Práctica 1.

Determinación de la actividad de la catalasa

Integrantes: Etzuly Guadalupe Luna Hernández,
Luis Alejandro Peralta Gutiérrez, Susana García Kunz
Asignatura: Tecnología Enzimática
Licenciatura: QFBT
Periodo: 2019-1
Fecha de entrega: 13-FEB-19
Docente: Marcela González Montoya

Resumen.
La catalasa es una enzima oxidorreductasa que se encuentra en los tejidos vegetales y animales. La función de
esta en los tejidos es de suma importancia durante el metabolismo celular, ya que se forma una molécula tóxica
llamada peróxido de hidrógeno, la catalasa descompone el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno. En esta
práctica se busca determinar la actividad de la catalasa en diversos tejidos tanto animales como vegetales
(Espinaca, rábano, cebolla, hígado, papa y riñón), esto se llevó a cabo por medio de 3 partes distintas, en la
primera se agregó el peróxido de hidrógeno directamente, en la segunda parte se determinó la actividad a
diferentes temperaturas y en la tercera se determinó la actividad en pH´s distintos. Se pudó observar que la
actividad de la catalasa puede variar dependiendo del tejido con el que se trabaja así como las condiciones
fisicoquímicas de estos, por lo que al trabajar con una enzima como la catalasa, se tiene que tomar en cuenta los
diferentes factores que pueden modificarla alterando un buen funcionamiento de la misma.

Palabras clave: Catalasa, Oxidorreductasa, Peróxido de Hidrógeno, condiciones fisicoquímicas.

Introducción.
La catalasa, enzima encontrada en diversos
organismos aerobios con función antioxidante
cataliza la dismutación del (H2O2) peróxido de
hidrógeno en agua y oxígeno. La mayoría de estas
enzimas tiene un grupo hemo en cada subunidad.
Las catalasas pequeñas suelen ser menos
resistentes a la desnaturalización ya que unen
NADPH, tienen hemo β y se inhiben e inactivan
gracias a los sustratos, en cambio las catalasas
grandes tienen un dominio extra en el C-terminal
que es semejante a la flavodoxina y son muy
resistentes a la desnaturalización, tiene hemo δ
presentando enlaces covalentes inusuales cercanos
al sitio activo y son resistentes a concentraciones
molares de H2O2
Se han identificado tres grupos distintos de
catalasas
1. Monofuncionales: contienen hemo y están
presentes tanto en organismos y están
presentes tanto en organismos procariotas
como en los eucariotas.
2. Mn-Catalasas: Enzimas hexaméricas que no
tienen hemo, tienen Mn en el sitio activo y
sólo están presentes en algunos organismos
procariotas anaerobios.
 3. Catalasas peroxidasas: Tienen actividad de
catalasa y peroxidasa, contienen hemo y
H2O2  H2O + O2
solo están presentes en bacterias y hongos.
Punto isoeléctrico de las proteínas

El punto isoeléctrico se define como “pH al cuál las

cargas positivas de las proteínas se igualan a las
cragas negativas de la misma por lo que la carga
neta es cero”.

Las proteínas tienen una conducta anfotérica

debido a los grupos funcionales de los aminoácidos
como los amino y carboxil terminales. El punto
isoeléctrico nos da información útil para razonar el
Figure 1 Estructura bioquímica de la catalasa
comportamiento de los aminoácidos y proteínas en
solución, así como la presencia de grupos
ionizables.

Figure 2 Estructura química de la catalasa

En el hombre la catalasa tiene actividad de

protección para la hemoglobina del H2O2 generado
en los eritrocitos, de igual manera protege en casos
de inflamación y prevención de mutaciones,
evitando el envejecimiento y cierto tipo de cáncer.
Figure 3 Punto isoeléctrico y proteínas
Reacción de la catalasa
Las moléculas complejas, tales como las proteínas,
En la reacción ocurre una transferencia de 2 se combinan con los iones de hidrógeno y con otros
electrones, siendo en dos partes: iones presentes en la dilución dándole lugar a la
carga neta de la molécula.
1. La catalasa se oxida por una molécula de
peróxido formando un intermediario A la concentración de iones hidrógeno, o al pH,
conocido como “compuesto I” para el cual la concentración del ion híbrido de
2. El compuesto I es reducido por otra una proteína es máxima y el movimiento neto de
molécula del H2O2 regresando a la catalasa a las moléculas de soluto en un campo eléctrico es
su estado inicial produciendo agua y prácticamente nulo.
oxígeno.
OBJETIVOS

 Reconocer las reacciones enzimáticas

 Observar el efecto que tiene sobre la acción
enzimática la adición de sustancias Efecto de la temperatura sobre el
inhibidoras y la desnaturalización funcionamiento de las enzimas
enzimática por la acción del calor

METODOLOGÍA

Rotular cinco tubos de ensaye del 1 al 5 y

Acción de la catalasa calentar un baño de agua hasta 37°C y otro
hasta 80°C. Añadir 5 mL de hígado
homogenado a cada tubo.

