TROMBOCITOPOYESIS

Dra. Arianna Pratti

Fac. Cs. Bioquímicas y Farmacéuticas.
UNR
MEGACARIOPOYESIS
Es el proceso por el cual una célula
progenitora hematopoyética se diferencia
en un gran megacariocito poliploide.

TROMBOPOYESIS
Es el proceso por el cual las plaquetas
son liberadas por el megacariocito.
 MEGACARIOCITOS
• Células altamente especializadas cuya función
es producir y liberar plaquetas a la circulación.

• Se diferencian a partir de una stem cell

hematopoyética pluripotente que reside
fundamentalmente en la médula ósea. Las Stem
cells pueden auto-renovarse o comprometerse
hacia un linaje celular específico.
 MEGACARIOCITOPOYESIS
• Precursor mieloide • CFU-GEMM
comprometido

• BFU-Meg: progenitor
• Precursores
comprometidos al temprano, alta capacidad
linaje proliferativa. CD34+/HLADR-
Megacariocítico
(cel. Pequeñas
identificadas por • CFU-Meg: progenitor más
anticuerpos) maduro CD34+/HLADR+

• PROMEGACARIOBLASTO

• MEGACARIOBLASTO
 MEGACARIOCITOPOYESIS

Duración 4 – 7 días
• Todos los precursores hematopoyéticos
expresan CD34 y CD41.
• El compromiso hacia el linaje
Megacariocítico se indica por la expresión
de CD61 (Gp IIIa) y elevada expresión de
CD41 (Gp IIb).
• Las células reconocibles al MO son
incapaces de auto-renovarse y se
mantienen gracias al pasaje continuo
de precursores del compartimiento de
células madres.
 TROMBOPOYESIS

ETAPAS EN LA MADURACIÓN DEL MEGACARIOCITO

 MEGACARIOPOYESIS

• El sello distintivo del desarrollo de los

megacariocitos es la formación de una célula
grande (~ 50-100 mm de diámetro) que
contiene un único núcleo grande,
multilobulado y poliploide.
• A diferencia de otras células, los
megacariocitos experimentan un ciclo celular
endomitótico durante el cual replican ADN
pero no sufren anafase o citocinesis
 ENDOMITOSIS
• Es un proceso único del MGK que consiste en
replicaciones múltiples del DNA sin división celular.
Durante la endomitosis, los cromosomas se replican
y la envoltura nuclear se rompe, se ensamblan los
husos pero nunca llegan a separarse. La célula
nunca entra en telofase ni citocinesis y la membrana
nuclear vuelve a formarse. En cada ciclo el material
nuclear se duplica: 4, 8, 16, 64, 128N, resultando
una célula multilobulada y POLIPLOIDE.
• Objetivo: Amplificación funcional de genes para
aumentar la síntesis de proteínas.
 CITOPLASMA
El citoplasma aumenta de tamaño, gana
granularidad, pierde basofilia y no se divide.

• Después de completar el proceso de endomitosis,

comienza un estadío de maduración en el cual el
citoplasma rápidamente se llena de proteínas
específicas, gránulos y organelas que finalmente
serán subdivididos y empaquetados en plaquetas.
Durante este estadío de maduración, el citoplasma
del megacariocito adquiere sus características
distintivas, incluyendo el desarrollo del sistema de
demarcación de membrana (SDM) y el ensamblaje
del sistema tubular denso.
• SDM funciona como una reserva de membrana
para la formacíón y extensión de las proplaquetas.
 Formación y expansión del SDM: modelo propuesto

Anita Eckly et al. Blood 2014;123:921-930

©2014 by American Society of Hematology

•MEGACARIOBLASTO: Núcleo grande arriñonado,
nucleolos y 2 sets de cromosomas (4N). Citoplasma
intensamente basófilo (gran cantidad de ribosomas), sin
granulaciones o muy escasas. 20 – 50 m de diámetro.
MEGACARIOBLASTO

Expresan GPIIb en
su superficie y el
receptor del factor
de von Willebrand
GP Ib/IX/V.
No forman
colonias, maduran
a megacariocito.
Reconocibles por
peroxidasa Plaq.
MEGACARIOBLASTO
MEGACARIOBLASTO
MEGACARIOBLASTO
PROMEGACARIOCITO:
Núcleo en forma de herradura ó muy escotado.
El citoplasma es menos basófilo a grisáceo y contiene
escasos gránulos azurófilos. 20 – 80 m de diámetro
PROMEGACARIOCITO:
PROMEGACARIOCITO
 MEGACARIOCITOS
• MEGACARIOCITO GRANULAR, NO
PLAQUETOGÉNICO: 70 - 100 micras, núcleo grande,
multilobulado. Citoplasma acidófilo. Numerosos
gránulos azurófilos. Alta síntesis proteica, alto número de
mitocrondrias, extensa expansión citop. Sistema de
demarcación de membrana (SDM) muy desarrollado.

