Misión del programa: “La formación de profesionales químicos que lideren el desarrollo, potencien la investigación

y apoyen el aprovechamiento de los recursos naturales del entorno mediante procesos científicos y tecnológicos”.

UNIVERSIDAD PEDAGÓGICA Y TECNOLÓGICA DE COLOMBIA

Laboratorio de Biotecnología
Compilador: Angélica María García T. PhD.

7. EXTRACCIÓN BÁSICA DE ADN EN TEJIDOS ANIMALES Y VEGETALES

Material a traer por parte del estudiante: cebolla cabezona fresca, espinacas, hígado de pollo,
fresas, banano, tomate y saliva, detergente lavavajillas (que no sea antimicrobiano), sal, zumo de
piña o papaya (o ablanda carnes), un colorante de cocina, vaso desechable, portaobjetos y
cubreobjetos, cuchillo, filtro de tela o filtro de café, guantes, papel de aluminio, tapabocas, jabón,
toalla (2, una para uso personal y otra para el trabajo práctico).

INTRODUCCIÓN
En las células eucariotas, el ADN está presente en el núcleo, así como en las mitocondrias y
cloroplastos. En procariotas, el ADN se encuentra en el citoplasma celular. La molécula de ADN es el
material soporte de los caracteres hereditarios de una especie y es transmitida a la progenie. El
bioquímico suizo Friedrich Miescher, fue el primero en descubrir la presencia de ácidos
asociados con las proteínas del núcleo celular. Al estudiarlas mejor, Miescher estableció que
dichas sustancias son bastante diferentes de las proteínas y de otros compuestos conocidos. La
unidad básica de un ácido nucleico es el nucleótido y cada nucleótido se compone de 3 partes: un
azúcar de 5 carbonos (la ribosa o la desoxirribosa), una base nitrogenada y un grupo fosfato.

Al efectuar la aislación de los ácidos nucleicos, es necesario considerar que éstos presentan su mayor
estabilidad y solubilidad en soluciones salinas. El ADN es insoluble en alcohol y soluciones diluídas de
NaCl pero soluble en soluciones concentradas de NaCl y puede disociarse de las proteínas con un
detergente o con fenol (el ARN es soluble en soluciones diluídas de NaCl, insoluble en alcohol y
también puede disociarse de las nucleoproteínas con un detergente o fenol).

Para comprobar que se aisló efectivamente ADN y/o ARN se recurre a la propiedad de las bases
nitrogenadas de absorber en la región de los 260 nm. Una manera de estimar la contaminación de
los ácidos nucleicos con proteínas es la relación A260 nm/A280 nm. Si esta razón es igual a 2 se
considera que la muestra tiene una pureza excelente; si esta razón se encuentra entre 2 y 1,6 se
considera una contaminación aceptable con proteínas y si es menor que 1,6 se considera una
contaminación no aceptable.

CONSULTA PREVIA A LA PRÁCTICA

a. Dibuje la estructura del ADN. Explique los componentes básicos de dicha estructura.
b. Dibuje el espectro de absorción del ADN. Cuáles son los componentes cromóforos del ADN?,
químicamente, a qué se debe la absorción en el ADN?
c. Cuál es la composición y función de los cromosomas?
d. Qué diferencias estructurales y funcionales existen entre los nucleótidos de ARN y ADN?
e. Qué clase de proteínas forman complejos con el ADN
f. Realice un diagrama de flujo de la práctica a realizar.

MATERIALES Y REACTIVOS
Materiales: 15 tubos de ensayo, vidrio de reloj, gradilla, espátula, agitador de vidrio, 2 vasos de
precipitados de 100 mL, vaso de precipitados de 400 mL, probeta, 1 pipetas de 10 mL, 1 pipetas de
5 mL, una pipeta de 1 mL, pipeteador, pinza para tubos de ensayo, embudo de vidrio, papel filtro,
plancha de calentamiento, licuadora, microscopio, espectrofotómetro.
Reactivos: agua destilada, etanol al 95% y frio, buffer citrato.