Para preparar el homogenado, corte en pedazos

por separado la muestra de hígado. Usando una
licuadora o mortero, moler el material con un poco
de agua hasta diluir parte de la muestra; no moler
excesivamente para que no queden pedazos muy
pequeños del material. Mantener los tubos a las siguientes
temperaturas: Tubo 1 = 80°C por 15 minutos
Tubo 2 = 37°C por 15 minutos
Tubo 3 = Temperatura ambiental
De ser necesario, filtrar el macerado con una gasa Tubo 4 = Hielo por 30 minutos
(manta de cielo). Colocar el homogenado en un Tubo 5 = Congelador a 4°C por 30 minutos
vaso de precipitado.

Usando un gotero, colocar cinco - cuatro gotas del

homogenado de hígado en una caja Petri y añadir
tres gotas de peróxido de hidrógeno. Repetir todo
el procedimiento con el riñón de vaca.
Añadir 2 mL de peróxido de hidrógeno al
tubo 1. Medir el tiempo transcurrido desde
que se añadió el peróxido hasta que se
comienzan a producir burbujas.

En otra caja Petri colocar un pedazo pequeño de

una seta. Romper este pedazo con un bisturí en
pedazos más pequeños. Añadir tres gotas de
peróxido de hidrógeno.

Repetir con los demás tubos. Comparar los

resultados en términos de tiempo de
Hacer el mismo procedimiento anterior, en otra reacción vs. temperatura.
caja Petri con un pedazo de espinaca, cebolla,
rábano y papa. A una placa añadir cuatro gotas de
agua y tres gotas de peróxido de hidrógeno.
 El efecto del pH sobre el
funcionamiento de las enzimas

Rotular tres tubos de ensayo A, B y C.

Añadir 3 mL de homogenado de
hígado a cada tubo.

Añadir soluciones 3M de HCl o 3M de

NaOH a los tubos como se indica a
continuación, y agitar suavemente
hasta mezclar:

Tubo A – 3 ml de 3 M HCl
Tubo B – 3 ml de 3 M NaOH
Tubo C – control (no ácido ni base)

Añadir 3 mL de peróxido de hidrógeno

a cada tubo. Observar y anotar las
reacciones.
 RESULTADOS

 Acción de la catalasa ea a a

Rábano No hubo Reacción Reacción Reacción

reacción instantán instantáne instantáne
ea a a
Hígado Cebolla No hubo La La reacción Reacción
reacción reacción tardó 5 instantáne
Riñón tardó 4 segundos a
segundos
Espinaca No hubo Reacción Reacción Reacción
reacción instantán instantáne instantáne
ea a a
Papa No hubo Reacció Reacción Reacción
reacción n instantán instantán
instantá ea ea
Figure 4 Acción de la catalasa en Hígado y Riñón de Res nea

Cebolla
Espinaca

Seta

Papa
Rábano

Figure 6 Reacción de la catalasa a 80°C

Figure 5 Acción de la catalasa en Espinaca,
“Papa, Hígado, Cebolla, Espinaca, Rábano, Riñón”
Seta, Rábano, Papa, Cebolla

 Efecto de la temperatura sobre el

funcionamiento de las enzimas.

Muestra 80°C 37°C Temperatu Hielo

ra
ambiente
Hígado Muy Reacción Reacción Reacción
poca instantán instantáne instantáne
reacción ea a a Figure 7 Reacción de la catalasa a 37°C
Riñón No hubo Reacción Reacción Reacción “Riñón, Espinaca, Papa, Rábano, Cebolla, Hígado”
reacción instantán instantáne instantáne
Figure 8 Reacción de la catalasa a temperatura ambiente Figure 10 Hígado con HCL, NaOH y solo antes de la prueba de
“Espinaca, Riñón, Papa, Hígado, Cebolla, Rábano” catalasa

Figure 11 Después de la prueba de catalasa

Figure 9 Reacción de la catalasa a bajas temperaturas (hielo) DISCUSIÓN DE RESULTADOS.