• MEGACARIOCITO MADURO, PLAQUETOGÉNICO:

generalmente núcleo picnótico, abundantes gránulos
azurófilos, extenso sistema de demarcación (el cual
constituirá la membrana plaquetaria) que resulta de
invaginaciones en la membrana plasmática. Se observan
las plaquetas preformadas.
MEGACARIOCITO GRANULAR, NO
PLAQUETOGÉNICO
MEGACARIOCITO MADURO,
PLAQUETOGÉNICO
MEGACARIOCITO MADURO,
PLAQUETOGÉNICO
MEGACARIOCITO MADURO,
PLAQUETOGÉNICO
MEGACARIOCITO MADURO,
PLAQUETOGÉNICO
Cada
megacariocito
origina aprox.
1200
plaquetas. Una
vez finalizado
el proceso el
núcleo es
fagocitado por
el SMF
REGULACION DE LA TROMBOPOYESIS

Trombopoyetina.

• Glucoproteína 80-90 kd, producida principalmente

en el hígado y por células estromales en la MO.
• Estimula la producción de megacariocitos.
• Aumenta el índice de endomitosis.
• Estimula la maduración del megacariocito.
• Promueve la viabilidad, el crecimiento y estimula
la diferenciación.
• Previene la apoptosis.
• Eliminación de TPO: por unión de alta afinidad
sobre receptores plaquetarios y megacariociticos.
 REGULACION DE LA TROMBOPOYESIS

La maduración del MGK es determinada por los niveles de TPO proveniente de la sangre
 REGULACION DE LA TROMBOPOYESIS

• IL3, IL11, IL6 Promueven el crecimiento

de la CFU- Meg. Aumentan la producción
de plaquetas in vivo e in vitro

• Interferón alfa y beta

disminuyen el crecimiento de la CFU meg.
 PLAQUETAS
- Son fragmentos celulares,
carecen de núcleo.
- Derivan del citoplasma de
los MGK de médula ósea.
Diámetro: 2 – 3 micras.
Volumen: 7 - 9 fl
Forma lenticular en reposo.
Vida media en circulación:
aprox. 10 días.
concentración promedio:
150.000 – 400.000/mm3
 PLAQUETAS
• 2/3 partes de las plaquetas circulan
en sangre periférica, el 1/3 restante
queda retenido en el bazo
reservorio de plaquetas.
En caso de necesidad fisiológica se
liberan, no existe reservorio medular
de plaquetas
 PLAQUETAS
• Cada día un adulto produce aproximadamente
1011 plaquetas. Este nivel puede incrementarse
de 10 a 20 veces en momentos de necesidad.
• Una gran cantidad de plaquetas se consumen
día a día en la función de mantener la integridad
vascular. Un megacariocito produce
aproximadamente 1000 plaquetas por lo que se
calcula que 108 megacariocitos son generados
en la médula por día.
• El tiempo que transcurre desde el progenitor
megacariocítico hasta la liberación de plaquetas
a la circulación es 4 a 7 días.
 PLAQUETAS
Las cifras normales de las plaquetas se
mantienen gracias al aporte de :
• Trombocitopoyesis
• Consumo y destrucción
• Distribución entre el pool circulante y el
pool de secuestro en el bazo.(1/3).
 FORMACIÓN DE PLAQUETAS
3-SINTESIS. PROT
1-AMPLIFICACION PLAQUETARIAS
MK INMADURO

9-PLAQUETAS
4-REORDENAMIENTO
MICROTUBULOS

2-SINT. ORGANELAS

8-LIBERACION DE
PRO-PLAQUETAS 10-APOPTOSIS MK 5-FORMACION DE
PROPLAQUETAS

7-AMPLIFICACION
FINAL
6-TRANSPORTE DE
ORGANELAS
Formación de proplaquetas y plaquetas.
(microscopía electrónica)
 Formación de proplaquetas y plaquetas.

