“COPROCULTIVO”

Practica no. 1

26 DE ABRIL DE 2013
CBTIS 65
_Bacteriología II
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OBJETIVO

Identificar las posibles especies patógenas de microorganismos presentes en las vías

gastrointestinales (Heces) a través del coprocultivo y de sus reacciones bioquímicas.

FUNDAMENTO

La porción inferior del intestino tiene una flora bacteriana normal excesivamente amplia.
Los microorganismos con mayor prevalencia son los anaerobios (Bacteroides, bacilos Gram
positivos, Estreptococos), microorganismos entéricos gran negativos y Enterococcus
faecalis. Cualquier intento por aislar bacterias patógenas de las heces implica la separación
de las especies patógenas, usualmente a través del empleo de medios selectivos
diferenciales y de cultivos enriquecidos. Las principales causas de trastornos
gastrointestinales agudos incluyen a los virus, las toxinas (de:
Estafilococos, Vibriones, Escherichia coli), bacilos entéricos gran negativos invasores, los
fermentadores lentos de la lactosa, la Shigella, la Salmonella y la Campilobacterias. La
importancia relativa de estos grupos tiene grandes discrepancias en las distintas partes del
mundo.
Las heces y los raspados rectales son los especímenes de que se dispone con mayor
facilidad. Debe anotarse, en el examen macroscópico la presencia de sangre, moco o
helmintos en la inspección inicial. Se suspenden los especímenes en un caldo selectivo como
el Caldo de Tetrationato y se cultivan sobre medios ordinarios así como en medios selectivos
diferenciales, por ejemplo Agar EMB, Agar McConkey, Agar S-S, para permitir la separación
de los bacilos gran negativos que no fermentan la lactosa de otras bacterias entéricas
comunes.
Los frotis teñidos pueden revelar una prevalencia de leucocitos y de ciertos
microorganismos anormales como Cándida o estafilococos, pero no pueden utilizarse para
diferenciar las bacterias entéricas patógenas de las de la flora normal, por lo que deben
realizarse otro tipo de pruebas para discriminar los tipos de bacterias presentes en la
muestra como son las pruebas bioquímicas.

José Joaquín Escobar Murrieta

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Materia Reactivos Muestra biológica

Cajas Petri Heces fecales

Caldo Tetrationato
1 frasco esterilizado agar EMB
1 balanza gran ataría agar S.S o V. brillante
1 probeta 100ml agar sangre
5 espátulas sim
1 parrilla eléctrica citrato de Simmons
1 matraz Erlenmeyer de kligler o kia
500ml fenilalanina
1matraz Erlenmeyer cade de urea
250ml reactivo de kovacks
4 tubos de ensaye de 10 cloruro férrico al 10%
x 75 lugol
1 tubo de ensaye de 15 reactivos para tinción de
x150 Gram
1 autoclave
2 mecheros
e asas bacteriológicas
1 tijeras
1 gradilla
1 bolsa para RBPI
papel para envolver
cinta testigo
papel aluminio
algodón
gasa
hisopos estériles

José Joaquín Escobar Murrieta

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PROCEDIMIENTO:

A. se preparan cajas Petri con agar sangre, EMB, salmonella – siguella, verde brillante;
según las indicaciones del fabricante, así mismo los medios para las pruebas bioquímicas en
los tubos de ensaye.

B.se esterilizan frascos para la toma de muestra.

C. se instruye al paciente sobre la forma que debe tomar la muestra
D. la muestra recibida se siembra en los medios de cultivo de la siguiente manera:
a. se toma la muestra con un hisopo estéril y descarga la muestra en los medios sólidos en
cajas Petri y se siembra en caldo Tetrationato

E: se etiquetan las cajas Petri y el tubo de caldo Tetrationato

F.se incuban en la estufa bacteriológica a 37|c durante 24 o 48 hrs

G. se revisan las cajas y se hace una descripción de la morfología de las colonias bacterianas
de cada caja Petri y se toma una muestra de caldo de Tetrationato y se resiembra en cajas
de verde brillante o en salmonella – Shigella.
H. de la caja de agar sangre se escoge las colonias sospechosas y se hace un frotis que se
tiñe con la técnica de Gram.
I. una vez seco los frotis, se les coloca una gota de aceite de inmersión y se observa en el
microscopio compuesto con el objetivo de inmersión teniendo cuidado de observar varios
campos

José Joaquín Escobar Murrieta

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ESUEMA DEL PROCEDIMIENTO:

José Joaquín Escobar Murrieta

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José Joaquín Escobar Murrieta

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OBSERVACIONES Y RESULTADOS

Vista microscópica X1O Vista microscópica X40 Vista microscópica X1OO

MEDIO DE CULTIVO MORFOLOGIA MORFOLOGIA CLASIFICACION

COLONIAL BACTERIANA PRESUNTIVA

Agar sangre

Agar EMB - - -

José Joaquín Escobar Murrieta

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COMENTARIOS Y CONCLUSIONES:

 A nuestra compañera Ana Mendiola, le toco cuidar de la autoclave.

 Nuestros medios de cultivo no se hicieron a la perfección (el maestro dijo: -que era
por que se habían congelado).
 La muestra tenía un olor normal
 Solo teníamos 1 medio de cultivo(el cual era Agar sangre) lo cual no permitió que
observáramos otros medios de cultivo
 La estría en el medio de cultivo salió perfecta

Bibliografía: http://procedimientosmicrobiologicos.wikispaces.com/COPROCULTIVO
Microbiología clínica práctica - Página 227
Escrito por Pedro García Martos, Fernando Paredes Salido, María Teresa Fernández del
Barrio

José Joaquín Escobar Murrieta