Mycobacterium tuberculosis

El diagnóstico de certeza de la tuberculosis es microbiológico. La importancia de realizar un buen

diagnóstico y seguimiento microbiológico de la tuberculosis está claramente reconocida y consensuada
en todos los programas de control de la tuberculosis. La estrategia fundamental para el control de la
enfermedad tuberculosa debe ser el rápido y correcto diagnóstico de los casos de tuberculosis activa y,
sobre todo, de los enfermos bacilíferos.

La tuberculosis humana es una enfermedad producida por bacterias del género Mycobacterium, y dentro
de éste por tres especies que pertenecen al complejo M.

Características bacteriológicas del género Mycobacterium

Son bacilos delgados de forma recta o ligeramente curvada, de tamaño de 1-10 µ de largo por 0,2-0,6 µ
de ancho. Ocasionalmente forman ramificaciones verdaderas observadas en cultivos enriquecidos y en
frotis de ganglios linfáticos. Son bacilos aerobios estrictos, inmóviles, sin cápsula, que no forman
esporas.

La estructura de su gruesa pared celular, responsable de su característica en la coloración ácido-alcohol

resistente, presenta en su lado interno una capa de polímeros de arabinosa y galactosa, seguida de otra
formada por ácidos micólicos (ácidos grasos de gran importancia en la taxonomía del
género Mycobacterium, y otra superficial formada por lípidos, como los sulfolípidos y micósidos, lo que
hace que presenten un alto contenido en lípidos. Es probable que los ácidos grasos y los lípidos sean los
responsables de su gran resistencia a la desecación y a la acción de los descontaminantes poderosos,
tanto ácidos como alcalinos. Son sensibles al calor húmedo y se destruyen a temperatura de
pasteurización.

El crecimiento bacteriano es lento; en condiciones óptimas de cultivo (temperatura 37 °C, pH = 7) el

tiempo de duplicación es de 15-18 h, tardando de una a 3 semanas en aparecer colonias visibles en
medios de cultivo sólidos. Importante para el inicio del tratamiento.

Obtención y transporte de muestras clínicas

Es necesario enviar las muestras en frasco estéril, transportarlas lo más rápido posible al laboratorio y
siempre que sea posible conservarlas a 4 °C.

Muestras respiratorias

El esputo es la muestra más frecuente y epidemiológicamente la más importante. Se deben considerar 3

esputos recogidos en 3 días consecutivos por la mañana, en ayunas, y en cantidad de 5-10 ml;
volúmenes inferiores pueden disminuir la positividad de la muestra. Cuando el enfermo no puede
espectorar se debe inducir el esputo (aerosol de solución salina, durante 15-20 min) o a la realización de
una fibrobroncoscopia, que permite realizar broncoaspirados selectivos, lavados broncoalveolares y
biopsias de las lesiones bronquiales.

El hallazgo de BAAR en las muestras clínicas es la primera evidencia de la presencia de una micobacteria.
Es el procedimiento más fácil y rápido que permite un diagnóstico presuntivo y el reconocimiento de los
pacientes bacilíferos, lo que le confiere un gran valor epidemiológico. Una tinción negativa nunca excluye
una tuberculosis. Para que una tinción sea positiva es necesario que el número de BAAR en el esputo sea
de 5.000-10.000 baar/ml.
Independientemente del resultado de la observación microscópica, se debe siempre efectuar el cultivo de
las muestras clínicas para realizar un diagnóstico de certeza de tuberculosis.

Cultivo e identificación del complejo M. tuberculosis

La técnica de cultivo es más sensible que la microscopia para el diagnóstico, ya que permite detectar 10
bacterias/mL de muestra concentrada. Asimismo, asegurar la negativización de los cultivos es
imprescindible para el seguimiento de la enfermedad y el control de la eficacia del tratamiento. La
realización del cultivo es fundamental para el aislamiento de la bacteria, que

permitirá, si fuera necesario, estudios de resistencia a fármacos y/o estudios de tipificación genética 6.

Las muestras remitidas para su estudio al laboratorio de micobacterias se pueden dividir en dos grupos:

1. Muestras procedentes de lugares estériles, como líquidos cefalorraquídeos, pleurales, peritoneales,

pericárdicos y biopsias de tejidos. Éstas pueden sembrarse directamente en los medios de cultivo. Si el
volumen es grande pueden requerir una concentración previa.

