Guía Lab Microbiología

MACROPROCESO DE APOYO CODIGO: AAAr051
PROCESO GESTION APOYO ACADEMICO VERSION: 5
GUIA DE PRACTICA PAGINA: 1 de 32
PRACTICA Nº 1
Facultad: CIENCIAS AGROPECUARIAS
Programa Académico: INGENIERÍA AMBIENTAL
Núcleo
MICROBIOLOGÍA Grupo: CUARTO
Temático:
Docente: GENIE LORENA VELASQUEZ DIAZ
Correo: glvelasquez@mail.unicundi.edu.co
NORMAS DE BIOSEGURIDAD BASICAS DE USO OBLIGATORIO:

 Protector naso bucal.
 Bata manga larga, cerrada en color blanco.
 Zapato cerrado en suela antideslizante
 Pantalón largo (holgado)
 Gorro desechable (cabello recogido)
 Gafas de laboratorio
 Guantes de vinilo o nitrilo
 El uso de dispositivos electrónicos está limitado a la actividad académica que

se esté ejecutando.
ELEMENTOS DE BIOSEGURIDAD ESPECIFICOS

TITULO DE LA PRACTICA
BIOSEGURIDAD
OBJETIVO GENERAL
Aplicar criterios disciplinares para la intervención segura en ambientes de

laboratorio.
MARCO TEORICO
Las normas de bioseguridad son un conjunto de normas preventivas destinadas a

proteger la salud y la seguridad de las personas que realizan actividades en el
laboratorio frente a riesgos procedentes del manejo de agentes biológicos, físicos
y químicos.
INTRODUCCION
La bioseguridad se hace indispensable en los laboratorios de microbiología,
lugares en los cuales se hace una manipulación directa de una amplia gama de
microorganismos pasando algunos por inofensivos, otros benéficos, hasta una
minoría que pueden ser patógenos, siendo de esta manera la base para la
preservación de la salud, en todos y cada uno de los laboratorios del periodo
lectivo.
ELEMENTOS EDUCATIVOS REQUERIDOS

(Equipos, Materiales, reactivos, herramientas con su respectiva cantidad)
Instalaciones del laboratorio

Textos
Artículos
PROCEDIMIENTO Y/O MONTAJE EXPERIMENTAL

Lectura de textos
Análisis de Lécturas
ANALISIS, DATOS Y RESULTADOS
RECOMENDACIONES Y/O OBSERVACIONES

Se recomienda responder las siguientes preguntas:
1. Que es bioseguridad
2. Cuáles serían para usted las normas básicas de bioseguridad en el laboratorio
de microbiología
3. Cómo puede usted evitar en el laboratorio daños a su salud
4. Mencione las clases de esterilización, cuales son los agentes de esterilización
con más uso en el laboratorio; en que consiste cada uno de ellos y para qué
materiales se utilizan.
BIBLIOGRAFIA
Grant W.D y Long P.E. Microbiología Ambiental. Ed. Acribia, S.A.1989. **
Holt, J.G; Krieg, N.; Sneath, J.; Staley, J. y Williams S. Bergey's Manual of
Determinative Bacteriology. Williams & Wilkins Ed., Baltimore, Maryland, USA 787
pp1994. **
Jawetz- Melnick y Adelberg. Microbiología Médica. Ed. El Manual Moderno, 15 a

edición 1996. *
Solicitante: Visto Bueno Coordinador de laboratorio:

Firma:
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Nombre: Genie Lorena Velasquez D.
Cargo: Docente TCO

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PRACTICA Nº 2
Núcleo MICROBIOLOGÍA Grupo: CUARTO
Temático:



PREPARACIÓN Y ESTERILIZACIÓN DE MATERIAL
OBJETIVO GENERAL
Reconocer cada uno de los elementos utilizados en microbiología y prepararlos

para la esterilización
MARCO TEORICO
El material que se emplea en el laboratorio de microbiología debe prepararse

adecuadamente, con la utilización de materiales apropiados que permitan
asegurar al final del proceso de esterilización, la eliminación total de toda forma de
vida microbiana, mediante el uso del autoclave, equipo que bajo condiciones de
temperatura, de presión y de tiempo arroja resultados pertinentes.
INTRODUCCION
En el laboratorio de microbiología el control de calidad parte de la utilización de

material estéril, con efectivos controles de esterilidad, teniendo en cuenta un
ambiente libre de patógenos y con todas las normas y elementos de bioseguridad.

 Elementos por grupos de trabajo

Elementos de bioseguridad
Alcohol 70%
Asas microbiológicas
Cajas de Petri limpias sin esterilizar
Fiolas
Tubos de ensayo
Pipetas
Elementos de caucho o plástico,
Escobillones
Autoclave
Horno.

1 Envoltura de material y taponamiento del mismo ( tapones)
2. Envolver en papel Kraft, cajas de petri, escobillones, bajalenguas, material de
plastico, tubos de ensayo.
Llevar el material de vidrio (pipetas) al horno y el resto al autoclave.
El material de plástico y caucho se esteriliza en autoclave a 110 °C, 10 librs de
presión por 10 minutos.

Resolver las siguientes preguntas:
Qué es Bacteriostático
Qué es Bactericida
Qué es Desinfección, esterilización. Limpieza.
Describa los pasos en el manejo de un autoclave.
Métodos de desinfección
Métodos de esterilización calor húmedo, calor seco
Tipo de compuestos químicos empleados para desinfección
Qué son las cintas indicadoras de esterilidad.
BIBLIOGRAFIA
pp1994. **

edición 1996. *

Firma:
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Cargo: Docente TCO Nombre: _________________________________
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PRACTICA Nº 3
Núcleo
Temático:



MONTAJE COLUMNA DE WINOGRADSKY
OBJETIVO GENERAL
Conocer la importancia de las relaciones entre microorganismos de acuerdo al

medio ambiente en el que se encuentre, favoreciendo su crecimiento y
desarrollando características de supervivencia.
Elaborar el montaje de la columna bajo criterios de conocimiento teórico
evidenciados en la práctica.
MARCO TEORICO
A diferencia de los estudios realizados por Louis Pasteur y Robert Kock, sobre
cultivos puros, dos famosos microbiólogos: Sergeri N Winogradsky (1856-1953) y
Martinus Willem Beijerinck (1851-1931) fueron los primeros en estudiar las
relaciones entre diferentes tipos de microorganismos que conviven en un mismo
hábitat y cuyas poblaciones se mezclan.
INTRODUCCION
Una demostración simple de laboratorio es a través de la columna de
Winogradsky, la cual ilustra como un microorganismo posibilita el crecimiento de
otros y viceversa.

 Elementos por grupo de trabajo

Muestra de barro de un arroyo, lago pantano, o costa del mar o rio
(aproximadamente 100 – 150 gramos de sedimento superficial o subsuperficial)
Recipiente alto de paredes transparentes y rectas ( botella o frasco)
Tapón de goma o cobertura plástica
Pipetas de vidrio, portaobjetos, cubreobjetos, cajas de petri.
Papel filtro o en su defecto papel periódico finamente picado.
5 gr. De cada una de las siguientes sales: CaCO3 , CaCO4, CaHPO4
Cinta de enmascarar
Alcohol 70%, 90%
Agua destilada
Probetas

Colectar una cantidad de barro o tierra para llenar el recipiente, hasta una altura
aproximada de 10 cm. Remover las piedras, ramas o partículas grandes del
material en estudio.
Mezclarlo con sales y el papel finamente picado.
Colocar la mezcla en un recipiente adecuado, y añadir suficiente agua destilada
hasta llegar aproximadamente a 5 cm del borde
Revolver la mezcla para eliminar burbujas de aire.
Colocar 3 o 4 portaobjetos en posición vertical sobre el sustrato, inclinados contra
la pared del recipiente.
Marcar el nivel del agua y cubrir la boca de frasco. Puede ser necesario reponer
agua para mantener el nivel original.
Incubar a temperatura ambiente cerca de una ventana para que reciba una
adecuada cantidad de luz, pero no excesiva.
Se debe observar semanalmente, anotando cualquier cambio de aspecto (color,
crecimiento microbiano etc.)

Qué es la columna de Winogradsky
Investigue en que consta la estratificación microbiana que presenta la columna.
Establezca la importancia del azufre en la sectorización y desarrollo microbiano.
Investigue que microorganismos participan en todo el proceso
Con base en el punto anterior, establezca el tipo de metabolismo que presenta la
población microbiana.
BIBLIOGRAFIA
pp1994. **

edición 1996. *

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PRACTICA Nº 4
Núcleo
Temático:



PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO
OBJETIVO GENERAL
Conocer la importancia y establecer las diferencias entre los medios de cultivos

empleados en cultivos microbiológicos.
Preparar adecuada y correctamente los medios de cultivo que ofrece la
universidad.
MARCO TEORICO
Un cultivo de microorganismos proporciona las condiciones físicas, químicas y

nutritivas adecuadas para que puedan reproducirse de forma controlada, el
crecimiento no está ligado a un solo tipo de microorganismo sino a una población,
existen diferentes tipos de medios entre los que se encuentran líquidos,
semisólidos y sólidos, a su vez cada uno de ellos puede cumplir con una
determinada función según sea la necesidad.
INTRODUCCION
Como parte de la identificación, diagnóstico e investigación microbiana se han
utilizado los medios de cultivo, quienes proporcionan el ambiente nutricional
adecuado a diversos microorganismos, en algunos casos confiriendo propiedades
comportamentales a fin de lograr un criterio de selectividad útil en el aislamiento e
identificación.


Cinta de enmascarar
Alcohol 70% y al 90%
Agua destilada
Cajas de petri,
Fiolas
Tubos de ensayo
Probetas
Elementos de caucho o plástico
Mecheros
Espátulas
Autoclave
Balanza
Cabina de Flujo laminar
Medios de Cultivo

-Revise la etiqueta de los medios de cultivo, anote el nombre, la composición y
forma de preparación.
-Realice los cálculos para preparar los volúmenes requeridos
-A continuación lleve la preparación a disolver en la plancha de calentamiento,
agite constantemente con ayuda de la varilla de vidrio hasta que ebulla para lograr
la disolución total del Agar. Mida el pH con ayuda de cinta indicadora de pH. El
rango de pH en este medio es de 7.0 a 7.5. Si se hace necesario la corrección del
pH, añada al medio de cultivo preparado la cantidad adecuada de solución de
ácido clorhídrico o de hidróxido sódico según el caso.
-Tape la boca del erlenmeyer con un tapón de papel kraft y selle con cinta de
enmascarar. Si las normas de preparación no indican otra cosa, la esterilización se
lleva a cabo en autoclave, a 121 grados centígrados, durante 15 minutos.
-Esterilizado el medio deje enfriar aproximadamente a 45°C.
-Proceda a servir el medio en presencia del mechero y en cajas de petri,
previamente esterilizadas. Las burbujas de aire en la superficie de la placa se
eliminan “abanicando” brevemente la superficie con la llama no luminosa de un
mechero. Deje enfriar hasta que solidifique.

Qué es un medio de cultivo
Investigue los tipos de medios de cultivo, empleos, diferencias, entre cada uno de
ellos.
Indique los componentes de los medios líquidos, sólidos y semisólidos y de
acuerdo a su función, enriquecidos, de transporte, de enriquecimiento, selectivos,
diferenciales.
Por qué es importante el pH en la preparación de un medio.
Como se realiza una prueba de esterilidad a medios de cultivo.
BIBLIOGRAFIA
Madigan, M. T.; Martinko G. M. ; Parker J. Brock, Biología de los Microorganismos.
Ed. Prentice Hall. 10ª edición. 2004. *
pp1994. **

edición 1996. *

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PRACTICA Nº 5
Núcleo
Temático:




CULTIVO MICROBIANO: TÉCNICAS DE SIEMBRA Y LECTURA DE SIEMBRA
OBJETIVO GENERAL
Conocer y desarrollar las técnicas de siembra microbiológica que existe.

Generar la destreza manual de la siembra en el laboratorio, teniendo en cuenta
las propiedades de los medios de cultivo.
MARCO TEORICO
Sembrar es introducir artificialmente una porción de muestra (inoculo) en un medio

adecuado con el fin de iniciar un cultivo microbiano para su multiplicación y
desarrollo, el medio se somete a unas condiciones de temperatura en una
incubadora para su crecimiento; existen varias técnicas de siembra empleadas
según la necesidad del manipulador y que proveerá a su vez la facilidad en la
interpretación del mismo.
INTRODUCCION
Para lograr una adecuada identificación y diagnóstico microbiano se hace
necesario emplear una correcta técnica de siembra, teniendo en cuenta el objetivo
a lograr un crecimiento masivo o un crecimiento aislado.
Los cuales a su vez permitirán desarrollar habilidades en el momento de reconocer
un crecimiento microbiano.

Cepas de microorganismos
Cinta de enmascarar
Asas bacteriológicas y micológicas
Alcohol 70%, 90%
Agua destilada
Escobillones
Agua depositada por varios días o contaminada etc

Cajas de petri con y sin medio de cultivo
Fiolas
Tubos de ensayo
Mecheros
Estufa

Siembra de medio sólido a medio líquido
• Marque correctamente los tubos con el número del grupo, sistema de siembra
utilizado y la fecha.
• Esterilice un asa a la llama de un mechero y déjela enfriar.
• Tome el tubo que contiene la muestra a sembrar, retire la tapa del tubo, flamee la
boca del tubo. Introduzca el asa en tubo sin tocar las paredes y tome un poco de
colonia del cultivo, flamee nuevamente la boca del tubo, tapelo y dejelo en una
gradilla. Tome el tubo de caldo nutritivo estéril en el cual va a colocar la muestra,
destápelo, flameando la boca el tubo con el mechero e introduzca el asa con la
muestra obtenida.
º Realice movimientos de rotación con el asa para emulsionar con el caldo las
paredes del tubo. Retire el asa, flamee la boca del tubo y tape.
º Esterilice el asa en el mechero después de usarla.
º Incube los tubos a 37ºC por 24 horas.
º Observar el crecimiento obtenido. Si no hay crecimiento el caldo queda
transparente
Siembra de medio líquido a sólido
º Proceda en la misma forma que en la siembra anterior pero con el asa curva o de
argolla. Si la siembra es en tubo recuerde hacer punción y estría. Si es en caja puede
utilizar diferentes sistemas como estría, agotamiento, rejilla con el fin de lograr un
cultivo puro.
Siembra de medio sólido a sólido
º Proceda de la misma forma que en la siembra anterior pero utilizando el asa recta.
Los medios sólidos contienen agar en proporción de 1.5 a 2.0% y se emplean para
obtener colonias aisladas. Las placas de agar se pueden inocular mediante varios
métodos: como estrías, agotamiento y rejilla con el fin de lograr un cultivo puro.
Siembra en rejilla
Realice una estría que atraviese el centro del agar. Luego realice estrías en ángulo
recto con respecto a la estría inicial. Voltee el agar en ángulo de 90 grados y realice
estría hasta cubrir todo el agar.
Siembra por agotamiento
Tome una placa de agar, marque la base de la caja de petri con los números 1, 2 y 3.
Coloque la muestra a sembrar en el numero 1, realice estrías hasta la mitad de la
caja. Esterilice el asa y gire la caja hasta el numero 2, tome las dos ultimas estrías y
siga estriando hasta el numero 3. Gire la caja y termine de estriar, tenga cuidado de
no tocar las estrías ya hechas.
Siembra por estrías
Marque la caja en 6 puntos. Coloque la muestra en el punto numero uno, realice
estrías hasta el numero 2. Esterilice el asa, tome las dos ultimas estrías y extiéndalas
hasta el numero 3, tome las dos ultimas estrías y extiéndalas hasta el numero 4 y así
sucesivamente hasta llegar al numero 6.
Siembra masiva
Tome un hisopo estéril e introdúzcalo en el tubo que contiene la muestra a sembrar,
luego frote toda la superficie del agar. Le evaluación del crecimiento en las placas de
agar se hace a través de la observación de colonias en la superficie .
Siembra en agar inclinado
Esta se realiza por punción y por estría. Por punción: Introduzca el inoculo con el asa
recta hasta el fondo del medio con un solo movimiento y teniendo cuidado de hacer el
mismo trayecto de entrada que de salida. Por estría: Extienda el inoculo sobre el agar
inclinado deslizando suavemente el asa por la superficie en forma de zigzag.
No olvide flamear la boca del tubo antes y después de la siembra. Evalué la presencia
de crecimiento en el agar por la formación de una película o por el crecimiento de
colonias en la superficie.
Siembra en profundidad
Marque la caja de petri estéril con el número de grupo, la fecha y siembra en
profundidad. Abra ligeramente la caja de Petri cerca del mechero.
º Abra un tubo con cultivo de bacterias y con ayuda de una pipeta de Pasteur plástica,
transfiera 1 ml de éste cultivo a la base de la caja de petri estéril. Descarte la pipeta
en el frasco de boca ancha con clorox.
º Vierta un poco de agar nutritivo en la caja de Petri, tape la caja y luego realice
movimientos suaves sobre el mesón, en el sentido de las agujas del reloj, luego al
contrario, en forma de L y L invertida, y por último en forma de 8. Esto garantiza una
distribución homogénea de las bacterias en todo el agar para facilitar su posterior
recuento.
º Envuelva las cajas de Petri y los tubos con cinta de enmascarar, márquelos con el
número de grupo, la fecha. Luego incube 37º c por 24 horas.

Investigue los tipos Siembra que existen en microbiología.
Cuál es la utilidad de cada siembra que existe
Grafique las diferentes técnicas de siembra que existen
Qué elementos de laboratorio y bajo cuales condiciones se deben emplear para la
siembras.
Investigue como se realiza una descripción macroscópica de colonias
BIBLIOGRAFIA
pp1994. **

edición 1996. *

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PRACTICA Nº 6
Núcleo
Temático:



RECONOCIMIENTOS DE MICROORGANISMOS: COLORACIONES
OBJETIVO GENERAL
Identificar las tinciones como parte fundamental de la identificación microbiana.

Aplicar correctamente las tinciones, según corresponda cada caso.
MARCO TEORICO
Las características morfológicas de un microorganismo pueden determinarse

examinando muestras al microscopio, una célula no teñida es vista como
transparente, si por el contrario es teñida puede facilitarse su visualización, para
ello existen coloraciones simples y compuestas, las primeras emplean un solo tipo
de colorante y las segundas emplean varios con el fin de generar una
diferenciación.
INTRODUCCION
Como parte del diagnóstico e investigación microbiana se han empleado las
coloraciones o tinciones, que poseen la propiedad de teñir estructuras microbianas
logrando un contraste con el medio que los rodea facilitando así su identificación y
caracterización.

Cepas de bacterias, hongos (mohos y levaduras)
Colorantes de Gram:
Cristal violeta, lugol, alcohol acetona, Fucsina básica o safranina
Azul de metileno,
Azul de lactofenol.
Alcohol 70%,
Agua destilada o solución salina 0.85%
Aceite de inmersión
Asas microbianas
Laminas portaobjetos
Laminas cubreobjetos
Mecheros
Microscopios

IDENTIFICACION DE BACTERIAS
Realice un frotis para colorear
Realice un montaje en fresco, observe al microscopio en 10 x y 40 x.
Realice una coloración simple y coloración de Gram, observar al microscopio en
objetivo de 10 x, 40 x y 100 x.


Qué es una coloración
Investigue los tipos de coloraciones
Acerca de la coloración de Gram, indique en que caso se utiliza, sus
componentes, cuál es la función de cada componente y tiempos de cada uno.
BIBLIOGRAFIA
pp1994. **

edición 1996. *

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PRACTICA Nº 7
Núcleo
Temático:




DETERMINACIÓN DE FLORA AMBIENTAL Y HUMANA
OBJETIVO GENERAL
Identificar las estructuras bacterianas y micóticas a través coloraciones

específicas.
Conocer la flora microbiana cultivable que procede del ambiente y del hombre
MARCO TEORICO
La flora humana y ambiental están caracterizadas por presentar diversos sectores

donde residen microorganismos con diferentes condiciones de humedad,
temperatura, pH y nutrientes, en la flora humana en condiciones normales, deben
encontrarse en equilibrio sin causar ningún tipo de alteración, por su parte la flora
ambiental cumple con similares condiciones al constituirse como parte de la
microbiota que favorece una armonía ecosistémica.
INTRODUCCION
Como parte del diagnóstico e investigación microbiana se han utilizado diversas
estrategias, a fin de aislar e identificar microorganismos a partir de diferentes
muestras, entre las que se incluyen de origen humano, animal, medio ambiental,
diferentes industrias, entre otras, empleando para dicho fin, medios de cultivos con
determinadas características y coloraciones que tiñen estructuras microbianas de
acuerdo a la afinidad por sus componentes.


Medios de cultivos previamente preparados
Agua destilada estéril (los venden en sobres)
Estufa
Cinta de enmascarar
Alcohol 70%, 90%
Levadura de panadería
Escobillones
Mecheros
Espátulas
Autoclave
Balanza
Incubadora
Colorantes de Gram
Azul de metileno
Microscopios

Marque una caja de Agar que se disponga y otra de Agar OGY con cinta en la
base, con los siguientes datos: No. de grupo, fecha, medio de cultivo y flora
ambiental.
• Escoja un sitio seguro en el laboratorio o en la Universidad. Recuerde: No salir
con la bata del laboratorio
• Abra las cajas y exponga al aire por 15 a 30 minutos.
• Pasado el tiempo, Reunir todas las cajas de Agar nutritivo con la tapa hacia
arriba, envuélvalas con cinta de enmascarar y márquelas con el número del grupo.
Incubar a 37 ºC por 24 a 48 horas.
Reunir todas las cajas de Agar Sabouraud o OGY con la tapa hacia arriba,
envuélvalas con cinta de enmascarar y márquelas con el número del grupo.
Incubar a temperatura ambiente por 4 a 7 días.
Determinación Flora de Superficie

El análisis de la superficie se realiza antes de hacer la limpieza y después
Antes de limpiar y después de limpiar
• Marque una caja de agar nutritivo y otra de agar sabouraud con cinta en la base,
con los siguientes datos: No. de grupo, fecha, medio de cultivo y superficie antes
de limpiar.
• Escoja una superficie en el laboratorio (mesones, pisos, pared)
• Delimite con la plantilla de cartulina (4x4 cm. aproximadamente) el sitio a
muestrear
• Abra el tubo tapa rosca con el agua destilada estéril, introduzca el hisopo para
humedecer el algodón. Coloque el tubo en la gradilla.
• Pase el hisopo humedecido sobre toda la superficie delimitada
• Encienda el mechero
• Abra la caja de agar nutritivo marcada cerca del mechero y pase suavemente el
hisopo sobre el agar, haciendo un zig-zag en la superficie. Cierre la caja.
• Abra la caja de agar OGY o Sabouraud marcada cerca del mechero y realice el
mismo procedimiento que realizó con el Agar Plate Count. Cierre la caja.
Determinación de Flora humana
• Escoja un área en el cuerpo de un compañero de grupo.

• Abra el tubo tapa rosca con el agua destilada estéril, introduzca el hisopo para
humedecer el algodón. Coloque el tubo en la gradilla.
• Pase suavemente el hisopo humedecido sobre el área escogida.
• Abra la caja de agar nutritivo marcada cerca del mechero y pase suavemente el
hisopo sobre el agar, haciendo un zig-zag en la superficie. Cierre la caja.
• Deje las cajas utilizadas en un sitio determinado del mesón de trabajo.
• Descarte los hisopos en el frasco de vidrio con una solución de hipoclorito de
sodio.
• Deje las cajas utilizadas en un sitio determinado del mesón de trabajo
• Llevar a incubar por 24-48 horas a 37°C..
• Realizar lectura trascurrido el tiempo
LECTURA
OBSERVACION MACROSCOPICA DE COLONIAS
Realice una descripción macroscópica de las colonias bacterianas y de hongos
entregadas en las cajas de petri. Haga un cuadro donde describa la forma
( puntiforme, circular, rizoide, irregular y filamentosa), el borde (entero, ondulado o
filamentoso), la elevación (plana, elevada, convexa, crateriforme y acuminada) y la

superficie (lisa o rugosa, mate o brillante, seca o cremosa, invasiva o superficial)
objetivo de 10 x , 40 x y 100 x.
Utilizar el aceite de inmersión para observar con 100 x.
Indique lo observado
IDENTIFICACIÓN DE ESTRUCTURAS FUNGICAS

Colocar una gota de Azul de lactofenol o Acido láctico sobre una lámina.
Coger la asa micológica, flamearla.
Abrir con cuidado y cerca del mechero la caja de petri que contiene el hongo
Tomar muestra del moho asegurándose de tomar el micelio completo
Colocarlo sobre la lámina hacer presión suavemente.
Cubrir con la laminilla.
Observar en el microscopio en objetivo de 40 X.
Dibujar e identificar las estructuras observadas.

Como se realiza un control de calidad en microbiología.
Cuales son los medios empleados para hacer control de calidad para mesofilos,
mohos y levaduras y coliformes.
Investigue cuales son los componentes del agar Plate Count y el agar OGY.
Investigue que microorganismos pueden hacer parte de la flora normal en el
cuerpo humano.
Investigue tipos de colonias de bacterias y de hongos.
Porqué los cultivos de hongos se deben incubar con la tapa en la parte de arriba y
no invertido como sucede con los cultivos bacterianos.
BIBLIOGRAFIA
Ed. Prentice Hall. 10ª edición. 2004.
pp1994. **

edición 1996. *

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PRACTICA Nº 8
Núcleo
Temático:



EFECTO DE LOS DESINFECTANTES SOBRE LOS MICROORGANISMOS
OBJETIVO GENERAL
Evaluar la eficacia de algunos desinfectantes sobre algunos microorganismos
MARCO TEORICO
Los desinfectantes son sustancias químicas que tienen como fin disminuir el
número de microorganismos que se encuentran en áreas cuyo proceso de
limpieza ha estado precedida, debido a que la materia orgánica a través de un
efecto diluyente reduce la capacidad biocida de los desinfectantes, para valorar la
eficacia de los desinfectantes se deben tener en cuenta factores físico químicos
tales como la temperatura, tiempo de exposición, pH, dureza del agua y la
adherencia bacteriana.
INTRODUCCION
El efecto de los desinfectantes, está sujeto a su composición química,
concentración empleada y al blanco de acción en los microorganismos, debido a lo
anterior se deben emplear diferentes concentraciones con el fin de evaluar la
eficacia de cada uno como compuesto microbicida.

 Elementos por cada grupo de trabajo

Hisopos estériles
*Discos de papel filtro estériles
*Pinzas estériles
*Hipoclorito de sodio al 5%
*Isodine solución
*Jabón desinfectante
*Timsen
*Creolina
*Alcohol antiséptico
*4 cajas de petri con agar Plate count
*2 cajas con agar OGY
*Cepas bacterianas en suspensión
*Frasco de boca ancha
*Regla.


Marque las 2 cajas de agar nutritivo con: el número. del grupo, fecha y
microorganismo en la tapa de la caja.
• Codifique los desinfectantes a emplear con un código. Ejemplo Hipoclorito 01,
CTmanos 02, CT industrial 03, Creolina 04, Glutaraldehído 06. • Coloque en la base
de la caja en forma equitativa, los códigos de los desinfectantes con un marcador de
vidrio.
• Encienda el mechero.
• Humedezca un hisopo estéril en el tubo de microorganismo a sembrar. Escurra el
exceso con las paredes internas del tubo.
• Siembre masivamente cada una de las bacterias en la caja de agar plate count que
le corresponde. Tenga en cuenta que las levaduras y los mohos se siembran en agar
OGY o Sabouraud.
• Descarte los hisopos en el frasco de boca ancha con solución de hipoclorito
• Con las pinzas estériles tome un disco de papel de filtro y sumérjalo en la solución
de desinfectante y colóquelo sobre el número que le corresponde según la
codificación de la base de la caja. Repita lo mismo con cada uno de los desinfectantes
utilizados en cada una de las cajas.
• Coloque las pinzas dentro del frasco de boca ancha.
• Envuelva las cajas de agar nutritivo con cinta y márquelas con el número del grupo.
Leve las cajas a incubar a temperatura de 37º C. por 24 horas

Conteste:
Cuales agentes químicos son más efectivos en el control de microorganismos?
Con qué criterios se selecciona un agente químico para desinfectar: superficies,
ambientes, objetos contaminados y la piel.
Que pruebas se utilizan para probar la efectividad de un desinfectante.
Investigue acerca de la Concentración inhibitoria mínima, qué es, para qué se
hace y a través de un esquema describa su procedimiento.
BIBLIOGRAFIA
Facultad de Medicina UNAM, Departamento de Bioquímica. Bioquímica y Biología
Molecular. Objetivos del curso y manual de prácticas de laboratorio. Mc Graw-Hill
Interamericana Editores, México, 2000.
pp1994. **

edición 1996. *

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PRACTICA Nº 9,10 y 11
Núcleo
Temático:



COLUMNA DE WINOGRADSKY : TOMA DE MUESTRA, SIEMBRA Y LECTURA

DE MICROORGANISMOS
(PRÁCTICA DESARROLLADA EN 3 SESIONES)
OBJETIVO GENERAL
Conocer e identificar la estratificación de los microorganismos en la columna de

acuerdo a sus necesidades de sobrevivencia.
Conocer los principales análisis microbiológicos a partir de muestras, con
evolución de tiempo.
MARCO TEORICO
Luego de un tiempo trascurrido de montaje de la columna, se puede diferenciar

claramente la estratificación microbiana de acuerdo a fenómenos como ciclos
biogeoquímicos, con el ciclo principal siendo el azufre y la fotosíntesis bacteriana
llevada a cabo por las bacterias fotosintéticas; al representar un ecosistema, se
encuentran otras poblaciones bacterianas, escasas fúngicas y algunos parásitos
los cuales se evidenciaran en cultivos y en montajes húmedos y secos.
INTRODUCCION
La Microbiología ambiental es un área de la microbiología que comprende una
variedad de microorganismos que participan activamente en el medio ambiente
favoreciendo o no el medio en el que se encuentren, en los dos tipos de muestras
se pueden observar las relaciones microbianas de acuerdo a sus requerimientos
nutricionales y metabólicos.


1 bolsa para todo el grupo de 500 ml Solución salina 0.85%
6 Tubos de ensayo
Pipetas de 2 y 1 ml estériles
2 pipetas de 10 ml
12 cajas de petri ( 4 agar plate count, 4 agar EMB, 4 agar OGY). * preguntar si es
siembra en profundidad o superficie.
Incubadora
500 ml agar plate count
500 ml agar OGY
500 ml Agar EMB
Cinta de enmascarar
Alcohol 70%, 90%
Agua destilada
Cajas de petri
Mecheros

Estufa
Para la LÉCTURA:
Colorantes de Gram
Láminas
Aceite de inmersión
Papel de arroz
Azul de lactofenol
Otros colorantes

RECUENTO DE AEROBIOS MESOFILO
1. Prepare las diluciones 10 ¯1 hasta la dilución 10 ¯5 teniendo en cuenta que los
productos que se van a manipular son sólidos.
2. Siembre 1 ml de dilución 10-3 y 10-5 en el fondo de una caja de petri debidamente
marcada, estéril y adicionando luego 15 ml de agar PCA fundido estéril.
3. Homogenice, e incube a 35ºC +/- 2ºC por 24 – 48 horas.
RECUENTO DE ENTEROBACTERIAS
1. Prepare las diluciones 10 ¯1 hasta la dilución 10 ¯5 teniendo en cuenta que los
2. Siembre 0.1 ml de dilución 10-2 y 10-4 en la superficie de una caja de petri
debidamente marcada, estéril y con 15m l de agar EMB.
3. Homogenice, e incube a 35ºC +/- 2ºC por 24 – 48 horas.
RECUENTO DE MOHOS Y LEVADURAS

1. Prepare las diluciones 10 ¯¹ hasta la dilución 10 ¯5 teniendo en cuenta que los
2. Siembre 1 ml de dilución 10-3 y 10-5 en el fondo de una caja de petri debidamente
marcada, estéril y adicionando luego 15 ml de agar OGY fundido estéril.
3. Homogenice, e incube a temperatura ambiente por 3 – 5 días.
LECTURA DE CULTIVOS
OBSERVACION MACROSCOPICA DE COLONIAS

Realice una descripción macroscópica de las colonias bacterianas y de hongos
entregadas en las cajas de petri. Haga un cuadro donde describa la forma
( puntiforme, circular, rizoide, irregular y filamentosa), el borde (entero, ondulado o
filamentoso), la elevación (plana, elevada, convexa, crateriforme y acuminada) y la
superficie (lisa o rugosa, mate o brillante, seca o cremosa, invasiva o superficial)
objetivo de 10 x , 40 x y 100 x.
Indique lo observado
IDENTIFICACIÓN DE ESTRUCTURAS FUNGICAS

Colocar una gota de Azul de lactofenol o Ácido láctico sobre una lámina.
Coger la asa micológica, flamearla.
Abrir con cuidado y cerca del mechero la caja de petri que contiene el hongo
Tomar muestra del moho asegurándose de tomar el micelio completo
Colocarlo sobre la lámina hacer presión suavemente.
Cubrir con la laminilla.
Observar en el microscopio en objetivo de 40 X.
Dibujar e identificar las estructuras observadas.

Se recomienda responder las siguientes preguntas:

1. Qué es un recuento microbiano y para que se utiliza
2. Como se realiza un recuento para mesófilos, para coliformes y para mohos
y levaduras e indique como se deben informar.
3. Analice, dibuje y explique la relación de entre los diversos microorganismos
que se encuentran en la Columna de Winogradsky
BIBLIOGRAFIA
Madigan, M. T.; Martinko G. M.; Parker J. Brock, Biología de los Microorganismos.
pp1994. **

edición 1996. *

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