ESPECTROSCOPIA UV-VIS

1. OBJETIVO GENERAL:

 Determinar el contenido de PO43- de una muestra problema.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS:

 Realizar una curva patrón de concentraciones conocidas de PO43- mediante

espectroscopia.
 Identificar las partes y el uso correcto de un espectrofotómetro para la determinación
analítica de compuestos.

2. FUNDAMENTO TEORICO
ESPECTROSCOPIA UV-VIS
La interacción de la luz con diversos colores permite muchas posibilidades de efectuar
mediciones cualitativas y cuantitativas. Muchas reacciones químicas generan colores
vividos que, además de ser fascinantes, con frecuencia dan la información suficiente para
efectuar un análisis. Sin embargo, los cambios de color pueden ser sutiles, o
verdaderamente difícil de distinguir debido a las limitaciones de nuestros ojos.
La luz visible forma parte del espectro electromagnético, los rayos en uno de sus extremos
y sus longitudes de onda son del orden de 10-14 m; y en el otro extremo están las ondas de
radio, cuyas longitudes son de 3*103 m o mayores. Nuestros ojos detectan radicaciones en
una parte bastante pequeña del espectro que abarca desde aproximadamente 400 nm hasta
750 nm.

Regiones UV y visible del espectro

electromagnético. (Tomado de:
Seamus.P.J.Higson: Química analítica)

En una celda transparente sencilla, por donde pasa un haz de luz incidente, de intensidad I0.
Algo de luz se absorbe y en consecuencia de la celda sale un haz de luz transmitida de
menor intensidad I. La luz es una forma de energía y, por consiguiente, la intensidad de un
rayo de luz es una medida de la potencia (energía por unidad de tiempo), por lo que las
unidades J*s-1 o watts. La absorbancia A, se define como log10 de la relación de las
intensidades de luz incidente y luz transmitida.
𝐼𝑜
𝐴 = 𝐿𝑜𝑔10( 𝐼 )

Absorción de la luz por una muestra

(Tomado de: Seamus.P.J.Higson:
Química analítica)

LEY DE LAMBERT -BEER

La cantidad de radiación monocromática que absorbe una muestra obedece a la ley de
Beer-Bouguer-Lambert. La radiación incidente,

Absorción de la radiación. P0 _ potencia de la radiación incidente, P _ potencia

de la radiación transmitida,c _ concentración, b _distancia recorrida por la radiación.

con potencia radiante P0, atraviesa una solución de una sustancia absorbente con
concentración c recorriendo una trayectoria b (la longitud de la celda donde se encuentra
la muestra); de aquí sale como radiación emergente (o transmitida), la cual posee una
potencia radiante P. Esta potencia radiante es la cantidad que miden los detectores espectro
métricos.
La colisión de un fotón de energía adecuada con la molécula adecuada resulta en absorción
de la luz. En consecuencia, si hay mayor cantidad de moléculas en la trayectoria del rayo de
luz, habrá mayor probabilidad de que ocurra una colisión, y en consecuencia, de que haya
absorción.
Esta ley relaciona la absorción de la mayor parte de especies moleculares con la
concentración [ ]: Cn, l: longitud de paso óptico, y la absorción molar E.
𝐴 = 𝐸𝐶𝑛𝑙
La ley de Beer se expresa a veces en función de la transmitancia T (transparencia,
coeficiente de transmisión o factor de transmisión), siendo T=1/A. Existen diversas
maneras de definir las unidades de E y l. Las absortividades molares, en consecuencia, se
indican para compuestos individuales a determinada longitud de onda y longitud de paso
óptico específicos. La mayor parte de los compuestos absorberán radiación a longitudes de
onda específicas, y es lo que causa su color. Si el compuesto es colorido, habrá al menos
una o hasta varias longitudes de onda que tienen absorbancia máxima.