PROCEDIMIENTO
1. EXTRACCIÓN DEL ADN (tejidos)
1.1. Corte la zona central de la muestra problema en cuadros. Adicione suficiente cantidad de
agua destilada (aprox. 50 mL) y la punta de una espátula con sal común. Proceda a licuar a
máxima velocidad por un periodo de 15 segundos. Las muestras de tomate y banano no es
necesario el licuado, con maceración bastará.
1.2. Filtre el líquido obtenido con ayuda de un filtro de tela o un filtro de café. Anote la cantidad
de volumen obtenido.
1.3. Adicione 1/5 del volumen de la mezcla de detergente líquido para platos, agite suavemente y
deje reposar durante 10 minutos.
1.4. Pase la mezcla a tubos de ensayo y llénelos hasta 1/4 de su volumen total. Adicione un poco
de zumo de piña o papaya (aprox. 2 mL, según cantidad de muestra). Agite suavemente para
no romper el ADN presente.
1.5. A continuación, adicione lentamente y por las paredes del tubo de ensayo alcohol isopropílico
hasta que llegue a la mitad del volumen del tubo de ensayo (aprox 4 mL). Deje reposar 3
minutos o hasta la formación de una zona turbia entre las dos capas. El ADN estará presente
en la capa superior, la etanólica.
1.6. Con ayuda de un agitador de vidrio, extraiga el ADN. Si no es posible la extracción simple con
varilla de vidrio, es probable que haya sido brusco el proceso de agitación y el ADN este
“roto”; por lo tanto, centrifugue sus muestras durante 5 minutos a 3000 rpm.
2. EXTRACCION ADN (Saliva)
2.1. Enjuáguese La boca durante al menos 50 segundos, con aproximadamente 30-40 mL de agua
destilada; empleando un vaso desechable, deposite el material saliva-agua destilada.
2.2. Aparte, prepare 40 mL de solución saturada agua destilada-sal y adicione jabón lavaplatos
(aproximadamente 1/5 del volumen de agua salada).
2.3. Mezcle la mitad de cada uno de las tres mezclas y homogenice. Deje reposar durante un
minuto.
2.4. Continúe con los pasos 1.5 y 1.6 del numeral 1.
3. IDENTIFICACIÓN DEL ADN
3.1. Realice una observación microscópica de parte de la muestra obtenida. Dibuje o tome
fotografías de lo observado
3.2. Espectro de absorción del ADN. Disuelva parte de la muestra de ADN en 3 mL de buffer
citrato salino (buffer Citrato 0,015 M y NaCl 0,15 M, pH 7.0). Diluya una pequeña porción (el
valor de A260nm debe estar entre 0,5 y 1,0). Trazar el espectro de absorción entre los 240 y
320 nm. Determinar la razón A260/A280 y establezca el grado de pureza de la extracción.
3.3. Pureza del ADN. Determínela a partir de la relación A260nm/A280nm
3.4. Comparta los resultados obtenidos con los demás grupos de laboratorio.

RESULTADOS
Analice y discuta los resultados obtenidos incluyendo las correspondientes observaciones cualitativas,
preguntas e incluya la función física y/o química de los diferentes reactivos empleados. Presente sus
resultados de la forma más clara posible apoyándose en el uso de tablas, gráficos, etc. NO OLVIDE
ENTREGAR COPIA DE LA HOJA DE RESULTADOS AL PROFESOR. El informe debe incluir todas las
muestras biológicas trabajadas.

BIBLIOGRAFÍA
La presente práctica fue diseñada tomando como pauta base:
EDWARDS, A.M., GARCÍA, A.M., SOTO, M., FUENTEALBA, D. 2010. Prácticas de Laboratorio de Bioquímica. Pontificia
Universidad Católica de Chile, Facultad de Química, Programas de Química y Química y Farmacia. Santiago de Chile, Chile.
MIGUEZ, J.B.1997. Prácticas de bioquímica. Universidad Pedagógica y Tecnológica de Colombia, Facultad de Ciencias,
escuela de Química. Tunja, Colombia.
Textos de apoyo:
LEHNINGER, A., NELSON; D.; COX, M. 2004. Lehninger Principles of Biochemistry. Macmillan Higher Education, 4a ed.
VOET, D., VOET, J. 2002. Biochemistry. Wiley & Sons. 2ª ed. Canada.
BOHINSKI, R.C. 1991. Bioquímica. Addison-Wesley-Longman, 5ª ed. México D.F. México.
UNIVERSIDAD PEDAGÓGICA Y TECNOLÓGICA DE COLOMBIA
LABORATORIO BIOTECNOLOGÍA

HOJA DE RESULTADOS

7. EXTRACCIÓN BÁSICA DE ADN EN TEJIDOS ANIMALES Y VEGETALES

Nombres:___________________________________________________________________
Sección/grupo: ________________

1. Observación microscópica de ADN

Muestra Esquema/dibujo Comentarios generales

En el informe

2. Grado de pureza del ADN extraído

Espectro Absorbancia Absorbancia Grado de

Muestra
(240-320nm) 260 nm 280 nm pureza

En el informe

3. Observaciones adicionales: