceração da mucosa), atrofia severa
ou uma infecção. São células pequenas com 15 micra, ovais ou redondas com uma elevada
relação núcleo / citoplasma.
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Endocervicais
As células endocervicais, são células cilíndricas alongadas ou arrendondadas dependendo
do ângulo que são observadas. Os aglomerados de células mostram um aspecto de favo de
mel ou em paliçada.
1- Finalidade
Classificar esfregaços cérvico vaginais quanto à: Celularidade (células superficiais,
intermediárias, parabasais e basais), qualidade do esfregaço e aspecto inflamatório
(presença de polimorfonucleares)
2- Classificação citológica:
Células Superficiais
São as células mais desenvolvidas do epitélio escamoso, aparecem isoladas ou em pequenos grupos.
O citoplasma é claro, brilhante, transluzente e levemente eosinófilo (rosado ou alaranjado) ou
cianofílico (azulado) e o núcleo é denso e picnótico.
Células Intermediárias
Desenvolvem-se a partir da diferenciação das células parabasais, são elípticas ou alongadas, possui
citoplasma cianofílico, transluzente claro, as margens celulares são bem delimitadas, com a
presença de grânulos amarelados (glicogênio).
Células Parabasais
São maiores que as células basais, descamam isoladamente, com formas redondas ou ovais,o
citoplasma se cora menos intensamente que as células basais e o núcleo é arredondado com
cromatina fina e granular.
Células Basais
São células com origem tipicamente embrionária, cuja capacidade de reprodução é constante e
intensa, quando descamam são isoladas, possuem formas arredondadas ou ovais e o núcleo é
grande, redondo ou oval.
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3- Observação ao microscópio:
Escolher 2 lâminas, observar em aumento de 40x e contar 100 células,classificando de
acordo com o índice ao lado. Desenhar e colorir as células observadas.
Qualidade do esfregaço:
( ) Satisfatório
( ) Insatisfatório
Celularidade (Contagem diferencial dos
tipos celulares)
Céls. Superficiais eosinofílicas:...............%
Céls. Superficiais cianofílicas:.................%
Céls. Intermediárias:................................%
Céls. Profundas (parabasais e basais):.....%
Polimorfonucleares:
( )Ausentes
( )Poucos
( )Numerosos
Qualidade do esfregaço:
( ) Satisfatório
( ) Insatisfatório
Celularidade (Contagem diferencial dos
tipos celulares)
Céls. Superficiais eosinofílicas:...............%
Céls. Superficiais cianofílicas:.................%
Céls. Intermediárias:................................%
Céls. Profundas (parabasais e basais):.....%
Polimorfonucleares:
( )Ausentes
( )Poucos
( )Numerosos
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1- Finalidade
Aprender a coletar secreção cérvico vaginal em simulador ginecológico.
2- Procedimento:
O espéculo deve ser introduzido cuidadosamente e depois aberto. O colo deve ser
visualizado (parcial ou totalmente).
O procedimento de coleta propriamente dito deve ser realizado na ectocérvice (uso da
espátula) e na endocérvice (uso da escova) do colo na JEC (junção escamo-colunar).
Uso da espátula
• A extremidade mais larga deverá ser inserida corretamente no orifício da cérvix e
girando 360º.
• O material assim colhido deverá então ser delicadamente espalhado sobre sua
superfície de uma lâmina (limpa e seca) em sentido longitudinal.
• Realizar a fixação da lâmina com fixador (metanol)
Uso da escova
• Introduzir a parte das cerdas da escova ginecológica no orifício cervical, girando
360º.
• Passar o material para lâmina, rodando a escova através da lâmina.
• Realizar a fixação da lâmina com fixador metanol.
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Espéculo
Escova
Endocervical Espátula de Ayre
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1- Finalidade
Classificar esfregaços cérvico vaginais quanto ao aspecto inflamatório (presença de
microorganismos e polimorfonucleares) através da coloração de gram.
Coloração de gram: O mecanismo da coloração de Gram se refere à composição da
parede celular, sendo que as bactérias Gram-positivas possuem uma espessa camada de
peptideoglicano e ácido teicóico, e as Gram-negativas, uma fina camada de
peptideoglicano, sobre a qual se encontra uma camada composta por lipoproteínas,
fosfolipídeos, proteínas e lipopolissacarídeos. Durante o processo de coloração, o
tratamento com álcool-acetona extrai os lipídeos, daí resultando uma porosidade ou
permeabilidade aumentada da parede celular das bactérias Gram-negativas. Assim, o
complexo cristal violeta-iodo (CVI) pode ser retirado e as bactérias Gram-negativas são
descoradas.
2- Procedimento:
1) Cobrir toda a lâmina com solução cristal violeta (corante roxo), aguardar um minuto;
2) Lavar rapidamente em água destilada;
3) Cobrir a lâmina com solução de Iugol (mordente) por um minuto;
4) Lavar em água destilada;
5) Cobrir a lâmina com álcool-acetona cerca de 15 segundos. Lavar a lâmina rapidamente
em água corrente;
6) Cobrir com fucsina e aguardar 15 segundos;
7) Lavar a lâmina em água destilada e secar.
