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INTRODUCCIÓN
Las tinciones hematológicas son un conjunto de procesos que conducen a la coloración de las
estructuras que componen las células sanguíneas. Esto tiene por objeto el aumentar el contraste
entre esas estructuras y el medio que las rodea, y permite por tanto que las células sean
visualizadas microscópicamente con mayor facilidad.
Objetivo
Fundamentos
Podemos definir el frotis sanguíneo, o extensión sanguínea, como una fina película de sangre
extendida sobre un portaobjetos, de modo que las células sanguíneas estén dispuestas en una
capa. La finalidad de la extensión sanguínea es la observación al microscopio óptico de las células
presentes en la muestra.
Las extensiones sanguíneas se pueden realizar de forma manual o de forma automática. En esta
práctica se utiliza la técnica manual del portaobjetos, también llamada técnica de los dos
portaobjetos.
Además, una buena extensión sanguínea presenta tres zonas claramente diferenciadas:
Cabeza: Es la zona inicial de la extensión. Si atendemos a las características que debe presentar un
frotis sanguíneo ideal, la cabeza será la zona con mayor grosor. De hecho, los hematíes pueden
estar formando más de una capa.
Cuerpo: Es la zona intermedia de la extensión sanguínea y la más adecuada para el estudio de las
células. Existe una adecuada proporción de leucocitos en esta zona.
Cola: Es la zona final del frotis. En ella los hematíes se disponen en forma de mosaico, deformados,
y homogéneamente coloreados. Los leucocitos dispuestos en esta zona suelen ser los más grandes
(monocitos y granulocitos).
Precauciones de bioseguridad
La manipulación inapropiada puede convertirse en una fuente de riesgo biológico para las
personas que están en contacto o para el medio ambiente. Utilizar los elementos de protección
personal necesarios para evitar exposición con riesgo biológico, de acuerdo con la fuente de la
muestra.
Guantes.
Bata.
Contenedores para especímenes, a prueba de fugas y de fácil sellamiento.
No refundar agujas.
Disponer y utilizar adecuadamente el contenedor para cortos punzantes.
Material
Portaobjetos.
Portaobjeto esmerilado.
Pipeta Pasteur.
Muestra de sangre anti coagulada con EDTA.
Algodón
Alcohol al 70%
Técnica del portaobjetos
Se pipetea una pequeña cantidad de sangre, utilizando una pipeta Pasteur, procedente del
tubo con la muestra.
Colocamos una gota, de pequeña cantidad de sangre, en un extremo del portaobjetos.
Se coloca encima el portaobjetos esmerilado con un ángulo de 30-45º. Lo deslizamos
hasta que el extremo que contacta con el porta, tome contacto, a su vez, con la gota de
sangre.
Movemos ligeramente, de un lado a otro, el portaobjetos esmerilado para que la gota de
sangre se extienda bien en su extremo.
Arrastramos el extremo del portaobjetos esmerilado por la superficie del portaobjetos
horizontal para extender la sangre en una fina capa que conformará el frotis sanguíneo.
Debemos levantarlo antes de llegar al final del extremo del portaobjetos.
El secado del frotis es a temperatura ambiente y en posición horizontal.
Resultados
Frotis sanguíneo
Observaciones:
Nos encontramos muchos portaobjetos sucios y con grasa, por lo que algunas extensiones
tuvieron que ser desechadas por ese motivo.
Las primeras extensiones salieron muy largas y con mucha celularidad debido a que
poníamos una gota de sangre demasiado grande. Es decir, con mucha cantidad de sangre.
Una vez que nos acostumbramos a colocar la cantidad justa de sangre, nos encontramos
con el problema de usar una angulación muy grande con el portaobjetos esmerilado. El
resultado era un frotis sanguíneo corto y grueso.
La colocación de los dedos es fundamental para que no nos molesten durante la
realización de la técnica y para que el portaobjetos no se mueva.
