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La feria del Chicharrón, en el mes de junio, es visitada cada año por cientos de
comensales.
En este municipio tienen sus viviendas de residencia la mayoría de los agricultores que
desarrollan actividades en el trópico, estas residencias de Sacaba son usadas cuando
sacan sus productos del trópico a comercializarlos en Cochabamba.
DEMOGRAFÍA
Sacaba tiene 196.700 habitantes (censo 2012). Debido a la carencia del espacio en los
límites de ciudad de Cochabamba, varios complejos nuevos de urbanización han sido
construidos dentro de los 13 kilómetros que separan Sacaba de la ciudad de
Cochabamba. Muchos de estos complejos residenciales se han construido para los
empleados de las empresas basadas en la ciudad.
CLIMA
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ECONOMÍA
Sacaba es una capital culinaria en Cochabamba, famosa por sus delicadezas basadas en
carne de conejo cuy y otras ofrendas gastronómicas. Varios restaurantes se pueden
encontrar en las calles de la ciudad. Sacaba es también famoso por sus numerosos
chicherias, que producen la chicha de maíz,( Que es un fermento de la misma)de un
agradable sabor, se cita al pueblo con picardía como "Sacaba - donde la chicha nunca se
acaba".
ATRACTIVOS
Localidad de Ukuchi, Circuito de Moto Cross, Camino del Inca, Templo de Bella Vista,
Hacienda de Tacopona, Iglesia de Melga y parapente en la serranía.
DATOS TÉCNICOS
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LA ENFERMEDAD DE CHAGAS
1.- INTRODUCCION
La enfermedad de Chagas representa uno de los más graves problemas de salud pública
en América Latina, con un alto impacto socio-económico al afectar mayoritariamente a
sectores vulnerables en situación de pobreza, y al grupo poblacional de adultos jóvenes en
edad productiva.
Es una parasitosis que puede lesionar seriamente el corazón y también otros órganos tales
como el aparato digestivo y el sistema nervioso. Las estimaciones de la Organización
Mundial de la Salud (OMS) señalan que entre 16 y 18 millones de personas presentan
serología positiva, que 50 mil individuos mueren cada año por causa de este mal y que
existen aproximadamente 90 millones de personas que viven en situación de alto riesgo de
contraer la enfermedad , lo que refleja su alto grado de alcance dentro del contexto de
salud Latinoamericano.
En Bolivia es una seria amenaza de salud, es una enfermedad endémica cuya principal vía
de transmisión es la vectorial debido a las condiciones de precariedad de las viviendas
particularmente en áreas rurales, seguida por la infección mediante transfusiones de
sangre y la transmisión congénita.
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2.- GENERALIDADES
2.1.- HISTORIA
Comparando las secuencias de genes de la subunidad 18S del rRNA de múltiples especies
de tripanosomas obtenidos de diversos hospederos y combinando otras técnicas
moleculares se sugirió que el origen del Trypanosoma es monofilético y que tiene un
ancestro común con el T. brucei de Africa que data de hace 100 millones de años.
El DNA del T. cruzi fue identificado en momias humanas sudamericanas con una edad de
4000 años.
Los primeros casos de la enfermedad de Chagas en Bolivia fueron reportados por Arthur
Neiva en Potosí (1916), seguido por Ventemillas en La Paz (1931, Mazza & Chacon en
Cochabamba (1937) y Martín & Macedo en Santa Cruz (1941)
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2.2.- DEFINICION
2.3.- JUSTIFICACION
En Bolivia es una seria amenaza de salud, es una enfermedad endémica cuya principal vía
de transmisión es la vectorial debido a las condiciones de precariedad de las viviendas
particularmente en áreas rurales, seguida por la infección mediante transfusiones de
sangre y la transmisión congénita.
Por ello que en esta información damos a conocer los análisis estadísticos de los pacientes
diagnosticados con chagas en el hospital Mexico de Sacaba, en los meses noviembre y
diciembre del 2013. Tomando en cuenta pacientes SUMI, SPAM, niños, hombres y
mujeres.
