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Capítulo 4
4.1 INTRODUCCION
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Varios métodos ópticos se han utilizado para la detección de ADN, tales como
luminiscencia, fluorescencia Raman u óptica, guía de ondas, estructura
troscopia y resonancia de plasmones superficiales (SPR). Varios inmovilizacion
estrategias para adjuntar ssDNA a superficies con el objetivo de alcanzar el máximo
Se han descrito selectividad y sensibilidad.
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Biosensores basados en ADN
Fig. 4.1. Vías de detección amplificadas de una falta de coincidencia de una sola base en ácidos nucleicos: (a) utilizando
Avidina y liposomas marcados con biotina; (b) utilizando un conjugado de avidina y nanopartículas de Au
y la deposición catalizada de oro; (c) utilizando una avidina-fosfatasa alcalina
bioconjugado y la precipitación biocatalizada del producto insoluble 4. (Reproducido
de la ref. [63] con permiso de Elsevier.)
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(3 £ 10 M) en tampón borato (pH 10.02), (a) con tratamiento previo ultrasónico (potencia
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intensidad, 72 W cm ; Separación del electrodo de la punta de la bocina, 5 mm), (b) exploración sucesiva sin
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(-) 40 ° voltamograma. Amplitud de pulso, 50 mV; ancho de pulso, 70 ms; rango de escaneo,
5 mV s . (Reproducido de la Ref. [123] con permiso de Elsevier.)
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Fig. 4.4. Voltamogramas de pulso diferencial sucesivos del carbono vítreo limpio.
electrodo, sumergido en la solución de ssDNA durante la modificación; se — apoyando
electrolito: 0.1 M de tampón de acetato pH 4.5. Amplitud de pulso, 50 mV; ancho de pulso, 70 ms;
Velocidad de barrido, 5 mV s . (Reproducido de la Ref. [70] con permiso de Elsevier.)
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Fig. 4.5. Imágenes topográficas AFM en modo MAC en aire de: (A1 y A2) limpian HOPG
superficie del electrodo; (B1 y B2) superficie de biosensor de dsADN de película delgada, preparada en
HOPG por 3 min. Adsorción libre de una solución de 60 mg ml dsDNA en pH 4.5 0.1 M
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tampón de acetato electrolito; (C1 y C2) superficie de biosensor de dsADN de película gruesa, preparada
sobre HOPG por evaporación de una solución de 37.5 mg ml dsDNA en pH 4.5 0.1 M
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Las redes de dsDNA forman una matriz de biomateriales para unir y estudiar otras
moléculas. El mayor problema encontrado con los electrodos HOPG.
modificado por una película delgada de dsDNA es el hecho de que el electrodo no está
Cubierto completamente permitiendo la difusión de moléculas desde la solución a granel.
A la superficie y su adsorción no específica. Esto lleva a dos
Contribuciones a la señal electroquímica, una de las simples adsorbidas.
compuesto y otro por el daño al dsDNA inmovilizado, y es difícil
Distinguir entre las dos señales [123].
La gran ventaja de la película gruesa de dsDNA es que la superficie HOPG es
completamente cubierto por dsDNA para que la unión no deseada de moléculas a
La superficie del electrodo es imposible. La respuesta del biosensor de ADN es, pues, única.
determinado por la interacción del compuesto con el dsDNA en la película,
Sin ningún aporte de la reacción electroquímica del compuesto.
en la superficie del sustrato HOPG.
Evidencia de que las moléculas de ADNb derivatizadas con tiol en las superficies de oro,
adsorbidos bajo control potencial, sufren un cambio morfológico en el que la
las hélices se paran derechas o se recuestan sobre la superficie metálica,
Dependiendo del potencial aplicado con relación al potencial de carga cero.
(pzc), ha sido descrito por Barton y colaboradores [92]. En positivo aplicado
los potenciales del eje helicoidal se vuelven paralelos a la superficie del electrodo, la base
pares orientados verticalmente contra la superficie del electrodo, lo que lleva a la
conclusión de que el espesor de una monocapa de dsDNA adsorbido en el
La superficie del electrodo es inferior a 2 nm. La posibilidad de controlar la cobertura.
de la superficie del electrodo y seleccionando la orientación del ADN utilizando pequeñas
Cambios en el potencial abre nuevas perspectivas para el desarrollo y
Aplicaciones de ADN biosensores electroquímicos. Un chip de silicona con una matriz.
