See discussions, stats, and author profiles for this publication at: https://www.researchgate.

net/publication/283908718

Extracción y precipitación de las proteínas de la Lemna obscura.

Article · January 2006

CITATION READS

1 579

1 author:

Alexis Ferrer
University of Zulia
72 PUBLICATIONS   517 CITATIONS   

SEE PROFILE

Some of the authors of this publication are also working on these related projects:

Diseño y Simulación Rigurosa de Secadores Agroindustriales View project

All content following this page was uploaded by Alexis Ferrer on 11 February 2016.

The user has requested enhancement of the downloaded file.

CIENCIA 14 (Número Especial2), 331 - 340, 2006
Maracaibo, Venezuela

Extracción y precipitación de las proteínas

de la Lemna obscura
Alexis Ferrer1 *, Lauris Urribarrí1, José Petersl, Orlaidy González1, Maria Terán 1,
David Chacón 1 y Alfonso Bravo 2
'Laboratorio de Instrumentación Analítica, Departamento de Química, Facultad Experimental
2
de Ciencias. Laboratorio de Investigación y Desarrollo en Nutrición, Escuela de Nutrición y
Dietética, Facultad de Medicina. La Universidad del Zulia. Maracaibo, Venezuela
Recibido: 11-09-06 Acep tado: 14-12-06

Resumen
En este trabajo se establecieron las condiciones de extracción y precipitación de las proteí-
nas de la Lemna obscura, para obtener concentrados proteicos con aplicación potencial en die-
tas avícolas y porcinas. La Lemna obscura, es una planta acuática, que se caracteriza por un
crecimiento acelerado y un alto valor nutricional, constituyendo un gran potencial como fuente
proteica. Para la obtención del concentrado proteico fue necesario extraer las proteínas del ma-
terial fibroso y precipitarlas cerca de su punto isoeléctrico. La Lemna obscura se recolectó en la
Punta Don Alons o. Barranquitas, Edo. Zulla, se secó , molió y luego se sometió a extracciones
con soluciones a diferentes pH (soluciones de hidróxido de calcio a pH 7 y 10, y agua destilada a
pH 5 ,56). relación sólido/liquido 1:15, diferentes temperaturas (30, 45, 60, 75°C) y tiempo de
extracción d e 45 rnin. Se realizaron las precipitaciones a partir de extractos obtenidos en condi-
ciones óptimas de extracción, variando la temperatura en baño maria a 50, 65 y 80°C y ajustan-
do el pH a 3 y 3 ,5 con HCL O, 1 M. Las proteínas precipitadas se separaron por crornatografia de
permeación de gel (GPC) con Sephadex G- 100 y las fracciones obtenidas se sometieron a elec-
troforesis en gel de poliacrilamida con dodecil sulfato de sodio (SDS-PAGE) determinándose
sus masas molares. Se establecieron como condiciones óptimas de extracción: agua destilada
corno agente extractan te (pH 5,56). temperatura de 45°C, relación sólido /liquido 1: 15 y tiempo
de 45 min. condiciones para las que se obtuvo el máximo rendimiento , 40o/o. El máximo rendi -
miento de precipitación de proteínas para la Lemna obscura fue de 42% a pH 3,5 y 50°C. La pro-
teína más abundante tuvo una masa molar similar a la de la enzima Rubisco. El concentrado
obtenido presentó un contenido proteico de 36%.
Palabras clave: Extracción; Lemna obscura; precipitación; proteínas.

* Autor para la correspondencia. E-mail : aferrerl@cantv.net

Scientific Journal from the Experimental Faculty of Sciences,

at La Universidad del Zulia Volume 14 (Número Especial2), 2006
332 Extracción y precipitación de las proteínas de la Lemna obscura

Protein extraction and precipitation from Lemna obscura

Abstract
Extraction and precipitation conditions for the proteins of Lemna obscura were esta-
blished in this work in arder to obtain protein concentrates with potential application in poultry
and swine.diets. Lemna obscura is an aquatic plant with an accelerated growth and high nutri-
tional value, constituting a great potential as a protein source. It was necessary to extract the
proteins from the fibrous material and precipitate them near their isoelectric point. Lemna obs-
cura was collected at Punta Don Alonso, Barranquitas in Zulla State, dried, milled and then
subjected to extraction at different pH val u es (calcium hydroxide solutions at pH 7 and 1O, and
distilled water at pH 5. 56), 1: 15 solid/liquid ratio, different temperatures (30, 45, 60 and 75°C)
and 45 min as extraction time. Protein precipitations from protein extracts obtained at optimal
conditions were carried out at 50, 65 and 80°C and adjusting the pH at 3 and 3.5 with 0. 1M
HCL Precipitated proteins were separated by gel permeation chromatography (GPC) with
Sephadex G-100 and the resulting fractions were subjected to sodium dodecyl sulfate- polya-
crilamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) determining their molar masses. Optimal extraction
conditions were: distilled water as the extraction agent at pH 5.56, 45°C, 1: 15 solid/liquid ratio
and 45 min, which produced the highest yield. 40%. The highest protein precipitation yield was
42% at pH 3,5 and 50°C. The most abundant protein hada molar mass similar to Rubisco. The
. protein content of the concentrate was 36%.
Key words: Extraction; Lemna obscur~ precipitation; protein.

Introducción racaibo, es necesario secarla para garanti-

Dado el crecimiento abundante de la
Lemna obscura en el Lago de Maracaibo
(entre 4 y 9% de la superficie del lago) en el
último año, los investigadores se han abo-
cado a estudiar posibles alternativas para
su aprovechamiento. Actualmente, se suele
esperar que la Lemna se acerque a las cos-
tas del estrecho del Lago de Maracaibo para
facilitar su recolección. Como resultado,
cada cierto tiempo se dispone de una gran
cantidad de biomasa con problemas de dis-
posición. Existen muchas evidencias en la
literatura del uso directo de Lemna sp. con
alto contenido proteico (30%) en la alimen-
tación de cerdos y aves ( l-3) con excelentes
resultados. Por lo general. la Lemna sp. se
suele cultivar en fincas con pequeños es-
tanques y se recoge cada dos días para ali-
mentar un número reducido de cerdos o
aves sin necesidad de deshidratarse. En el
caso de la Lemna recogida en el Lago de Ma-
zar su conservación si se quiere usar como
alimento. El uso de esta planta por
animales de estómago simple, tiene el po-
tencial de sustituir la harina de soya impor-
tada que es la fuente proteica más impor-
tante utilizada en los alimentos balancea-
dos. Esta propuesta requiere que la bioma-
sa tenga un nivel muy bajo de fibras (4), ya
que éstas dificultan la disponibilidad de las
proteínas y limitan la absorción de otros
nutrientes por parte de los animales. Dadas
estas premisas, el objetivo principal de este
trabajo fue establecer las condiciones de
extracción y precipitación de las proteínas
de la Lemna obscura, para obtener concen-
trados proteicos con posible aplicación en
dietas avícolas y porcinas, así como iniciar
los estudios de fraccionamiento. De esta
manera se estaría dando uso a este nuevo
recurso presente en la Cuenca del Lago de
Maracaibo, que pudiera incrementar la
oferta de alimentos en el futuro.

Scientific Journal from the Experimental Faculty of Sciences,

at La Universidad del Zulia Volurne 14 (Número Especial2), 2006
A. Ferrer et al. 1 Ciencia Vol. 14, Número Especial2 (2006) 331 - 340
Materiales y Métodos
Material
La Lemna obscura se recolectó en la
Punta Don Alonso, Barranquitas, Edo. Zu-
lia. El material se secó en un homo de con-
vección forzada a 60°C por 72 h. Luego se
molió hasta un tamaño de partícula de
lmm, en un equipo de laboratorio.
Caracterización de la biomasa
A las muestras se les determinó el con-
tenido de humedad (5). proteína cruda por el
método de Kjeldahl y el contenido de celulo-
sa, hemicelulosa y lignina por el método de
Goering y Van Soest (6).
Extracción de proteínas
Para las extracciones se siguió el pro-
cedimiento planteado por Urribarri y col. ,
(7,8). Se utilizaron 2 g de muestra en base
seca para las extracciones por triplicado,
usando como agente extractante solucio-
nes de hidróxido de calcio. Se realizaron en-
sayos preliminares utilizando diferentes
valores de pH inicial del agente extractante
(10 , 11, 12 y 12,6). relación sólido/líquido
( 1: 1 O y 1: 15) y diferentes tiempos de extrac-
ción (5, 10, 20, 30, 45 y 60 min) para selec-
cionar la relación sólido/líquido y el tiempo
de extracción adecuados. Una vez seleccio-
nados estos parámetros, se realizaron ex-
tracciones con soluciones de hidróxido de
calcio a pH 7 y 1O y agua destilada (pH
5 ,56). a una relación sólido/ /liquido 1:15,
diferentes temperaturas (30, 45, 60, 75°C)
y un tiempo de extracción de 45 min. Poste-
riormente, se les determinó proteína solu-
ble (por duplicado) a los extractos por el mé-
todo de Lowry (9). previa construcción de la
curva de calibración, utilizando para medir
la absorbancia un Espectrofotómetro UV-
visible Cary 50 (Varían Associates INC , Ca-
lifornia, USA) a una longitud de onda de
741,9 nm. Se calculó el porcentaje de rendi-
miento como el cociente de los gramos de
proteína soluble extraída y los gramos de
proteína cruda inicial por cien.
Scientific Joumal from the Experimental Faculty of Sciences,
at La Universidad del Zulla Volume 14 (Número Especial2), 2006
333
Determinación del punto isoélectrico
de las proteínas
Para la determinación del punto isoé-
lectrico de la proteínas se construyó un gra-
diente de pH (2,0- 6 ,5) a partir de alícuotas
de 1O mL de solución proteica ajus tando el
pH con una solución de HCl O, 1 N en inter-
valos de 0,5 a temperatura ambiente. Luego
se centrifugaron a 6880g durante 10 minu-
tos. Se tomaron alícuotas de 1 mL del sobre-
nadan te de cada uno de los tubos y se les de-
terminó proteína soluble por el método de
Lowry. Con los valores de absorbancia obte-
nidos se estimó por diferencia la cantidad de
proteínas que precipitó. Se confirmó la pro-
teína precipitada pesando el precipitado ob-
tenido y determinándose el contenido de
proteína cruda por el método Kjeldahl.
Precipitación de proteínas
Se siguió la técnica reportada por Urri-
barrí y col. (7). Se agregaron alícuotas de 10
mL del extracto prot eico en erlenmeyers de
lOO mL, se ajustó el pH cercano al punto
isoeléctrico de las proteínas (pH 3 y 3,5) con
una solución de HCL O, 1 N. Los erlenmeyers
se colocaron en baño maria a temperaturas
de 50, 65 y 80°C durante 30 min. Una vez
cumplido el tiempo de precipitación se cen-
trifugaron a 10.000 rpm a 10°C por 10 min
en una Centrifuga Centra NTMP4R (Interna-
cional Equipment Company, Nedham
Heights. Massachussets, USA). separando
así la proteína precipitada del sobrenadan-
te. Finalmente se determinó la proteína so-
luble a los sobrenadantes por el método de
Lowry modificado. La proteína precipitada
se determinó por diferencia entre la proteína
del extracto respectivo y la del sobrenadan-
te . El porcentaje de rendimiento de precipi-
tación se calculó como el cociente entre la
proteína precipitada y la proteína soluble en
el extracto.
Fraccionamiento de las proteínas
La resolución de las proteínas se reali-
zó por cromatografía preparativa de Exclu-
sión Molecular, en una columna de 1O cm de
334
longitud por 1 cm de diámetro. Se usó como
soporte Sephadex G-100 de tamaño de par-
tícula 20-50 m y como eluyente una solu-
ción amortiguadora de fosfato pH 7,0. El vo-
lumen de exclusión molecular se estimó con
una solución de Blue Dextran. A cada frac-
ción eluida se le monitoreó la absorbancia a
280 nm en un Espectrofotómetro UV-Visi-
ble. Posteriormente se graficó absorbancia
vs el número de fracciones eón la finalidad
de determinar los grupos de proteínas pre-
sentes. Para la determinación de la masa
molar aparente de las proteínas (o polipépti-
dos en el caso de las proteínas con estructu-
ra cuaternaria) se utilizó un equipo de elec-
troforesis (mini-cámara EC 120 Mini Vertical
Gel System) con un soporte discontinuo de
gel de poliacrilamida. La resolución de las
muestras se efectuó en presencia de dodecil
sulfato de sodio (SDS). Se utilizaron marca-
dores de pesos moleculares (Sigma
123H9458, ST. Louis. USA). Se utilizó una
fuente de poder marca SHANDON, modelo
Vokan 400. Se siguió el método propuesto
por Laemmli (10). Se utilizaron varias pro-
teínas para la estandarización. Además de
la precipitación termoácida (calentamiento
en el pi) se realizó una precipitación por sa-
lado (salting out) agregando una solución
saturada de sulfato de amonio. Seguida-
mente se centrifugó a 10,000 rpm durante
10 min a4°C. Luego se dializó con una mem-
brana de poro de 3500 Da contra agua desti-
lada por 24 horas y se determinó la caneen-
tración de proteínas por el método de Lowrv.
La comparación de los resultados entre la
precipitación termoácida (pi) y por salado
informa sobre la eficiencia de la precipita-
ción. ya que por salado precipitan práctica-
mente todas las proteínas presentes en el
sobrenadante.
Se realizaron varias experiencias de ex-
tracción y precipitación de proteínas en con-
diciones óptimas. Los concentrados se pre-
pararon por liofilización. A todos se les de-
terminó proteína cruda por micro~ Kjeldahl.
Scientific Journal from the Experímental Faculty of Sciences,
at La Universidad del Zulia Volume 14 (Número Especial2), 2006
Extracción y precipitación de las proteínas de la Lemna obscura
Resultados y Discusión
El contenido de humedad inicial de la
muestra fue de 93%. Una vez sometida a se-
cado , el contenido de humedad bajó a
5,30%. Los contenidos de proteína cruda,
celulosa, hemicelulosa y lignina en base
seca (b.s.) fueron 15; 17; 18,4; y 2,4%, res-
pectivamente. Se ha encontrado que el con-
tenido proteico de la Lemna sp. en el lago es
muy variable, dependiendo de la zona y del
tiempo de recolección (edad de la planta),
encontrándose desde valores altos, 31 o/o,
hasta muy bajos, 6% (J. E. Rincón, comuni-
cación personal). El valor de 15% de proteí-
nas obtenido e~ este trabajo, está alrededor
del valor promedio observado en muestras
de diferentes sitios en el lago. Por lo tanto, el
reporte de contenido proteicos hasta 45%
( 11) puede ser una quimera en las condicio-
nes del Lago de Maracaibo. Lo que ha sido
una constante es un contenido elevado de fi-
bra en todos los casos. El contenido global
de celulosa. hemicelulosa y lignina, alcanzó
un valor de 37,8% en base seca, que es un
valor muy alto, nada comparable con el con-
tenido de fibra de la Lemna que se cultiva en
estanques y se recoge cada dos días
(5,7-16,2%) (11). El contenido de fibras está
muy por encima del recomendado para die-
tas de aves (<4%) (12) y de cerdos (10- 15%)
(13). Extraer la proteína y presentarla en un
concentrado con un nivel bajo de fibra se
hace imperativo, si se quiere utilizar la Lem-
na del Lago de Maracaibo en grandes pro-
porciones en la alimentación de animales de
estómago simple.
En ensayos preliminares se seleccio-
naron el tiempo de extracción y la relación
sólido/líquido de la solución extractante.
En la Tabla 1 se observa que los rendimien-
tos de extracción máximos se obtuvieron a
45 y 60 minutos. Aunque el rendimiento a