“Hígado, Rábano, Riñón, Cebolla, Espinaca, Papa”

 Acción de la catalasa.
 El efecto del pH sobre el funcionamiento de
Al probar la actividad de la catalasa de manera
las enzimas directa en el homogenizado se vió un “burbujeo” o
Muestra Ácido Base Control reacción inmediata, excepto en la cebolla, además
(Solo) de que no se tuvo una reacción tan marcada como
Hubo Hubo Reacción en el resto de los tejidos; esto nos podría indicar
Hígado precipitación solubilización inmediata dos cosas:
de proteínas de proteínas
y reacción de 1. Que hay una menor presencia de catalasa
catalasa en la cebolla
2. La actividad de la catalasa no es tan rápida
en la cebolla, dando a entender que podría
no tener un sitio catalítico tan efectivo
como en el resto de los tejidos.
  Efecto de la temperatura sobre el
funcionamiento de las enzimas (catalasa)
La temperatura normalmente ejerce un doble
efecto en cuanto a la conformación y reacción de
las enzimas.
Todas la enzimas sufren una desnaturalización
frente a temperaturas muy elevadas ya que pierde
su estructura terciaria, por lo que su sitio activo
igual se ve afectado como se puede observar en la
figura 5, en la cuál no se ve ninguna reacción en los
tejidos. Al observar la figura 6 y 7 se ve una reacción
normal de la catalasa, ya que son temperaturas a las
cuales la catalasa esta “acostumbrada” a trabajar,
en cuánto a la figura 8 que es en condiciones de
temperatura baja, se tuvo una reacción mucho más
rápida, por lo que nos podría indicar que no solo la
estructura de la catalasa es resistente a
temperaturas bajas, si no que se puede dar un
doble efecto aumentando la actividad de la misma.
 Efecto del pH sobre el funcionamiento de
las enzimas
La catalasa, como cualquier otra enzima, gracias a
su composición estructural cuenta con puntos
isoeléctricos, los cuáles se alcanzan al modificar el
pH del medio, lo que resulta en un aumento,
reducción o incluso eliminación de la actividad
biológica de la enzima.
Como se puede observar incluso antes de agregar el
peróxido (Figura 9) ya existe un cambio en la
conformación de las proteínas presentes en el
tejido (incluyendo a la catalasa), dando una
precipitación en medio ácido ya que al llegar a su
punto isoeléctrico hay un cambio estructural que
puede provocar este comportamiento, teniendo
una solubilización en medio básico debido a los
radicales libres de los aminoácidos que al ionizarse,
establecen enlases débiles, normalmente puentes
de hidrogeno, y observando el tubo control, al cual
solo se le agregó agua, hay una reacción normal de
la dismutación del H2O2)
CONCLUSIÓN
Como se pudó observar en los resultados, las
enzimas trabajan a ciertas condiciones tanto de
temperatura como de medio, por lo que al trabajar
con ellas se deben cuidar muy bien estos
parámetros, para evitar cualquier degradación de
las mismas. La catalasa al ser una enzima
importante en nuestro cuerpo la cual evita elimina
toxinas importantes, pero de fácil degradación
debemos de igual manera cuidar nuestros hábitos,
ya que al caer en una alcalosis o acidosis podríamos
dañar el funcionamiento y tener efectos no
deseables.
REFERENCIAS
1. ADELAIDA DÍAZ. (2003). LA ESTRUCTURA DE
LAS CATALASAS. 09-Feb-2019, de
Departamento de Bioquímica, Instituto de
Fisiología Celular, UNAM. México Sitio web:
http://www.uacj.mx/ICB/redcib/Documents
/REB_DOC/2003/06/2003-
2_LA%20ESTRUC_.pdf
2. Lourdes Lengo. (2013). Enzimas. 09-Feb-
2019, de UnidadesBio Sitio web:
http://www.lourdes-
luengo.org/unidadesbio/proteinas/practica
_enzimas.htm
3. EcuRed. Punto Isoélectrico Consultado el
09-Feb-2019. Disponible en:
https://www.ecured.cu/Punto_isoel%C3%A
9ctrico
4. BioModel. Craga eléctrica de las moléculas
en fución de su punto isoeléctrico y del pH.
Consultado el 09-Feb-2019. Disponible en:
http://biomodel.uah.es/tecnicas/carga/carg
a_pI_pH.htm
5. Mónica González. (10 de Octubre del 2010). https://quimica.laguia2000.com/conceptos-
Enzima Catalasa. 09-Feb-2019, de La Guía basicos/enzima-catalasa
Química Sitio web: