2.6.13.

Examen microbiológico de productos no estériles: prueba para

microorganismos específicos

Introducción
La prueba que se describe a continuación permitirá determinar la ausencia o aparición limitada
de microorganismos específicos que pueden detectarse en las condiciones descritas.
Las pruebas están diseñadas principalmente para determinar si una sustancia o preparación
cumple con una especificación establecida para la calidad microbiológica. Cuando se utilice para
tales fines, siga las instrucciones que se dan a continuación, incluyendo el número de muestras
que se tomarán e interprete los resultados como se indica a continuación.
Se pueden utilizar procedimientos microbiológicos alternativos, incluidos los métodos
automatizados, siempre que se haya demostrado su equivalencia con el método de la farmacopea.

Procedimientos generales
La preparación de las muestras se lleva a cabo como se describe en el capítulo general 2.6.12.
Si el producto a examinar tiene actividad antimicrobiana, en la medida de lo posible, se eliminará
o neutralizará como se describe en el capítulo general 2.6.12.
Si se utilizan sustancias activas en la superficie para la preparación de la muestra, su nivel de
toxicidad para los microorganismos y su compatibilidad con los inactivadores utilizados debe
demostrarse como referencia en el capítulo general 2.6.12.

Propiedades inhibitorias y estimulantes del crecimiento de los medios, idoneidad de la

prueba y controles negativos.
Se debe establecer la capacidad de la prueba para detectar microorganismos en presencia del
producto a probar. La idoneidad debe confirmarse si se introduce un cambio en el rendimiento de
la prueba, o el producto, que pueda afectar el resultado de la prueba.

Preparación de cepas de ensayo.

Use suspensiones estables estandarizadas de cepas de prueba o prepárelas como se indica a
continuación. Las técnicas de mantenimiento del cultivo de lotes de semillas (sistemas de lotes
de semillas) se utilizan para que los microorganismos viables utilizados para la inoculación no
sean más de 5 pasajes eliminados del lote de semillas maestro original.

Microorganismos aerobios.
Cultive cada una de las cepas de prueba bacteriana por separado en caldo de digestión de soja
con caseína o en agar de digestión de soja con caseína a 30-35 ° C durante 18-24 h. Se cultiva la
cepa de prueba para Candida albicans por separado en Sabouraud-dextrosa agar o en
Sabouraud-dextrosa, ambos al 20-25 ° C durante 2-3 días.
-Staphylococcus aureus como ATCC 6538, NCIMB 9518, CIP 4.83 o NBRC 13276;
-Pseudomonas aeruginosa como ATCC 9027, NCIMB 8626, CIP 82.118 o NBRC 13275;
- Escherichia coli como ATCC 8739, NCIMB 8545, CIP 53.126 o NBRC 3972;
-Salmonela enterica subsp. Enterica serovar typhimurium, como ATCC 14028 o, como
alternativa, Salmonella enterica subsp, enterica serovar Abony como NBRC 100797, NCTC
6017 o CIP 80.39;
-Candida albicans como ATCC 10231, NCPF 3179, IP 48.72 o NBRC 1594.
Se utilizó una solución tamponada de cloruro de sodio-peptona de pH 7.0 o una solución de
tampón de fosfato de pH 7.2 para hacer las suspensiones de prueba. Use las suspensiones dentro
de 2 h o dentro de 24 h si se almacena a 2-8 ° C.

Control negativo
Para verificar las condiciones de prueba, se realiza un control negativo utilizando el diluyente
elegido en lugar de la preparación de prueba. No debe haber crecimiento de microorganismos.
También se realiza un control negativo al probar los productos como se describe en la sección 4.
Un control negativo fallado requiere una investigación.

Promoción del crecimiento y propiedades inhibitorias de los medios.

Pruebe cada lote de medio preparado y cada lote de medio preparado ya sea de medio
deshidratado o de ingredientes.
Verifique las propiedades adecuadas de los medios relevantes como se describe en la Tabla
2.6.13.-1.

Pruebas de productos.
Bacterias gramnegativas tolerantes a la bilis.
Preparación de muestras y preincubación. Prepare una muestra con una dilución 1 en 10 de no
menos de 1 g del producto a examinar como se describe en el capítulo 2.6.12 general, pero
utilizando caldo de digestión de frijol de soja con caseína como el diluyente elegido, mezcle e
incube a 20-25 ° C por un tiempo suficiente para resucitar las bacterias, pero no lo suficiente para
estimular la multiplicación de los organismos (generalmente 2 h pero no más de 5 h).

Prueba de ausencia. A menos que se indique lo contrario, use el volumen correspondiente a 1 g

del producto, preparado en 4-1-1, para inocular el caldo de enriquecimiento de
enterobacterias-Mossel. Incubar a 30-35 ° C durante 24-48 h. Subcultivo sobre placas de agar
rojo violeta bilis y glucosa. Incubar a 30-35 ° C durante 18-24 h.
El producto cumple con la prueba si no hay crecimiento de colonias.
Prueba cuantitativa
Selección y subcultura. Inocular cantidades adecuadas de caldo de enriquecimiento de
enterobacterias Mossel con la preparación descrita en 4-1-1 y / o diluciones de este que
contengan respectivamente 0.1 g, 0.01 gy 0.001 g (o 0.1 mL, 0.01 mL y 0.001 mL) del producto
previo. para ser examinado. Incubar a 30-35 ° C durante 24-48 h. Subcultivar cada uno de los
cultivos en una placa de agar de violeta bilis rojo violeta. Incubar a 30-35 ° C durante 18-24 h.
Interpretación. El crecimiento de las colonias constituye un resultado positivo. Tenga en cuenta
la cantidad más pequeña del producto que da un resultado positivo y la cantidad más grande que
da un resultado negativo. Determine a partir de la Tabla 2.6.13.2 el número probable de
bacterias.

Escherichia coli.
Preparación de la muestra y preincubación. Prepare una muestra usando una dilución 1 en 10 de
no menos de 1 g del producto a examinar como se describe en el capítulo 2.6.12 general, y use
10 ml o la cantidad correspondiente a 1 g o 1 ml para inocular una cantidad adecuada (
determinado como se describe en 3-4) del caldo de digestión de soja con caseína, mezclar e
incubar a 30-35 ° C durante 18-24 h.

Selección y subcultura.
Agitar el recipiente, transferir 1 ml de caldo de digestión de soja con caseína a 100 ml de caldo
MacConkey e incubar a 42 ° C durante 24-28 h. Subcultivo en una placa de agar MacConkey a
30-35 ° C durante 18-72 h.

Interpretación. El crecimiento de colonias indica la posible presencia de E. coli. Esto es

confirmado por la prueba de identificación.
El producto cumple con la prueba si no hay colonias presentes o si las pruebas de identificación
son negativas.