INFORME DE LABORATORIO

PRÁCTICA 2.
METODOS DE SIEMBRA

NICOLAS MENDEZ ÁVILA 20172185048

JENCY CASALLAS 20172185057
SOFÍA GUERRERO LIZARAZO 20172185030

UNIVERSIDAD DISTRITAL FRANCISCO JOSÉ DE CALDAS

FACULTAD DE MEDIO AMBIENTE Y RECURSOS NATURALES
ADMINISTRACIÓN AMBIENTAL
BOGOTÁ
2018
OBJETIVO GENERAL
 Identificar las diferentes técnicas de aislamiento de medios de cultivos para tener la
obtención de colonias aisladas, también aplicar la técnica en tubos de ensayos con
distintos medios líquidos y sólidos, de la misma manera realizar la técnica de
siembra por agotamiento en cajas de Petri.
OBJETIVOS ESPECIFICOS
 Aplicar los distintos tipos de siembra estipulados en la guía
 Obtener cultivos aislados a partir de la muestra
 Emplear la parte ambiental en una caja Petri
 Poder responder las preguntas y las tablas que nos pide la guía
PROCEDIMIENTO

A. Medio líquido.
Tubos de ensayo con los
diferentes medios de cultivo y
cepa bacteriana

Encender mechero

Esterilizar el asa, calentándola al rojo y luego dejarla enfriar

Flamear suavemente la boca de los

tubos e introducir el asa redonda

Repetir la esterilizar el
Ingresar el asa en la muestra para luego
asa, cada vez
depositarla en el medio de cultivo
introducido el asa en el
tubo con el medio
líquido

FIN
B. Medio Solido

Caja petri

Esterilizar el asa

Sembrar por agotamiento agar Se enfría con las paredes y

nutritivo luego coger un con el asa
muestra para así utilizar la
técnica de espiral.

Siembra por agotamiento agar

sangre Agregamos la muestra en
forma de rejilla

Incubar junto con los otros elementos

Observar el número de colonias por

parte del agar sangre y evidenciar el
número de hongos junto con levadura
formadora en el YGC

Realizar tinción simple por parte de las

colonias de agar sangre y observar con
Reportar lo obtenido
microscopio.

FIN
C. Tubos de ensayo SIM

Siembra un agar
movilidad

Esterilizar asa punta recta

En tubos con medios de cultivo con

superficie plana realizar re alizar
picadura o punción.

Cuando la superficie este inclinada al sacar el asa del medio hacer un espiral en la
superficie al retirar el asa.

Incubar junto con los otros elementos

con papel vinipel

Reportar lo observado luego de la

incubación, cada característica, si
presenta movilidad.

FIN
D. Ambientales

Caja con agar

nutritivo

Colocar la caja del agar

destapada y exponerla 15 min

Después taparlo e incubarlo junto el otro

material utilizado

Contar las colonias

desarrolladas en el medio Reportar

FIN
DATOS DE LA MUEZTRA
 LUGAR: Canal Tintal I
Calle 95b38Sur Av Cd de Villavicencio (Osorio XII)

RESULTADOS
A. METODO DE SIEMBRA

TSI
En el primer tubo encontramos presencia de H2S, en los tres tubos encontramos presencia
de gas y fermentación de los 3 azucares (Lactosa, sacarosa y glucosa)
SIM
Está totalmente negro ya que presenta presencia de ácido sulfúrico, al agregar reactivo de
Kock nos arrojó indol positivo (presencia de EscherichiaColi), precensia de aminoácido.

CALDOS MEDIOS LÍQUIDOS

En los caldos encontramos floculación, se enturbio el medio (Positivo), producción de gas.
AGAR NUTRITIVO
Producción de gas, movilidad positiva, crecimiento en la superficie,

AGAR NUTRITIVO INCLINADO

No encontramos presencia de gas, se observan colonias, producción de masividad.

EMB
Colonias Gram Negativas, positivo para Escherichia Coli
 AN AGOTAMIENTO

MASIVIDAD
 B. CONTROL AMBIENTAL: Cancha

AN: 26UFC YGC: 2 hongos y 1 levadura

TABLA DE RESULTADOS.

a. MÉTODOS DE SIEMBRA

AGAR
FUENTE AGAR TSI. AGAR SIM. CALDOS. NUTRITIVO.
DE AGUA.
H2S GAS GLU LAC/SAC H2S GAS INDO GAS TUR GAS MO CRE
L V
1.Juan no no si si si si si
amarillo
2.Humedal no si si si si no si si si si si si
cordoba
3.Eje no si no si si si si si si si si si
ambiental
4.Canal tintal no si si si si si si si si si si si
dos
5.Canal si si si si si si si si si si si si
recreo
6.Canal si si si si si si si si si si si si
recreo
7.Canal tintal si si si si si si si si si si si si
uno

b. AMBIENTALES
Grupos Fecha Sitio de Exposición Tiempo de Número de colonias
exposición
1 22-08- Lab Microbiología 15 min AN: 1 UFC
2018 YG: 1 hongo
2 22-08- Baño de mujeres 15 min AN: 9 UFC
2018 YG: 3 hongos
3 22-08- Plazoleta 15 min AN: 18 UFC
2018 YG:
4 22-08- Zona verde 15 min AN: 7,296UFC
2018 YG: 3 hongos y 2
levaduras
5 22-08- Sillas metropolitano 15 min AN: 5.440UFC
2018 YG: 52 hongos y 0
levaduras
6 22-08- Baño laboratorio 15 min AN: 2.256UFC
2018 YG: 1 hongo y 11
levaduras
7 22-08- Cancha 15 min AN: 26 UFC
2018 YGN: 2 hongos y 1
levadura

ANALISIS DE RESULTADOS
 TSI (Triple Sugar Iron Agar (agar triple azúcar hierro BD))

El agar triple azúcar hierro contiene tres carbohidratos (glucosa, lactosa y sacarosa).
Cuando dichos carbohidratos se fermentan, la producción resultante de ácido es
 detectada por el indicador rojo fenol. Se producen cambios de color: amarillo para
la producción de ácido y rojo para la alcalinización. Dado que la lactosa y la
sacarosa se encuentran presentes en concentraciones mucho más elevadas que la
glucosa, la formación de ácido en la base del tubo se debe a dichos azúcares,
mientras que la formación de ácido a partir de la glucosa es suprimida por la rápida
oxidación de una pequeña cantidad de ácido en el área inclinada del tubo, lo que
genera una reacción de pH neutro o alcalino cuando se fermenta sólo glucosa. La
sacarosa añadida permite la exclusión de determinados organismos coliformes y las
especies Proteus que pueden atacar la sacarosa, pero no la lactosa, en un período de
incubación de 24 – 48 h. Con un pH neutro o alcalino, el ácido sulfhídrico
(producido por el tiosulfato sódico) reacciona con la sal de amonio ferroso, lo que
produce sulfuro de hierro de color negro. El cloruro sódico mantiene el equilibrio
osmótico del medio. La aplicación original de la fórmula de TSI es como medio en
tubo, con una base de tubo y un área inclinada. Permite la diferenciación de los
organismos fermentadores de glucosa, lactosa y/o sacarosa, además de la detección
de la producción de sulfuro de hidrógeno. Cuando se utiliza como medio en placa,
las reacciones observadas en la capa de agar en la placa se limitan a la formación de
productos alcalinos (producidos a partir de las peptonas del medio, si no se
fermentan la glucosa, lactosa y/o sacarosa) o los productos ácidos de la lactosa y/o
sacarosa que constituyen los azúcares más importantes del medio. Además, se
produce sulfuro de hidrógeno si no se fermenta ningún azúcar hasta formar
productos ácidos, dado que la formación de sulfuro de hidrógeno requiere un pH de
neutro a alcalino. La mayoría de las cepas de Proteus, de las que se sabe que
producen sufuro de hidrógeno en pH neutro o alcalino, acidifica el medio, dado que
fermentan sacarosa y no presentarán color negro en este medio, mientras que las
cepas de Salmonella no fermentadoras de sacarosa ni de lactosa producen colonias
de color negro.

 SIM (Sulfuro-Indol-Movilidad)

Es útil para diferenciar miembros de la familia. Enterobacteriaceae.

Es un medio semisólido que se utiliza para el estudio de la formación de indol,
movilidad y SH2 en las bacterias entéricas gram negativas.
Las cepas móviles pueden observarse por la turbidez que producen alrededor del
punto de siembra. Apropiado para enterobacterias como E. coli, Salmonella
typhimurium y Shigella flexneri.

Motilidad: En este medio se observa la capacidad de la bacteria para degradar la

urea por medio de la enzima ureasa formando amoniaco y carbonato de amonio, que
alcaliniza el medio por lo cual el rojo de fenol vira a un rojo cereza.

Hidrógeno sulfurado: Estudia el metabolismo de la cisteina que posee dos

moléculas de azufre (S) que serán liberados como H2S por acción de la cisteinasa y
 con la presencia de sales ferrosas formaran S2Fe que le dará un precipitado de color
negro.

INDOL: Se usa el reactivo de Kobacs, que manifiesta la degradacion del triptofano

por la enzima triptofanasa en indol, que se combina con el aldehído (dimetil
benzaldehído) presente en el reactivo de Kobacs, para producir un color rojo.

 Caldo Nutritivo

Medio no selectivo, contiene pluripeptona y extracto de carne que constituye la

fuente de carbono y nitrógeno necesarios para el adecuado desarrollo bacteriano.
Puede ser utilizado además, como pre-enriquecimiento en la búsqueda de
Salmonella spp. A partir de alimentos, ya que permite recuperar células dañadas,
diluir metabolitos tóxicos y sustancias inhibitorias y proporciona una ventaja
nutricional a Salmonella sobre otras bacterias.

 Medios Semisolidos

Se preparan a partir de los medios líquidos, agregando a éstos un agente

solidificante en una proporción menor que para preparar medios sólidos. Uno de sus
usos es la investigación de la movilidad de las bacterias.

 YGC
(Extracto de levadura, glucosa, cloramfenicol)
Medio selectivo recomendado para el recuento genérico de mohos y levaduras.

 EMB
(eosina-azul de metileno)
Este medio (también denominado E.A.M.) es utilizado para el aislamiento selectivo
de bacilos Gram negativos de rápido desarrollo y escasas exigencias nutricionales.
Permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae.
Es nutritivo por la presencia de peptona que favorece el desarrollo microbiano. La
diferenciación entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y
aquellos que son incapaces de hacerlo, está dada por indicadores como lo son eosina
y azul de metileno, estos ejercen un efecto inhibitorio sobre la amplia variedad de
bacterias Gram positiva. El agar es el agente solidificaste. Muchas capas de
Escherichia coli y Citobacter sp., presentan un característico brillo metálico. Las
cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o rosada
mientras que las que no lo hacen son incoloras.
CUESTIONARIO
 ¿Qué es una hemolisina, cuántos tipos hay, cuál es su relación con la virulencia de
los microorganismos?

Son sustancias que producen lisis de los eritrocitos, mediante la producción de

poros en la membrana citoplasmática. La mayoría de ellas son proteínas o lípidos.
Se reconocen en la actualidad aproximadamente 30 especies de Streptococcus;
siendo algunas de las especies de mayor importancia en patología humana:
S.Pyogenes (estreptococo del grupo A), S.agalactiae (estreptococo del grupo B),
y S.pneumoniae (neumococo).
Son un factor de virulencia de Staphylococcus aureus, Vibrio parahemolyticus,
Streptococcus pyogenes y otro gran número de bacterias patógenas.

 ¿Qué es un pigmento bacteriano? ¿Qué clases de pigmentos de bacterias se

conocen? ¿Cómo se pueden identificar?

La presencia de pigmentos en las bacterias que medran en hábitats sometidos a la

luz les confiere un efecto protector frente a la luz visible y el ultravioleta cercano.
Los carotenoides se localizan en la membrana plasmática y protegen a la célula de
la fotooxidación, su presencia confiere a las bacterias colores que van desde el tono
amarillo al rojo, entre ellas los géneros Micrococcus, Corynebacterium,
Mycobacterium y Nocardia entre las levaduras los géneros Rhodotorula,
Sporobolomyces. La molécula de colorante absorbe energía lumínica y la cede al
O2 pasándola de su estado normal a un estado excitado el cual inicia reacciones de
oxidación en cadena que llevan a la muerte del microorganismo.

 Pulquerrimina: pigmento rojo que contiene hierro en su molécula, es

sintetizado por Cándida pulcherrima, levadura aislable de zumos de frutas,
flores con néctar y el tracto gastrointestinal de las abejas.
 Prodigiosina: en medios que contengan hidratos de carbono medra
frecuentemente una bacteria que llevaba el nombre de Bacterium
prodigiosus o Micrococcus prodigiosus conocida también como " hongo de
las hostias".
 Indigoina: pigmento azul derivado de las azaquinonas, es excretado al
medio por Pseudomonas indigofera entre otros.

 Cree que existe relación con la identificación de los pigmentos bacterianos con el
tema visto en la práctica de hoy. ¿Por qué?

La relación es evidente ya que en cada cultivo se denota la reacción de la bacteria

con el medio y podemos establecer su actuar por medio de pigmentos bacterianos,
 por ejemplo en el TSI, que cuando dichos carbohidratos se fermentan, la producción
resultante de ácido es detectada por el indicador rojo fenol.

 Por qué muchos de los microorganismos del aire poseen pigmentos? Cuál será la
función de dichos pigmentos?

La presencia de pigmentos en las bacterias que medran en hábitats sometidos a la

luz les confiere un efecto protector frente a la luz visible y el ultravioleta cercano.
Los carotenoides se localizan en la membrana plasmática y protegen a la célula de
la fotooxidación, su presencia confiere a las bacterias colores que van desde el tono
amarillo al rojo, entre ellas los géneros Micrococcus, Corynebacterium,
Mycobacterium y Nocardia entre las levaduras los géneros Rhodotorula,
Sporobolomyces.
El mecanismo por el cual la luz visible afecta a los microorganismos se basa en el
fenómeno de fotooxidación, en presencia de oxígeno atmosférico algunos
pigmentos celulares (flavinas, citocromos) actúan como fotosensibilizadores. Es
posible explotar este fenómeno para eliminar bacterias patógenas utilizando
colorantes vitales (p.ej. azul de metileno).
La molécula de colorante absorbe energía lumínica y la cede al O2 pasándola de su
estado normal a un estado excitado el cual inicia reacciones de oxidación en cadena
que llevan a la muerte del microorganismo.
Este tipo de colorantes se suele incorporar a la bebida de animales de los zoológicos
o de criaderos donde se aprovecha su piel.
En las bacterias fotosintetizadoras los pigmentos absorben luz con fines
fotosintéticos, los carotenoides se localizan junto a las bacterioclorofilas en las
membranas fotosintéticamente activas de los tilacoides o cromatóforos

CONCLUSIONES
 Identificamos de forma correcta las tecnicas para la realizacion de los medios de
cultivos y para el analisis ambiental.
 Implementamos cada tipo se siembra para los medos de cultivo.
 Empleamos el control ambiental de una forma adeacuada obteniendo los respectivos
resultados.

BIBLIOGRAFÍA
http://www.bd.com/europe/regulatory/Assets/IFU/HB/CE/PA/ES-PA-254458.pdf
https://microbiologia-monitoria.weebly.com/medios-diferenciales.html
http://microbiologia3bequipo5.blogspot.com/2014/09/tipos-y-funciones-de-los-medios-
de.html
http://asignatura.us.es/mbclinica/docs/recursos/34/medios-de-cultivo.pdf
http://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_5a28240e1c004.pdf