8) Colocar uma gota de óleo de cedro sobre a lâmina e observar em objetiva de imersão
(100X).
RESULTADO: bactérias Gram-positivas: roxo
bactérias Gram-negativas: rosa/vermelho
ASPECTO INFLAMATÓRIO
Cocobacilos Gram Lábeis (positivos e negativos): A gardnerella vaginalis é uma bactéria que faz
parte da flora vaginal normal de 20 a 80% das mulheres sexualmente ativas. Quando, por um
desequilíbrio dessa flora, ocorre um predomínio dessa bactéria temos um quadro de vaginose
bacteriana.
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Fungos: A cândida albicans o fungo responsável por uma das infecções vaginais mais comuns - a
candidíase.
Protozoários: O Trichomonas vaginalis é o agente causador da tricomoníase. Existe em apenas
uma única forma (trofozoíto), que é simultaneamente infecciosa e ativa. É transmissível
sexualmente.
3- Observação ao microscópio:
Corar uma lâmina pela coloração de gram e observar em objetiva de 100x, desenhar e
classificar de acordo com o índice ao lado:
Microorganismos:
( ) Cocobacilos gram lábeis
( ) Bacilos Gram-positivos( Bacilos
de Doderlin)
( ) Fungos (leveduras)
( ) Protozoários
( ) Outros
Polimorfonucleares:
( )Ausentes
( )Poucos
( )Numerosos
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Gardenerella vaginalis cocobacilos gram lábeis) Gardenerella vaginalis cocobacilos gram lábeis)
1- Finalidade
Observar os efeitos dos hormônios esteróides sobre o epitélio cérvico vaginal.
2- Classificação citológica:
ÍNDICES CITOLÓGICOS
3- Observação ao microscópio:
4º Padrao de descamação:
( ) Planas e isoladas (limpo)
( ) Pregueadas e aglutinadas (sujo)
4º Padrão de descamação:
( ) Planas e isoladas (limpo)
( ) Pregueadas e aglutinadas (sujo)
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1- Finalidade
Observar os efeitos dos hormônios esteróides sobre o epitélio cérvico vaginal e classificar o
trofismo do epitélio.
2- Classificação citológica:
TROFISMO VAGINAL
Esfregaço Eutrófico ou Trófico: Quando o epitélio vaginal possui suas três camadas
funcionais (profunda, intermediária e superficial), falamos que o mesmo é eutrófico ou
maturo e a descamação é de células intermediárias e superficiais e em proporções
variadas.O indicador citológico de maturação epitelial é dado pelo encontro de células
superficiais.
ÍNDICES CITOLÓGICOS
1º Contagem diferencial dos tipos celulares
Céls. Profundas ....................................%
Céls. Cianófilas intermediárias..............%
Céls. Eosinófilas intermediárias............%
Céls. Cianófilas superficiais..................%
Céls. Eosinófilas superficiais.................%
2º Soma-se a quantidade de células superficiais, ou seja, células cianofílicas e eosinofílicas.
Desta forma obtemos o índice picnótico (I.P.).
Índice picnótico de 01 a 29% - indicam estímulo estrogênico fraco. Correspondem aos 7
primeiros dias do ciclo.
Índice picnótico de 30 a 49% - indicam estímulo estrogênico moderado. Observado do 8º ao
12º dia do ciclo.
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Índice picnótico maior que 50% - são indicadores de importante estímulo estrogênio
encontrado normalmente do 13º ao 16º dia do ciclo (período peri-ovulatório).
3- Observação ao microscópio:
Escolher 2 lâminas, observar em objetiva de 40 e classificar de acordo com o índice ao
lado:
1º Esfregaço:
( )Eutrófico
( )Hipotrófico
( )Atrófico
2º Índices citológicos
Céls. Profundas ....................................%
Céls. Cianófilas intermediárias..............%
Céls. Eosinófilas intermediárias............%
Céls. Cianófilas superficiais..................%
Céls. Eosinófilas superficiais.................%
3ºÍndice Picnótico (IP):..............%
4º Padrão de descamação:
( ) Células planas e isoladas (limpo)
( ) Células pregueadas e aglutinadas (sujo)
5º Indice de Frost:____/____/____
6º Classificar a fase do ciclo:
1º Esfregaço:
( )Eutrófico
( )Hipotrófico
( )Atrófico
2º Índices citológicos
Céls. Profundas ....................................%
Céls. Cianófilas intermediárias..............%
Céls. Eosinófilas intermediárias............%
Céls. Cianófilas superficiais..................%
Céls. Eosinófilas superficiais.................%
3º Índice Picnótico (IP):..............%
4º Padrão de descamação:
( ) Células planas e isoladas (limpo)
( ) Células pregueadas e aglutinadas (sujo)
5º Indice de Frost:____/____/____
6º Classificar a fase do ciclo:
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1-Finalidade
Classificar esfragaços por coloração de papanicolaou (ciclo hormonal) e coloração de gram
(flora bacteriana)
2- Procedimento:
Confeccionar 2 lâminas e proceder coloração de papanicolaou e de gram.