60 minutos fue más alto, no tuvo diferen-
cias significativas (p>0,05) con respecto al
obtenido a 45 minutos, por lo que se tomó
este último para el resto de las pruebas.
A. Ferrer et al. 1 Ciencia Vol.l4, Número Especial2 (2006) 331 - 340
Tabla 1
Efecto del tiempo sobre el rendimiento
de extracción de las proteínas de la Lemna sp.
a 30°C, pH 10 y relación S/L 1:15.
Tiempo Rendimiento de
(min) extracción
(%)
5 31,34 a
10 32,72 a
20 34,73 b
30 34,78 b
45 36,60 be
60 38 e
Letras distintas corresponden a valores con diferencias
significativas (p<O,OS).
Llama la atención que la diferencia entre el
rendimiento a 5 minutos con respecto al de
60 minutos es apenas del 20%, indicando
que el efecto del tiempo es leve.
Por otra parte, en la Figura 1 se mues-
tra el efecto del pH y la relación sólido/líqui-
do sobre el rendimiento de extracción de las
proteínas. Se hizo evidente que el rendi-
miento a la relación S/L de 1:15 fue siempre
s~perior al de 1:10. No se evaluaron relacio-
nes con mayor volumen de extractante por
consideraciones de costo. También s~ ob-
servó que la diferencia de pH no ejerció nin-
gún efecto en el rendimiento de extracción.
Este resultado es diferente al encontrado en
gramíneas, donde es necesario alcanzar va-
lores de pH iguales o mayores de 10 para ex-
traer las proteínas. El uso de valores muy al-
calinos de pH obedece a producir cargas ne-
gativas que produzcan repulsión entre las
moléculas de proteínas que faciliten-su so-
lubilización y extracción. El pi de las proteí-
nas en las gramíneas está alrededor de 4,8 .
Si en el caso de la lemna no es necesario uti-
lizar valores tan alcalinos de pH, el pi de sus
proteínas debe ser inferior a 4,8. El extrac-
tante representa un costo en el proceso, por
lo tanto, a medida que el valor del pH de ex-
Scientific Joumal from the Experimental Faculty of Sciences,
at La Universidad del Zulia Volume 14 (Número Especial2), 2006
335
tracción esté más cercano a la neutralidad el
proceso tendrá menor costo.
El efecto de la temperatura sobre el
rendimiento de extracción de las proteínas
de la Lemna obscura se muestra en la Figura
2. Se observa en dicha figura que al aumen-
tar la temperatura de extracción de 30 a
45°C, el rendimiento de extracción de las
proteínas aumenta de 32 a 40%, valor que
se mantiene casi invariable a 60 y 75°C
(p>0,05), por lo que se seleccionó 45°C como
la temperatura óptima de extracción.
La Tabla 2 muestra el rendimiento de
extracción de proteínas al variar el pH de la
solución extractante a 45°C, relación sóli-
do /líquido 1: 15 y tiempo de 45 min.
Se observa que un aumento en el pH por
encima del pH del agua destilada con hidró-
xido de calcio no ejerce influencia en el rendi-
miento de extracción. Este comportamiento
es diferente al de otras fuentes de proteínas
como gramíneas y leguminosas (7).
La Figura 3 presenta los resultados de
la determinación del punto isoélectrico de
las proteínas, mostrando una típica curva
de pi entre pH 2 ,5 y 6,5. con un máximo a
3 ,5 , que representaría el punto isoeléctrico.
Es decir, por encima y por debajo del pi las
proteínas tienen mayor solubilidad. El pre-
cipitado a pH 3 también es rico en proteínas.
Es importante destacar que también se ob-
servaron precipitados abundantes a pH 2 y
a pH 2,5. Sin embargo, en estos casos preci-
pitó una cantidad apreciable de hemicelulo-
sa y lignina, lo que le resta calidad al precipi-
tado proteico. Lo único que puede explicar
que la cantidad de proteína a pH 2 sea ma-
yor que a pH 2,5 (y cercana a la obtenida a
pH 3,5) es que la precipitación extra de ligni-
na y hemicelulosa por el p H más ácido
arrastre compuestos nitrogen ados. En base
a los resultados obtenidos. se tomaron los
valores de pH 3 y 3.5 para realizar la precipi-
tación de las proteínas con calor. Un valor de
pi igual a 3,5 es más bajo que el de las pro-
teínas de las hojas de gramíneas y legumi-
nosas, que está alrededor de 4 ,8 (14). Los
336 Extracción y precipitación de las proteínas de la Lemna obscura

40
35 -
~ 30
Bt: 25
Ql
20
E
=et: 15
Ql
a:: 10
5
o
10 11 12 12,6
pH

mSiL 1:10 oS/L 1:15

Figura l. Rendimiento de extracción de las proteínas de la Lemna obscura a 30°C a diferentes pH y rela-
ción sólido / líquido por un tiempo de 45 min.

;JU

45
40
~ 35
o 30
e:
.!!! 25
.s-o 20
t:
Ql 15
a::
10
5
o
30 45 60 75
Temperatura (°C)

Figura 2. Efecto de la temperatura sobre el rendimiento de extracción de las proteínas de la Lemna obscura
a pH 10, relación sólido / líquido 1:15 (solución de hidróxido de calcio) y tiempo de 45 min.

valores relativamente bajos del punto isoé- máximo del 40%. Este resultado coincide
lectrico explican la precipitación a un pH de con la extracción de nitrógeno de Lemna sp.
5,56 d el agua destilada. Dicho pH está sufi- en un tiempo de 90 min (15).
cientemente alejado del punto isoélectrico
Es evidente que una gran parte de la
de las proteínas como para garantizar que
proteína de la Lemna se encuentra asociada
los grupos carboxilos de los aminoácidos se
químicamente a la pared celular o a organe-
encuentren como carboxilatos, de modo que
los, ya que la extracción solo llegó a 40%.
exista repulsión de cargas negativas entre
Para eliminar las barreras fisicoquímicas
las proteínas, facilitando su movilidad y por
que impiden la extracción de las proteínas
lo tanto, su extracción. Por otro lado, el utili-
de la Lemna, ésta tendría que someterse a
zar solo agua destilada representa un aho -
pretratamientos fisico-químicos que dismi-
rro de reactivos. Por lo tanto, las proteínas
nuyan la cristalinidad de la celulosa, solubi-
de la Lemna obscura son extraíbles con agua
licen parcialmente a la lignina y a la hemice-
destilada a 45°C , 45 min y relación sólido /lí-
lulosa, y desacetilen a la hemicelulosa, en el
quido 1:15, alcanzándose un rendimiento

Scientific Joumal from the Experimental Faculty of Sciences,

at La Universidad del Zulia Volume 14 (Número Especial2), 2006
A. Ferrer et al. 1 Ciencia Vol. 14, Número Especial2 (2006) 331-340 337

Tabla 2
Rendimiento de extracción de proteínas a diferentes valores de pH de la solución extractante.
Temperatura= 45°C, relación sólido/líquido= 1:15 y tiempo= 45 min.

pH Concentración de proteína soluble Rendimiento de extracción

(%)
--------------------------~~/mU
5,56 3217,8 40,2 ± 2,4
7 3247,4 40,3 ± 1,8
10 3181,4 39,8 ± 2,9

35

30

~ 25
o
"E., 20
·e 15
.,
"t:l
r:::
0:: 10

o
2 2,5 3 3.5 4 4 ,5 5 5,5 6 6,5
pH

Figura 3. Rendimiento de precipitación de las proteínas de la Lemna obscura a diferentes valores de pH

para la determinación del punto isoeléctrico.

caso de que exista este tipo de grupos en la
hemicelulosa de la lemna.
La Figura 4 muestra la influencia de la
temperatura sobre el rendimiento de preci-
pitación de proteínas de la Lemna obscura a
pH·s cercanos al punto isoeléctrico . Los ex-
perimentos se realizaron a pH 3 y 3.5. Se ob-
serva que la temperatura entre 50 y 80°C no
tuvo un efecto significativo (p>0,05) debido a
que el rendimiento para cualquiera de los
valores de pH se mantuvo casi invariable en
el rango de temperatura estudiado. No obs-
tante, se observa un aumento al comparar
los resultados con el rendimiento obtenido
en la prueba de la determinación d el pi la
cual se realizó a temperatura ambiente
(25°C) y que se incluyó en la figura. Dicho
aumento se atribuye a desnaturalización de
las proteínas por el calor aplicado . La preci-
pitación a pH 3,5 fue superior en un 13.5% a
la obtenida a pH 3, lo cual concuerda con lo
observado en la prueba de la determinación
del pi. De acuerdo a los resultados obteni-
dos, las proteínas de la Lemna obscura son
precipitables a pH ácido (pH=3,5) y tempera-
tura de 50°C , aJcanzándose un valor máxi-
mo de rendimiento de 42%.
Al tomar en cuenta de manera conjun-
ta la extracción y la precipitación de las pro-
teínas de la Lemna., se obtiene una recupe-
ración total d e proteína verdadera de 16,8%.
Este valor se considera elevado comparado
con la recuperación de proteínas de follajes
de leguminosas y gramíneas sometidas a ex-
tracción en condiciones más drá sticas de pH
y temperatura (7, 16, 17). El concentrado
proteico obtenido presentó una concentra-
ción de proteína cruda de 36%. Es impor-
tante resaltar que este contenido correspon-
de a proteína verdadera, ya que el método de

Scientific Joumal from the Experimental Faculty of Sciences,

at La Universidad del Zulia Volume 14 (Número Especial2), 2006
338 Extracción y precipitación de las proteínas de la Lemna obscura

45

40
o~

.Se 35
Gl
li:llpH 3
.E opH 3,5
'ij 30
e
Gl
a::
25

20
25 50 65 80
0
Temperatura ( C)

Figura 4. Rendimiento de precipitación de las proteínas de la Lemna obscura a diferentes temperaturas y

pH.