proplaquetas

plaquetas

MK

Microscopía de fluorescencia confocal de un megacariocito en cultivo

 Formación de proplaquetas y plaquetas.

verde: Tubulina
rojo: Actina
azul: DNA

Microscopía de fluorescencia confocal de un megacariocito en cultivo

haematologica | 2009; 94(6)
 Formación de proplaquetas y plaquetas.
(microscopía electrónica de barrido)

Extensión de proplaquetas en el interior de un sinusoide en la médula ósea

MGK migran desde el nicho osteoblástico de stem cells hacia el
nicho vascular
• La principal función plaquetaria es
mantener la integridad vascular y frenar el
sangrado.

• Para el desarrollo de esta función, la

superficie plaquetaria juega un rol crucial
de contacto, primero asegurando la
adhesión a los componentes del
subendotelio expuesto y luego
favoreciendo la agregación y formación
del trombo plaquetario.
 ESTRUCTURA
MEMBRANA PLASMATICA
Rol fundamental:
• mantenimiento de la integridad citoplasmática.
• mediador de las interacciones con proteínas vasculares y
plasmáticas.
• mediador de las interacciones intercelulares.
• interacción con los elementos del citoesqueleto.
• participa activamente en el proceso de endocitosis y
almacenamiento de proteínas plasmáticas en los gránulos de
secreción.
• Limita la superficie plaquetaria extendiendo hacia adentro
múltiples canales que dan origen al sistema canalicular
conectado a superficie (sistema canalicular abierto: SCA).
• Fosfolípidos: distribución asimétrica, los fosfolípidos aniónicos
(fosfatidilserina) están casi exclusivamente en la capa interna, los
neutros tienen una distribución más o menos uniforme.
 ESTRUCTURA
MEMBRANA PLASMÁTICA

Glicoproteínas de membrana:
• GP Ib-IX-V ADHESIÓN vWF
• GP IIb-IIIa (pool externo) AGREGACIÓN Fibrinóg.
y vWF
• GP VI Colágeno GP IIb IIIa
(Fibrinógeno y vWF)
• GP Ia-IIa
GP Ia IIa
(colágeno)
GP VI
GP
Ib-V-IX
(vWF)
MEMBRANA PLASMÁTICA
Receptores de activación:
- de ADP (P2Y1, P2Y12)
- de Trombina (PAR1, PAR4)
- de Tromboxano A2 (TP a/b)
- de Adrenalina (a2A-adrenérgico)

Woulfe DS, 2005

 ESTRUCTURA
CITOESQUELETO
Es responsable de la forma discoide de la plaqueta en reposo y
también del cambio de forma asociado con la activación
plaquetaria y la emisión de pseudópodos.

• malla densa de filamentos de ACTINA: Sist. Contráctil.

Su función está relacionada con los cambios de forma de la
plaqueta, el reordenamiento de complejos de GPs (Ib IX V) y
la formación de seudópodos.
• MICROTUBULOS  TUBULINA
Se disponen como una banda circunferencial por debajo de la
membrana plasmática. El anillo de microtúbulos tiene aprox.
100m de largo y está enrollado 8 a 12 veces en la periferia. Se
observa como una banda continua debajo de la membrana
plasmática en la sección ecuatorial y como cilindros abiertos
pequeños en los extremos en la sección transversal.
• ESPECTRINA
 Microtúbulos (MT) Función
Mantenimiento de la forma discoide de las plaquetas en reposo.

Durante el cambio de forma, los MT se contraen y centralizan las

organelas de secreción en la cercanía del sistema canalicular. En
paralelo, fragmentos de microtúbulos aparecen en la periferia celular
formando seudópodos.

En el MGK : Son los responsables de la elongación del citoesqueleto

para formar las pro-plaquetas. El extremo distal de cada pro-plaqueta
tiene un haz de MT en forma de gota que forman un bucle justo debajo
de la membrana plasmática. Los filamentos de actina son los
responsables de la ramificación de las pro-plaquetas.

transporte de membranas, organelas y gránulos a los extremos de las

pro-plaquetas en formación
Glicoproteínas de membrana y estructura de los componentes del
citoesqueleto dentro de las plaquetas
CITOESQUELETO
REORGANIZACIÖN DE MICROTÚBULOS EN LA FORMACIÖN DE PROPLAQUETAS
 ESTRUCTURA
• SISTEMA CANALICULAR ABIERTO (SCA)
Sistema de conductos conectados con la superficie
de la plaqueta formado a partir de invaginaciones de
la membrana plasmática que forman túneles hacia el
interior de la plaqueta. Gran reserva de membrana
para la emisión de seudópodos y el “spreading”.

