Taller enzimas (ejercicios) Paso 3.

De esta figura determinar la velocidad de sustrato transformado

QdA2, EIA, UV por minuto (V) para cada concentración de sustrato ([S]) en el tramo
1 Problemas para resolver lineal de cada curva. Estos valores serán las pendientes de las porciones
lineales y serán también las velocidades iniciales.
1) Los estudiantes de la EIA del curso de QdA realizaron un experimento Paso 4. Representar gráficamente [S] vs V
de laboratorio, adicionando una enzima a un sustrato (S) con el fin
de obtener uno producto. Midieron la velocidad de desaparición 2) Para una enzima que se comporta de acuerdo a la ecuación de
cada 30 segundos, durante tres minutos. En el experimento se Michaelis-Menten determinar cuánto debe aumentar la
adicionaron en seis tubos 1,5 µg de enzima (peso mol 30 000), concentración de sustrato para que la velocidad pase de 10 % de Vmax
posteriormente se colocó un mismo volumen de disolución de a 90 % de Vmax. Indicar adicionalmente, si la enzima presenta
sustrato a distintas concentraciones. Los resultados se presentan en cooperatividad positiva.
la siguiente Tabla. Se pide a los estudiantes determinar de forma
gráfica cuáles son las velocidades iniciales para cada tubo con 3) Calcular qué velocidad se obtendrá en una reacción enzimática si la
distinta concentración de sustrato velocidad máxima es igual a 100 y la concentración de sustrato es a)
10 Km, y b) Km/3. R/. a) 91 %; b) 25%.
Tiempo (min) Sustrato transformado (µmol)
0 1 2 3 4 5
S S S S S S 4) Para una reacción catalizada por una enzima hipotética se pide
0,5 0,0 0,49 0,71 1,10 1,36 1,45 responder: a) ¿Cuál es la velocidad máxima para dicha reacción?; b)
1 0,1 1,05 1,52 2,24 2,74 3,00 ¿Por qué la velocidad inicial permanece constante a una [S] mayor
1,5 0,2 1,66 2,36 3,48 - -
de 5E-4 M; c) ¿Cuál es la concentración de enzima libre para una [S]
2,0 0,3 2,23 3,18 - - -
de 5E-4 M?; d) ¿Cuál es la Km de la enzima?; e) Calcular la velocidad
2,5 0,4 2,81 4,00 - - -
inicial para [S]=1E-6 y [S]=1E-1; f) Calcular la concentración de
3 0,5 3,40 - - - -
producto formado en los cinco primeros minutos de reacción
Conc. Inicial
0,0 2,32 4,55 12,66 38,50 200,00 utilizando 10 ml de una disolución de sustrato 2E-3 M. Los datos de
(µmoles ml-1)
velocidades iniciales a varias concentraciones de sustrato se
Recomendaciones: observan en la siguiente tabla:
Paso 1. Corrija cada lectura sustrayendo (restando) el cambio aparente
[S] (moles/L) 5,0E-2 5,0E-3 5,0E-4 5,0E-5 5,0E-6 5,0E-7
en la disolución testigo (0S) en el tiempo correspondiente.
V (µmoles/min) 0,25 0,25 0,25 0,20 0,071 0,0096
Paso 2. Represente μmoles de sustrato transformado (eje Y) para cada
concentración frente al tiempo (eje X) (recomiendo hacerlo en Excel y 5) Existen diferentes formas de linealizar la ecuación de Michaelis-
luego imprimir y pegar en su taller). Trazar la mejor recta para cada serie Menten (ver tabla). a) Reordenar la ecuación de Michaelis-Menten
de puntos y sacar las ecuaciones de cada recta (y=mx+b)).
 para las diferentes linealizaciones. b) ¿Cuál es el significado de la
pendiente, la intersección con el eje de las y, y de la intersección con V (mM min-1)
[S] (mM)
el eje de las x para los diferentes gráficos? Sin inhibidor Inhibidor A
1,25 1,72 0,98
1/v en función de 1/[S] (Lineweaver-Burk) 1,67 2,04 1,17
v/[S] en función de v (Hanes) 2,50 2,63 1,47
[S]/v en función de [S] (Hanes-Woolf) 5,00 3,33 1,96
v en función de v/[S] (Eadie-Hofstee) 10,00 4,17 2,38

6) Se estudió la actividad de la enzima ureasa, que cataliza la reacción: 8) En un experimento se midió la tasa inicial de una reacción
CO(NH2)2 + H2O ↔ CO2 + 2NH2 en función de la concentración de enzimática, v, a varias concentraciones de substrato [S]. La
urea. Con los resultados que se presentan en la Tabla, determinar: concentración de la enzima es 10 nM. Empleado la ecuación de
¿Cuáles son los valores de Km y Vmáx para esta reacción? Lineweaver-Burk se graficó 1/v versus 1/[S] y se observó una línea
(Recomendación utilice el método de doble inversa o de recta en la cual el intercepto en y es 0,005 nM-1 s y la pendiente es
Lineweaver-Burk) R/. Km =105 mmoles·dm-3 y Vmáx =15,2 mmoles 200 s. ¿Cuál es el valor de KM y el de Vmax para esta reacción
urea consumidos·min-1·mg enzima-1. enzimática? ¿Cuál es el valor de kcat para esta enzima? ¿Determine
el coeficiente de especificidad? R/. KM = 40000 nM; Vmax = 200 nM·s-
1
Concentración de urea ; kcat = 20 s-1; α = 0,0005 s-1·nM-1.
30 60 100 150 250 400
(mmoles dm-3)
V inicial (mmoles urea 9) Para el problema anterior, en el caso de que se adicionen 30 mM de
3,37 5,53 7,42 8,94 10,70 12,04
consumidos min-1 mg enzima-1) un inhibidor, E, y se observe que el intercepto en y es 0,0065 nM-1·s
y la pendiente es 260 s. ¿Qué tipo de inhibición se observó? ¿Cuál es
7) Se estudia la cinética de una enzima en ausencia y presencia de un el valor de Ki para el inhibidor con esta enzima? R/. Ki = 100000 nM.
inhibidor A, a una concentración 10 mM. La velocidad inicial viene
dada en función de la concentración de sustrato. En la Tabla se 10) Para una reacción enzimática en presencia de un inhibidor
reportan los datos obtenidos. a) Determina Vmax y KS en ausencia y competitivo, la velocidad de reacción observada a una concentración
presencia del inhibidor; b) ¿Qué tipo de inhibición se produce?; c) de sustrato [S]i = 1,5E-3 M es igual a la velocidad de reacción sin el
Calcular la constante de disociación (Ki) de la reacción de inhibición. inhibidor a una concentración de sustrato [S]0 = 7,69E-5 M. Calcule
R/. Vmax = 5,13 mM·min-1; KS = 2,48 mM; Ki = 13,75 mM. la constante de inhibición, Ki, del inhibidor si su concentración [I] =
3,7E-4 M. R/. Ki = 2,0E-5 M