análisis utilizado mide polipéptidos con de que la precipitación en el método termoá-

masa molar superior a 3500 Da. Es posible
optimizar la selectividad del método de pre-
cipitación para elevar la concentración de
proteínas hasta 46-48%, valor típico de la
harina de soya.
Se conoce muy poco de las proteínas de
la Lemna sp. El estudio de las mismas re-
quiere el uso de técnicas clásicas de fraccio-
namiento molecular tales como la cromato-
grafia preparativa de exclusión molecular e
intercambio iónico y electroforesis en gel de
poliacrilamida, ambas basadas en la resolu-
ción de mezclas complejas de polipéptidos,
en función del tamaño y cargas de las proteí-
nas. La Figura 5 muestra varias fracciones
de masas molares distintas obtenidas de
proteínas prec ipitadas con calentamiento
en el punt o isoeléctrico, aunque sobresale
una fracción d e elevada masa molar.
Cuando los extractos se precipitaron
con el método del salado (Figura 6), se obser-
va un gran pico (proteína en abundancia) de
elevada masa molar que coincide aproxima-
damente c on el gran pico mostrado en la Fi-
gura 5. El resto de las proteínas está en baja
concentración y son de menor masa molar.
Si se observa el valor de la absorbancia de
ambos picos se concluye que hay mucha
mayor precipitación en el método del salado,
lo cual se esperaba. No se muestra evidencia
cido haya sido selectiva, sino que fue de me-
nor eficiencia. En la precipitación termoáci-
da (Figura 5) puede ocurrir que las proteínas
de alto peso molecular se hidrolicen parcial-
mente o que ocurra un desdoblamiento de
proteínas con estructura cuaternaria, típica
de enzimas, disminuyendo la masa molar de
las proteínas fraccionadas. Si ésto ocurre,
aumentarla la susceptibilidad de dichas
proteínas a la hidrólisis enzimática, y por lo
tanto aumentarla su digestibilidad. El méto-
do termoácido es fácil de industrializar
mientras que la precipitación con sal es más
que todo de carácter analítico.
En general se puede decir que no se ob-
serva gran diversidad en las fracciones pro-
teicas de la Lemna obscura. Cuando se ex-
traen proteínas de follaje de plantas supe-
riores como gramíneas, leguminosas y tu-
bérculos se observa un gran número de frac-
ciones.
La Figura 7 muestra el perfil electroforé-
tico de patrones moleculares SIGMA y proteí-
nas de Lerrma sp. La elución electroforética
de las proteínas de la Lemna precipitadas por
calentamiento en el pi mostró dos bandas de-
finidas cercanas de masas molares aproxi-
madamente de 66 y 70 KD correspondientes
al primer pico eluído por cromatografia de ex-
clusión molecular (Figura 5). La aparición de

Scientific Joumal from the Experimental Faculty of Sciences,

at La Universidad del Zulia Volume 14 (Número Especial2), 2006
A . Ferrer et al. 1 Ciencia Vol. 14, Número Especial2 (2006) 331-340 339

0.050

E
S:
0,040

0,030
1~ ·······················¡

1
e
ce
N 1 1
ui 0,020
.e
~
< 1
1
0 ,010 1
1
1
0,000
o 5 10 15 20

Número de Fracciones

Figura 5. Fraccionamiento por cromatografía de exclusión molecular en Sephadex G-100 de las

proteínas de la Lemna obscura precipitadas con calentamiento en el punto isoeléctrico.

0,16 - -- - -- - - - - - - - - -- .
0 ,14- ~
il
!i
0,12
E 0,1
1\
! .
S:
~ 0,08
~ 0,06-
0,04
0 ,02 ,
o
o 5 10 15 20
Número de fracciones

Figura 6. Fraccionamiento por cromatografía de exclusión molecular en Sephadex G-100 de las

proteínas de la Lemna obscura precipitadas con el método del salado.

bandas irregulares no definidas de fragmen- tan la fracción predominante de las proteí-

tos pequeños (posiblemente hidrolizadas) en
el orden de los 14 y 15 KD corresponde al
resto de las proteínas eluídas por exclusión
molecular, lo cual es coherente con el cro-
matograma mostrado en la Figura 5.
La masa molar de las proteínas más
abundantes está en el orden de la masa mo-
lar de la enzima Rubisco, responsable de la
fotosíntesis, y la que suele estar en mayor
proporción en las plantas verdes (alrededor
de un 50%). De acuerdo a los resultados de
esta investigación, estas bandas represen-
nas de la Lemna.
Conclusión
De este trabajo se concluye que es posi-
ble obtener concentrados de alto tenor pro-
teico de la Lemna obscura, los cuales tienen
un gran potencial para la alimentación de
animales de estómago simple.
Agradecimiento
Al ICLAM, por financiar el proyecto. Al
Dr. José Elí Rincón , del Laboratorio de Con-
taminación Acuática de la Facultad Experi-