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3.- OBJETIVOS
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4.- MARCO TEORICO
El Trypanosoma cruzi transmite la enfermedad a los seres humanos principalmente por las
heces del insecto triatomíneo. Por lo general, éstos viven en las grietas y huecos de las
casas mal construidas. Pican en una zona expuesta de la piel, como la cara, y defecan
cerca de la picadura. Los parásitos penetran en el organismo cuando la persona picada se
rasca y empuja las heces hacia la picadura, los ojos, la boca o alguna lesión cutánea
abierta. También se puede transmitir por la transfusión de sangre infectada, transmisión de
la madre infectada a su hijo durante el embarazo, a través de trasplantes de órganos y por
alimentos contaminados.
El riesgo de contraer Chagas está asociado con modos de vida inequitativos y de pobreza,
comunidades con malas condiciones de existencia y familias con un estilo de vida pobre e
insalubre. Las casas con grietas, paredes no revocadas, de adobe, o techos de paja u otros
materiales porosos, asociados a pobre ventilación e iluminación son propensas a estar
infestadas. El hacinamiento y falta de servicios básicos favorecen el aumento del número
de criaderos de vectores.
El Programa Nacional de Chagas constituye uno de los programas fundamentales del Plan
estratégico de Salud por su impacto sobre la morbilidad, mortalidad y reducción de la
esperanza de vida. Este programa comprende medidas relacionadas con el fumigado de
las casas y el entorno con insecticidas, mejora de las viviendas, la promoción de medidas
preventivas personales como el empleo de mosquiteros; buenas prácticas higiénicas en la
preparación, el transporte, el almacenamiento y el consumo de los alimentos; tamizaje de
la sangre para transfusión; control de los recién nacidos de las madres infectadas, para
diagnosticar y tratar tempranamente el problema; capacitación del personal local;
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promoción de la participación social; investigación en diagnóstico y tratamiento de la
enfermedad.
Su abordaje como otros problemas de salud pública transmitidos por vectores, se lo puede
realizar mediante estrategias de control o de erradicación, con metodologías y metas
diferentes. La estrategia de erradicación implica coberturas universales de las medidas
preventivas y de mejora de las viviendas que alcance a todos los criaderos de vinchuca,
en todas las casas, de todas las localidades infestadas en la zona endémica del país, para
la eliminación total del vector, pero el alto costo hace que esta estrategia sea inaplicable
en el país.
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diagnóstico temprano de la enfermedad de Chagas congénita (microhematocrito,
inmunocromatografía, ELISA), especialmente en áreas rurales donde la enfermedad de
Chagas es endémica, es por eso que las tasas de transmisión congénita pueden ser
estimadas realizando un control adecuado al nacimiento y un seguimiento posterior en los
niños cuyas madres presentaron factores de riesgo.
Sin embargo se hace una reflexión sobre la falta de estandarización del estudio
histopatológico en las placentas y de las membranas extraembrionarias de niños
congénitamente infectados en los diferentes seguimientos realizados. Se aconseja para el
estudio rutinario de la placenta hacer cuatro secciones, incluyendo en todo su espesor,
duplicándose el número de los cortes en caso de fuerte sospecha de la infección congénita
si existiera ausencia de lesión placentaria, así podrían ser detectados raros focos de
vellosititis y a veces de parásitos. Esta ausencia de lesiones placentarias se asocian a
recién nacidos asintomáticos en los cuales la infección acontece en los últimos días de vida
intrauterina.
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Macroscópicamente, la placenta chagásica presenta un aspecto similar al observado en la
sífilis y la eritroblastosis fetal, es suculenta, edematosa, de cotiledones grandes, con un
aumento de espesor respecto a las gestantes normales, pálidas y relativamente exangües,
con peso aumentado así como la relación feto-placentaria alterada.
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El embarazo es asociado a recrudescencia de la parasitemia sugiriendo que es más
frecuente y persistente en este periodo.
Algunos autores indican que esta infección no tiene efectos sobre la fecundidad ni en el
desarrollo de un eventual embarazo, sin embargo otros estudios consideran que la
enfermedad de Chagas puede ser causa de abortos en el segundo trimestre de gestación
y una elevada frecuencia de óbitos fue observada en mujeres con una historia previa de
transmisión congénita de esta enfermedad.