Para memorizar:
Índice picnótico de 01 a 29% - indicam estímulo estrogênico fraco. Correspondem aos 7 primeiros
dias do ciclo.
Índice picnótico de 30 a 49% - indicam estímulo estrogênico moderado. Observado do 8º ao 12º dia
do ciclo.
Índice picnótico maior que 50% - são indicadores de importante estímulo estrogênio encontrado
normalmente do 13º ao 16º dia do ciclo (período peri-ovulatório).
3- Observação ao microscópio:
Observar em objetiva de 40 e classificar de acordo com o índice ao lado:
1- Finalidade
O HPV pertence ao grupo adenovírus, subgrupo papiloma, DNA vírus. Com capacidade
oncogênica, está relacionado epidemiologicamente ao carcinoma de colo uterino.
Classificar esfregaços cérvico vaginais seguindo os critérios de interpretação citológica da
infecção pelo HPV.
Bimultinucleação: O núcleo de muitas células infestadas pelo HPV pode ser simples,
freqüentemente duplo, algumas vezes múltiplo, aumentado de volume e com
hipercromatismo. Não há nucléolos e inclusões não são observadas.
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Critérios morfológicos para diagnóstico de neoplasia intra-epiteliais cervical baseiam nas
alterações do núcleo.
3- Observação ao microscópio:
Qualidade do esfregaço:
( )Mais de 30% das células em bom
estado
( )Presença dos 4 principais tipos
celulares (JEC)
Atipias celulares:
( ) Coilócitos
( ) Paraceratose
( ) Diceratose
Bimultinucleação:
( ) Núcleos duplos
( ) Núcleos múltiplos
( ) Núcleos com volume aumentado e
hipercromatismo.
Qualidade do esfregaço:
( )Mais de 30% das células em bom
estado
( )Presença dos 4 principais tipos
celulares (JEC)
Atipias celulares:
( ) Coilócitos
( ) Paraceratose
( ) Diceratose
Bimultinucleação:
( ) Núcleos duplos
( ) Núcleos múltiplos
( ) Núcleos com volume aumentado e
hipercromatismo.
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Fonte: http://screening.iarc.fr/atlasglossdef.php?lang=4&key=Coil%F3cito&img
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1. Finalidade
Contagem citológica diferencial de distensões de derrames serosos.
Derrame pleural
É a acumulação excessiva de fluido entre as membranas que envolvem o pulmão (cavidade
pleural). Uma quantidade excessiva deste fluido pode descompensar a ventilação por
limitar a expansão dos pulmões (atelectasia).
Normalmente as membranas que envolvem os pulmões (pleuras) possuem apenas uma
quantidade mínima de líquido pleural para evitar o atrito entre si. Quando uma dessas
pleuras sofre com processo inflamatório causa dor torácica.
2. Técnica:
Coloração de Panótico
A coloração de Panótico é composta por 3 soluções: I - Solução alcoólica para fixação do
esfregaço; II - Corante Eosina; III - Corante Azul de Metileno. Para a coloração, mergulhar
5 vezes a lâmina em cada solução, sempre retirando o excesso de corante ao passar de um
recipiente para o outro. Lavar com água corrente e esperar secar.
3. Observação ao microscópio:
1. Finalidade
Análise citológica de distensões de descarga papilar e punção aspirativa por agulha fina
(PAAF) de nódulos mamários.
2. Técnica:
Coloração de Papanicolaou
A coloração de Papanicolaou é considerada como padrão internacional de coloração em
citopatologia pois permite uma boa avaliação dos padrões inflamatórios, hormonais e
oncológicos.
Reagentes
- Solução de Hematoxilina de Harris: hematoxilina de Harris (0,5%), alúmen potássico (10%)
e óxido de mercúrio (0,25%);
- Solução EA36: Verde Luz (0,2%), eosina amarela (0,2%) e marrom Bismark (0,05%);
- Solução de Orange G a 0,5%.
3. Observação ao microscópio:
Achados gerais:
- intensa celularidade (em grupos e células isoladas)e
diáteses tumorais.
- tridimensionalidade nos grupos celulares, com células
desprendidas em seus bordos.
- células de tamanhos variáveis ora amoldadas com
citoplasmas mal definidos, as vezes vacuolizados (células
em anel de sinete)
- figuras de "canibalismo" e de mitose.
- ausência de células mioepiteliais
- estroma adiposo aderido a grupos de células tumorais
2. CARCINOMA LOBULAR
Principais características do carcinoma lobular:
Hipocelularidade;
Pequenos grupos de células malignas pequenas, isoladas
ou dispostas em cordões;
Monomorfismo celular;
Presença de vacúolo citoplasmático com muco (célula em
anel de sinete), parâmetro de um diagnóstico mais
desfavorável;
Núcleos variam de hipocromáticos a hipercromáticos, com
cromatina fina e granular com discreta irregularidade da
membrana nuclear;
Presença de nucléolos pequenos e geralmente localizados
no centro do núcleo;