La limpieza de los portaobjetos es muy importante para evitar encontrarnos grasa y
suciedad en futuros usos.
II.- TINCIÓN DEL FROTIS SANGUÍNEO
Objetivos
Realizar una tinción de las células blancas presentes en un frotis de sangre mediante la técnica de
tinción de Wright.
Identificar los tipos de células sanguíneas presentes en la muestra de sangre una vez teñida.
Fundamento
Esta coloración es conocida como policromática debido a que produce varios colores. Es una
solución de alcohol metílico de un colorante ácido (eosina) y otro básico (azul de metileno). El
alcohol sirve como un fijador del frotis sanguíneo al portaobjetos. El amortiguador, que consiste
en una solución tamponada, mantiene el pH del colorante y favorece la mejor absorción por los
diferentes componentes celulares.
Una tinción de Romanowsky consiste en azul de metileno y sus productos de oxidación, así como
eosina, la acción combinada de estos colorantes producen el efecto Romanowsky y da una
coloración púrpura a los núcleos de los leucocitos y a los gránulos neutrofílicos y de color rosado a
los eritrocitos.
Materiales
Frotis sanguíneo
Colorante Wright
Solución tamponada
Aceite de inmersión
Microscopio
Procedimiento:
Colocar el frotis secado al aire sobre una rejilla o cubeta de tinción con la sangre hacia
arriba
Cubrir completamente el portaobjetos con el colorante de Wright gota a gota.
Dejarlo que permanezca en el frotis aproximadamente de 5-8 minutos, para fijar los
glóbulos sanguíneos.
El colorante deberá cubrir completamente el portaobjetos, pero no debe derramarse por
los bordes.
Agregar directamente al colorante un volumen igual de agua tamponada, para evitar la
coloración débil.
Esperar la formación de brillo metálico
Dejar actuar de 10-15 minutos.
Lavar con agua en el chorro cuidadosamente hasta que la extensión presente un aspecto
rosado al examinarlo a simple vista.
1: plaquetas
2: eritrocitos
3: eosinófilo
4: neutrófilo
5: linfocito
Análisis de observaciones:
Los monocitos se observan más grandes que las otras células, su núcleo se pinta de color
violeta.
Los neutrófilos se observan con 2, 3 hasta 4 núcleos, segmentados por hilos de cromatina.
Los eosinófilos se observan bilobulados y en su citoplasma se observan granulaciones de
color naranja.
Los linfocitos se observan con la mayor parte del núcleo que ocupa casi todo el citoplasma
Los eritrocitos se observan de color rosados, con una pequeña claridad central.
Las plaquetas son pequeñas y de color moradas.
Para realizar la lectura de células sanguíneas se debe realizar entre el cuerpo y la cola
donde existe mayor distribución de los leucocitos.
Las plaquetas se leen en la cola del frotis, donde los glóbulos rojos se hayan bien
separados uno de otro.
Si la tinción es demasiado azul, posiblemente, esto esté causado por: ungrosor excesivo de la
extensión, o un pH alto del colorante.
LOS LEUCOCITOS:
GRANULOCITOS: son los que poseen gránulos en su citoplasma, los gránulos se encargan de
liberar sustancias de tipo proteico para segregar sustancias de tipo proteico.
AGRANULOCITOS: Son los que carecen de gránulos en su citoplasma. En estos encontramos dos
tipos:
Basófilo Linfocitos
http://articulosdemedicina.com/biometria-hematica
http://tinciones-hematologicas.html
http://es.org/Tinción_de_Wright
http://www.bio-optic.com/introduccion/Teoria_de_la_Microscopia.pdf
http://articulosdemedicina.com/biometria-hematica
http://html.tincioneshematologicas.html
http://org.Tinción_de_Wright
http://www.bio-optic.com/introduccion/Teoria_de_la_Microscopia.pdf
https://celulassanguineas.wordpress.com/about/