DETERMINACIÓN DE FOSFORO. MÉTODO DEL CLORURO ESTAÑOSO

El ion fosfato de combina con el molibdato de amonio en condiciones ácidas formando un
complejo conocido como fosfomolibdato de amonio, según la siguiente reacción:
𝑃𝑂43− + 12(𝑁𝐻4)𝑀𝑜𝑂4 + 24𝐻 + → (𝑁𝐻4)3𝑃𝑂4.12𝑀𝑜𝑂3 + 21𝑁𝐻 + + 12𝐻2𝑂
El molibdato contenido en el o-fosfato es reducido para formar un complejo de color azul
proporcional a la cantidad del fosforo presente.
(𝑁𝐻4)3𝑃𝑂4.12𝑀𝑜𝑂3 + 𝑆𝑛2+ → 𝐴𝑧𝑢𝑙 𝑑𝑒 𝑚𝑜𝑙𝑖𝑏𝑑𝑒𝑛𝑜 + 𝑆𝑛4+

Independientemente de la región del espectro implicada, los instrumentos que miden la

absorbancia o transmitancia se componen de cinco elementos básicos:
 Una fuente estable de energía.
 Un selector de longitud de onda para aislar una determinada región de longitudes de
onda de la fuente.
 Celdas para la muestra.
 Un detector de radiación o transductor para convertir la energía radiante recibida en
una señal medible (generalmente eléctrica).
 Un dispositivo de lectura.

Partes de un espectrofotómetro (Tomado de: https://espectrofotometro.online/)

 3. MATERIALES Y REACTIVOS

Materiales:
- 7 balones aforados de 100mL
- Pipeta volumétrica 1mL, 5mL, 20mL
- Pipeta graduada 0.1mL
- Pera
- Espectrofotómetro
- Erlenmeyer 200mL

Reactivos:
- Molibdato de amonio
- Cloruro estañoso
- (50, 10, 0.01, 0.05, 0.10, 0.30, 0.50, 1.00) P-PO4-3 mg/L)

4. PREPARACION DE SOLUCIONES
A partir de esta solución, preparamos una con una concentración 10mg/L usando la formula
C1V1=C2V2
𝑚𝑔 𝑚𝑔
50 ∗ 𝑉1 = 10 ∗ 0.1𝐿
𝐿 𝐿
1000𝑚𝐿
𝑉1 = 0.02𝐿 ∗ = 20𝑚𝐿
1𝐿
5.1.2. Soluciones para la curva patrón
Usando la misma fórmula C1V1=C2V2 hallamos los mililitros de nuestra solución 10mg/L
que necesitamos aforar a 100mL para obtener las concentraciones de (0.01, 0.05, 0.10, 0.30,
0.50, 1.00) mg/L y seguimos el procedimiento descrito anteriormente.

Solución (No) Concentración buscada de Volumen necesario de

P-PO4(-3) (mg/L) 10mg/L (mL)
1 0.01 0.1
2 0.05 0.5
3 0.1 1
4 0.3 3
5 0.5 5
6 1 10
 5. PROCEDIMIENTO

5.1.Preparación de la curva patrón:

5.1.1. Solución patrón de fosfato

Pese 109.7 mg de KH2PO4 Disuelva en agua Concentración de

anhidro que ha sido secado destilada, afore a la solución:
previamente en la estufa durante 500mL. 50mg de P-PO4-3
una hora a 110°C. /L.

A partir de esta solución, preparamos una con una concentración 10mg/L usando la formula
C1V1=C2V2

De la solución 50mg/L Aforamos a los Concentración de

tomamos 20 mL y los 100mL. la solución:
pasamos a un balón 10mg de P-PO4-3
aforado de 100mL. /L.

5.1.3. Preparación de los reactivos:

5.1.3.1.Molibdato de amonio

Disuelva 25gr de Adicione 280mL de Mezcle con la

heptamolibdato de amonio H2SO4 concentrado solución de
(NH4)6Mo7O24.4H20 en a 400 de agua molibdato y diluya
175mL de agua destilada. destilada y enfrié. hasta 1 litro.

