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INDICE ................................................................................................................................................ i
ÍNDICE DE FIGURAS ......................................................................................................................iii
I. RESUMEN ..................................................................................................................................... 1
II. INTRODUCCIÓN ......................................................................................................................... 2
3.1 Fuentes de microorganismos ............................................................................................. 3
3.1.1 Aislamiento de microorganismos ..................................................................................... 3
3.1.1.1 Métodos generales ............................................................................................... 3
a) Diseminación en superficie ............................................................................................. 3
b) Por mezcla ......................................................................................................................... 4
3.1.1.2 Métodos especiales.............................................................................................. 5
3.1.2 Selección de microorganismos................................................................................... 5
3.1.3 Mantenimiento de microorganismos de interés. ............................................................ 6
a) Subcultivos ........................................................................................................................ 6
b) Mantenimiento bajo capa de aceite ............................................................................... 7
c) Congelación....................................................................................................................... 7
d) Liofilización ........................................................................................................................ 7
e) Preservación en celulosa ................................................................................................ 7
f) Cultivos en tierra ............................................................................................................... 8
3.2 Microorganismos de nivel industrial ........................................................................................ 8
3.2.1 Levadura .............................................................................................................................. 8
3.2.2 Hongos filamentosos ......................................................................................................... 9
3.2.2.1 Clasificación Taxonómica .......................................................................................... 9
a) Phylum Zygomycota....................................................................................................... 10
b) Phylum Ascomycota....................................................................................................... 10
c) Phylum Deuteromycetes ............................................................................................... 10
d) Phylum Basidiomycota .................................................................................................. 10
3.2.2.2 Morfología general .................................................................................................... 10
a) Hifas.................................................................................................................................. 10
b) Micelio .............................................................................................................................. 10
c) Esporas ............................................................................................................................ 11
3.2.3 Bacterias ............................................................................................................................ 11
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3.2.4 Microalgas ......................................................................................................................... 11
3.3 Fermentación o bioproceso .................................................................................................... 12
3.3.1 Fermentador ...................................................................................................................... 12
3.3.1.1 Fermentador aeróbico ............................................................................................. 13
3.3.1.2 Fermentador anaeróbico ......................................................................................... 13
3.3.2 Sustratos ............................................................................................................................ 15
3.4 Productos obtenidos por fermentación ................................................................................. 15
3.4.1 Diversidad de productos y su obtención ....................................................................... 15
3.4.2 Productos finales del metabolismo energético ............................................................ 16
3.4.3 Productos intermedios de metabolismo primario ........................................................ 16
3.4.4 Productos de metabolismo secundario ......................................................................... 16
IV. CONCLUSIONES ..................................................................................................................... 18
V. BIBLIOGRAFÍA ........................................................................................................................... 19
ii
ÍNDICE DE FIGURAS
iii
I. RESUMEN
1
II. INTRODUCCIÓN
2
III. REVISIÓN DE LITERATURA
a) Diseminación en superficie
Es el método más utilizado, para realizarlo se necesita un asa de siembra, la
cual debe calentarse al rojo vivo con ayuda de un mechero y enfriada cerca del
mismo para posteriormente tomar una muestra del microorganismo proveniente
del cultivo la cual será extendida sobre la superficie de la placa sin dañar el agar.
Dicha placa debe ser incubada a la temperatura adecuada y de forma invertida
para evitar la deposición del agua de condensación sobre el medio y no dificultar
el crecimiento de colonias aisladas (Metrix).
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Existen diferentes métodos de sembrado, los cuales pueden ser: agotamiento de
asa, depósito y posterior quemado, dilución previa en solución fisiológica,
extensión en superficie con espátula de Drigalski, entre otros.
Una vez sembrados los microorganismos y pasado el tiempo de incubación
requerido, las colonias aparecen sobre la superficie y si el sembrado se realizó de
forma correcta, estarán distribuidas uniformemente. De esta manera las colonias
podrán diferenciarse dependiendo de su forma, tamaño, color, textura, entre otras
características especiales.
b) Por mezcla
Es una técnica que tiene por ventaja el cálculo del número de bacterias
presentes en la muestra, al trabajar con exactitud. Para llevarla a cabo es
necesario realizar diluciones seriadas de la muestra y colocar el mismo volúmen
en diferentes tubos estériles. Como acto seguido se vierte medio de cultivo fundido
en el tubo con temperatura aproximada de 45°C, posteriormente se homogeniza el
contenido por rotación y es añadido a una caja Petri para enfriar y posteriormente
incubar a la temperatura adecuada (Metrix).