Scientific Journal from the Experimental Faculty of Sciences,

at La Universidad del Zulia Volume 14 (Número Especial2), 2006
 340
Pm
Albúmina (66 KD)
- 8.
f3 - Caseína (24
Km
k-Caseína (19 KD)
--
a -Lactoalbúmina (14 KD) - ....·- - -
Figura 7. Perfil electroforético de las proteínas.
Pozo 1: patrones SIGMA. Pozo 2: pro-
teínas de Lemna obscura.
mental de Ciencias de la Universidad del Zu-
lia, por su gran contribución en la selección
y recolección de las muestras.
Referencias Bibliográficas
l. GARCÍAM.D ., MOUNETY. Rev CompProd
Porc 3: 1-7, 1996.
2. KHAN M .J .. STEINGRASS H. , DROCHNER
W. J Agríe Sci 29: 317-324. 2002.
3. GONZÁLEZ R. . PONCE J .. FEBRERO L.
ROMERO 0 ., ESTRADA O . Monográfico
de Acuicultura. REDVET. 5 : 1-6. 2004.
4 . JANSENW., CARRÉ B. Influence offiberon
digestibility of poultry feeds. W. Haresign
and D.J. Cole (editors). Recent Advances
in Animal Nutrition. Butterworths (Lon-
don), pp. 71 -86, 1985.
5. COVENIN 1156- 79. Alimentos para ani-
males. Determinación de humedad. Vene-
zuela. 1983.
6. GOERlNG H.K., VAN SOEST P.J. Forage fi-
ber analysis (apparatus, reagents. proce-
Scientific Joumal from the Experimental Faculty of Sciences,
at La Universidad del Zulia Volurne 14 (Número Especial2), 2006
View publication stats
Extracción y precipitación de las proteínas de la Lemna obscura
M dures , and sorne applications) . Agríe
Handbook No. 379. ARS-USA, Washing-
ton, D.C. (USA) , pp. 8, 1970.
7. URRlBARRÍ L., FERRERA., COUNAA. Rev
Fac Agron (LUZ) 21: 268-279, 2004.
URRlBARRÍ L. , FERRER A. , COLINA A.
Appl Biochem Biotechnoll21/124: 721-
730,2005.
9. WWRY 0. , ROSEBROUGH N ., FARRA. ,
10.
11.
RANDALL R. .Anal Chem 16: 190-210 ,
1965.
LAEMLI U.K. Nature 227: 680-685, 1970.
LANDOLT E. , KANDELER R. Biosystematic
investigations in the Jamüy of dw::kweeds
(Lemnaceae} , vol. 4 . The family of Lemna-
ceae- a monographic study. Vol 2. Verof-
fentlichunger des Geobotanischem Insti-
tutes ETH, Stiftung Rübel, Zürich (Zwitzer-
2 land) , pp. 21 -26, 1987.
12. NATIONAL RESEARCH COUNCIL. Nutrient
requirements ofpoultry. 9th revised edition.
Subcommittee on Poultry Nutrition, Com-
mittee on Animal Nutrition , National Re-
search Council. Board on Agriculture. The
National Academies Press. Washington ,
D .C (USA), pp. 19-34, 1994.
13. NATIONAL RESEARCH COUNCIL. Nutrient
requirements of swine. 1Oth revised edition.
Subcommittee on Swine Nutrition, Com-
mittee on Animal Nutrition, National Re-
search Council. Board on Agriculture . The
National Academies Press. Washington,
D.C (USA). p 8 , 1998.
14. CASSAB G. Plant Mol Biol 49: 281-3 09 ,
1998.
15. MIECH P. Nutricional evaluation of plant
species using the water extraction tech-
niqu e . MEKARN Mini - projects. www.
mekarn . org/ msc2003- 051 m i nipro-
jects/webpage/phal.h tm .
16. DÍAZ M ., GONZÁLEZ A., CURBELO F. ,
CRUZ A. , MORA C. Rev Cubana Cien Agrí.
31: 183- 188, 1997.
17. HERNÁNDEZ T., CENTENO C. , MARTÍNEZ
C., HERNÁNDEZA. J Agríe Food Chem 4 3 :
3065-3069, 1995.