Esta variación en las manifestaciones clínicas también se las observó según la distribución
geográfica de los países y aún en distintas regiones de un mismo país.
En los niños asintomáticos, se presume un contagio muy cercano al momento del parto,
porque se observó una sintomatología florida y elevada mortalidad en prematuros, así las
consecuencias de la infección del recién nacido pueden depender del tiempo de la
infección.
En un estudio se demostró la diferencia clínica según el sexo del neonato, el recién nacido
masculino no presentó sintomatología, en cambio las recién nacidas femeninas
presentaron anemia severa, hiporeflexia, disnea y hepatoesplenomegalia, vinculada con
óbito fetal.
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La infección chagásica en el neonato se la puede catalogar, según el momento del
diagnóstico, como temprana (antes de los 30 días de vida) y tardía (después de los 30 días
de vida) y son diversos los signos asociados a ella.
Neonatos asintomáticos. Se puede observar que un 46% - 90% de los neonatos con
infección por T. cruzi no presenta ningún tipo de sintomatología.
Mega vísceras. Entre un 18.3 % a 45% de los recién nacidos infectados presentaron un
discreto aumento del tamaño del hígado (hepatomegalia) y un 13% hepatoesplenomegalia.
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persistente y en el 1% de los neonatos infectados se determinó edema generalizado, frió,
sin signo de Godet; la miositis también puede estar presente.
Bajo peso al nacer. La tasa de transmisión congénita del T. cruzi en los conceptos que
pesan más de 2000g fue mucho más baja en comparación con los valores encontrados
entre los fetos que pesaron menos de 2000g.
Alteraciones en la serie blanca. Se determinó una significante reducción del número de los
monocitos, neutrófilos pero no de los linfocitos.
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y esofagitis; a diferencia de estos, los óbitos solo presentaron nidos de amastigotes a nivel
del esófago y epitelio corial de membrana extraplacentaria.
4.4.- EL PARÁSITO
4.4.1.- TAXONOMÍA
4.4.2.- MORFOLOGÍA
Según los ciclos de los tripanosomatideos las formas morfológicas del parásito son:
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TRIPOMASTIGOTE METACÍCLICO. Es flagelado, fusiforme, con un núcleo central (16-20
μm x 2-4 μm), cinetoplasto de gran tamaño y el blefaroblasto posterior de donde surge un
flagelo que contornea una membrana ondulante que le confiere movimiento. El
tripomastigote sanguíneo (20-25 μm x 2-4 μm), presenta un polimorfismo más grande, este
estadio se encuentra en la sangre del vertebrado y no tiene capacidad para dividirse, pero
sí para invadir otras células.
La vida del T. cruzi comprende dos ciclos de desarrollo: uno en el hospedero vertebrado
(ser humano o mamíferos reservorios) y otro en el hospedero invertebrado (insectos
vectores).
También los tripomastigotes pueden ser ingeridos por los triatomineos durante el
hematofagismo. En el estómago del insecto ellos se transforman en formas redondeadas;
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los epimastigotes en el lumen del intestino medio se multiplican muy activamente por
división binaria longitudinal. Al cabo de 15 a 30 días se desarrollan los tripomastigotes
metacíclicos (infectantes para el vertebrado) en el intestino posterior (recto) del triatoma
para ser eliminados por las heces u orina.
El T. cruzi comprende un conjunto de poblaciones de cepas que circulan entre los vectores,
hombres y reservorios, tanto domésticos como selváticos. Se han realizado aislamientos
del parásito de diversos hospederos, demostrándose una gran variación intraespecífica en
cuanto a diferencias morfológicas de las formas sanguíneas, tropismo, virulencia, habilidad
para inducir lesiones, susceptibilidad para agentes quimioterapeúticos, constitución
antigénica y capacidad de infección para células hospederas.
4.5.- EL VECTOR
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De las siete especies capaces de adaptarse y colonizar la casa del ser humano el T.
infestans tiene una amplia distribución en los países del cono Sur: Bolivia, Perú, Argentina,
Paraguay y Brasil. P. megistus se encuentra también en pequeños focos en Bolivia,
Paraguay, Argentina, el T. sórdida está distribuido en el sur de Brasil, Bolivia, Paraguay y
norte de Argentina. Chile y Uruguay erradicaron de su territorio al T. infestans.
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las tasas de infección natural de triatominos domiciliarios varían entre 1 y 40%, siendo más
elevada en los insectos viejos y en las áreas donde la densidad del vector es más alta y
está ocurriendo transmisión activa.
El riesgo de que una persona contraiga la infección al recibir una única transfusión de
sangre chagásica es de 12 a 20%. Ocurre a través de la sangre total, plasma, concentrado
de hematíes o varios derivados de la sangre. El porcentaje de dadores chagásicos oscila
entre 0.5 y 2% en las importantes ciudades de América Latina pero puede alcanzar más
del 50% en algunas regiones de mayor endemicidad.
Puede ocurrir antes del cuarto mes de gestación y generalmente después del sexto mes
de embarazo, siempre dependiendo de la lesión placentaria o de factores ligados al
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parasito y al hospedero. La enfermedad de Chagas congénita es curable, como la forma
aguda debida a la transmisión vectorial, siendo su gran problema la detección precoz a
través de los sistemas de salud de las regiones endémicas.
Puede darse por la ingestión por parte de un mamífero infectado, de alimentos y bebidas
contaminados con heces de triatominos. El T. cruzi ya fue encontrado en las secreciones
lácteas humanas en la fase aguda de la infección, por lo tanto en el neonato amamantado
no se puede diferenciar una infección congénita de una infección adquirida por el
amamantamiento.
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transformación a amastigotes (3 horas después de la interiorización) y multiplicación por
división binaria simple cada 12 horas hasta nueve generaciones (Pereira D., 2002). Estas
formas intracelulares desintegran la célula huésped e infectan otros macrófagos, formando
así el foco primario.
Con frecuencia, en la puerta de entrada del parásito aparece una lesión inflamatoria
indurada, llamada chagoma. Los cambios histológicos locales consisten en la presencia de
parásitos intracelulares en los leucocitos y células del tejido subcutáneo, edema intersticial,
infiltración linfocitaria e hiperplasia reactiva de los ganglios linfáticos adyacentes. Tras la
diseminación del parásito a través de los linfocitos y de la corriente sanguínea, los músculos
incluido el miocardio pueden estar intensamente parasitados.
En el ser humano la infección se caracteriza por una fase aguda parasitémica que dura
algunas semanas seguidas de una fase crónica con una carga parasitaria más débil pero
persistente. La respuesta inmune que se desarrolla en el curso de la fase aguda es la
responsable del control de la multiplicación parasitaria que conduce a la fase crónica.
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4.7.- ETAPAS CLÁSICAS DE LA ENFERMEDAD DE CHAGAS
Las manifestaciones clínicas de la etapa aguda empiezan 6-10 días después de la infección
y hasta 1-2 meses. En esta etapa se incluyen, además de los cuadros agudos adquiridos
por vía vectorial, los cuadros producidos por la transmisión sanguínea, por los transplantes
de órganos, la reactivación en inmunodeprimidos y transmisión congénita.
Las características clínicas pueden ser específicas e inespecíficas. El punto de entrada por
el T. cruzi en el cuerpo puede estar marcado por la inflamación, que conlleva una hinchazón
edematosa conocida como chagoma y cuando esto ocurre en el ojo se puede producir
conjuntivitis, edema palpebral unilateral y adenopatía satelital preauricular (signo de
Romaña), o puede presentarse un chagoma hematógeno, lipochagoma, chagoma de
inoculación.
La etapa crónica puede durar muchos años y afectar irreversiblemente órganos internos.
Después de la fase aguda, los pacientes pueden estar asintomáticos pero serológicamente
positivos. Cerca del 70 a 85% de la gente infectada continúa en este estado conocido como
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la forma indeterminada de la enfermedad de Chagas crónica, por el resto de sus vidas.
