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LABORATORIO BIOQUIMICA

ADRIANA PATRICIA PACHECO MORENO

JOSE EDWARD VASQUEZ GARZON

SILVIA ARABELLY SERRATO TRIANA

YULIANA VARGAS PARADA

DOCENTE

GUSTAVO JAIMES MONROY

BIOQUIMICA

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

NOVIEMBRE 2016
CONTENIDO

 Introducción

 Objetivos

 Practica 1: seguridad y normas en el laboratorio

 Practica2 : Propiedades bioquímicas de los aminoácidos

 Practica 3: Bioquímica de las proteínas

 Practica 4: Identificación de carbohidratos

 Practica 5: Características de los ácidos grasos


INTRODUCCION

Durante el desarrollo del presente laboratorio se reconoce la importancia de las normas de

bioseguridad en el laboratorio, se reconocen los elementos de trabajo, la ubicación de botiquines,

duchas y salidas de emergencia.

Se aclara el concepto de bioelementos, y conoceremos los enlaces químicos de los carbohidratos,

aprenderemos a reconocer proteínas y lípidos


OBJETIVOS

 Conocer y aplicar las normas de bioseguridad al ingresar siempre a un laboratorio

 Darle un uso adecuado a los materiales del laboratorio

 Reconocer las propiedades bioquímicas de los aminoácidos

 Reconocer las propiedades bioquímicas de las proteínas

 Aprender a identificar los carbohidratos

 Conocer las características de los ácidos grasos


PRACTICA 1: SEGURIDAD Y NORMAS EN EL LABORATORIO

- Vestimenta cómoda: cubrir el


máximo de la piel uso de bata, jeans,
guantes, blusa de manga larga, calzado
cómodo.

- No ingerir alimentos, bebidas o


mascar chicle.
NORMAS PERSONALES
- Evite tocar partes del rostro, llevar
las manos a la boca nariz u oídos.

- Puntualidad al ingreso.

-El laboratorio es zona exclusiva para


prácticas.

- Para reacciones químicas


escoger el recipiente
DEFINICION: Estrategia
adecuado
pedagógica que facilita la NORMAS PARA LA
SEGURIDAD Y
consolidación del aprendizaje UTILIZACION DE
NORMAS EN EL -No usar recipientes de
y desarrollo de las PRODUCTOS
LABORATORIO alimentos
competencias disciplinarias QUIMICOS
- Rotular todo

- No use materiales en mal


estado

- No aspirar pipetas con la


boca

NORMAS DE USO DE - Comprobar la temperatura


INSTRUMENTOS NORMAS DE de los materiales a manipular
EMERGENCIA

- Mantenga sin humedad objetos con contacto


- En caso de evacuación del laboratorio cierre las llaves del gas
eléctrico
- Salga en forma ordenada
- Utilizar el recipiente adecuado en las balanzas
- conozca la ubicación exacta de los equipos de emergencia, duchas,
botiquín y salidas de emergencia

-
UBICACIÓN DEL BOTIQUIN

LAVAOJOS Y DUCHA
LAVAMANOS

PRACTICA 2: PROPIEDADES BIOQUIMICAS DE LOS AMINOACIDOS

Los aminoácidos se denominan así por tener un grupo amino (-NH2) y un grupo carboxilo (-

COOH).

Es posible agrupar los aminoácidos en clases principales basadas en las propiedades de sus

grupos R, en especial de su polaridad, o tendencia a interaccionar como el agua a PH biológico

(cerca del pH 7.0).

La polaridad de los grupos R varía enormemente desde totalmente apolar o hidrofobico

(insoluble en agua) hasta altamente polar o hidrofilico (soluble en agua).

Tabla 1 Clasificación de los aminoácidos


En el laboratorio trabajamos con los siguientes materiales albumina de huevo, leche de soya y

glicina. Y se realizaron las siguientes prácticas

PRACTICA 2.1

REACCION CON LA NIHIDRINA

El grupo alfa-amino de los aminoácidos forma complejos coloreados con la ninhidrina: violeta

azuloso en la mayoría de los aminoácidos cuyo grupo amino es primario, amarillo para la prolina

e hidroxiprolina y café para la asparagina que tiene un grupo amino en la cadena lateral.

Esta reacción también identifica los grupos alfa-amino libres presentes en péptidos y proteínas.

Precauciones la ninhidrina es toxica.


PROCEDIMIENTO

Se preparan 3 tubos de ensayo agregando a cada uno 1.5ml de leche de soya, albumina de huevo

y glicina, se agregan 2ml de solución 0.3% nihidrina a cada uno, se llevan luego a un baño de

agua hirviente por 10 minutos y se observaron los siguientes cambios

ALBUMINA DE HUEVO
RESULTADO: Se observa un color violeta turbio porque es un grupo amino primario, por su

composición es una cadena larga por ese motivo se observa un color claro.
LECHE DE SOYA

RESULTADO: Al ser una proteína vegetal sus cadenas son intermedias, da un color violeta
GLICINA

RESULTADO: Por ser de cadena corta al realizar el ejercicio es la que marca el color violeta

más oscuro
FUNDAMENTACION:

La nihidrina reacciona específicamente con el grupo alfa amino de los aminoácidos ya sean

libres o bien unidos mediante enlaces peptídicos.

La nihidrina a PH de 4 a 8 es un oxidante fuerte y siempre reacciona con los grupos de alfa

amino, liberando amonio el cual se condensa con la nihidrina reducida y con otra molécula de

nihidrina formando un compuesto que va de azul a violeta purpura, esta reacción se denomina

condensación de la nihidrina

PRACTICA 3 BIOQUIMICA DE LAS PROTEINAS

Las proteínas son uno de los principales componentes de todas nuestras células. Los

aminoácidos (compuestos orgánicos) son los ladrillos de construcción de la proteínas. Los

aminoácidos se agrupan de acuerdo con su comportamiento químico. La síntesis de las

proteínas ocurre mediante la unión entre sí de las cadenas de aminoácidos. Los distintos
aminoácidos imparten diferentes comportamientos químicos en la estructura de las

proteínas. Debido a la presencia de diferentes aminoácidos en las uniones peptídicas las

proteínas reaccionan con una variedad de compuestos formando productos coloreados.

PRACTICA 3.1 REACCION DE BIURET

Esta reacción la producen los péptidos y las proteínas pero no los aminoácidos ya que se debe a

la presencia del enlace peptídico CO-NH que se destruye al liberarse de los aminoácidos.

El reactivo de Biuret lleva sulfato de cobre y sosa. El cobre en un medio fuertemente alcalino se

une con los enlaces peptídicos formando un complejo de color violeta (Biuret) cuya intensidad

de color depende de la concentración de proteínas.

PROCEDIMIENTO:

Preparar los tubos de ensayo agregar a cada tubo 1ml de la solución correspondiente (albumina

de huevo, glicina y leche de soya), agregar 3 gotas de sulfato cúprico a cada tubo, agitar observar

y describir los cambios


ALBUMINA DE HUEVO

RESULTADO: Al mezclarse la albumina de huevo con el sulfato de cobre se torna de color

violeta al tener esta solución mayor concentración de proteínas


LECHE DE SOYA

RESULTADO: La leche de soya al contacto con el sulfato de cobre se torna de color violeta

aunque de menor intensidad a la albumina al tener una concentración intermedia de proteínas.


GLICINA

RESULTADO: La glicina al contacto con el sulfato de cobre la intensidad del color es tenue,

debido a la poca carga proteica existente en la glicina


FUNDAMENTACION: En esta práctica se observa que las proteínas al contacto con el sulfato

de cobre producen un enlace que forma en las soluciones un color violeta que definirá su

intensidad según la cantidad de proteínas en cada solución.

PRACTICA 3.2 REACCION DE AMINOACIDOS AZUFRADOS

Se pone de manifiesto por la formación de un precipitado negruzco de sulfato de plomo. Se basa

en la separación mediante un álcali, del azufre de los aminoácidos el cual al reaccionar con una

solución de acetato de plomo forma el sulfuro de plomo

PROCEDIMIENTO: Prepare los tubos de ensayo, agregue 1.5 de la solución que corresponda a

cada uno (glicina, albumina de huevo, leche de soya), agregue hidróxido sódico 2ml + 10 gotas

de acetato de plomo 5% a cada tubo caliente cada tubo a ebullición, observe y describa los

cambios.
ALBUMINA DE HUEVO: Al entrar en contacto con el acetato de plomo y el hidróxido sódico

presenta un color marrón oscuro, debido a la alta concentración de azufre en sus cadenas ya que

la albumina contiene gran cantidad de cisteína y metionina

LECHE DE SOYA: Al entrar en contacto con el hidróxido sodio y el acetato de plomo toma n

color marrón claro sedimentoso debido a que la leche de soya contiene menor cantidad de

cisteína y metioninas

GLICINA: Al entrar en contacto con los reactivos no presenta reacción química ya que no

contiene aminoácidos azufrados en su estructura

PREGUNTAS

1. Para el siguiente pentapeptido, diga cuales pruebas y porque serán positivas (ALA- VAL-

GLY- GLU- LYS)

Se realizarían las siguientes pruebas:

Nihidrina: Esta prueba saldrá positiva porque el pentapeptido tiene aminoácidos con grupo

amino primario y por lo tanto dará coloración violeta.

Reacción de Biuret: Esta prueba resultara positiva porque el pentapeptido tiene enlaces

peptídicos y dará coloración violeta

2. Cuál es la relación de un alfa-aminoácido y nihidrina?

La nihidrina es un oxidante que reacciona con los grupos alfa-amino liberando amonio,

formando un complejo que produce color violáceo


3. Cuál es la reacción con el reactivo Biuret?

El reactivo de Biuret contiene sulfato de cobre que es fuertemente alcalino que se une a los

enlaces peptídicos formando un complejo de color violeta, entre más concentración de proteínas

mayor coloración.

4. Como podríamos saber que sustancia desconocida es una proteína?

Aplicaría la reacción de Biuret y esperaría que coloración toma, si es una coloración violeta es

una proteína, esta coloración se genera por la reacción del sulfato de cobre con los enlaces

peptídicos.

5. Que coloración da la reacción de Biuret?

La reacción de Biuret da una coloración violeta


PRACTICA 4 IDENTIFICACION DE LOS CARBOHIDRATOS

Los hidratos de carbono constituyen el grupo de biomoleculas más abundante sobre la superficie

terrestre, representando aproximadamente el 75 % de la materia orgánica existente.

En ocasiones, se denominan también carbohidratos, azucares, sacáridos o glúcidos. Todos

son términos que hacen referencia a su sabor dulce, o a que poseen la composición con

(H2O). Estas moléculas usualmente contienen carbono, hidrógeno y oxígeno en una

proporción de 1:2:1. Los carbohidratos se clasifican como monosacáridos, disacáridos o

polisacáridos, dependiendo del tamaño y la complejidad de la molécula. Los monosacáridos

se componen de una sola molécula de azúcar. Cuando dos monosacáridos se unen se

produce un disacárido, y cuando dos o más se unen se produce un polisacárido.

Los materiales utilizados para esta práctica son:


A

Almidón de yuca, Lactosa y Sacarosa


PRACTICA 4.1 PRUEBA DE BENEDICT

Es similar a la reacción de Feling, el medio básico débil y el estabilizante (citrato sódico)

utilizados hacen que este test sea más sensible y estable. La presencia de glucosa se indica por

un precipitado de óxido cuproso.

PROCEDIMIENTO:

Prepare los tubos de ensayo, agregue a cada tubo 3ml de la solución que corresponda (almidon

de yuca, sacarosa, lactosa) agregue 2ml del reactivo Benedict lleve los tubos a un baño de agua

hirviente por 10 minutos observe y registre los cambios.


RESULTADOS:

ALMIDON DE YUCA: Al adicionar los 2 ml del reactivo de Benedict la muestra se torna azul,

al llevar a baño en agua caliente durante 10 minutos no presenta cambios en la coloración

indicando que este no es un azúcar reductor

SACAROSA: Al igual que la muestra anterior al entrar en contacto con el reactivo de Benedict

toma una coloración azul, al llevarse al baño de agua caliente por 10 minutos, no presenta

cambios en su coloración esto indica que no es un azúcar reductor


LACTOSA: Esta muestra, al ser llevada al baño de agua hirviendo marca un color anaranjado

debido a la cantidad de presencia de azucares reductores en su estructura.


PRACTICA 4.2 REACCION DE FEHLING

Los azucares reductores, en medio alcalino, son capaces de reducir el ion Cu2+ de color azul a

Cu+ de color rojo. Para ello el grupo carbonilo del azúcar se oxida a grupo carboxilo.

PROCEDIMIENTO:

Prepare los tubos de ensayo, añada a cada tubo 3ml de la solución correspondiente (almidon de

yuca, sacarosa y lactosa), añada 1ml del reactivo fehling a cada tubo, lleve cada tubo a un baño

de agua hirviente observe y tome apuntes.


RESULTADOS:

ALMIDON DE YUCA: Al no contener azucares reductores en su estructura no muestra cambios

en su coloración después de 10 minutos en agua hirviendo

SACAROSA: Al contener una mínima cantidad de azucares reductores en su estructura toma una

coloración cobriza en su centro dejando su exterior sin cambios


LACTOSA: Al contener una gran cantidad de azucares reductores en su estructura al contacto

con el reactivo y después de 10 minutos en un baño de agua hirviente toma una coloración rojo

cobre.

PRACTICA 4.3 REACCION DE MOLISH

La presencia de carbohidratos en una muestra se pone de manifiesto por la reaccion de

Molisch, que a cierto punto es la reaccion universal para cualquier carbohidrato. Se basa en la

acción hidrolizarte y deshidratante del ácido sulfúrico sobre los hidratos de carbono. En dicha

reaccion el ácido sulfúrico cataliza la hidrolisis de los enlaces glucosúricos de la muestra y la

deshidratación a furural (en las pentosas) o hidroximetilfurfural (en las hexosas). Estos furfurales

se condensan con el alfa naftol del reactivo de Molisch (reaccion de Molisch) dando un producto

coloreado.
PROCEDIMIENTO:

Prepare los puntos de ensayo agregue 3ml de la solución indicada (almidón de yuca, lactosa,

sacarosa), agregar dos gotas de reactivo Molisch y mezclar bien, incline el tubo y agregue 1ml de

ácido sulfúrico dejándolo deslizar por las paredes del tubo, no mezcle, ponga el tubo en posición

vertical y observe la formación del anillo rojo violeta que aparece en la zona de contacto de los

dos líquidos
RESULTADOS:

ALMIDON DE YUCA: Con esta solución se observa un anillo rojizo en su parte superior

separando las soluciones viéndose en el fondo una solución turbia y en el centro una solución

transparente.
SACAROSA: En esta solución se observa que al añadir el acido sulfurico a la solución esta se

enturbia y se forma una base azul oscura en su fondo


LACTOSA: Esta solución al contacto con al ácido sulfúrico se enturbia y forma un anillo negro

en la base/centro de la solución
PRACTICA 4.4 REACCION LUGOL YODO

La prueba de yodo se da como consecuencia de la formación de cadenas de poli yoduro a partir

de la reaccion entre el almidón y el yodo presente en el reactivo de lugol.La amilosa y la

amilopectina son componentes del almidón pero la amilosa es de estructura lineal, con enlaces α

(1-4), que forma hélices en donde se juntan las moléculas de yodo formando un color azul

oscuro; mientras que la amilopectina es de estructura ramificada, con enlaces α (1-4) (1-6), que

forma hélices mucho más cortas y las moléculas de yodo son incapaces de juntarse presentando

un color intermedio entre anaranjado o amarillo.

PROCEDIMIENTO:

Prepare los tubos de ensayo, agregue 3ml de la solución correspondiente (almidón de yuca,

sacarosa, lactosa), agregue 5 gotas de lugol observe y tome apuntes de los cambios.
RESULTADOS:

ALMIDON DE YUCA: Esta al contener amilosa de estructura lineal forma una concentración

más alta y de color azul oscuro que quiere decir que tiene enlaces más cortos y las moléculas de

yodo están mas juntas

SACAROSA: Esta solución al entrar en contacto con el yodo toma un color anaranjado y se

observa una base transparente esto se puede explicar que al ser la amilosa de estructura

ramificada y tener enlaces más largos las moléculas de yodo son incapaces de juntarse

LACTOSA: Similar que la sacarosa la lactosa contiene amilosa de estructura ramificada, por tal

motivo las moléculas de yodo no se juntan y esta solución toma una coloración anaranjada.
PREGUNTAS:

1. Dibuje los monosacáridos glucosa, galactosa, ribosa y fructosa, clasifíquelos según el

número de átomos de carbono y la función principal

GLUCOSA: D-Aldohexosa

GALACTOSA: D- Aldohexosa
RIBOSA: D-Aldopentosa

FRUCTOSA: D-Cetohexosa
2. Escriba las funciones: aldehidica, cetonica, alcohólica, acida, colóquelas en orden de

reactividad y explique el porqué de ese orden.

Función aldehidica: Los aldehídos son compuestos orgánicos que se caracterizan por tener el

grupo funcional C H O (formilo). La polarización del grupo carbonilo crea atracciones dipolo-

dipolo entre las moléculas de aldehídos, lo cual les da mayores puntos de ebullición que los

hidrocarburos o éteres de peso molecular semejante. Los aldehídos son más polares y hierven a

mayor temperatura que los éteres y los alcanos, pero a menos temperatura que los alcoholes que

están enlazados por puentes de hidrogeno.

Función cetonica: Una cetona es un compuesto orgánico caracterizado por poseer un grupo

funcional carbonilo unido a dos átomos de carbono a diferencia de un aldehído en donde el grupo

carbonilo se encuentra unido al menos a un átomo de hidrogeno, el doble enlace con el oxígeno

lo diferencia de los alcoholes y éteres, por esto las cetona suelen ser menos reactivas que los

aldehídos ya que los grupos alquílicos actúan como dadores de electrones por efecto inductivo.

Función alcohólica: el alcohol es un compuesto orgánico que contiene el grupo hidroxilo unido

a un radical alifático o a alguno de sus derivados. Los alcoholes pueden ser primarios

secundarios o terciarios en función del número de átomos de hidrogeno sustituidos en el átomo

de carbono al que se encuentra enlazado el grupo hidroxilo


Función acida: Los ácidos son compuestos que contienen uno o más átomos de hidrogeno los

cuales al disolverse en agua se liberan en forma de catión H+

Según su orden de reactividad se clasifican así:

ALCOHOLES: se consideran derivados del agua, donde uno de los átomos de hidrogeno es

sustituido por un radical alquílico. El enlace O-H es covalente polar y el ángulo aproximado del

enlace R-O-H es de 105°.

ALDEHIDOS: El grupo carbonilo (CO) está altamente polarizado, por lo que resulta ser muy

reactivo. Existe densidad de carga negativa sobre el oxígeno y positiva por el carbono, así que es

una molécula polar.

CETONA: Al igual que los aldehídos las cetonas pueden adicionar átomos de hidrogeno en

presencia de catalizadores.

ACIDOS: Hay cuatro enlaces covalentes polares: el C-O simple y el doble enlace C-O, además

del enlace O-H. el oxígeno es el nucleofilo, ya que posee dos pares electrónicos no compartidos,

además de la polaridad de los enlaces con los átomos que esta enlazado.

Defina los siguientes términos:

AZUCAR REDUCTOR: Es un término químico para un azúcar que actúa como un agente

reductor y puede donar electrones a otra molécula, es un tipo de carbohidrato o azúcar natural

que contiene un grupo aldehído o cetona libre, los azucares reductores pueden reaccionar con

atrás partes de la comida como aminoácidos para cambiar el color o sabor de la comida.

Ejemplo de azucares reductores:


La glucosa

La fructosa

La galactosa

La maltosa

AZUCAR NO REDUCTOR: Significa que no pueden donar electrones a otras moléculas, se

unen por enlaces glicosidicos de tipo alfa o beta. Cuando dos monosacáridos de unen forman un

disacárido los cuales por condensación liberan una molécula de agua por lo tanto son azucares no

reductores.

Ejemplos de azucares no reductores

La sacarosa

Los almidones

La celulosa

El glucógeno
Realice un enlace glucosidico.

Un enlace glucosidico es aquel mediante el cual un glúcido se enlaza con otra molécula que

puede ser o no otro glúcido.

LACTOSA:

PRACTICA 5: CARACTERISTICAS DE LOS ACIDOS GRASOS

Los lípidos son biomoleculas orgánicas formadas básicamente por C H y O aunque este último

elemento se encuentra en proporciones mucho más bajas que los dos primeros. Además pueden

contener P N y S. Constituyen un grupo de sustancias muy heterogéneas con características


químicas diversas pero con propiedades físicas comunes como que son en su mayoría insolubles

en agua, son más solubles en disolventes orgánicos como éter, cloroformo o hexano.

PRACTICA 5.1 SOLUBILIDAD EN LIPIDOS

PROCEDIMIENTO: Prepare dos tubos de ensayo con 3ml de aceite vegetal agregue a uno de los

tubos 4ml de agua destilada y al otro tubo ml de hexano agite los tubos deje reposar y describa lo

que observa

RESULTADOS: Se observa que al mezclarse el agua destilada en el tubo con aceite vegetal no

se logran disolver viendo que el agua queda en la base y el aceite en la parte superior, mientras

que al mezclarse el hexano en el tubo con aceite vegetal se observa que se disuelve por completo

quedando un líquido uniforme.


PRACTICA 5.2 REACCION CON EL SUDAN III

El sudan III es un colorante que se utiliza para detectar en específico las grasas ya que es

insoluble en agua y soluble en las grasas, al ser de color rojo se disuelve y tiñe las grasas de color

anaranjado

PROCEDIMIENTO Y RESULTADO

Se preparó un tubo de ensayo con 3ml de aceite vegetal al que se le adiciono 8 gotas del reactivo

sudan III, se observa que al mezclarse con el aceite vegetal se disuelve por completo quedando

una mezcla uniforme


PREGUNTAS:

1. ¿Qué son los jabones? ¿Cómo se pueden obtener los jabones?

Los jabones es el producto de la reacción química o saponificación entre los ácidos grasos y

una solución alcalina con un producto final asociado llamado glicerina. Si el medio alcalino

tiene como componente sodio el producto final es sólido y si es potasio el producto es blando

o líquido. Este producto final tiene dos componentes un grupo hidrófobo apolar que se

disuelve en grasas o aceites y uno grupo hidrófilo o polar que es soluble polar.

2. ¿Qué enzima logra en el aparato digestivo la hidrólisis de las grasas?

En el proceso de hidrólisis de las grasas en el aparato digestivo participan varios tipos de

enzimas que a continuación se refieren:

1En la boca participan las enzimas de la saliva que se llaman lipasa bucal.

2En el estómago participa la lipasa gástrica que continua el proceso de hidrólisis.

3. Pero donde se realiza el procesos principal de hidrólisis de las grasa es en el intestino

delgado donde participa las enzimas principales que se generan tanto en la hígado y se

acidifica en la vesícula biliar y en el páncreas, se llaman enzimas lipasas pancreático

colipasa, que finalmente destruyen las grasas convirtiéndolas en colesterol.

.
CONCLUSIONES

 Se tienen claras las normas de ingreso al laboratorio como la vestimenta adecuada el uso

de bata zapatos adecuados no ingerir alimentos y manejar con precaución los materiales e

instrumentos del laboratorio

 Se reconoce el concepto de aminoácido, su clasificación según la distribución de los

carbonos y si pertenece a un grupo acido (carboxilo) o base (amino)

 Aprendimos que las proteínas son grupos de aminoácidos unidos a través de enlaces

peptídicos que se establecen en el grupo carboxilo de un aminoácido y en el grupo amino

de otro

 Aprendimos a identificar la reaccion de los carbohidratos al calor y contacto con diversos

reactivos, que dependiendo de si son almidones o no, azucares reductores o no tienen un

comportamiento diferente y así se identifican.

 Conocimos los compuestos que logran disolver las grasas y químicamente a que se debe.
BIBLIOGRAFIA

Peterson, W.R. Formulación y Nomenclatura Química Orgánica (6ta edición). Barcelona-

España: Eunibar-editorial universitaria de Barcelona. pp. 102-106.

Armendaris G, Gerardo (2007). Química orgánica 3 (Tercera edición). Quito-Ecuador: Gruleer.

pp. 140-141.

Rodríguez F La estructura de las proteínas

Lehninger, 2000. Principios de bioquímica. Omega, Barcelona.

Pato Pino, 2008. Bioquímica II. Alfa, Buenos Aires.