Otra forma de realizar ésta técnica consiste en agregar un volumen conocido de
muestra a una caja de Petri y a continuación añadir el medio de cultivo fundido y
atemperado, mezclando por rotación suave de la caja (Figura 1).
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3.1.3 Mantenimiento de microorganismos de interés.
a) Subcultivos
Consiste en el repique periódico del cultivo en un medio nutritivo fresco. El
intervalo de transferencia varía con cada microorganismo, debiendo considerarse
el medio adecuado para cada especie. Una vez desarrollados los cultivos se
mantienen a 4 °C durante lapsos comprendidos entre 15 días y 2 meses. Ésta
técnica tiene algunos inconvenientes, entre los cuales destacan: posibilidad de
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mutación con cada transferencia, riesgo de contaminación, alteraciones en el
medio de cultivo.
c) Congelación
La actividad metabólica de una célula es reducida considerablemente por
mantenimiento a muy baja temperatura, la congelación es una técnica de elección,
ya sea para cortos o largos períodos de tiempo. La técnica involucra el crecimiento
del cultivo hasta la fase estacionaria, debido a que en esta etapa las células son
más resistentes a los daños por congelación y descongelación.
También se aconseja utilizar una densidad celular elevada, debido a que, cuando
parte de las células se lisan se liberan sustancias crioprotectoras que aumentan el
porcentaje de células sobrevivientes. Las células a congelar pueden ser
resuspendidas directamente en un agente crioprotector o se puede agregar el
mismo como aditivo al medio de cultivo (Metrix). Hay estudios que coinciden en
señalar que una velocidad de congelación lenta y una rápida descongelación
rinden los mayores números de células viables.
d) Liofilización
Es considerado como el método más adecuado para la preservación de
microorganismos. Ésta técnica involucra el congelamiento de un cultivo seguido
por un secado bajo vacío, lo cual resulta en la sublimación de agua de la
suspensión celular. Tiene como ventaja que la mayoría de los organismos
sobreviven al secado. El medio utilizado para su realización es un factor
importante en el proceso. Al emplearse ésta metodología es necesario dar a las
células un tiempo de recuperación debido a que las células pueden recibir daños,
los cuales son reversibles y el tiempo requerido es en función del daño producido.
e) Preservación en celulosa
Método que consiste en la utilización de un soporte de papel para el
mantenimiento de células en condiciones de ausencia de agua es un
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procedimiento adecuado y sencillo, para conservar cepas. La técnica consiste en
embeber tiras de papel de filtro con una suspensión densa de organismos en
suero, glutamato de sodio u otro agente, las mismas son posteriormente
colocadas en tubos para su posterior secado bajo vacío.
f) Cultivos en tierra
La tierra estéril puede ser inoculada con un cultivo e incubada varios días para
inducir esporulación de bacilos aerobios y anaerobios. Una vez que la misma se
manifiesta, la tierra es secada con ayuda de un desecador y el cultivo mantenido
de esta forma en una atmósfera seca o en refrigerador.
A los microorganismos se los conoce sobre todo por las enfermedades que
causan a las personas, animales y plantas. Sin embargo, son esenciales para la
elaboración de alimentos, medicamentos y otros productos de interés industrial.
El uso de los microorganismos en la industria se debe a que los estos, al realizar
procesos de fermentación, liberan moléculas orgánicas al medio donde se
desarrollan, algunas de las cuales tienen utilidad para el hombre; es el caso del
ácido láctico (fermentación láctica) y el alcohol etílico y CO2 (fermentación
alcohólica) (Microorganismos de nivel industrial).
Entre los microorganismos útiles en la industria se destacan las levaduras, que
producen el alcohol para la elaboración del vino y el dióxido de carbono para
“levantar” la masa del pan, y las bacterias ácido lácticas, que aportan el ácido
láctico en los productos lácteos, cárnicos y vegetales fermentados. Siendo así, los
microorganismos que realizan fermentación alcohólica (levaduras) son utilizados
para la obtención del pan, vino, cerveza y otras bebidas alcohólicas; y los que
realizan fermentación láctica (bacterias y algunos hongos) son utilizados
industrialmente para la obtención del queso y otros productos lácteos
3.2.1 Levadura
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Las levaduras son de diverso tipo y existen en diversos hábitats, reproduciéndose
tanto sexual (mediante esporas) como asexualmente (por gemación o brotación).