2. Muestras procedentes de lugares en los que existe microbiota (esputos, orinas etc.) que se multiplica
más rápido que las micobacterias, por lo que puede impedir el crecimiento de las micobacterias. Este tipo
de muestras debe ser sometido a un proceso de homogeneización (descontaminación y posterior
neutralización-concentración). Los métodos más utilizados

son el de Tacquet y Tison (laurilsulfato sódico), el de NALC-NaOH y el que utiliza ácido oxálico, que
elimina P. aeruginosa, u otras bacterias de la microbiota.

CULTIVO DE Mycobacterium tuberculosis en medio Löwenstein-Jensen

Para el aislamiento primario de muestras clínicas, se requiere un medio complejo Lowenstein Jensen,
que contiene una base de patata-huevo o una base de agar suero. Los bacilos tuberculosos tienen un
crecimiento muy lento incluso en condiciones óptimas y requiere de 10 a 20 días de incubación a 37ºC.
Aunque la proliferación puede tener lugar a un pH que oscila entre 6 a 7.6, el pH óptimo de crecimiento
es de 7. El tiempo de duplicación de M. tubercusosis en condiciones óptimas de cultivo es de 15 a 18
horas, tardando varias semanas (1 a 3) en aparecer colonias visibles en medios de cultivo.
DIAGNÓSTICO DE MUESTRAS CLÍNICAS. VISUALIZACIÓN. MICROSCOPIA El hallazgo de bacilos
ácido alcohol resistentes (BAAR) en extensiones teñidas y examinadas al microscopio es la primera
evidencia de la presencia de micobacterias en una muestra clínica.
Las baciloscopias pueden prepararse directamente de la muestra clínica o después de que ésta haya
sido descontaminada y concentrada para la realización del cultivo. Esto aumenta ligeramente la
sensibilidad de la técnica.
Todas las caracterísiticas morfológicas por visualización pueden ser consideradas, pero no se pueden
establecer diferencias entre las distintas especies con un alto grado de certeza hasta que no sea
probado mediante cultivo, e identificación. - La no observación de BAAR en una muestra clínica no
descarta el diagnóstico de tuberculosis, ya que es una técnica de sensibilidad limitada. Se ha
demostrado que son necesarios de 5.000 a 10.000 bacilos por ml de esputo para el reconocimiento en la
microscopía directa, en estos casos el cultivo detecta de 10 a 100 colonias de micobacterias viables.
Los resultados del examen microscópico deben expresarse en número aproximado de bacilos
visualizados.
La sensibilidad de la baciloscopia depende, en gran parte, de una buena preparación de la tinción y de la
lectura, se han documentado sensibilidades desde un 20 a un 80%, dependiendo de donde se haya
hecho el estudio y del tipo de muestras estudiadas.

COLORACIÓN DE ZIEHL NELSEN

La tinción de Ziehl-Neelsen es una tinción diferencial que permite distinguir un grupo especial de
bacterias cuya pared presenta resistencia a la decoloración por una mezcla de ácido y alcohol: las BAAR
o bacterias ácido-alcohol resistentes (Bacilos).
Entre las BAAR se encuentran las micobacterias, agentes etiológicos de enfermedades como
la tuberculosis y la lepra.Estas bacterias se tiñen muy mal con la tinción de Gram, por lo que su
visualización es solo posible con esta técnica. Por lo tanto, las bacterias Gram + y Gram- son no-Baar.

La tinción consta de tres fases:

1. Tinción en caliente con un colorante básico, como la fucsina fenicada. Las Baar presentan en
su pared ácidos micólicos y ceras que le confieren un carácter hidrofóbico e impiden el paso de
colorantes, pero al calentar la muestra se fluidifica esta pared cérea y permite el paso de
colorantes catiónicos. Todas las bacterias de teñiran de rojo.
2. Decoloración en frío con una mezcla de ácido-alcohol. Al estar frío, se vuelve a solidificar la
pared y queda retenido el colorante, impidiendo su arrastre. En las demás bacterias el colorante
será arrastrado por el ácido-alcohol. Las Baar seguirán teñidas de rojo y las demás bacterias
quedarán incoloras.
3. Coloración de contraste. El azul de metileno tiñe a las demás bacterias, ya que no puede
traspasar la pared de las BAAR. Por lo que las BAAR permanecerán rojas y las demás
bacterias azules.
Muestra coloreada con Tinción Zielh Nelsen: