Factores de Crecimiento y Señalización de

proteínas en el Desarrollo Craneofacial

Robert Spears y Kathy K.H. Svoboda

La regulación del crecimiento y desarrollo son controlados por las interacciones de las
células entre sí y el medio ambiente extracelular a través de las señales de transducción
de los caminos que controlan el proceso de diferenciación mediante la estimulación de
la proliferación o causando la muerte celular. Esta opinión definirá las moléculas de
señalización comunes y provee una visión de los principios generales de los eventos de
transducción de señales. También se revisa las vías de las señales de transducción
controlando un mecanismo específico encontrado en desarrollos craneofaciales
denominado Transformación Epitelial – Mesenquilales (EMT) empleado durante la
gastrulación, migración cranial de la cresta neural, y la formación paladar secundaria.
Semin Orthod 11:184 –198 © 2005 Elsevier Inc. Todos los derechos reservados

Factores de Crecimiento y proteínas G (GPCR, Fig 1A), receptores de canales iónicos,

Transducción de Señales
La señalización intracelular es usualmente desencadenada
por un evento de la superficie celular tal como una proteína
específica (ligando) que se une a un receptor de superficie
celular para formar una interacción receptor – ligando.
Dichas células contiene células vecinas y los tejidos
circundantes no celulares son denominados Contactos de
Matriz Célula - Célula ó Matriz Extracelular (ECM) (Fig
1A).1 Las interacciones de las células con otras células o la
ECM pueden estimular muchas reacciones, incluyendo:
incremento de la división celular, movimiento celular,
diferenciación e incluso muerte celular programada
(apoptosis). Las proteínas de la union superficial celular
(repectores) son clasificadas por la estructura de la proteína
y características del ligando. Estas proteínas son usualmente
localizadas en la superficie celular en la membrana plástica.
Parte de esta proteína puede estar situado fuera de la célula
para interactuar con el ligando. Esta parte de las proteínas es
llamado el dominio de union al ligando extracelular. Parte de
la proteína atravesará a través de la membrana, denominado
el dominio que abarca la membrane, y la porción de la
proteína estará dentro de la célula y se denomina dominio
citoplásmico.
La mayor parte de la lista de libros de biología celular
moderna muestra al menos cuatro tipo de receptores de
superficie celular, incluyendo los receptores acoplados a
Department of Biomedical Sciences, Baylor College of Dentistry, Texas
A&M Health Science Center, Dallas, TX.
This work was supported by grant sponsors: Baylor Oral Health Foundation;
Tobacco Endowment Fund, Texas A&M University System; Grant Num-
ber: 304-202850-4013.
Address correspondence to Robert Spears, PhD, Texas A&M University
System, Baylor College of Dentistry, Department of Biomedical Sciences,
3302 Gaston Ave, Dallas, TX 75266; Phone: 214-828-8297; Fax: 214-
828-8951. E-mail: rspears@bcd.tamhsc.edu
1073-8746/05/$-see front matter © 2005 Elsevier Inc. All rights reserved.
doi:10.1053/j.sodo.2005.07.003
receptores enlazados de Tirosina – Quinasa, y los receptores
con actividad intrínseca enzimática.2 Los CPCRs son
caracterizados por dominios multiples transmembrana
(usualmente siete) que enrolla a la proteína dentro y fuera de
la membrana en la conformación serpentina (Fig 1A,
GPCR). Los receptores de canales iónicos son relacionados
estrechamente y actualmente abiertos a un canal de
membrana cuando se une el ligando. Muchos receptores de
citoquinas están en la clase enlazada Tirosina – Quinasa ya
que carecen de actividad intrínseca; pero cuando el ligando
se une, la Tirosina – Quinasa intracelulares son activadas
para generar cambios celulares. Los receptores del factor
clásico del crecimiento tienen actividad de Quinasa dentro
de la proteína (intrínseca) y por lo tanto forma la cuarta clase
de receptores – el repector Tirosina – Quinasa, o receptor de
Quinasas Serina / Treonina (Fig 1A y C). Estos receptores
usualmente tiene un dominio transmembrana, y al menos
dos moléculas que deben convertirse estrechándose
asociadamente (combinación) para activar la señal.
Además de estas clases clásicas de receptores, las células
pueden responder a su entorno ECM a través de receptores
de integrina o receptores proteoglicanos tales como la
familia sindecano (Fig 1A y B). Los dominios de
transmembrana individuales con largos extracelulares y
dominios citoplásmicos mucho más pequeños caracterizan
estos receptores. Las moléculas de sindecan tienen largas
cadenas glicosaminoglicanos que asisten en la apoderación
de los factores del crecimiento de fibroblastos cercanos a la
membrana celular.3-6 Los receptores de integrina son
heterodímeros compuestos por subunidades. La familia es
muy grande con al menos 25 integrina heterodímeros,
incluyendo 19 subunidades y 8 subunidades idenficadas. 7
Las integrinas no tienen actividades de Quinasas, pero en la
unión en moléculas ECM, algunas proteínas asociadas se
activan por autofosforilación y luego fosforilan (activan)
184
Desarrollo Craneofacial 185

Figura 1 (A) Muchos tipos de receptores están las células que contribuyen a las mismas vías de señales. En esta ilustración, el receptor acoplado a la
proteína G (GPCR), receptor tirosina quinaza, las moléculas de adhesión celular (CAMs), selectinas, integrinas, sindecán, y cadherinas son representadas
con algunas de las señales de moléculas intracelulares que han sido identificadas. Todas las moléculas receptoras tienen tres características estructurales en
común: unión en dominio ligando extracelular, dominio transmembrana, y un dominio intracelulares citoplásmicos. (B) Las moléculas de integrina
(cuadrado inferior) son alargados para demostrar que las interacciones del dominio citoplásmico con otras proteínas (FAK, paxilina, Src y ILK). Estas
proteínas se convierten en fosforiladas cuando las integrinas se unen a ligandos (ECM) y se agrupan para formar adhesiones focales. (C) Receptores TGF
están en los receptores de tirosina quinasa (cuadrado superior) y la señal de activación a través de varias vías incluído el Smad y las vías de quinasa – PI3,
para estimular la EMT (como se explica en el texto).

que rodea proteínas para generar señales para las actividades Proteínas de Señalización
celulares específicas que usualmente cambian el
citoesqueleto de actina. Una de las primeras proteínas para Intracelular
convertirse fosforilada es la Quinaza de Adhesión Focal Un principio básico de transducción de señales es que
(FAK) (Fig 1B). existen problemas en al menos en dos estados: activado e
Otro concepto en la reciente literatura es que las diferentes inactivado. En este momento sabemos de varios métodos
señales moleculares pueden ser retiradas en microdominios para convertir las señales de encendido y apagado,
8,9
de las membranas denominadas series lipídicas que incluyendo fosforilación, desfosforilación, localización
pueden facilitar la transferencia entre diferentes receptores y intracelular, ciclos nucleótidos (ADP / ADP o GDP / GTP),
1,10-16 y niveles de calcio / iones (ver glosario; tabla 2).
vías de señalización.
186
Cascada de GPCR. Uno de los primeras señales de los
mecanismos de transducción descritas ha sido la cascada
CPCR que genera el ciclo clásico de segundos mensajeros
AMP (cAMP), GMP cíclico (cGMP), diacilglicerol (DAG),
Fosfato Inositol (Ca2). Cuando los receptores de la proteína
ligada u hormona llegan a ser activados, se desencadenan
una serie de eventos en la superficie celular que causan un
incremento transitorio en las moléculas del segundo
mensajero.2 Como en otros eventos de señalización, hay un
incremento transitorio en la forma activa de la molécula
acompañado por una rápida disminución para producir una
“señal”. En pocas palabras, cuando el ligando se une al
receptor causa un cambio en la estructura de la proteína que
permite la sub-unidad de la proteína G de unirse al dominio
citoplásmico del receptor (Fig 1A, GPCR). Esta interacción
causa el intercambio de GDP para la sub-unidad GTP y la
disociación de las sub-unidades desde la sub-unidad. La sub-
unidad activada (GTP ligado) interactúa con la Adenilil
Ciclasa, la enzima unida a la membrana responsable de la
producción de cAMP. Después de la activación del Adenilil
Ciclasa, la subunidad revierte al estado GDP y se reúne con
las subunidades. No solo es el número muy grande de
CPCRs, pero las subunidades son también numerosos,
proporcionando una amplia variedad de señales a la célula.
Una vez que las proteínas G son activadas, la señal puede ser
amplificada por las interacciones con otras proteínas.
Clásicamente, la Adenilil Ciclasa produce cAMP que activa
otras quinazas que derivan el ciclo de quinazas AMP
dependientes (cAPKs), también llamados proteína quinaza A
(PKA). Estas quinazas puede fosforilar (activar) un número de
substratos, dependiendo del estímulo específico para amplificar
la señal desde la superficie celular.2 Uno de los efectos de la
activación de la liberación de calcio desde las áreas de
almacenamiento intracelulares, tales como el retículo
endoplásmico rugoso y las mitocondrias. Desde los niveles
libres de calcio en las células son mantenidos a muy bajos
niveles, el rápido incremento en los niveles de calcio desde
estos organelos intracelulares ha sido una manera de
visualizar los eventos de las señales. El calcio puede ser
etiquetado, ya sea con colorantes de radiométrica
cuantitativos o colorantes de longitud de onda individuales
para monitorear estos cambios rápidos en células siguiendo
17
la estimulación. El secuestro rápido de los libres iones de
calcio por moléculas tales como calmodulina que se unen
muchos iones de calcio se desconecta la señal de calcio.
Fosforilación y Desfosforilación. La fosforilación y
desfosforilación provee otro mecanismo para las señales de
encendido y apagado. Las enzimas que fosforilan otras
proteínas son llamadas quinazas. Los aminoácidos comunes
que se convierten en fosforiladas son tirosina, teorina y
serina. Como se dijo anteriormente, las proteínas
fosforiladas pueden ser activados adicionando moléculas de
fosfato, y se desactivan removiendo el fosfato, una función
usualmente hecha por otra clase de enzima, la fosfatasa.
Algunas proteínas pueden auto fosforilarse; una vez
activado, pueden fosforilar sustratos a su alrededor. Un
ejemplo de este tipo de proteína se discutió previamente
describiendo Las moléculas de integrina; quinaza de
R. Spears Y K.K.H.Svoboda
adhesión focal (FAK) se convierte en fosforilada cuando las
integrinas se unen a su ligando, ECM (es decir, colágeno,
fibronectina, o laminina). Una vez que el FAK se convierte
en fosforilada, éste va a activarse o fosforilación paxillin,
18
una actina proteína asociada, y otra quinaza, Src (Fig 1B).
Src puede también iniciar activando las proteínas que
rodean,
Para complicar las cosas, algunas proteínas son inactivas
en el estado fosforilado y se activan después de la
desfosforilación. Por lo tanto, es importante entender los
posibles cambios en las proteínas antes de iniciar una
investigación. Las células pueden contener un aumento
constante de una proteína dada en una fuente, pero la
proteína tiene que estar en un estado activo para producir
19
una señal que va a cambiar las proteínas alrededor de ella.
Es importante recordar que sólo porque un mRNA para una
proteína dada es expresado; esto no indica que la proteína
fue producida o que haya sido activada.
Unión de Nucleótidos. La proteína está generalmente en un
estado inactivo si el nucleótido ADP o GDP se unen y son
activados cuando el ATP o GTP se unen. Un ejemplo de este
tipo de activación es la pequeña familia de proteínas G, Ras
y Rho. Estas proteínas se alternan entre la unión activa GTP
desde (encendido) y la unión de forma inactiva GDP
(apagado) para regular otras quinazas que fluyen con la
corriente. Muchas otras proteínas regulan el estado
“encendido” y “apagado” de las pequeñas proteínas G. Los
factores de intercambio de guanina – nucleótido (GEFs) son
la señal de “encendido”, ya que se añade GTP a la proteína.
La activación de proteínas GTP (GAPs) son la señal de
“apagado”, ya que se eliminan un fosfato para desactivar la
proteína. La disociación del inhibidor de proteínas Guanina
– Nucleótido (GDIs), apoderándose las proteínas inactivas
en la fuente de citoplasma. Se ha demostrado que una de
estas proteínas reguladoras (p190RhoGAP; proteína 190
kDA que funciona como GAP para Rho) se fosforila muy
rápidamente en el epitelio embrionario muy rápidamente en
19
respuesta a las células de unión ECM. También se
demostró la disminución los niveles de proteínas de Rho o la
disminución de actividad de otras señalizaciones de
24
moléculas de integrina.
Locación Intracelular. Algunas proteínas se mueven a las
estructuras intracelulares específicos, tales como las adhesiones
focales 1, 25 cuando son activados. Paxilina, Actinina y Talin
se acumulan en las adhesiones focales tanto en células
migratorias como en estacionarias. Además, las moléculas de
integrina llegan a estar agrupadas en la adhesión focal de las
células de fibroblastos (Fig 1A) y nuevas evidencias indican
que estas proteínas pueden actuar como sensores para las
14
fuerzas mecánicas.
Muchas proteínas se mueven a la membrana plasmática
cuando se activan . El movimiento a la membrana plasmática
pueden tener muchas medidas, incluyendo la liberación de una
proteína chaperona citoplásmica y/o la adquisición de una cola
lipídica. Las pequeñas proteínas G (tales como el Rho) requiere
tanto la liberación del inhibidor de la disociación de la
proteína guanina-nucleótido (GDI) y una matiz de lípidos
Desarrollo Craneofacial
26, 27
para mover la membrana. Además de tener el GTP
unido a la proteína, ésta en sí se mueve al sitio en acción.
Muchos de las pequeñas proteínas GTPase (Ras, Raf, Rac)
siguen patrones de translocación intracelulares similares en
la activación.
Otras proteínas activadas mueven al núcleo y pueden
actuar como factores de transcripción. Ejemplos de este tipo
de translocación intracelular son algunos de las proteínas de
28-30
quinaza MAP. Las quinazas MAP pueden responder a
una variedad de señales extracelulares, incluyendo estrés
osmótico, choque térmico, citoquinas y los mitógenos.31
Dos de las quinazas MAP, las quinazas reguladas por
señales extracelulares (ekr-1 y ekr-2; también referidos
como erk-1/2), traslada al núcleo después de la activación
para regular la expresión de varios factores de transcripción
30, 31
(Tabla 1). La activación de las vías de quinaza de MAP
ha sido identificado como un mecanismo usado por
integrinas para regular la expresión de genes que conduce a
cambios en la forma celular durante la propagación o
10,21,32,33
migración de células, y como un camino de
1, 10, 34
diafonía entre integrinas y los factores de crecimiento
A veces, la señal de la proteína necesita unirse a otra
proteína, una chaperona, antes de la translocación al núcleo.
Las proteínas de transformación de crecimiento factor beta
(TGF-) activa una clase de proteínas llamados Smads. Estos
factores de crecimiento se unen a los receptores de
superficie de células (T RI y T RII) y activa las proteínas
específicas Smad (Smad 2 o 3) que luego se unen a una
proteína chaperona, Smad 4, antes de la translocación al
núcleo (Fig 1C), para actuar como factores de
transcripción.
35-38
Similarmente, las proteínas morfogenéticas óseas (BMPs) se
unen a los receptores BMP, activándose los Smads 1 al 5,
donde se une el Smad 4 para moverse al núcleo. Para
mayores detalles acerca de esta vía se discutirán más
adelante en esta revisión (regulación EMT).
Resumen
Las respuestas intracelulares a los receptores de superficie
celular son complicados y es tema de muchas
investigaciones activas. Un número de estudios han
establecido un vínculo recíproco entre las integrinas ECM,
la señalización del factor de crecimiento, adhesión de
moléculas célula – célula, dominios de membrana
especializados (grupo de lípidos), y receptores de proteína
vinculado G. 1 Además, se estableció la diafonía entre el
ECM y la vía estimulada de los mitógenos intracelulares.;
las pequeñas proteínas G y el fosfoinositol. 39, 40 El micro
medioambiente y los tejidos resultantes de las células
influyen profundamente sus vínculos. Por lo tanto, para
lograr un fenotipo diferenciado de las células o para
responder a los cambios micro medioambientales, las
moléculas ECM y sus receptores deben integrarse tanto en
sus formas como en sus funciones. En contraste, los genes
mutados y las interacciones aberrantes con el micro
medioambiente pueden degradar esta integración,
posiblemente resultando en una transformación maligna o un
desarrollo abnormal. 41 Recientemente, también se ha
187
convertido aparentemente que las integrinas regulares Rho
GTPases y viceversa. Las integrinas y GTPases podrían, por
lo tanto, estar organizados en una señal en cascada compleja
que regula el comportamiento celular. 1, 10, 21 En la
próxima sección de esta revisión, la importancia acerca de
las vías de señal para el desarrollo craneofacial van a ser
discutidas más adelante.
Factores Importantes de Crecimiento
en las Interacciones Epiteliales /
Mesenquimales
La transformación del fenotipo celular, desde epiteliales
hasta mesenquimales (transformación epitelial /
mesenquimal, EMT) y viceversa, ha sido bien documentada
en el desarrollo embrionario, tanto en la curacíon de heridas
y en metatarsis en tumores. La Epitelial sirve como límite
entre el medio ambiente externo y el resto de los órganos
mientras que las células mesenquimales son encontradas en
el compartimiento del tejido conectado. La función de la
barrera epitelial es parcialente soportada por uniones firmes
de célula – célula, tales como uniones ajustadas y
desmosonas. En adición, las células epiteliales normalmente
tiene polaridad apical y basal y añade hemidesmosomas a la
lámina basal. Las células mesenquimales son tambíén
movibles y rodeados por la matriz extracelular. Ellos tiene
polaridad antero – posterior, y forma solo de contactos
transitorios con sus células vecinas. Durante la transición del
fenotipo de la célula EMT, la célula epitelial pierde adhesión
célula – célula, rompiéndose a través de que la lámina basal
se convierte en movible, y las proteínas mesenquinales
expreso (Fig 2B).
Desde los mediados de los 90’s y más recientemente,
muchas revisiones fueron publicadas en EMT tanto en
42-48
desarrollo y en patogenesia. EMT y su oposición, la
transformación mesenquimal – epithelia, ocurren durante el
desarrollo normal del proceso. EMT ocurre durante la
gastrulación, uno de los primeros eventos de desarrollo que
cambia dos capas del disco embrionario, en tres capas del
embrión. Este proceso involucra la imaginación en la capa
superior de células (epiblasto) para formar tanto las capas de
50,51
mesodermo y capas germinales. En adición, varios
52
procesos de otro desarrollo tales como la esclerotoma y el
53-55
desarrollo de la mesénquima del cojín cardíaco requiere
EMT. En contraste, la transformación mesenquimal –
epitelial ocurren en la formación de somitas, riñones y el
56
caudal o secundario tubo neural. Esta revisión va a
concentrarse en el EMT durante el desarrollo de la estructura
craneofacial, específicamente en la cresta cráneo neural
(CNC) y la formación del paladar secundario.
Cresta Cráneo Neural
Antes del cierre de los pliegues neurales en la cabeza del
mamífero, las células de la cresta neural se separan desde la
capa epitelial embrionario del tubo neural dorsal cambiando
su forma y propiedades desde las células neuroepitelial a
células mesenquimal. En una reciente reunión celebrando las
contribuciones de James A. Weston para el entendimiento de
la cresta neural, Weston propuso que el CNC son derivados
188 R. Spears Y K.K.H.Svoboda

Table 1 Factores de transcripcion

Cbfa 1 Factor de union al nucleo a1, control de la diferenciacion de las celulas mesenquimales dentro los osteoblastos
Dax 1 Hormona receptor nuclear de la familia expresada en diferentes tiempos gonadales
Dlx Genes distales de modelos pareados (6 miembros) que estrechamente relacionados con los genes Hox y
estan implicados en la morfogenesis de la mandibular y el oido interno
E12 Activador de transpcripcion para MyoD
Egr-1 Crecimiento temprano respuesta-1, que se encuentra en el estadio brote mesenquimal del diente
Emx-2 G e n e s Homeobox es necesario para la formacion del cuerpo calloso
En-1 -2 Engrailed-1 and -2, con Pax-1 and -2 son criticos para organizacion del desarrollo del mesencefalo y el
cerebelo en ambos lados del organizador itsmico.
Eya-1-2 Ojos ausentes-1, -2—expresados en la placode del cristalino, requiren Pax-6 para la expresion
GATA-4 Es importante en el desarrollo temprano del corazon
Gbx2 Gastrulacion cerebro homeobox 2—expresada en el cerebro posterior para formar la frontera medio del
cerebro posterior , necesario para formacion de rombomeres 1 y 3
Gli-1-3 Zinc factores de regulacion de morfogenesis del dedo; S e l i b e r a Gli-1 a partir de los microtubulos complejos
abajo del shh, whereas Gli-3 es anterior y suprime shh
Goosecoid Homeodomain proteinica expresada en la region primitivo del nodo; activada el chordin, noggin y otros genes en
la region organizadora
HNF-3 Factor nuclear Hepatico 3—expresado tempranamente en el intestine GATA-4
HNF-3 Factor nuclear Hepatico 3 —expresado en la region organizadora temprana con goosecoid y chordin
Hox a-d Homeobox—contienen a-d— pertenece a los genes que se encuentran en el grupo de los cuatro cromosomas—
necesario en la segmentacion craneocaudal del cuerpo
Id Inhibidor del nucleo de union del ADN que puede formar un heterodimero con MyoD y bloquear de dimerizacion del
MyoD
Krox-20 Gen de segmentacion q u e g u i a l a formacion de rombomeros 3 y 5, kreisler y Hoxa-1 estan envueltos en la
formacion d e rombomeros 5
Lbx-1 Lim-tipo homeobox contienen genes
Lef-1 Potenciador linfoide del factor 1, que envuelve a la via Wnt-catenin durante la transformacion- epitelio
mesenquimal
Lbx-3-4 Expresado in Rathke’s primordium con Rpx de la forma Rathke’s bolsa
Lim-1 Homeobox contiene el factor de transcripcion necesario para el desarrollo de la cabeza
Lmx-1 Se encuentra en la extremidad del brote del mesodermo—responde a la rama de la molecula de senalizacion
del ectodermo, Wnt- 7a para inducir las caracteristicas dorsales; produce el ectodermo ventral En-1 para suprimir
Wnt-7a y Lmx-1
MEF-2 Potenciador del factor miocitos-2—importante en el dearrollo temprano del corazon
MFH-1 El factor de transcripción forkhead-1-winged hélice-deficiencia del mesénquima en ratones conduce a la interrupción
del arco aórtico izquierdo
Msx-1 Expresado en rápida proliferación del mesénquima en los tipos del primordio facial, brote de las extremidades, y la lámina
dental, MSX-1 y -2 expresan en diente fase de brote mesénquimal
MyoD Durante el desarrollo musculo miogenico regulado por los factores se expresan en secuencia (Myf-5,Pax-3, MyoD,
miogenina MRF-4)
Nkx2-5 Importancia del desarrollo temprano del corazon
Oct-3-4 Genes Homeodominio de la familia POU; Oct-4 es importante en las etapas de escisión temprana y es en todos los
blastómeros hasta el estadio mórula
Otx-1-2 Orthodenticle homólogas-controles formación del prosencéfalo / cerebro medio, Otx-2 el cual caracteriza precursores del
primer arco
Paraxis Helix-loop-helix factor transcipcion sometido mediante el epitelio mesenquimal de transformacion
Pax-1-9 Paired box-1 to -9—contiene un par dominante y un par parcial homeobox; Genes Pax son importantes para órganos
de los sentidos y el desarrollo del sistema nervioso; además de que están involucrados en los tejidos que utilizan la
transición epitelio-mesenquimal en los procesos de desarrollo
Pdx-1 Pancreático duodenal homeobox-1 expresada en las células progenitoras pancreáticas con Hlxb-9
Pit-1 Pituitaria-1, miembro de la familia de genes POU expresa en la pituitaria
Pitx-1 Expresado en el desarrollo de las extremidades posteriores arriba del Tbx-4; Pitx-2 que se expresa en el temprano
desarrollo de la membrana orofaríngea
Rpx Bolsa Rathke homeobox que contienen genes de se expresados en la bolsa de Rathke primordio con Lbx-3 y
Lbx-4, estimulada por BMP-4 y FGF-8
SF-1 Se expresa el factor-1 Steroidogenico expresados en diferentes tiempos gónadales , el desarrollo de la corteza adrenal,
pituitaria y el hipotálamo
SIP-1 Proteínas Zinc del dedo que reconoce E-box motifs y encontró la transformación de células epiteliales mesénquimales
(EMT) y reprime la E-cadherin
Desarrollo Craneofacial 189

Table 1 Continuacion
Slug Proteínas zinc del dedo que se expresa en células epiblasticas durante la gastrulación y las células de la cresta
neural en el estadio de desarrollo de la etapa de placa neural ; las células que expresan transformación del slug de
los fenotipos del epitelio mesenquimal
Snail Proteínas dedo de zinc que reconoce E-box motificado y encontró en las células transformando del epitelio al
mesénquima (EMT) y reprime la E-cadherin; estrechamente relacionado con el slug
Sox Familia larga (más de 20) que tienen un grupo comun de alta movilidad (HMG) de dominio que se une a 7
nucleótidos en el surco menor de la hélice del ADN; Proteínas Sox trabajan con otros factores de transcripción en
una gran variedad de tejidos; Sox-9 controla la diferenciación de las células mesenquimales en precartilago
Sry Sex-región determinante, un miembro de la familia de genes Sox se encuentra en el cromosoma Y, desencadena el
desarrollo testicular inhibiendo Dax-1
Tbx-4-5 T-box familia, -5 expresado en la extremidad anterior; -4 Expresado en la extremidad posterior con Pitx-1, Tbx-5
expresada en la retina dorsal
Twist Proteína básica hélice-loop-hélice que es un regulador de la morfogénesis que juega un papel esencial en la
EMT incluyendo el desarrollo mesodermo durante la gastrulación por la represión de la E-cadherin
Vax-2 Ventral anterior homeobox-2—expresado en la retina ventral
Wt-1 Tumor de Wilms de suprecion del Gen-1- expresados en los conductoos mesonéfricos regulado por la
transformación del epitelio mesénquimal.
ZFY Zinc dedos Y
*Compilación de varios incluyendo Carlson.138

57,
desde una temprana población de ectodermo no neuronal.
58
Mientras esta teoría controversial es averiguado para
atraer muchos investigadores en los próximos años, esta
revisión se concentrará en la teoría actual que el CNC ha
derivado desde el epitelio neural. Sin embargo, tanto como
el ectodermo y el neuroepitelio son tipos de células
epiteliales, tienen que completar el EMT. Una publicación
reciente del Desarrollo de la Dinámica dedica a este tema
como un asunto subtitulado: “Especial atención a la Cresta
59
Neural y las Contribuciones de James A. Weston.”
La mayor diferencia entre las células de cresta neural en la
región craneofacial y aquellas en el baúl es que las células
CNC son formados con instrucciones de nivel específico en
la cabeza, mientras aquellas en el baúl no aparecen ser
60
programadas. En la región craneal, el CNC migra en
corrientes difusas a través de la mesénquima craneal, con un
nivel de instrucción específico, a alcanzar sus destinos
finales. Estas células también son referidas como
61
ectomesénquima en algunos textos. Los extensos
experimentos demostraron que el mantenimiento de esta
parcial característica es muy importante en el desarrollo de
los patrones en el rostro.
:Las células CNC son como células multipotentes, que
responden a señales expresadas espacialmente temporales y
convirtiéndose en “comprometidas”. Los candidatos a
reguladores incluyen factores de crecimiento – miembros de
65
la familia TGF factor de crecimiento fibroblastos
(FGF)66,67, factor de crecimiento derivado de plaquetas
(PDGF)68, y productos gen Wnt69,70 (Tabla 2). El papel de
la familia TGF-en los procesos de desarrollo CNC ha sido
recientemente revisado.71 La implicación de varias
moléculas de transducción de señales y factores de
transcripción también han sido reportados.44
Los procesos maxilares pareadas y la prominecia mandibular
del primer arco branquial dan lugar principalmente a las
estructuras de los maxilares superior e inferior. El
componente de la cresta neural de la mandíbula superior se
deriva del cerebro anterior y el mesencéfalo, mientras que la
de la mandíbula inferior desde el mesencéfalo y
rombencéfalo (rhombomeres 1 y 2). Estas células CNC
contribuyen principalmente a las siguientes estructuras en el
primer arco branquial: paladar y maxilar, la dermis y la
grasa de la piel, papila dental, las células de Schwann de los
nervios periféricos, los melanocitos, y parte del tejido
conectivo. Un estudio reciente demostró que la eliminación
condicional de la señalización de receptor gen
transmembranal (T rII) en sólo el linaje craneal y la cresta
neural resultó en la hendidura del defectos del paladar y
atrofias secundarias. La patogénesis de paladar hendido en
estos ratones parece estar relacionada con el deterioro de la
célula de proliferacion.72 la formación normal de algunos
derivados del primer arco branquial, tales como paladar y el
labio, necesitan la transformación epitelial-mesenquimal du-
rante remodelación embrionaria.
Regulacion del EMT
Factores de crecimiento y las señales de
transducción. La regulación de la EMT es críticada
durante los procesos de desarrollo dinámicos y homeostasis
postnatal. Hay (1989) postulo que el gen (s) maestro
activado en epitelios por los cambios en el medio ambiente
al iniciar el EMT (teoría del gen maestro) (Fig 2).
Recientemente varias moléculas han sido identificados como
posibles genes maestros INCLUYENDO factores Twist de
transcripción, Snail o SIP1 (Tabla
1). Los cambios en el entorno que pueden iniciar EMT
incluyen factores de crecimiento, moléculas de adhesión
celular, matriz extracelular, y la superficie del receptores y
baja señal transduccion de los eventos (Tabla 2), y factores
de transcripción (Tabla 1). Las células epiteliales se
caracterizan por adherencias célula-célula (adherencia
unidas, desmosomas y hemi-desmosomas,) y un lámina
basal intacta. Durante EMT las células pierden la expresión
de las proteínas de adhesión celular, especialmente la E-
cadherin y aumentan la expresión de las enzimas que
rompen la lámina basal (Figura 2B).
Esta revisión se centrará en el TGF y su señalización bajo
las moléculas principalmente durante el desarrollo del
paladar. El TGF-superfamilia incluye muchas pequeñas
190 R. Spears Y K.K.H.Svoboda

Figure 2 (A) Los estantes de las promiencias palatinas crecen como se ilustra en las etapas tempranas principales de fusión horizontal
. La consecuencia de las crestas palatinas es estimulada por Fgf10 en el mesénquima que estimula la Fgfr2b en el epitelio y aumenta
shh que señala de nuevo al mesenquima.64,72 Cuando los estantes palatinas se reúnen en la línea media, las células epiteliales de borde
medial (MEE) desaparecen.42 Las células de la superficie de la epidermis progresan a través de la muerte celular programada
(apoptosis), y algunas células basales migran al epitelio oral o nasal, pero otras células cambian y se vuelven fenotipos a
mesenquimales a través de un programa regulado. (B) La teoría del gen maestro propone que un regulador hace que la regulación
sea bajo los genes epiteliales, en particular E-cadherin, y la regulación positiva de los genes mesenquimales tales como la vimentin,
fibronectin y N-cadherin. Las células también degradan la lámina basal que incluye colágeno de tipo IV y la lamina incrementando la
matriz metaloproteinasas (MMP). (C) El cambio del fenotipo puede ser visualizado mediante el etiquetado de las células epiteliales
con un marcador fluorescente (CCFSE) y luego el cultivo de las crestas palatinas durante 3 días. El marcador de marcado se visualiza
en secciones ópticas con focal individuales en la región mesenquimal en los procesos palatinos que habían fusionado recientemente
(C, flechas) .46

proteínas que son multifuncionales (control del crecimiento,
migración y diferenciación) tanto durante el desarrollo
embrionario y postnatal del tejido homeostatico.73-75 Las
respuestas celulares al TGF durante el desarrollo
craneofacial y regulación CNC han sido estudiado
ampliamente y recientemente revisados.71
Los estudios diseñados para investigar cómo las células
interpretan señales TGF han identificado los tres tipos de
receptores transmembranales de señalización TGF-: tipo I,
tipo II (T y T RI RII), 76 y T RIII (figura 1C). Tipos
receptores I y II TGF tienen un receptor citoplasmática
serina / treonina. Quinasa dominate TGF-s iniciado la
señalización mediante el ensamblado de los complejos de
receptores. La inicial referencia de T RII al ligando es
Desarrollo Craneofacial
reconocido por T RI y la formación de ligando / T RI / T RII
/ con resultados complejos en la activación de T RI por T
RII.77
Activado T RI propaga la señal de muchos efectos
fosforilados, tales como proteínas Smad (Fig
1C)78 Las proteínas Smad son homólogos a la Drosofila
"madres contra dpp" (mad), las proteínas Caenorhabditis
elegans Sma proteinas. En los vertebrados se han encontrado
al menos nueve genes que comprenden la familia Smad..
Diferentes miembros de la familia Smad tienen diferentes
funciones de señalización. Smads 1, 2, 3, y 5 e interactuar
con los receptores y se denominan R-Smads. Estas proteínas
se convierten en fosforilados que actúan en los los
receptores de acciones activadas y se transportan a la
nucleos.71,79-81
Sin embargo, cuando no hay señales de afuera hacia adentro,
R-Smads permanecen en el citoplasma, en parte mediante la
unión a la proteína SARA tempranas (Smad activación del
receptor de anclaje) fosforilación .82 Receptor fosfato de R-
Smads debilita la afinidad del R-Smads por SARA y expone
su señal importación nuclear. La activación de R-Smads
también aumenta su afinidad con Smad4 (CoSmad ).83,84 Los
resultados,el Smad de traslocacion completa dentro del
nucleo,donde el Smads interactua con los factores de
transcripción. El Smad señala el camino bajo control por
muchos agentes reguladores incuyendo la proteína
transmenbranal, BAMBI, que tiene un dominio intracelular
que imita la estructura de un receptor de tipo I y previene la
formación del recpetor complejo 85; la ubiquitin ligasa,
Smurf 186; el antagónicos del Smad6 y Smad7,87,88 y las
oncoproteínas de Eski / Sno.89 En adicion, en el núcleo
celular responsable de otras entradas de señal que
determinan qué genes serán reconocidos por el complejo
Smad 90Recientemente, el factor regulador interferón del gen
6 (IRF6) fue identificado como el candidato a la causa de
una forma de dominante autosómico del labio leporino y
paladar hendido.91 Van der Woude sindrome,sin embargo,
no está claro cómo la mutación puntual en este gen
contribuye al labio leporino o paladar hendido.
Aunque la vía Smad ha recibido mucha atención en los
últimos 5 años, ahora se apreciará que el TGF - complejo
receptor activado también puede indicar a través de otras
vías, 92 tales como los que implican las proteínas quinasas
activadas por proteínas quinasa (MAPKs), 93,94 fosfoinositol-
3 quinasa (PI-3-quinasa) (figura 1C), 95,96 y PP2A / p70S6K,
aunque los detalles moleculares de este acoplamiento son
todavía oscuros. La importancia relativa y la interacción de
estas diversas vías en las respuestas cambiantes de las
células a TGF están comenzando a ser sondeado.
Miembros de la familia TGF son esenciales para la EMT
durante el desarrollo. El cojín cardíaco embrionario ha sido
estudiada consecutivamente en un modelo de cultivo de
órganos que demostró la separación de células de las células
endoteliales iniciales TGF-2 mediada por TGF-3, mientras
que se requería para el cambio morfológico de células que
permitió la migración de las células en la matriz extracelular
.97 Estas conclusiones se basaron en experimentos que se han
utilizado en la oligodesoxinucleótidos y neutralizantes de
anticuerpos de TGF-3 para inhibir la EMT en vitro.97
191
Desarrollo del paladar .como se muestra en la figura 2, las
formas del paladar secundario como una consecuencia de la
prominencia maxilar. Interesantemente, se ha demostrado
recientemente que la cobertura del cerdo (shh) y la Fgfr2b
también se expresaron en la epitelio palatal temprano 98 y
parecen ser inducida por Fgf10. Cuando esta vía fue
interrumpida en animales transgénicos, los procesos
palatales fallaron en crecimiento.98 Los estantes normales
palatinos se elevan y crecen hacia la línea media donde se
fusionan en algunos de los epitelios en las celulas del borde
medial (MEE) se mueven en el mesénquima a través el
proceso de EMT (Fig 2). La migración de células MEE se
pueden visualizar si las células epiteliales donde se bañan
en un marcador que sólo penetra el epitelio superficial tal
como carboxi 2,7 = diclorofluoresceín succinimidiléster
diacetato (CCFSE). Después de las crestas palatinas han sido
órgano que cultivaron durante 3 días, en donde se
encuentraron células mesenquimales (Fig
2C) demostrando que las células marcadas habían
progresado a través de EMT.99
Durante el desarrollo del paladar en mamíferos TGF-
isomorfos 1, 2, expresión 3, T RII, RIII y T se detectaron en
el epitelio del borde medial (MEE) en el sitio de
hibridizacion100 y inmuno-histoquimico.101,102 de particular
interés fue las localizadas de TGF-3 ARN, y en menor
medida en TGF-1 y TGF-2 en el MEE y el epitelio del
tabique nasal, que estaban destinados a someterse a
incremento EMT.100 usando oligodesoxinucleótidos
antisentido o anticuerpos neutralizantes a TGF-3, pero no
TGF-1 o TGF-2 , resultado en el fracaso de la fusión del
paladar in vitro.103 Otros experimentos demostraron que el
TGF-3 transgénicos y golpe fuera de los ratones tienen el
paladar hendido como su único defecto.104,105
Cuando los procesos palatinos de TGF-3 en ratones golpe
fuera se cultivaron, los epitelios de la línea media no pudo
pasar por EMT.106,107 Sin embargo, la sobreexpresión de
Smad2 en el TGF-3 animales nula partia del rescate fusión
palatal.108 Además, aunque algunos pollos tiene paladar
naturalmente abierta, los estantes de pollo en cultivo
fusionado cuando se añadió TGF-3 en el medio.109
Está claro que a partir de estos experimentos que el TGF-3
es un factor de crecimiento esencial al inducir EMT durante
la fusión del paladar. Investigadores han propuesto que los
posibles mecanismos de TGF-3- fusión palatal inducida
incluyen la regulación de la fusión mediante la inducción de
filopodia de la membrana celular en MEE antes plataforma
de contacto.107 En segundo lugar, la regulación de la matriz
extracelular y la degradación mediante la modulación de la
producción del inhibidor tisular de la metaloproteinasa-2
(TIMP-2), MMP13, y MMP2 ha sido propuesto.110
Recientemente, se encontró que el TGF-3 es necesaria para
inhibir la proliferación MEE durante EMT.111
Varios grupos de investigación han empezado a investigar el
TGF-3 intracelular estimulada por moléculas de señalización
que son responsables de EMT durante la fusión del paladar.
Smad2 la expresión se detectó durante la fusión palatal, 112
y ha sido sugerido que la fosforilación de Smad2 puede ser
necesario para TGF-3 de regulación a la baja de la
proliferacion MEE.111 Los grupos y la sobreexpresión de
Smad2 en el TGF-3 - / - ratón no hizo el rescate de las
192 R. Spears Y K.K.H.Svoboda

Table 2 Proteinas senal de transduccion, Abbreviaturas y Definiciones

Activin Proteina de senalizacion, miembros de la familia TGF, actividad de induccion en el mesodermo

Angiopoietin-1 Factores brotes—interactuando con el Tie-2 (receptor) durante la angiogenesis.
BAMBI Proteina transmembranal, cuyo dominio intracelular se asemeja a la homodimeracion interface
T RI receptor y la formacion de la prevencion of TGF- receptor complejo
bax bcl-associated x proteina de la muerte cellular acelerada (apoptosis)
b-catenin Se une al E-cadherin en uniones celula-celula, pero puede ser modulado por agentes de senalizacion (Wnt, Ras, and PI-3
kinase) recolocado en los nucleos e interactuando con los factores de transcripcion (TCF/LEF-1); estabilizador nuclear -
catenin posee un estado que induce EMT in vitro133
bcl-2 B celula de linfoma proteinica donde existe bloques de muerte celular (apoptosis)
BMP-1-9 Proteina del hueso morfogenico, miembros del TGF- familia—inducida por la placa neural,diferenciacion esqueletal, y
otras inducciones
CAM Moleculas de adhesion celular (neuronal CAM [N-CAM], L-CAM E-cadherin)
cAMP AMP ciclico, Segundo mensajero de la senal de trasduccion GPCR del camino
cAPKs AMP ciclico-dependen quinasa ademas el llamado protein- kinase A (PKA)
Cereberus Factor de senalizacion, Lim-1 y Cereberus-relato nulo de los ratones de la cbeza
cGMP GMP ciclico
Chordin Molecula de senalizacion activa en el desarrollo muy temprano incluyendo la formacion primitiva, expresada por el
nodal, cripto, and Vgl; tambien la parte del nodo primitivo (organizado)
Cripto Descripcion de Chordin
Cyclops Molecula de senalizacion expresado en primordios opticos para separar campos opticos
COL Colageno—matriz d e proteinica extracelular; encima de miembros de 25 familias que estan identificados; superficie de las
celulas receptoras para el colageno de las integrinas
DAG Diacilglicerol, Segundo mensajero para GPCRs
Dia p140 Diaphanous, sustrato para RhoGTP, polimerizacion de actina promotora
dpp Decapentaplegic-TGF- familia, desarrolo de senalizacion del miembro
E-cadherin Celula de adhesion molecular encontrada en la uniones adheridas
ECM Matriz extracelular incluida el colageno, lamina de proteoglicanos y fribronectin, etc
EGF Factor de crecimiento epidermal
erk Senal extracellular de la regulacion de proteina encontrada en la cascada de senalizacion del MAP kinase
ET-1 Endotelial-1, molecula de senalizacion secretada de las arterias coronarias que estimulan la conduccion del sistema
de desarrollo
FAK Adhesion focal de la kinasa, asociado en la senalizacion de los recptores de integrina
FGF 1-10, Factor del crecimiento fibroblastico 1-10, senalizacion de la moleculas expresadas mediante el desarrollo; asociado con
el sindecan y receptores FGF I–III
Follistatin Molecula de senalizacion para el trabajo con el vaso y chordin (de la notocorda) del block BMP-4 que induce la formacion
del sistema nervioso
GAP GTPase proteina de activacion en el Rho, vias de proteinas del Ras Cdc42
Gdf-5 Factor de crecimiento y diferenciacion-5, miembro de la familia BMP , activada en la formacion conjunta de las articulaciones
Del Wnt-14
GDI Inhibidor de la asosiacion de la Guanina-Nucleotido, secuestra RhoGDP y lo mantiene en forma nactiva
GDNF Celula Gliacil-derivado del factor neurotrofico, simulacion uterina para crecer mas que el blastema meteratrogenico
GEF Factor de intercambio de la Guanina, converted ede la familia Rho p r o t e i n i c o p a r a e s t a d i o GDP to GTP
GPCR Proteina G-receptores acoplados,d e s c r i p c i o n g e n e r a l d e l o s receptors que requieren proteina G para la
propagacion de la senal—mira glosario.
grb2 Factor de crecimiento receptor-acoplado de la proteina 2, adaptado a la proteina de crecimiento y el factor receptor
HGF Factor de crecimiento Hepatico (factor disperso)
ICE Interleuquina-1 enzima convertida
IGF Factor de crecimiento de insulina
Ihh Indian hedge hog, senalizacion de la molecula de la famila sonic hedgehog
Inhibin Inhibidor de la secrecion de la gonadotropina por la hipofisis
integrim ECM receptor y heterodimeros -ver glosario
ILK Integrina-vinculada con la kinasa
JNK/SAPK Jun N-terminal kinasa t ambién conocido como SAPK, actividad stress proteína quinasa
Kinase Enzimas que fosforila otras proteinas
Lefty F a m i l i a TGF, determinacion del cuerpo asimetrico
LIF Factor inhibidor de Leukemia
MAP kinase Actividad mitogen de la proteina Kinasa—ver glosario
MAPKK Actividad mitogen de la proteinica kinase tambien conocido MEK
MAPKKK Actividad mitogen kinase-kinase-kinase o MEKK
MIS Mullerian sustancia inhibidor, familia TGF, regresion de los ductos parmesometricos
MMP Matriz metaloproteinas, larga familia de enzimas para digerir ECM proteinas
Desarrollo Craneofacial 193

Table 2 Continuacion

NCAM Celula Neural, molecula de adhesion

NGF Factor de crecimiento del nervio
Nodal F a m i l i a TGF-, formacion del mesodermo y la racha primitiva, derecho-izquierdo fijacion axial
Noggin Molecula de senalizacion
Notch Receptor de la superficie celular activado por Delta o Jagged que inhibe a la célula vecina de la diferenciación en el fenotipo
dominante; un mecanismo utilizado para producir las células gliales en lugar de las neuronas
NT-3 Neurotrofina 3, miembro de la familia del factor de crecimiento nervioso, necesario para la migración de la cresta neuronal
especialmente en el tracto de la salida cardíaca
PDGF Platelet-derivado del factor de crecimiento
PDK 3-Fosfoinostide-dependen de la proteina kinasa
PKB Proteina kinase B tambien conocido como Akt
PKC Proteina kinasa C
Ptc Receptor inhibe el Shh que Smo unido a Shh—See Shh
Phosphatase Enzima de la proteina de la desfosforilacion
PI3kinase Fosfatidylinositol 3 kinasa
PIP2 Fosfatidylinositol (4, 5)-bisfosfato
RA Acido retinoico
r-Fng Fringe-expresada en la cresta ectodérmica apical durante el desarrollo de las extremidades radical temprano
SARA Smad anclaje de activacion del receptor , TGF- senalizacion
ROCK Rho espiral asociada en cual contiene la proteína Kinasa también conocido como p160 Rho kinasa
Shh Sonic hedgehog, señalando molécula que se une al receptor PTC (parcheado) que libera el efecto inhibidor de Ptc en Smo; activa
en el nodo primitivo, notocorda, placa de piso, portales intestinales, de la zona de actividad polarizante, brotes de pelo y
unas, consejos ectodérmicas de procesos faciales, ectodermo apical del segundo arco, puntas de brotes epiteliales
pulmonares, retina, tubérculo genital
Smo Smoothened, proteína integral de la membrana, que activa Gli, un factor de transcripción
Smad smad y mad senal homologa de la proteina recolocado en 1996, activado enel camino de la TGF
Src La kinase estuvo descrita por primera vez por el sarcoma virus Rous ;s i n e m b a r g o t a m b i e n s e e n c u e n t r a e n
las celulas normales
TGF- 1-3 Transformacion del factor del crecimiento, familia larga en el factor de crecimiento
T RI, II, III Transformacion del factor de receptor
TIMP Inhibidor del tejido de metaloproteinas
VEG-f Factor del crecimiento endotelial
Wnt-1 Homóloga del Wingless y drosófilas encontró en ectodermo neural anterior al organizador ístmico
*Varias referencias incluyendo Lodish e colaboradores2 y Carlson.138

fisuras palatinas secundarias. También hay evidencia de los
estudios de cultivo de células epiteliales mamarias que la
regulación por disminución de la señalización de la
disminución del Smad del crecimiento pendiente-Smad y
las respuestas transcripcionales; sin embargo, la regulación
a la baja no afectó a la formación de fibras de estrés TGF-
mediada y EMT.113
La comprensión de las senalesde transducción puede ser
complicados. Por ejemplo, hemos investigado recientemente
el papel de la señalización de TGF durante la formación de
paladar secundario en un modelo de ratón (Fig 3). Hemos
encontrado que un efecto alternativo bajo la señalización del
MEE, PI-3 quinasa, ha sido identificado como un efector en
la reorganización de la actina y TGF-mediada EMT.114-116
activado PI-3 quinasa fosforila fosfatidilinositol 4,5-
bisphophate ( PIP2) para generar fosfatidilinositol 3, 4, 5-
trifosfato (PIP3), que reclutan los efectos bajo a la
membrana plasmática (Fig 1C). Junto con las pequeñas
GTPasas Rho y Rac, PIP3 activa varias serina / treonina
quinasas tales como proteína quinasas 3-fosfoinostide-
dependientes (PDKs) .117,118 PDK1 activa PKC, p70S6K1,119
y se dirige a Thr308 de la proteína quinasa B (PKB, también
conocido como Akt), 120 mientras que la integrina-quinasa
vinculadas (CIC), un PDK recién encontrado Akt activa en
su sitio.121 Ser473 en la estimulación donde migra Akt y
anclajes de la membrana.122 Posteriormente, Akt activado se
separa de la membrana plasmática y se transloca en el
citoplasma y el núcleo, la regulación de la supervivencia
celular, la síntesis de proteínas, y la célula Cy.123 También
parece que PI-3 quinasa posee tanto los lípidos y la actividad
proteína quinasa 124 y puede controlar directamente las
actividades de los componentes individuales de la RAS /
RAF / ERK- Path- manera mitogénica mediante la
formación de un complejo de señal de proteínas.
Las consecuencias de la activación quinasa PI-3 son
numerosos, incluyendo los efectos sobre la progresión del
ciclo celular, la suspensión de medicion de la apoptosis, la
migración celular, y alteraciones en la célula-célula de
adhesion.125 PI-3 quinasa que tiene funciones reguladoras
clave y participa en el desarrollo del cáncer. El control de la
PI-3 quinasa es la actividad, por lo tanto, esencial para la
homeostasis.
Muchos de estos cambios celulares requieren la
reorganización del citoesqueleto de actina. Como un efecto
bajo de señalización TGF-senal, PI-3 quinasa está implicada
en la reorganización de la actina, metaloproteina (MMP) de
producción, y la célula mobil.114,115 Fue demostrado que
LY294002, un inhibidor específico de la PI-3-quinasa ,
completamente bloqueado TGF-mediada por la C-terminal
fosforilación de Smad2, la migración celular, y EMT
parcialmente bloqueado en cultura de las células de las
epiteliales mamarias.116 Desde MMPs son necesarios para
romper la membrana basal, se especuló que el bloqueo de
PI-3 actividad migración quinasa inhibidor celular y la
producción de MMP, que son procesos esenciales durante la
EMT. Además, la sobreexpresión de una quinasa bajo el
CIC efector PI-3 inducida anclaje independiente de
crecimiento epitelial celular, pérdida de expresión de E-
194
129
cadherin y EMT.126,127 CIC también implicaciones indica en
TGF-inducida por la conversión fibroblástica de células
metastasicas.128
Una reciente investigación en nuestro laboratorio apoya la
teoría de que la PI-3-quinasa era necesario para la EMT
durante el desarrollo del paladar secundario in vitro (E13.5-
R. Spears Y K.K.H.Svoboda
Figure 3 Las distintas secciones individuales de
hematoxilina y eosina (H & E, A, A ', B, B') y
laminina manchado (C, C ', D, D') de los tejidos del
paladar después
72 horas en el control (A, C) o 1 M LY294002-
tratado (B, D) medio. En paladar esta completamente
unido en el control medio(A, A '). No se observaron
epitelios en la línea media. En presencia de 1 M
LY294002, epitelios borde medial persistieron
(flechas en B, B '). La laminina se observó bajo el
epitelio de la superficie oral en todos los grupos
(puntas de flecha en C, D) y en las zonas
mesenquimales que pueden estar desarrollando los
vasos sanguíneos. Sin embargo, laminina fue negativa
en la línea media del paladar en el grupo control
cultivado (flechas en C, C '), indicando que la lámina
basal tenía completamente degradado en el paladar
fusionado. En contraste, se detectó lamina
estratificado en la línea media de LY294002- grupos
tratados (flechas en D, D ') lateral de dos capas del
MEE. Barra de escala 80 m en D (se aplica a A-D), 40
m de D '(se aplica a A'-D'). La medida de las
puntuaciones de fusión de los paladares después se
calcularon 72 horas de la cultivo en los diferentes
grupos de tratamiento como se describe en el estudio
de Janji y leagues.127 No hubo diferencia significativa
entre los controles y 100 M LY294002- tratado en los
paladares. Sin embargo, los tejidos tratados con
LY294002 1 y 10 M fueron significativamente
diferentes de los controles (* p 0,01) .
E16.5) .129 Hemos demostrado que el inhibidor de la quinasa
PI-3, LY294002, y la disminución del palatal mediode
fusión y la degradación de la lámina basal bloqueado.
Control de los paladar fusionados (figura 3A, A ') y el MEE
progresaron a través de EMT mientras que la lámina basal
degradado (Figura 3 C, C') en la cultura. Los procesos
Desarrollo Craneofacial
Palatinos tratados con LY294002 tenían células mecánicas
en la línea media (Fig 3B, B ') y la lámina basal aún contenía
laminina (Fig 3 D, D') y por tanto no se degrada. Sin
embargo, era posible que la inhibición de la PI-3 quinasa
retrasó pero no bloqueó completamente el EMT como en
algunos de los paladares fueron parcialmente fusionados129
(figura 3, gráfico de la puntuación media de la fusión).
Aunque hay pruebas de que PI-3 kinasa puede ser guiado
bajo de el TGF, también bajo de otros factores de
crecimiento y receptores de integrina como se ha
mencionado anteriormente.
Además la PI-3 quinasa, otras vías de señalización también
pueden ser activados por TGF. Una investigación de TGF-1
mediados desamblados de las uniones célula-célula
epiteliales demostrado un vínculo entre la vía TGF / Smad y
las alteraciones de catenin / E-cadherin fosforilacion.130 Un
estudio posterior por el mismo grupo transfectados
transitoriamente del epitelios con Smad2 / 4 o Smad3 / 4 ex
vectores de presion pero no alteró fenotipo celular . 131Estos
resultados sugieren que la vía Wnt que puede ser una vía de
señalización potencial más medial de acontecimientos
posteriores del siguiente receptor de TGF-vinculante. Como
parte del citoesqueleto epitelial, catenin se une a la E-
cadherin. La actividad de catenin se controla por un gran
número de parejas de unión que afectan a su estabilidad y la
localización, que puede ser modulada por muchos agentes de
señalización tales como Wnt, Ras, y PI-3 kinase.42,132,133 En
la liberación a partir del complejo, reubica catenin en el
núcleo e interacciona con factores de transcripción tales
como TCF / LEF-1. Esta bilizacion de la catenin nuclear
donde se ha demostrado que induce la EMT en vitro.134
Además de los cambios en los factores de crecimiento, la
modulación de entorno extracelular también incluye el
mantenimiento y degradación del ECM, que está mediada en
parte por metaloproteinas (MMPs) y los inhibidores de tejido
o metaloproteinasas (TIMP). Se observaron la expresión de
MMPs temporopatial 2, 3, 7, 9, y 13, y TIMPs 1 y 2 donde se
observaron durante la fusión de la murina palatal.135,136 La la
zona de fusión palatal de TGF 3-ratones deficientes, TIMP-2
estaba completamente ausente; MMP-2 y MMP-13 tiene a
reducir niveles.110 En la exposición al inhibidor de MMP
(BB 3103), los procesos murinos palatales han logrado
fusionar en cultura.137
Conclusiones y Futuras direcciones
Crecimiento y desarrollo craneofacial es un proceso
complejo y estrechamente regulado. En los últimos años, se
ha hecho evidente que la interacción entre los numerosos
factores reguladores de crecimiento que afectan a las células
del tejido del ser humano en desarrollo y la regulación
espacial 138 Mientras que una gran cantidad de información
ha sido adquirida desde los primeros descubrimientos de los
factores de crecimiento, se necesitan más estudios para
determinar cómo estos factores pueden ser manipulados en
un entorno clínico para aumentar el tratamiento.
Naturalmente ocurre señales endógenas para el desarrollo
craneofacial ,estos agentes terapéuticos potenciales para el
195
tratamiento de diversas anomalías craneofaciales. Sin
embargo, los agentes terapéuticos eficaces y aceptables con
esta propiedad se carece y aún permanecen en las etapas
iniciales de exploración.
Las acciones de los factores de crecimiento son muy
complejas, por eso cada factor de crecimiento que tiene
múltiples efectos a diferencia de los efectos de varios
tejidos, así como las interacciones de cada factor puede
tener otro orden sobre otra. Aún esta por determinar las
complejidades de estos efectos y la forma en que se puedan
ver afectadas por la concentración, el factor de duración de la
exposición, y la etapa de desarrollo de las células o tejidos
tratados. Antes de la terapia del factor de crecimiento puede
ser eficaz en el ámbito clínico, se necesitará una serie de
preguntas sin respuesta, incluidas los criterios de seguridad,
dosis y medidas del requerimiento del tratamiento,
preocupaciones temporales y vehículos adecuados en los
que se entrega los factores de crecimiento en un sitio de
acción. Muchos factores de crecimiento requieren una
exposición prolongada para generar una respuesta, por lo que
la elección del vehículo de entrega es de muy critica
importancia.
A pesar de los límites de la tecnología actual, la aplicación
de factores de crecimiento en el crecimiento y en el
desarrollo craneofacial muestra una promesa considerable.
Es probable que las combinaciones de factores de
crecimiento pueden ser útiles en algunas circunstancias
clínicas. El gran potencial de factores de crecimiento para
mejorar el tratamiento de diversas anomalías craneofaciales
no debe ser ignorado, pero, en lugar, necesita más
investigación. Estamos claramente en el umbral de una
nueva era en el desarrollo de los regímenes de tratamiento,
en el que vamos a ser capaces de regular los procesos que
rigen el crecimiento y el desarrollo normal y anormal y
quizás en última instancia, compren- dan las complejidades
involucradas en el desarrollo craneofacial.
Glosario para la señal de traduccion
Tipos de Receptores
Receptores acoplados proteinico G (GPCR): La familia mas
grande de moleculas receptoras. Ese es un receptor
caracterizado multiple de dominios transmembranal (siete
usualmente) que gana una proteina dentro y fuera de la
menbrana en una conformación serpentiante.
Algunos ejemplos son: los receptores de acetilcolina
muscarínicos, receptores de acetilcolina nicotinamida,
rodopsina, receptor adrenérgico.
Receptores de canales iónicos: Los receptores de canales
iónicos están estrechamente relacionados con los GPCR y en
realidad pueden abrir un canal de la membrana cuando el
ligando se le une.
Receptores de tirosina quinasa: Estos receptores tienen
usualmente un dominio transmembranal y al menos dos
moléculas que deben dimerizar para activar la señal. Los
196
ejemplos incluyen: EGFR, receptor del factor de crecimiento
epidérmico; PDGFR, receptor del factor de crecimiento
derivado de plaquetas; IGFR, receptor del factor de
crecimiento de la insulina; T y T RI RII, TGF-receptores I y
II; FGF, factor de crecimiento de fibroblastos.
Clases de receptores vinculados con la tirosina quinasa :
Estos receptores carecen de actividad intrínseca, pero
cuando el ligando se une, tirosina quinasas intracelulares se
activan para generar cambios celulares.
Receptores asociados con la matriz extracelular : los
receptores de integrina y la familia tienen indicando una sola
transmembrana principal extracelular y con un dominio
citoplásmica mucho menor. Las moléculas syndecan tienen
largas cadenas de glicosaminoglicanos que ayudan en el
secuestro de la FGF cerca de la celda membrana.3-6 Los
receptores de la integrina son heterodimeros compuestas de
subunidades. La familia es grande, con al menos 25
heterodímeros de integrina, incluyendo 19 sub-unidades y 8
subunidades identificados.7 Las integrinas no tienen
actividad quinasa, pero en la unión a moléculas de ECM, las
proteínas asociadas se activan por autofosforilación y luego
fosforilan las proteínas circundante para generar señales a la
quinasa MAP, Rho, o vias quinasa PI-3.
Moléculas de señalización intracelular y 2ª Mensajeros
Definiciones Generales
Adaptador de proteínas:
Las proteínas con específicas proteína-proteína con
dominios
que mantienen grandes complejos multiproteicos juntos.
El Adaptador de proteínas no tienen actividad catalítica y
no activan otras proteínas. Contienen diferentes dominios
que actúan como sitios de ataque para otras proteínas tales
como dominios para los residuos de fosfotirosina (dominios
SH2 y PTB), prolina (dominios SH3 y WW),
fosfoinosítidos (red dominios PH), y la secuencia única con
la C residuos terminal hidrofóbica (dominios PDZ).
Quinasa: La clase de enzima que fosforila aminoácidos
(serina, treonina, y tirosina) mediante la transferencia de un
grupo fosforilo a partir de ATP o GTP a la proteína con una
secuencia de consenso específico.
Fosfatasa: La enzima que elimina el grupo fosforilo a partir
de una proteína.
GPCR asociada a proteínas de segundo mensajero: G y
activar la enzima adenilato ciclasa para producir AMP
cíclico (AMPc), GMP cíclico (cGMP), diacilglicerol (DAG),
fosfoinositol, y calcio (Ca2).
Ras-Raf-MAP quinasa: La familia MAP quinasa puede
responder a una variedad de señales extracelulares,
incluyendo, estrés osmótico, choque térmico, las citoquinas,
y los mitógenes. Señalización camino arriba conduce a una
activación de tirosina quinasa que activan proteínas G (Ras,
Rac, Cdc42) a través de adaptador de proteínas tales como
Grb2 o mSOS1. Las proteínas G activan Raf, también
conocido como quinasa activada por mitógen-quinasa-
quinasa (MAPKKK) o MEKK activado por estimulos del
Raf (vía serina / fosforilación treonina) activada por el
mitógen quinasa-quinasa (MAPKK) o MEK. Estimula el
MEK (vía tirosina y fosforilación de la treonina) activada
por la proteína quinasa (MAPK) o la señal extracelular
R. Spears Y K.K.H.Svoboda
proteína regulada (ERK). En la familia de MEKK, hay
varias isoformas Raf incluyendo raf-1, B-Raf, y A-Raf. Hay
por lo menos 5 MEKs con MEK 1/2 que actúan
específicamente en ERK1 / 2. En la actualidad hay varias
ramas de MAPK incluyendo ERK1 / 2, JNK / SAPK, p38,
ERK-3, y varios homólogos relacionados con p38.
Vías de señalización a través de fosfoinositol PI-3
quinasa: PI-3 quinasa fosforila PIP (PI (4) fosfato) o PIP2
(PI (4,5) bisfosfato) en la posición D3 para generar,
respectivamente, PI (3,4) P2 o PI (3,4,5) P3. 138 Estos
subproductos de fosfolípidos han sido implicados con la
señalización y reorganización del citoesqueleto a través de
interacciones con prolin, gelsolina, y Rac. PI-3-quinasa de
señalización es necesaria para la EMT durante el desarrollo
del paladar.
Proteínas Small G Rho, Rac y Cdc42: alternar entre la
forma activa unida a GTP (bajo) y la forma inactiva PIB
determinada (apagado). Muchas otras proteínas regulan el
"on" y el estado "off" de las proteínas G pequeñas. Los
factores de intercambio de guanina-nucleótido (GEFs) son el
"sobre" la señal, ya que añadir GTP a la proteína. Proteínas
GTP-activación (BPA) son la senal "off" , ya que eliminar
un fosfato para desactivar la proteína. Disociación Guanina-
nucleótido inhibidor de proteínas (GDIs) secuestra la
proteína inactiva en el campo.1,12,20-23 citoplasmático.
La disminución de los niveles de proteína Rho o
disminución de la actividad de otros Tegrin dan la
señalización de moleculas.24
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200 R. Spears Y K.K.H.Svoboda