REACCIONES DE CARACTERIZACION DE AMINOACIDOS Y PROTEINAS

Se determinará la presencia de proteínas en muestras biológicas, determinados aminoácidos generalmente triptófano y

tirosina.

REACCION DE NIHIDRINA:

Reacciona con el grupo amino de aminoácidos libres y los grupos amino de las proteínas para generar un compuesto
azul-violeta.

La prolina y la hidroxiprolina también reacciona con nihidrina, pero en este caso no da un color azul-violeta si no
amarillo.

 Procedimiento:

1ml de las proteínas

preparadas

Baño maría
durante 10
min
 1ml glicina
 1ml metionina
 1ml prolina

REACCION DE BIURET

Contiene enlaces peptídicos tales como el biuret, se añade sulfato cúprico se forman sales complejas de color violeta.
Cuando se calienta la urea se libera amoniaco, la reacción es cuantitativa y permite valorar la presencia de proteínas con
bastante exactitud e independientemente del tipo de proteína.
 3 gotas de sulfato
1ml solución de cúprico al 1%
proteína

2ml de hidróxido de
sodio al 30%

1ml de glicina

Indica la presencia de
enlaces peptídicos

AMINOACIDOS AZUFRADOS EN LAS PROTEINAS

Se realiza mediante un hidrolisis de la proteína de un medio alcalino, que conlleva a la destrucción de los aminoácidos
sulfurados liberando el azufre precipitando el sulfuro de plomo de color negro.

 Proteína y glicina
 Metionina 1ml de hidróxido de
 Cisteína y cistina sodio al 30%

Baño maría
10 min
Acetato de plomo
al 5%
PREPARACION DE LAS MUESTRAS

Calentar baño maría

con agua del grifo Leche de soya
500ml Diluirla en agua

Clara de huevo

Vaso de precipitado
250ml
Agua
destilada

REACCION XANTOPROTEICA

1ml de la Solución

de la proteína

Ácido nítrico
concentrado

- Glicina 1 ml
- fenilamina Baño maría
- Tirosina Calentar durante
- triptófano
5 min

La solución o el precipitado se tiñen de

amarillo
REACCION DE MILLON

Solución de proteína

1ml

Nitrito sódico
Reactivo de millón
- Glicina O,5ml
0.5 ml
- Tirosina
- triptófan
o

Baño maría Tirosina y proteínas

5 min Color rojo

RECONOCIMIENTO DE ARGININA

Hidróxido de sodio 30%

0.1 ml

- Proteínas
- Arginina
- glicina

Naftol 0.05

0.3 ml

Urea 40%

0.3 ml

Hipodromito sódico 1N

2 gotas
Baño de hielo
RECONOCIMIENTO DE TRIPTOFANO

A. Reacción de Hopkins - cole

- Glicina
- Triptófano
- Metionina Hopkins – cole
- Glicina 1ml 1ml

Proteína

1ml

Ácido sulfúrico concentrado

1.5 ml

B. Reacción de ácido glioxilico

- Arginina
- Glicina
- Metionina
- Triptófano
1ml

Ácido acético Ácido sulfúrico

Proteína glacial 1ml concentrado 1ml
hasta formar 2 fases
1ml