En un medio nutricionalmente favorable, se produce una nueva camada de ellas
en tan sólo 90 minutos, ya que son organismos simples y eficaces. La
fermentación es el proceso que este tipo de hongos lleva a cabo para obtener
energía.
Son hongos formados por una serie de ramas tubulares llamadas hifas, el
conjunto de las cuales forman el micelio. Se reproducen por la formación de
esporas, las cuales pueden ser pigmentadas y le dan el color al hongo (Rafael San
Juan). Al centro de la colonia se ubican las hifas fértiles que dan origen a las
esporas, razón por la cual los hongos son más coloreados en esa zona. Se
caracterizan por presentar crecimiento rápido, tener reservorios naturales en el
suelo, plantas, animales y vegetales muertos, crecen a temperaturas de 25 – 30°C
y sus esporas o conidios son transportados por el aire, son normalmente inhalados
y presentan gran resistencia en el medio ambiente.
La mayoría de los hongos filamentosos de interés clínico y vegetal, tienen una
fase de reproducción sexuada (telomorfa), pero es su forma asexual (anamórfica)
la que casi siempre produce las enfermedades y es observada en las muestras
(Rafael San Juan).
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a) Phylum Zygomycota
Están caracterizados por un micelioaseptado y septos en la base de las
estructuras reproductoras o septos secundarios, forman micelio vegetativo de tipo
algodonoso. Presentan reproducción sexuada por formación de zigosporas y
reproducción asexuada por esporangiosporas. Ejemplo: Mucor, Rhyzopus, Absidia
(esporangiosporas) y Syncephalastrum (merosporas).
b) Phylum Ascomycota
Estos hongos se caracterizan por presentar filamentos tabicados, forman
esporas sexuales endógenas (ascosporas) contenidas en pequeños sacos
llamados ascos y esporas asexuadas exógenas (conidios). Ejemplo: Aspergillus,
Penicillium, algunas levaduras como Candida e Histoplasma y dermatofitos como
Microsporum y Trichophyton.
c) Phylum Deuteromycetes
Los Deuteromycetes u hongos imperfectos comprende hongos filamentosos
tabicados y levaduriformes que si bien pueden presentar reproducción sexuada
(solo algunas especies), la forma asexuada es la más importante ya que ésta
produce las enfermedades. Ejemplo: hongos patógenos (Aspergillus y Penicillium),
dermatofitos (Trichophyton y Microsporum) y levaduras patógenas (algunas
Cándidas).
d) Phylum Basidiomycota
Los Basidiomycetes son hongos que presentan filamentos tabicados y formación
de esporas sexuadas (basidiosporas) que se desarrollan en el extremo de células
en forma de escudo (basidios) Ejemplo: Cryptococcus y Trichosporum.
a) Hifas
Los hongos filamentosos están constituidos por una serie de ramas tubulares,
habitualmente aisladas y conservando su individualidad pero que permanecen
unidas por un tronco central, que se denominan hifas.
b) Micelio
Es el conjunto de desarrollo de un hongo (conjunto de hifas), pudiendo ser
visible macroscópicamente como una masa cremosa, algodonosa, vellosa, etc. El
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micelio puede ser de 2 tipos: el vegetativo que es aquél destinado a dar sostén,
protección y nutrición al hongo, y el reproductivo que es el conjunto de hifas
fértiles que nacen del micelio vegetativo pero que se diferencian biológica y
morfológicamente para las funciones de reproducción.
c) Esporas
Son células uni o plurinucleadas, de aspecto hialino o pigmentado (azul, verde,
amarillo, rojo, negro) y son éllas las que dan el color a las colonias o micelios.
Cuando se originan de forma sexuada (por fusión de gametos) se denominan
esporas y si su origen es de tipo asexuado (esporulación o fragmentación) se
llaman conidios.