5.1.3.2.Cloruro estañoso

Disuelva 2.5gr de cloruro

estañoso SnCl2 2H2O en
100 mL de glicerol.
5.1.4. Espectro de absorción de la solución
Prepare 100mL de patrón del
patrón 0.3 ppm, adicione 4mL
del reactivo de molibdato de
amonio y 0.5mL de cloruro
estañoso, deje en reposo 10
minutos.
5.1.5. Curva de calibración:
Ajuste el equipo a la
longitud de onda
seleccionada y calibre el
cero del equipo con agua
destilada.
Ajuste los datos de la
curva por mínimos
cuadrados y determine
todos los parámetros
estadísticos de la curva.
5.1.6. Análisis de la muestra problema:
Tome 100mL de muestra
problema.
Determine la
concentración de P en la
curva. Determine el error
del resultado.
Tome un espectro de la
solución entre 200 y 1000nm Tome esta como
(Absorbancia vs longitud de la longitud de
onda) y determine la longitud onda de trabajo.
de onda a la cual se da la
máxima absorbancia.
Tome 100mL de cada uno de los patrones, incluyendo
uno de agua destilada que corresponde al blanco de los
reactivos, adicione 4mL del reactivo de molibdato de
amonio y 0,5mL de cloruro estañoso, deje en reposo 10
minutos y mida el color en el espectrofotómetro da la
longitud de onda seleccionada.
Trace una curva de
absorbancia vs
concentración.
Adicione 4mL del reactivo de molibdato, 0.5mL
de reactivo de cloruro estañoso. La velocidad
con que aparece el color y la intensidad de este
dependen de la temperatura de la solución final.
Es por esto por lo que la muestra, los reactivos y
los patrones deben mantenerse entre 20°C y
30°C, sin diferencias superiores a 2°C.
Al cabo de 10 minutos,
pero antes de 12 mida la
absorbancia a la longitud
de onda seleccionada.
6. CALCULOS Y RESULTADO

6.1. Tabla de datos

6.1.2. Tabla [ ] P-PO4(-3) (mg/L) vs Absorbancia

[ ]P-PO4(-3) (mg/L) Absorbancia

0,01 0,016
0,05 0,063
0,1 0,147
0,3 0,291
0,5 0,576
1 1,015
Muestra 0,483

6.1.3. Grafica [ ] P-PO4(-3) (mg/L) vs Absorbancia

Absorbancia
1.2
y = 1,0103x + 0,0213
1
R² = 0,9935
Absorbancia

0.8

0.6

0.4

0.2

0
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2
[ ]P-PO4(-3) (mg/L)

6.1.4. Concentración [ ] P-PO4(-3) (mg/L) en la muestra problema

𝑦 = 1.0103𝑥 + 0.0213
𝑦 − 0.0213
=𝑥
1.0103
 0.483 − 0.0213
=𝑥
1.0103

0.456 [ ] P − PO4(−3) (mg/L) = 𝑥

6.1.5. Error en la determinación de la concentración de la muestra problema.

Muestra problema Teórica= 0.5[ ] P-PO4(-3) (mg/L)

(0.5 − 0.456)[ ]P − PO4(−3) (mg/L)

%𝐸𝑟𝑟𝑜𝑟 = ∗ 100 = 8.8%
0.5[ ] P − PO4(−3) (mg/L)

7. ANALISIS DE RESULTADOS
- Para la calibración del espectrómetro, es necesario encontrar el espectro de
absorción de la solución, usando una solución de 0.3 ppm para que el equipo inicie
en absorbancia 0.
- La adición de cloruro estañoso permite la formación de fosfomolibdato generando un
color característico azul que varía por la concentración en cada solución. La adición
de cloruro estañoso debe lo mas cuidadosa posible, ya que un exceso de este genera
errores en la practica y debe volverse a realizar.
- La cantidad de tiempo después de añadir el cloruro estañoso debe ser medido y no
debe sobrepasar los 12 minutos ni ser menor a 10 minutos al momento de llevar la
muestra al espectrómetro, esto debido a que antes de los 10 minutos el fosforo
presente en la muestra todavía se encuentra en reacción con el estaño y no es su
máxima absorción de luz posible, después de los 12 minutos la reacción se regresa y
el fosforo pierde la capacidad de absorber poco a poco.
CONCLUSIONES
- Para poder realizar correctamente la espectrofotometría es necesario saber el rango
del espectro electromagnético en que el compuesto a analizar absorbe mayor cantidad
de radiación, esto se consigue analizando un blanco y luego una solución con la
muestra recorriendo todas las longitudes de onda, siendo el de mayor absorbancia el
rango a utilizar para la realización de la curva de calibración.
- Los estándares o patrones de calibración para un análisis fotométrico se deben
aproximar tanto como sea posible a la composición final de las muestras reales y
deben abarcar un intervalo razonable de concentraciones del analito.
- El método estandarizado se fundamenta en aprovechar las potencialidades de la
espectroscopia visible. Esta combinación proporciona una técnica fiable y rápida.
BIBLIOGRAFIA