Estas personas pasan a constituirse en reservorios humanos del parásito por muchos años.
4.8.- EPIDEMIOLOGÍA
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FIGURA 3: Situación epidemiológica de la enfermedad de Chagas por nivel de riesgo
(Bolivia-2006)
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presentaron infestaciones de 2.5% y 3% respectivamente y los departamentos con
infestaciones por encima del 3%, fueron Cochabamba (7.3%) y Tarija (9.3%), donde a su
vez se identificó 17 municipios con índices de infestación superiores al 10% Aiquile,
Pasorapa, Omereque, Capinota, Santibáñez, Sicaya, Tapacari, Punata y San Benito en
Cochabamba; Pucara, Saipina, El Trigal en Santa Cruz; y Entre Ríos, Yacuiba, Villa Montes
y Carapari en Tarija. En el departamento de Tarija la reducción del índice de infestación
fue del 72.6% al 9.1%.
En sud América, Bolivia es el país que presenta la más alta tasa de seroprevalencia en
bancos de sangre (20.9%) siendo Brasil (0.7% a 0.6%), Uruguay (0.6%) y Chile (12.4% a
1%) los países con menores proporciones de seroreactividad para la enfermedad de
Chagas. Las encuestas realizadas en 1989 en Bolivia demostraron la importancia de un
control riguroso de las donaciones de sangre. En efecto, la seroprevalencia de la infección
chagásica en los donadores era muy elevada, particularmente en los departamentos de
Santa Cruz (51%), Tarija (45%), Chuquisaca (39%), Cochabamba (28%) y Potosí (24%)
(Programa Nacional de Chagas, Ministerio de Salud y previsión Nacional, 1998).
4.9.- DIAGNÓSTICO
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En la etapa aguda los estudios se centran en la búsqueda y reconocimiento del
Trypanosoma cruzi en sangre (metodología: parasitológica directa), porque en las etapas
iníciales de la enfermedad se encuentran parasitemias importantes y a medida que
transcurre la infección van disminuyendo hasta hacerse mínimas y aleatorias. En las etapas
crónicas (inaparente o indeterminada y
- Microematocrito (CAPILAR)
- Método hemoaglutinación indirecta (HAI)
- Ensayo inmunoenzimático (ELIZA)
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Su sensibilidad en fase aguda es del 95% y la especificidad del 100%, tiene un valor
predictivo positivo del 100% y un valor negativo predictivo del 99.7%.
MATERIALES Y REACTIVOS
• Placas de poliestireno con fondo en U.
• Micropipeta de 5 a 50 μL.
• Micropipeta multicanal de 5 a 50 μ.
• Puntas para micropipeta.
• Solución Alsever.
• Sangre de carnero.
• Suero fisiológico
• Buffer fosfato salino pH 7,2.
• Buffer fosfato salino pH 6,4
• Ácido tánico
• Solución diluyente.
• Suero control positivo a Trypanosoma cruzi.
• Suero control negativo a Trypanosoma cruzi.
• Antígeno de Trypanosoma cruzi.
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MUESTRA
SENSIBILIZACIÓN
a) Tubo N.° 1: Colocar 5 mL de Antígeno (diluido 1/20 en buffer fosfato pH
6,4). Adicionar 5 mL de suspensión de glóbulos rojos tanados. Tubo
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N.° 2 (Control): Colocar 5 mL de buffer pH 6,4. Adicionar 5 mL de suspensión de glóbulos
rojos tanados.
b) Incubar los tubos durante 20 minutos a 37 °C.
c) Centrifugar por siete minutos a 2000 rpm.
d) Eliminar el sobrenadante.
e) Lavar el sedimento con 10 mL de solución diluyente.
f) Centrifugar por siete minutos a 2000 rpm.
g) Descartar el sobrenadante.
h) Resuspender el sedimento en 5 mL de solución diluyente.