La morfología de las esporas es bastante variable y características de cada
especie de hongo (Sevilla). Las esporas pueden ser: según forma (ovales,
elípticas, estrelladas, fusiformes, helicoidales, piriformes, etc) o según la
presentación de tabiques (amerospora, didimospora, fragmospora, dictiospora).
3.2.3 Bacterias
Entre las especies bacterianas de interés industrial están las bacterias del ácido
acético, Gluconobacter y Acetobacter que pueden convertir el etanol en ácido
acético. El género Bacillus es productor de antibióticos (gramicidina, bacitracina,
polimixina), proteasas e insecticidas. Del género Clostridium cabe destacar
Clostridium acetobutylicum que puede fermentar los azúcares originando acetona
y butanol (Microorganismos de nivel industrial). Las bacterias del ácido láctico
incluyen, entre otras, las especies de los
géneros Streptococcus y Lactobacillus que producen yogur. Corynebacterium
glutamicum es una importante fuente industrial de lisina. El olor característico a
tierra mojada se debe a compuestos volátiles (geosmina) producidos
por Streptomyces aunque su principal importancia radica en la producción de
antibióticos como anfotericina B, kanamicina, neomicina, estreptomicina,
3.2.4 Microalgas
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Microalgas y cianobacterias difieren en muchos aspectos, especialmente en que
las primeras son eucariotas y las segundas son procariotas, pero desde el punto
de vista de la ingeniería de procesos, lo relevante es que crecen usando luz como
energía y CO2 como fuente de carbono. Por supuesto, tienen requerimientos
nutricionales distintas, especialmente teniendo en cuenta que muchas
cianobacterias pueden fijar N2 atmosférico, mientras que las microalgas necesitan
especies nitrogenadas como nitrato, amonio o aminoácidos.
Sin embargo, el objetivo es hacerlas crecer a la máxima velocidad y productividad,
diseñando sistemas para que siempre estén saturadas de nutrientes inorgánicos y
así crezcan limitadas por luz, que es el recurso escaso y caro. Por tanto,
diseñaremos de la misma forma los fotobiorreactores tanto para microalgas como
para cianobacterias, siendo ambas son fotoautótrofas. Existen microalgas
heterótrofas que se pueden tratar como cualquier otro microorganismo. No
necesitan un foto-biorreactor para crecer (Sevilla).
3.3.1 Fermentador
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3.3.1.1 Fermentador aeróbico
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contenido del tanque. No obstante en muchas fermentaciones anaerobias
requieren una fase inicial de crecimiento aeróbico (Fermentaciones Industriales).
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emplean en la elaboración de alimentos, como ciertas cepas de Penicillum, que le
otorgan las propiedades tan características a los quesos del tipo Roquefort y
Camembert (Microorganismos útiles en la industria).
Además de la industria alimenticia, hay otras industrias que se benefician de los
productos de los microorganismos, entre ellas, la farmacéutica. Hay bacterias que
producen una variada gama de antibióticos, como ciertas cepas del género
Streptomyces (estreptomicina, tetraciclina, eritromicina), y también hongos
filamentosos, como Penicillium, del cual se obtiene la penicilina (Microorganismos
útiles en la industria).
Los metabolitos secundarios como aquellos que no son indispensables para las
funciones vitales del microorganismo, a diferencia de los metabolitos primarios,
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aunque tal afirmación se encuentre actualmente en revisión. Frecuentemente los
precursores específicos para la biosíntesis de estos productos son obtenidos por
modificación de metabolitos primarios y estos precursores suelen ser limitantes de
la biosíntesis (Microorganismos útiles en la industria). Pertenecen a este grupo los
antibióticos, las toxinas, los alcaloides y las giberelinas.
La característica de algunas enzimas del metabolismo secundario no poseen alta
especificidad por el sustrato. Por último, la mayoría de los productos de este grupo
comparten la propiedad de formarse cuando los microorganismos crecen a bajos
valores de velocidad. Se cree que una de las causas sería el fenómeno conocido
como represión catabólica ya comentado, por el cual estaría reprimida la
biosíntesis de las enzimas asociadas al metabolismo secundario cuando el
crecimiento ocurre a valores de velocidad altos, mientras que dejaría de reprimirse
a valores de velocidad bajos (Microorganismos de nivel industrial).
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IV. CONCLUSIONES
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V. BIBLIOGRAFÍA
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