LABORATORIO 2-Coloracio de Bac

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERÍA
FACULTAD DE INGENIERÍA AMBIENTAL
COLORACION DE BACTERIAS
PRIMER LABORATORIO DEL CURSO MICROBIOLOGÍA – SA323K
GUILLEN MANCHA, WILLIAM
DOCENTE: ING. JORGE GILBERTO TELLO CEBREROS
Lima – Perú
2018
UNIVERSIDAD NACIONAL DE I N G E N I E RIA
Facultad de Ingeniería Ambiental
INDICE
RESUMEN............................................................................................................................... 3
SUMARY.................................................................................................................................. 4
I. INTRODUCCIÓN............................................................................................................. 4
II. OBJETIVO....................................................................................................................... 5
III. MARCO TEÓRICO....................................................................................................... 6
1) Conceptos Previos:...................................................................................................6
IV. RESULTADOS............................................................................................................. 7
V. DISCUSION DE RESULTADOS......................................................................................8
VI. CONCLUSIONES:....................................................................................................... 9
VII. RECOMENDACIONES:.............................................................................................11
VIII. CUESTIONARIO........................................................................................................ 12
IX. FUENTES DE INFORMACIÓN:.................................................................................13
X. ANEXOS:....................................................................................................................... 14
XI. APENDICE................................................................................................................. 15
1. DIAGRAMA DE FLUJO.............................................................................................15
2. PROCEDIMIENTO....................................................................................................16
2
INDICE DE ILUSTRACIONES
Ilustración 1. Formas de bacterias...........................................................................................................6
Ilustración 3.Fotografía de la placa con muestra luego de su exposición.............................................14
Ilustración 4.Fotografias, izquierda tubos de los 5 grupos. Derecha: placas numeradas de los 5
grupos expuestos en diferentes medio....................................................................................................14
INDICE DE TABLAS
Tabla 1.Características de muestra utilizadas de los grupos 1,2,3,4 y 5......................................6
INDICE DE FIGURAS
Figura 1.Ingredientes del Agar saboraud..............................................................................................14

Figura 2.Diagrama de flujo....................................................................................................................15
3
RESUMEN
El presente trabajo determina
SUMARY
The distribution of microorganisms carried out in the laboratory, taking as samples in
the different environments of the faculty of Environmental Engineering, verifies that
microorganisms are present in every place such as soil, air, water. We also have
factors that determine its proliferation such as temperature, acidity, nutrients, among
others. The results obtained confirm this fact in. The three procedures A, B and C.
Bacteria, fungi are living organisms that proliferate in a very short time.
For what we find in the analyzed environments such as Rhizopus nigricans,

Alternaria aspergillus, yeasts, these are very frequent microorganisms in the area
and in places in the open air.
I. INTRODUCCIÓN
El tamaño de la mayoría de las células bacterianas es tal que resultan difíciles de
ver con el microscopio óptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la
célula y el medio que la rodea. El modo más simple de aumentar el contraste es la
utilización de colorantes. Si se desea simplemente aumentar el contraste de las
células para la microscopía, son suficientes los procedimientos que usan un solo
colorante llamado de tinción simple. Sin embargo, a menudo se utilizan métodos
que no tiñen de igual modo todas las células, es el proceso denominado tinción
diferencial. Uno muy usado en microbiología es la tinción Gram. Basándose en su
reacción a la tinción Gram, las bacterías pueden dividirse en dos grupos:
grampositivas y gramnegativas. Esta tinción tiene gran importancia en taxonomía
4
bacteriana ya que indica diferencias fundamentales de la pared celular de las

distintas bacterias.Mientras que las bacterias gramnegativas son constantes en su
reacción, los microorganismos grampositivos pueden presentar respuestas variables
en ciertas condiciones (son gramlábiles). Por ejemplo, los cultivos viejos de algunas
bacterias grampositivas pierden la propiedad de retener el cristal violeta, y en
consecuencia, se tiñen por la safranina apareciendo como gramnegativas.Análogo
efecto se produce en ocasiones por cambio en el medio del organismo o por ligeras
modificaciones en la ejecución de la técnica. Por este motivo, es preciso atenerse,
en la práctica, al procedimiento establecido. Para explicar el mecanismo de la
tinción de Gram se han propuesto varias hipótesis fundadas en la naturaleza
química de las paredes celulares de los microorganismos.
II. OBJETIVO
- Identificar la tinción GRAM, forma y agrupación al que pertenecen las muestras
que se analizaran en laboratorio utilizando el microscopio compuesto.
III. MARCO TEÓRICO

1) Conceptos Previos:
Microorganismos: son los seres vivos más diminutos que y que pueden ser
apreciados a través de un microscopio; podemos incluir las bacterias, levaduras y
mohos que pululan en diferentes partes del planeta.
Bacterias: Son organismos unicelulares, procariotas y cosmopolitas, con una gran

diversidad de formas, funcionan como reguladoras en los ambientes, produciendo
5
oxígeno y fijando nitrógeno y carbono, degradando materia orgánica en

descomposición y controlando las poblaciones de organismos ya que producen
enfermedades. Tenemos:
Ilustración 1. Formas de bacterias

Fuente: Ibáñez Ártica Miguel(2015).Biodiversidad del Reino Monera. Formas de bacterias.Recuperado
de: http://naturarchives.blogspot.pe/2015/08/biodiversidad-el-reino-monera.html(extraido 05-04-
2018).
La tinción de gram es uno de los métodos de tinción más importantes en el laboratorio
Identificación de Bacterias por Tinción GRAM: Morfología Bacteriana
Ya hemos visto que la tinción de GRAM aporta dos ideas básicas para la deficinión
"taxonómica" de las bacterias: el color que adquieren tras la tinción y la forma que
presentan las células bacterianas.
Cocos: Micrococos, aparecen aislados y dispersos tras la división celular.

Diplococos, aparecen por pares. Estreptococos, tienden a unirse formando cadenas.
Estafilococos, aparecen en grupos irregulares, a veces de gran tamaño
Bacilos:Grandes variaciones morfológicas: fusiformes, estreptobacilos, cocobacilos
Espirales:Utilizamos el término Pleomorfismo para referirnos a la adopción de
diferentes formas en una misma especie.
Coloración Gram
Soluciones aplicadas por su REACCION Y APARIENCIA DE LAS BACTERIAS

orden Grampositivas Gramnegativas
Cristal violeta Células se tiñen color violeta Células se tiñen color violeta
Lugol solución iodada Se forma el complejo CV-I. Se forma el complejo CV-I.
Las células continúan Las células continúan
teñidas de color violeta teñidas de color violeta
Alcohol Se deshidratan las paredes Eliminación por extracción
celulares. Se contraen los de grasas de las paredes
6
poros. Disminuye la celulares. Aumenta la

permeabilidad. El complejo porosidad. El complejo CV-I
CV-I no sale de las se separa de la bacteria.
bacterias que continúan
teñidas de color violeta
Safranina bacterias no decoloradas; bacterias decoloradas; se
quedan teñidas de color tiñen de color rosado.
violeta.
Fuente:Pelczar
Bacterias gramnegativos
En microbiología, se denominan bacterias gramnegativos aquellas que no se tiñen
de azul oscuro o de violeta por la tinción de Gram, y lo hacen de un color rosado
tenue: de ahí el nombre de "gramnegativos" o también "gramnegativos".
Bacterias Gram positivas

En microbiología, se denominan bacterias Gram positivas, o bacterias Gram-
positivas, aquellas bacterias que se tiñen de azul oscuro o violeta por la tinción de
Gram.
IV. RESULTADOS
Datos del Grupo 01:
Tabla 1.Características de muestra utilizadas de los grupos 1,2,3,4 y 5.
GRUPO MUESTRA CARACTERES DE COLONIA FORMA AGRUPACION GRAM
UTILIZADA
AULA VACIA  Tamaño: 4mm Estreptococos Negativo
 Borde:liso Cocos
N° 1  Elevación: convexa
 Carácter Ópticos: Opaca
 Pigmentación: blanca
INNOCULADOR  Tamaño: 1mm cocos Estreptococos Negativo
ESTERIL  Borde:liso
 Elevación: convexa
7
Placa nº3 (grupo 1) (*) Estafilococos Positivo

Placa estéril Cocos
N° 2 Tubo Nº3 No se pudo observar Positivo
Pipeta estéril y tubo
no estéril
Huella digital (placa  Borde: Lobular Estafilococos Positivo
N°2 sector B)  Elevación: plana Cocos
N° 3  Carácter Ópticos: Opaco
Laboratorio de  Borde: Lobular Positivo
Microbiología (placa  Elevación: plana
N°1)  Carácter Ópticos: Opaco Cocos Estafilococos
Placa N°2 (*) Estreptococos Negativo
N° 4 GRUPO 3 sector A Cocos
(pelo)
(*) Positivo
Tubo N°1(GRUPO 4)
Bacilo Estreptobacilos
Sector no estéril  Tamaño: 1mm Estreptobacilos Negativo
 Borde:liso bacilos
N° 5  Elevación: plana
 Pigmentación: crema
Sector estéril  Tamaño: 2mm cocos Estreptococos Negativo
 Borde:ondulante
 Elevación: plana
Nota. Fuente: Grupo 01,02,03,04 y05.
(*)No especifica.
V. DISCUSION DE RESULTADOS
 Para el GRUPO 1
 Para las placa N° 2 estéril sector C del grupo 3 ,inoculador estéril, se observó un
reducido grupo de 2 colonias pesar de que no debería haber esto hace suponer
que hubo una mala manipulación de los instrumentos lo que ha contaminado al
instrumento.
PROCEDIMIENTO B :
 Para el grupo 4, en pipeta y tubo estéril se observa el crecimiento de bacterias
con sus respectivas características como es la manifestación de olor pútrido por
lo que no debe presentarse por ser esterilizado ambos instrumentos. Puede
ocurrir esto por el mal guardado de instrumentación. En cambio en el grupo 2
8
donde tomaron una muestra del lugar biblioteca FIA, hubo la característica de
olor imperceptible, es compatible con lo esperado.
 Para los dos grupos las condiciones de pipeta y tubo estéril muestran un
escaso-nulo crecimiento de bacterias y hongos, lo cual se puede deber a un
cierto grado de contaminación al momento de transportar los tubos. En teoría no
es lo esperado.
PROCEDIMIENTO C :
 Se observaron en todas las placas el crecimiento de hongos y levaduras.

 En la placa del grupo 1 se obtiene muy poca cantidad de colonias(6),lo cual está
acepción no es muy correcta por ser en el lugar del baño de hombres por tener
mayor concentración de humedad, puesto que el crecimiento de los hongos se
incrementa. Por lo que no es muy convincente esos resultados.
 El ambiente más contaminado de hongos(75 colonias) fue observado a través
de la placa del grupo 5 ,donde la muestra fue tomada en el laboratorio de
fisicoquímica de la FIA .Aunque el que debió tener el mayor número de hongos
es el baño de hombres por tener mayor concentración de humedad, puesto que
el crecimiento de los hongos se incrementa con la presencia de abundante
oxígeno.
VI.CONCLUSIONES:
PROCEDIMIENTO A:
1) Grupo 01:Aula 261-Vacía
 Para la Placa N°1;la cual fue expuesta en el Aula 261-vacía se observa la
presencia de 12 colonias donde los tamaño oscilan entre 1mm a 6mm,con
un tipo de margen liso, de elevación plana y convexas con pigmentación
crema y caracteres ópticos opacos.
 En la Placa N°2:el cual se dividió en 4 sectores A,B,C y D se observó lo
siguiente, para el sector A(pelo),se encontró 4 colonias, en el sector
B(huella)se encontró 35 colonias debido al aseo incorrecto de las manos, en
el sector C(inoculador estéril) y en el sector D(inoculador no estéril) se
encontró solo una colonia de cada uno.Con un tipo de margen liso, de
elevación plana,de pigmentación blanco en el sector A y en los demás
crema.caracter óptico opaco.
9
 En la Placa N°3, se encontró 3 colonias.

 Y para la Placa N°4,se observó la presencia de 2 colonias, con las siguientes
características morfológicas predominantes las de 1mm,de margen liso,
elevación plana, pigmentación blanco y caracteres ópticos opacos y
translúcida.
2) Grupo 03: Laboratorio de microbiología.

 Para la Placa N°1;expuesta al laboratorio de microbiología se observaron la
formación de 52 colonias de microorganismos cuyos tamaños oscilan de 1 a
3mm,con margen liso predominante elevación plana , de pigmentación
blanca amarilla y naranja, y de carácter óptico opacos y triangulados.
 En la Placa N°2:el cual se dividió en 4 sectores A,B,C y D se observó lo
siguiente, para el sector A(cabello),la formación de 53 colonias, en el sector
B(huella)se encontró 24 colonias debido al aseo incorrecto de las manos, en
el sector C(inoculador estéril) se observaron 2 colonias y en el sector
D(inoculador no estéril) se encontró 6 colonias.
 En la Placa N°3, se observó 29 colonias. Tamaño varía de 1 a 4mm de
margen liso en su mayoría, ondulante y lobular, elevación plana convexa, de
pigmentación blanca carácter óptico opacos translucidos.
 Y para la Placa N°4, se observó la presencia de 37 colonias, con las
siguientes características morfológicas predominantes las de 1mm,de
margen ondulante, liso y lobular, elevación plana y convexa, pigmentación
blanco y caracteres ópticos opacos y translúcidos.
PROCEDIMIENTO B:
1) Grupo 02: Biblioteca FIA.
 En el tubo N°1(tubo y pipeta estériles), no debe haber presencia de bacterias
aunque se dio las siguientes observaciones presencia escasa de bacterias con
distribución sedimentada y olor imperceptible lo cual indica que hubo
contaminación en los instrumentos.
 En el tubo N°2(tubo y pipeta no estéril), se observó abundante presencia de
bacterias, con distribución sedimentada y con olor pútrido debido al uso de la
pipeta no estéril.
10
 En el tubo N°3(tubo no esteril y pipeta estéril), se observó una moderada

cantidad de bacterias con distribución de crecimiento en forma de sedimento y
olor pútrido esto debido al uso del tubo no estéril.
2) Grupo 04: Centro de estudiantes(CEIA)

 En el tubo N°1(tubo y pipeta estériles); también no debe haber presencia de
bacterias dado que el tubo y pipeta son estériles pero se vio las siguientes
observaciones presencia escasa de bacterias con distribución sedimentada y
olor putrido lo cual indica que hubo contaminación en los instrumentos.
 En el tubo N°2(tubo estéril y pipeta no estéril), se observó escasa presencia de
bacterias, con distribución sedimentada y con olor pútrido debido al uso de la
pipeta no estéril.
 En el tubo N°3(tubo no estéril y pipeta estéril), se observó una moderada
cantidad de bacterias con distribución de crecimiento en forma de sedimento y
olor pútrido esto debido al uso del tubo no estéril.
PROCEDIMIENTO C:
 Se observaron 4 tipo de hongos: Aspergillus, Alternaria y Rhizopus.
 Se usó el agar sabourand, para aislar hongos de ciertas levaduras, ya que es útil
para el crecimiento de hongos patógenos.
 Se concluye de las muestras que se recogieron en cada ambiente que se
encuentran contaminadas en especial el laboratorio de físico-química, debido a
la gran diferencia de desarrollo de número de hongos.
VII. RECOMENDACIONES:
EN EL PROCEDIMIENTO A:
 Se debe tener presente la adecuada esterilización de los instrumentos a utilizar
para tener un mejor resultado en los experimentos.
 Tratar de agarrar las placas Petri a costados evitando tocar los lados en el
proceso del experimento.
 Colocar el inoculador estéril en una gradilla para evitar contaminación en el agar.
 Se debe sellar las placas los bordes de las placas antes de colocarlos a la
incubadora, debido a que la humedad afecta a los microorganismos.
 Al colocar el pelo en el agar, trata de evitar de tocar con los dedos el agar.
11
 Hay que tomar en cuenta la vida media de los microorganismos,lo cuales viven
aproximadamente 48 horas luego de ser cultivados, pasado este tiempo para su
estudio e identificación no se obtendría resultados óptimos a lo esperado.
EN EL PROCEDIMIENTO B:
 Se debe tener presente la adecuada esterilización de los instrumentos a utilizar

para tener un mejor resultado en los experimentos.
 Tapar bien los tubos de ensayo con algodón al momento de esterilizarlas.
 Utilizar de manera adecuada la pera al transferir el caldo nutritivo con la pipeta al
tubo para evitar contaminación en la pipeta estéril o en el tubo estéril de acuerdo
al procedimiento.
 Hay que tomar en cuenta la vida media de los microorganismos,lo cuales viven
aproximadamente 48 horas luego de ser cultivados, pasado este tiempo para su
estudio e identificación no arrojaría resultados óptimos.
EN EL PROCEDIMIENTO C:
 Tratar de agarrar la placa Petri a los costados evitando tocar los lados en el
proceso del experimento.
 No poner la placa cerca de la puerta del ambiente que ha cada grupo les ha
tocado, debido a que puede haber contaminación de afuera del ambiente.
 En el ambiente que tenga mayor humedad o menos iluminación tendrá más
desarrollo de hongos.
 Se debe sellar los bordes de las placas antes de colocarlos a la incubadora,
debido a que la humedad afecta a los microorganismos.
 Tomar en cuenta el tiempo y los factores que afectan a la proliferación de
microorganismos.
VIII. CUESTIONARIO
Coloración de Bacterias
1. Hacer una tabla en relación a enfermedades microbianas que son
transmitidas por el aire, agua y alimento.
2. Responder:
a) ¿Cuáles son las diferencias entre las paredes celulares de las bacterias
gram positivas y gram negativas?
GRAM POSITIVAS
12
Las bacterias grampositivas cuentan con una envoltura celular que comprende la
membrana citoplasmática y una pared celular compuesta por una gruesa capa de
peptidoglucano, que rodea a la interior. La pared celular se une a la membrana
citoplasmática mediante moléculas de ácido lipoteicoico, la capa de peptidoglicano
confiere una gran resistencia a estas bacterias y una de las responsables de retener
el tinte durante la tinción de Gram. Una de las diferencias de las bacterias
grampositivas con gramnegativas es que presentan una segunda membrana lipídica
externa a la pared celular.
GRAM NEGATIVAS
Esta característica está íntimamente ligada a la estructura didérmica dada por la

envoltura celular, ya que presenta doble membrana celular (una es externa y la otra
citoplasmática) lo que refleja un tipo natural de organización bacteriana. Son uno de
los principales supergrupos de bacterias y cuando se trata como taxón se le puede
llamar con el nombre de Negibacteria o bien Didermata. Las que restan son las
bacterías grampositivas.
b) ¿Afecta la edad de cultivo a la reacción de tinción de gram?
IX.FUENTES DE INFORMACIÓN:
M.J.PELCZAR Jr. Y R.D.REID.MICROBIOLOGíA Editorial Mc.Graw-Hill Book
Co.Inc.New York 4ta.Edic.1984. (pág. 57-86).
Ibáñez Ártica Miguel (2015).Biodiversidad del Reino Monera. Formas de bacterias.

Recuperado de: http://naturarchives.blogspot.pe/2015/08/biodiversidad-el-reino-
monera.html(extraido 05-04-2018).
13
Micología, Microscopía de las Setas, Recuperado

de:http://www.micomania.rizoazul.com/microscopia%20caracteres.html(Extraido 05-
04-2018)
Universidad Complutense Madrid, Grupo de investigación: hongos y levaduras de

interés en agroalimentación. Líneas de Investigación, Recuperado de:
https://www.ucm.es/hongos-y-levaduras/lineas-de-investigacion(Extraído 05-06-
2018)
Fungal infection.Colonias verdes de A. flavus en agar Sabouraud , Recuperado de:

http://www.life-worldwide.org/esp/fungal-diseases/aspergillus-flavus.Extraído(04-04-
2018)(22hrs.)
IZQUIERDO LOPEZ, Gady Sadith, CALIDAD MICROBIOLOGICA AMBIENTAL DEL

AIRE EN LOS INTERIORES DEL HOSPITAL EsSALUD EN TINGO MARIA, PERÚ,
(Abril,2016).
Cultura,E.a.Microorganismos y alimentos.Obtenido de
http://www.epralima.com/infoodquality/materiais_espanhol/Manuais/3.Microorganism
os_y_alimentos.pdf
Luna, M. M. GESTION INTEGRA. Obtenido de https://gestionintegra.com/factores-

que-favorecen-el-crecimiento-bacteriano/(3 de abril de 2018).
X. ANEXOS:
14
Figura 1.Imagen de las paredes celulares de las bacterias gram positivas y gram negativas.
Fuente: crecimiento microbiano.Diefrencias entre gram positivas y gram negativas.Recuperado de:
https://es.slideshare.net/toons1233/capitulo-6-14297911 (Extraído 11-04-2018)
Ilustración 2.Fotografía de la placa con muestra luego de su exposición.

Fuente: Grupo 4.
Ilustración 3.Fotografias, izquierda tubos de los 5 grupos. Derecha: placas numeradas de los 5
grupos expuestos en diferentes medio.
Fuente: Grupo 4
XI.APENDICE
1. DIAGRAMA DE FLUJO
15
Figura 2.Diagrama de flujo.
Fuente: Elaboración propia.

2. PROCEDIMIENTO
PROCEDIMIENTO: Método Gram (Tinción de Gram).
1) Usar laminas limpias y pasarlas varias veces cortando la llama del mechero
bunsen.
2) Dejar enfriar la lámina y colocar sobre ella una gotita de suero fisiológico con el
inoculador.
3) Con el inoculador estéril, tocar ligeramente el cultivo que ha de ser examinado y
transferir un poquito del sobre la gotita de suero fisiológico.
4) Esterilizar el inoculador y dejarlo enfriar.
5) Frotar el cultivo con el inoculador hasta extenderlo sobre la parte central del
porta-objeto, cuidando de que se forme una película muy delgada.
6) Dejar que la película seque al aire.
7) Fijar la preparación sobre pota-objeto pasándola por la llama del mechero tres
veces, manteniendo la película hacia arriba de la llama. Dejar enfriar.
8) Cubrir la película con el colorante cristal violeta (Gram #1) y dejar cubierto así
por un espacio de 60 segundos.
9) Lavar la lámina con agua durante 20 segundos.
10) Tratar la lámina con la solución lugol (Gram #2), durante un minuto.
11) Decolorarla con alcohol-acetona (Gram #3) durante 15 a 20 segundos.
13) Contracolorar con safranina (Gram #4) y dejar que se tiña por un espacio de 20
segundos.
15) Dejar de secar y examinar al microscopio la preparación. Un organismo gram
positivo retendrá el color cristal violeta y aparecerá teñido de azul o morado y un
organismo gram negativo tendrá el color rosado o rojo de la safranina.
16

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FACULTAD DE INGENIERÍA AMBIENTAL

PRIMER LABORATORIO DEL CURSO MICROBIOLOGÍA – SA323K

GUILLEN MANCHA, WILLIAM

DOCENTE: ING. JORGE GILBERTO TELLO CEBREROS

Figura 1.Ingredientes del Agar saboraud..............................................................................................14

For what we find in the analyzed environments such as Rhizopus nigricans,

bacteriana ya que indica diferencias fundamentales de la pared celular de las

III. MARCO TEÓRICO

Bacterias: Son organismos unicelulares, procariotas y cosmopolitas, con una gran

oxígeno y fijando nitrógeno y carbono, degradando materia orgánica en

Ilustración 1. Formas de bacterias

Identificación de Bacterias por Tinción GRAM: Morfología Bacteriana

Cocos: Micrococos, aparecen aislados y dispersos tras la división celular.

Soluciones aplicadas por su REACCION Y APARIENCIA DE LAS BACTERIAS

poros. Disminuye la celulares. Aumenta la

Bacterias Gram positivas

Placa nº3 (grupo 1) (*) Estafilococos Positivo

 Se observaron en todas las placas el crecimiento de hongos y levaduras.

 En la Placa N°3, se encontró 3 colonias.

2) Grupo 03: Laboratorio de microbiología.

 En el tubo N°3(tubo no esteril y pipeta estéril), se observó una moderada

2) Grupo 04: Centro de estudiantes(CEIA)

 Se debe tener presente la adecuada esterilización de los instrumentos a utilizar

Esta característica está íntimamente ligada a la estructura didérmica dada por la

b) ¿Afecta la edad de cultivo a la reacción de tinción de gram?

Ibáñez Ártica Miguel (2015).Biodiversidad del Reino Monera. Formas de bacterias.

Micología, Microscopía de las Setas, Recuperado

Universidad Complutense Madrid, Grupo de investigación: hongos y levaduras de

Fungal infection.Colonias verdes de A. flavus en agar Sabouraud , Recuperado de:

IZQUIERDO LOPEZ, Gady Sadith, CALIDAD MICROBIOLOGICA AMBIENTAL DEL

Luna, M. M. GESTION INTEGRA. Obtenido de https://gestionintegra.com/factores-

Ilustración 2.Fotografía de la placa con muestra luego de su exposición.

Figura 2.Diagrama de flujo.

Fuente: Elaboración propia.

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