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA
a) Rotular una placa de microtitulación para realizar diluciones de los sueros a evaluar al
doble, incluyendo los sueros controles positivo y negativo. Iniciar en la dilución ¼ hasta
1/512.
b) Se recomienda colocar la placa de microtitulación sobre un papel, toalla o franela
humedecida para prevenir el efecto de la electricidad estática.
c) Colocar en los pozos de la fila A, 75 uL de la solución diluyente y 50 uL en los pozos de
las filas B, C, D, E, F, G y H.
d) Agregar a cada pozo de la fila A, 25 uL del suero a evaluar, homogeneizar aspirando y
expeliendo varias veces con la pipeta.
e) Luego realizar diluciones sucesivas al doble. Con la ayuda de una micropipeta multicanal
tomar 50 uL de la dilución ¼ de cada suero por evaluar y verterlo en los pozos de la fila
siguiente, homogeneizar y repetir igual con la siguiente fila.
f) Agregar 50 uL de la suspensión antigénica en cada pocillo.
g) Agitar con suaves golpes en los bordes de la placa.
h) Dejar la placa en reposo sobre una superficie plana.
i) Realizar la lectura después de una hora y a las 24 horas.
Cuando se evalúan muchos sueros es apropiado, primero, realizar el tamizaje con la
dilución de valor diagnóstico (¼). De esta manera, seleccionar los positivos y, en un
segundo ensayo, proceder a titularlos realizando las diluciones correspondientes.
LECTURA.
La falta de reactividad (negativo), se manifiesta por la sedimentación del antígeno en forma
de botón.
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La reactividad del suero (positivo), se manifiesta por la formación de una malla de bordes
irregulares que cubre al 50-100% del fondo del pocillo.
Se considera positiva la muestra a partir de la dilución ¼ y se informa con el título de la
última dilución positiva.
RESULTADO
Reactiva: Se detecta la presencia de anticuerpos contra Trypanosoma cruzi. Título: según
lectura.
No reactiva: Ausencia de anticuerpos contra Trypanosoma cruzi.
INTERPRETACION DE RESULTADOS
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El HAI puede ser cuantitativo utilizando, una sola dilución del suero o muestra,
generalmente la dilución 1/16, obteniendo un resultado positivo o negativo que también
informamos como indterminado, ya que puede confirmarse con otra prueba
HAI POSITIVO dilución 1/16: se considera positivo o también indeterminado pero se debe
confirmar con otra serología complementaria con resultados concordantes, para no
informar un falso positivo.
HAI POSITIVO dilución 1/32: se considera como positivo pero también se sujiere otra
prueba serológica confirmatoria y si es mayor a esta dilución ya se considera positivo para
chagas.
HAI POSITIVO dilución 1/64 o mayor, se procede a confirmar con otra prueba enzimática.
Se procede informar hasta la evolución final de la dilución por la técnica de HAI chagas.
HAI POSITIVO dilución 1/16, 1/32, 1/64, 1/128 o mayor: Se debe informar al peditra medico
para un inicio de tratamiento siempre especificando el final de la dilución y es necesario un
control serológico cuantificado.
(ELISA Enzimed Linked Inmuno Sorbent Assay). Se destaca su utilización para el cribado
por su alta sensibilidad 97.7% a 100% y una especificidad del 93.3% al 100% y es
actualmente el método diagnóstico más difundido.
Esta técnica se basa en la adsorción pasiva del antígeno soluble de T. cruzi a través de la
formación de complejos antígeno/anticuerpo que son detectados mediante
antigammaglobulina humana marcada con una enzima revelada gracias a un sustrato
específico.
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La técnica ELISA emplea antígenos solubles de Tripanosoma cruzi, adheridosva soportes
inertes (placa de microtitulación) y antiglobulinas humanasvconjugadas con enzimas, como
detectores de la reacción antígenoanticuerpo
(Figura 28).
Es un método de gran sensibilidad, pero cuya especialidad está sujeta a lavcalidad de los
antígenos y reactivos empleados por lo que exigen unavrigurosa estandarización.
Los kits comerciales contienen las placas con antígeno y reactivos.
La reacción suele hacerse positiva después de 20 días de infección.
EQUIPOS E INSTRUMENTOS
• Estufa de incubación 37 °C.
