Reacción en Cadena de la

Polimerasa (PCR)
y Sistemática Molecular

Alan Zamorano Carrasco

 PROCARIOTAS

EUCARIOTAS
VIRUS

VIROIDES
Dogma central de la Biología
Transcripción
Codigo genético
Traducción
Traducción
Replicación del DNA y DNA Polimerasa
 Para qué sirve todo esto?
Kary Mullis, premio
Nobel de Química 1993

Thermophilus
aquaticus
 Polymerase Chain Reaction - PCR
• PCR amplifica el DNA
– Se realizan billones de copia de algunas
pequeñas cantidades DNA
– Se puede copiar fragmentos de diferentes
tamaños, no es necesario tener el genoma
completo de un organismo.
• Un gen
• Muchos genes
• Es un proceso artificial que imita la replicación
natural.
 Cómo funciona el PCR?
• Reactivos requeridos
– Muestra de DNA que se quiere amplificar
– DNA polimerasa
• Taq DNA polimerasa – Funciona a altas temperaturas
– Nucleotideos
• Llamados dNTPs
– Pareja de primers o partidores
• Un primer se une al DNA en el extremo 5’ de la región a
amplificar
• El otro primer se une al DNA en el extremo 3’ de la región a
amplificar (hebra complementaria)
• Delimitación del fragmento de DNA que se quiere copiar
– Agua
– Buffer
 Como funciona el PCR?
• Protocolo
– Poner todos los reactivos en un tubo.
– Romper la hebra de DNA para crear dos hebras
complementarias. (Denaturación)
– Unir cada partidor a su hebra correspondiente.
• 5’ primer a la hebra 5’ => 3’
• 3’ primer a la hebra 3’ => 5’
(Annealing)
– Copiar cada hebra
• DNA polimerasa
(Elongación)
 Animación PCR
http://www.dnalc.org/resources/animations/pcr.html

Y
RT-PCR+
gel electroforésis
http://www.bio.davidson.edu/courses/immunology/flash/rt_pcr.html
 Cómo
funciona
el PCR?
Qué ocurre con los
virus de RNA y los
viroides?
 Electroforesis de DNA en gel.
• La electroforesis permite detectar la presencia
de DNA en una muestra
• Permite detectar el tamaño aproximado del DNA
de la muestra
– Es decir, el número de nucleótidos del fragmento
amplificado
– No es exacto. Para saber el número exacto de
nucleótidos se deben utilizar técnicas de
secuenciación más avanzadas.
– Puede ser utilizado para identificar un gen si se
conoce previamente el número de nucleótidos de
éste.
 Cómo funciona la electroforesis?
• Una muestra que contiene un fragmento de DNA es sometida a
una corriente eléctrica a través de un gel, que es en realidad un
“colador” de un tamaño de poro específico.

– Los grupos fosfato del DNA tiene carga negativa, por lo tanto se
movilizan hacia el electrodo positivo.
– Fragmentos mas largos tienen mayor número de nucleótidos.
• Mayor masa molecular
• Mayor tamaño
• Pasan por el colador con mayor dificultad.
– Los fragmentos más pequeños se mueven con más facilidad a
través de los poros, por lo tanto avanzan más rápido.

• Los fragmentos son visualizados utilizando una tinción especial.

• Se debe utilizar una referencia de tamaños de DNA para comparar
el tamaño de la muestra problema
Cómo funciona la electroforesis?
Secuenciación
Qué genes debemos elegir?

A nivel macro
Qué genes debemos elegir?

Y a nivel
micro?
Dogma central de la Biología