• SISTEMA TUBULAR DENSO (STD)

Sistema cerrado de canales que deriva del retículo
endoplásmico del megacariocito. Puede secuestrar
Ca++ y liberarlo cuando las plaquetas son activadas.
 ESTRUCTURA
GRÁNULOS PLAQUETARIOS
• GRÁNULOS :
Fibrinógeno, Factor V,
Factor Plaquetario 4 (FP4),
Factor Von Willebrand (vWF),
 Tromboglobulina (Tr), PDGF.
Factor de crecimiento endotelio v.

• GRÁNULOS DENSOS (d):

ATP, ADP, Calcio, Serotonina.

• LIZOSOMAS:
En la membran de los gránulos alfa
Enzimas hidrolíticas hay Gp IIb/IIIa, P selectina
 ESTRUCTURA
GP IIb-IIIa GP Ib-IX-V

MP
SCA mitocondrias

STD
d
MICROTUBULOS
GLICOG  L
ESTRUCTURA
 Diagrama de las características estructurales
de la plaqueta en corte ecuatorial y transversal

Williams Hematology, 8° edic., cap. 114

 GRANULOS PLAQUETARIOS:
centralización durante la activación
• Es conveniente observar el frotis de sangre
periférica donde se evaluará número,
forma, tamaño y agregación plaquetaria.

MGG

HIALÓMERO CROMÓMERO
Macroplaqueta en circulación de sangre periférica teñida con MMG
Metabolismo Plaquetario
Mecanismo de amplificación de señal: Ca++ citop PLA2
-secreción de ADP por gránulos densos

-síntesis de TROMBOXANO A2

CO

PGG 2
PGH2
TXasa
TROMBOXANO A2/B2

TP

PLC

IP3 DAG

Ca 2+ PKC
Metabolismo Plaquetario
Respuesta plaquetaria a la injuria: hemostasia primaria
Iniciación: captura, adhesión, activación
Extensión: cohesión y secreción
Perpetuación: estabilización del trombo
 ADHESION

…forming a monolayer.
Liberación de Agonistas

• ADP y otros
activadores
son liberados
•Generación
de TXA2

ADP Thromboxane A2
AGREGACIÓN
 Secuencia

Adhesión Activación Agregación

 Fisiología Plaquetaria
• Adhesión: La plaqueta es capaz de reconocer la pared vascular dañada gracias
a sus receptores, los cuales se unen ppalmente al FvW (Gp IbIXV) y al colágeno
(Gp VI, Gp IaIIa) presentes en la matriz subendotelial. Activación
• Exposición en la membrana de FL de carga negativa (Fosfatidilserina)
• Cambio de forma: dependiendo del estímulo de activación, el reordenamiento
del citoesqueleto puede llevar a la formación de extensiones citoplasmáticas
anchas y planas que faciliten la adhesión o bien, si las plaquetas se activan en
fase fluida por la acción de agonistas solubles como ADP, TX y trombina, se
emitirán proyecciones largas y delgadas, óptimas para la interacción plaqueta-
plaqueta mediada por FI.
• Liberación del contenido de los gránulos: los gránulos se desplazan al centro,
rodeados por la espiral de microtúbulos, y son liberados en el SCA.
• A nivel metabólico comienza la síntesis de otro agonista fundamental, el TX, el
cual junto al ADP y la trombina constituyen los mecanismos de amplificación de
señal.
• Cambio de conformación de la GPIIbIIIa, aumenta la afinidad por sus ligandos,
la densidad en la membrana y como consecuencia la capacidad de las
plaquetas para interaccionar entre si. (Agregación)
• El trombo plaquetario se consolida por una malla de fibrina, que le otorga
resistencia mecánica para soportar el embate constante del flujo sanguíneo.
• Las células endoteliales intactas producen sustancias inhibidoras de la
activación plaquetaria, como PGI2 (prostaciclina) y NO (óxido nítrico).