• Lector ELISA.
• Lavador de placas ELISA.
• Micropipeta de 0,5 a 10 μL y 10 a 100 μL.
• Micropipeta multicanal de 50-200 μL.
• Potenciómetro.
MATERIALES Y REACTIVOS
• Placas con fondo plano, sensibilizadas con antígeno de Trypanosomavcruzi
• Antigammaglobulina G humana conjugada con peroxidasa (titulado).
• Suero control positivo a Trypanosoma cruzi.
• Suero control negativo a Trypanosoma cruzi.
• Suero control interno.
• Peróxido de hidrógeno 30%.
• Buffer fosfato salino (PBS) pH 7,2 (Anexo 1).
• Buffer de lavado. PBS pH 7,2 - Tween 20 al 0,05% (Anexo 1).
• Solución de bloqueo (PBS pH 7,2 - BSA 3%) (Anexo 1).
• Solución diluyente (PBS pH 7,2 - BSA 1%) (Anexo 1).
• Solución estabilizadora para el sustrato.
• Cromógeno: Orto-phenilendiamina (OPD).
• Ácido sulfúrico 2,5 M.
PROCEDIMIENTO
9.3.1. Retirar del refrigerador la placa sensibilizada con el antígeno y dejar que tome la
temperatura ambiente.
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• Lavar los pozos adicionando a cada uno de ellos 300 μL de PBS - Tween 0,05%. Repetir
el lavado por tres veces.
• En el último lavado eliminar por completo el líquido residual, invirtiendo la placa sobre
papel absorbente (aplicar golpes firmes).
9.3.2. Bloqueo de sitios inespecíficos mediante la adición de 100 μL de PBS - BSA 3% en
cada pozo.
• Dejar una hora a temperatura ambiente.
• Lavar al igual que en 9.3.1. 9.3.3. Incubación de los sueros:
• Rotular la placa de acuerdo con el esquema de distribución de suero
(Figura 29). Se aconseja realizar duplicados.
• Incluir en cada ensayo dos controles positivos y tres controles negativos, un control interno
y un blanco de reactivos.
• Colocar 100 μL por pocillo, de las diluciones de los sueros (1/100).
Mezclar aplicando suaves golpes en las paredes laterales de la placa.
• Incubar 30 minutos en estufa a 37 ºC, con la placa tapada para evitar la evaporación.
• Retirar el líquido de los pozos con la ayuda de una micropipeta y descartar dicho líquido
en un recipiente que contenga hipoclorito de sodio al 5%.
• Lavar los pozos al igual que en el punto 9.3.1.
9.3.4. Incubación del conjugado:
• Colocar 100 μL por pozo del conjugado preparado de acuerdo con el título obtenido
previamente.
• Incubar 30 minutos en estufa a 37 ºC.
• Lavar al igual que en 9.3.1.
9.3.5. Reacción con el sustrato:
• Preparar minutos antes de su uso la solución del sustrato más cromógeno (OPD) ver
anexo.
• Colocar 100 μL en cada pozo.
• Dejar en oscuridad y a temperatura ambiente durante 15 minutos.
• Detener la reacción adicionando 100 μL de ácido sulfúrico 2,5 M, por pozo.
REACTIVOS COMERCIALES (KITS)
En caso de usar kits, seguir estrictamente las instrucciones del inserto contenido en la caja
tanto en el procesamiento, como para determinar la validez del ensayo y calcular el valor
de corte.
LECTURA
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Para que el examen tenga validez, los controles positivo, negativo y control interno deben
reaccionar como tales, es decir que la absorbancia de cada uno de ellos corresponda al
valor predeterminado.
Con lector de ELISA
La presencia o ausencia de anticuerpos anti Tripanosoma cruzi se determina, relacionando
la absorbancia de la muestra a 450 nm respecto al valor del corte.
Se ha definido el valor del corte (VC) como el punto de cruce entre el promedio de las
lecturas de los sueros controles no reactivos y reactivos más dos desviaciones estándar
(DS).
VC = CN + 2 DS
El valor de corte promedio encontrado en nuestro laboratorio es de 0,320
REACTIVO: Muestras con absorbancias mayores de 0,384.
NO REACTIVO: Muestras con absorbancias menores de 0,256.
INDETERMINADO: Se consideran así aquellas cuyas absorbancias caen entre ±20% del
valor de corte. Estas muestras deben ser ensayadas nuevamente, si el resultado persiste
solicitar una nueva muestra luego de un mes, tiempo suficiente para que el nivel de
anticuerpos sea mayor en caso de tratarse de una infección reciente.
- LECTURA VISUAL: Si se opta por este método de interpretación debe considerarse:
REACTIVA: Muestra con coloración netamente amarillo-naranja.
Colores tenues mayores que el del control negativo, requieren la interpretación
instrumental.
NO REACTIVA: Toda muestra que no presente coloración o que ésta sea igual que la de
los controles negativos.
TITULACIÓN
Para obtener el título de las muestras reactivas en el tamizaje, se realiza diluciones dobles
de los sueros a partir de 1/100 y se procede de acuerdo con el punto 9.3.
INFORME E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
• Reactivo: Se detecta anticuerpos (lgG) anti Trypanosoma cruzi. Título: el título de la
muestra es la dilución del suero en la que la absorbancia resulta mayor o igual que el valor
de corte.
• No reactivo: No se detecta anticuerpos (lgG) anti Trypanosoma cruzi.
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Según la Organización Mundial de la Salud se recomienda utilizar al mismo tiempo por lo
menos dos técnicas complementarias para identificar a un paciente como chagásico. La
llamada serología convencional (CS) utiliza las pruebas de IFI, HAI, ELISA, que constituyen
los métodos más sensibles para el diagnóstico de la enfermedad, permitiéndonos el
diagnóstico en más del 95% de los infectados.
ANTÍGENOS RECOMBINANTE
EN 1999 se realizó un estudio donde la sensibilidad de los métodos serológicos para los
antígenos recombinantes (H49, JL7, B13, JL8, A13, IF8) en pacientes en fase crónica fue
de 96.2% a 99.6%.
ANTICUERPOS LÍTICOS
Distintos anticuerpos extraídos contra T. cruzi en una infección activa tuvieron diferentes
actividades funcionales. La función lítica puede cumplirse durante el curso de una infección
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con T. cruzi y su relación puede indicarnos el nivel de parásitos circulantes. Los anticuerpos
líticos son detectados por medio de la prueba de la lisis mediada por complemento (CoML),
aglutinando los tripomastigotes después de la infección y no después de la inmunización.
INMUNOCROMATOGRAFÍA
El uso de las drogas parasiticidas en humanos cumple las funciones de erradicar el parásito
y disminuir la probabilidad de desarrollar la enfermedad (Sosa Estani et al., 1999). Los
fármacos utilizados en el tratamiento de la tripanosomiasis americana se pueden clasificar
en los siguientes grupos:
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1. Revocado de paredes dentro y fuera.
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PACIENTES PARTICULARES Y SUMI
97
6%
822 PARTICULAR
725
50%
44% SUMI
TOTAL
http://saludpublica.bvsp.org.bo/textocompleto/rnsp62113.pdf
http://www.cromoion.com/files/haichagas.pdf
http://chagasticstarija.org/index.php/54-proyecto-chagas-tics
http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs340/es/
http://www.cdc.gov/parasites/chagas/resources/es/informativa_breve.pdf
http://fcm.uncu.edu.ar/medicina/posgrado/dermatologia/teoricos/Chagas.pdf
http://etesis.unab.cl/xmlui/bitstream/handle/tesis/314/guajardo_de.pdf?sequence=3
http://www.tesis.ufm.edu.gt/pdf/3490.pdf
http://digibug.ugr.es/bitstream/10481/787/1/15764096.pdf
http://chagasenelsxxi.com.ar/wp-content/uploads/Cardiolog%C3%ADa-Enfermedad-de-
Chagas.pdf
http://saludpublica.bvsp.org.bo/textocompleto/rnsp62113.pdf
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