COLORACIÓN DE GRAM

La tinción de Gram o coloración de Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en

bacteriología para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas. Debe su
nombre al bacteriólogo Danés Christian (1853-1938), que desarrolló la técnica en 1884.Es
un proceso en el que se aplican uno o más colorantes a los microorganismos para darle
color a las bacterias y este nos permite clasificarlas en Gram + y Gram-.Estas bacterias
se diferencian en el contraste y el medio que las rodea, para esto es preferible teñirlas
porque el colorante aumenta el contraste, además se diferencian porque tienen paredes
celulares diferentes, la Gram- tiene una membrana externa que no tienen la Gram +.

PROCEDIMIENTO

1. Realizar un frotis de echerichia coli sobre el portaobjeto.

2. Secar al aire libre y fijar con calor.
3. Cubrir el portaobjeto con cristal violeta por un 1 minuto. En este lapso de tiempo el
cristal violeta va a teñir todas las bacterias tanto Gram + y Gram – de color
morado.
4. Lavar con agua destilada.
5. Adicionar lugol por 1 minuto. Este actúa como mordiente fijando el colorante,
haciendo que el cristal violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la célula
bacteriana.
6. Lavar con agua destilada.
7. Decolorar con alcohol acetona por 14 segundos. En este paso, cuando se agrega
el alcohol acetona a las bacterias Gram +, el cristal violeta se va a retener en
ellas, debido a la capa de pectiglucano, sin embargo en las bacterias Gram – el
alcohol acetona va a retirar el cristal violeta, por lo que queda incolora.
8. Lavar con agua destilada.
9. Adicionar safranina de Gram por 30 segundos. Al añadir la safranina esta teñirá a
las bacterias Gram- que están sin colorantes, pero no las Gram+ que están teñidas
con el cristal violeta.
10. Lavar con agua destilada.
11. Dejar secar y observar al microscopio con objetivo de inmersión. Este objetivo de
inmersión es usado para la observación de objetivos muy pequeños, como las
bacterias individuales.
RESULTADOS E INTERPRETACIÓN

COLORACION DE GRAM
A PARTIR DE ECHERICHIA COLI
GRUPO INFET-30/0172019

No se observó las bacterias Gram+ y Gram- debido a un mal procedimiento en un paso.

Este paso fue no agregar lugol, por lo que provocó que no se fijaran en las bacterias el
colorante ni determinar las diferencias en el color de cada una de estas.

Este es el resultado que debió dar en la coloración de Gram

En donde las bacterias de color morado son Gram+ y las de color rosado son Gram-.