Heller y colaboradores [93] utilizaron electrodos de platino para la biotina -
Inmovilización de oligonucleótidos mediada por estreptavidina e hibridación
Se controló mediante el ajuste de la intensidad del campo eléctrico.
La superficie del electrodo puede modificarse inmovilizando ssDNA o
dsADN. El biosensor ssDNA electroquímico utiliza oligonucleótido corto
secuencias para la capa de reconocimiento de superficie capaz de identificar un
secuencia de nucleótidos complementaria de un ADN diana a través de híbridos
ización. El biosensor dsDNA electroquímico puede predecir el mecanismo.
y detectar el daño causado al ADN por compuestos peligrosos para la salud que
causa roturas de la hebra y posibilita la detección electroquímica de la
Bases expuestas. Procedimientos de inmovilización y tratamiento químico de un
Electrodo por reacciones químicas o por quimisorción alterar su superficie que
Debe caracterizarse por técnicas de superficie. La puesta a punto del electrodo.
El potencial permite la generación in situ de radicales a partir de electroactivos.
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Originalmente desarrollado como un fármaco dirigido a los genes [15-17], PNA, como se mencionó
Anteriormente, demuestra propiedades de hibridación hacia complementarias.
Las secuencias de ADN y el comportamiento de adsorción se estudiaron mediante AC.
mediciones de impedancia en un electrodo colgante de gota de mercurio (HMDE) por
Palecek y colaboradores [111]. La capacidad diferencial del electrodo doble.
La capa se midió en función del potencial. La adsorción de ANP, con una
espina dorsal neutral, fue considerablemente diferente de la del ADN, sin ANP
Desorción que ocurre incluso después de la aplicación al electrodo de un alto
Potencial negativo por un largo periodo de tiempo.
Las mediciones de impedancia electroquímica también se utilizaron para detectar la
La hibridación de ADN en chips de Si / SiO 2 y gran énfasis ha sido puesto por
Cloarec et al. [112] sobre la inmovilización de cadenas simples sobre los sustratos en
Para obtener sensores reproducibles. La adsorción de dsDNA y
Los nucleótidos en una superficie de carbono vítreo también han sido evaluados por
espectroscopia de impedancia química por Oliveira Brett et al. [113,114].
La utilización de una matriz de dsDNA para ayudar a la inmovilización de enzimas es también una
Alternativa prometedora para el desarrollo de biosensores de ADN y sus
Aplicación en sistemas de análisis de inyección de flujo (FIA). Un ADN tirosinasa de carbono.
El electrodo de pasta descrito por Serrano y colaboradores [115] mostró una excelente
rendimiento para la detección de catecol en un sistema FIA y sugiere que
Otros biosensores enzimáticos pueden beneficiarse de la presencia de ADN.
La actividad citostática de varios medicamentos de platino ha demostrado que el platino
complejos de coordinación causan una inhibición irreversible de la síntesis de ADN debido a
Unión covalente con el ADN. Esto hace que el tratamiento sea a menudo
Acompañado de reacciones adversas. Se utilizó voltamperometría diferencial de pulso.
Para investigar las interacciones de los complejos de coordinación de platino con fuertes
agentes anticancerígenos en solución con ADN por Oliveira Brett et al. [116,117]. los
Los fármacos que interactúan con el ADN previenen el crecimiento celular, pero no solo el crecimiento de células cancerosas;
El efecto citotóxico también bloquea el crecimiento de las células normales. La falta de
La selectividad de los medicamentos contra el cáncer es uno de los principales problemas en la quimioterapia contra el cáncer.
y los biosensores de ADN son una herramienta importante para la investigación de la
Mecanismo químico y biológico de los fármacos activos contra las células cancerosas.
Los nitroimidazoles se encuentran entre los fármacos nitroheterocíclicos más importantes de
Interés en la quimioterapia contra el cáncer. Se observó que la adenina y la guanina.
interactuar con intermedios generados durante la reducción de nitroimidazol,
causando daños irreversibles al ADN y sugiriendo propiedades mutagénicas de
estos compuestos. El mecanismo de reducción de un grupo de nitroimidazoles.
fue investigado por un nuevo enfoque de Oliveira Brett et al. [118-122] utilizando
El biosensor del ADN. El analito se concentró previamente en la superficie del electrodo.
que contiene ADN y ya sea la reducción o la oxidación de la reducción
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4.5 CONCLUSIONES
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Expresiones de gratitud
Referencias
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