Вы находитесь на странице: 1из 5

THE APPLICATIONS OF ПРИМЕНЕНИЕ ФЕРМЕНТОВ

ENZYMES IN MEDICINE
T. T. BEREZOV
В МЕДИЦИНЕ
í. í. ÅÖêÖáéÇ
The basic functions of en-
zymes (biological cata- êÓÒÒËÈÒÍËÈ ìÌË‚ÂÒËÚÂÚ ‰ÛÊ·˚ ̇Ó‰Ó‚
lyzes) in living organisms
are outlined. The key role Успехи современной биохимии в выяснении
of enzymes in the regula- фундаментальной природы жизни и молекулярных
tion of the rates of chemi- основ патологии, включая наследственные болезни
человека, а также в определении структуры и функ-
cal reactions is described. ции белков и нуклеиновых кислот в значительной
Special attention is paid to степени обусловлены широким внедрением в био-
medical enzymology, in химию достижений физики, химии и математики.
Этот союз с точными науками позволил не только
particular, to the role of разработать методологические подходы для более
enzymes in the develop- глубокого изучения строения и функций индивиду-
ment of pathological pro- альных химических компонентов живой материи на
молекулярном уровне, но и способствовал разви-
cesses and the usage of тию новых направлений в биохимии, включая мо-
enzymes for the diagnosis лекулярную биологию, биоорганическую химию и
of widespread human энзимологию.
diseases. Учение о ферментах – энзимология – преврати-
лось в самостоятельно и интенсивно развивающую-
ся область знания. Российские ученые (академики
Ç Òڇڸ Í‡ÚÍÓ ËÁÎÓÊÂ- В.А. Энгельгардт, А.Е. Браунштейн, С.Р. Мардашев,
Ì˚ ÓÒÌÓ‚Ì˚ ÙÛÌ͈ËË И.В. Березин и др.) внесли крупный вклад в миро-
вую науку в области изучения структуры и функций
ÙÂÏÂÌÚÓ‚ (·ËÓÎӄ˘ÂÒ-
ферментов, механизмов энзиматического катализа
ÍËı ͇ڇÎËÁ‡ÚÓÓ‚) ‚ и регуляции активности и синтеза ферментов; это
ÊË‚˚ı Ó„‡ÌËÁχı, ÓÚ- способствовало существенному улучшению мето-
дов диагностики, лечения и профилактики заболе-
ϘÂ̇ Íβ˜Â‚‡fl Óθ
ваний человека.
ÙÂÏÂÌÚÓ‚ ‚ „ÛÎflˆËË
Прежде чем касаться медицинских проблем эн-
ÒÍÓÓÒÚË ıËÏ˘ÂÒÍËı Â- зимологии, кратко перечислим основные функции
‡ÍˆËÈ ‚ Ó„‡ÌËÁÏÂ. ê‡Ò- ферментов не только в организме человека и живот-
ÒÏÓÚÂÌ˚ ÔÓ·ÎÂÏ˚ ÏÂ- ных, но и в отдельной живой клетке. Основной и,
может быть, главной функцией ферментов является
‰ËˆËÌÒÍÓÈ ˝ÌÁËÏÓÎÓ„ËË, их способность резко повышать (в десятки и сотни
‚ ˜‡ÒÚÌÓÒÚË Óθ ÙÂ- миллиардов раз) скорость химических реакций, то
ÏÂÌÚÓ‚ ‚ ÏÂı‡ÌËÁÏ ‡Á- есть ферменты выполняют роль катализаторов ог-
ромного числа химических реакций, осуществляе-
‚ËÚËfl Ô‡ÚÓÎӄ˘ÂÒÍÓ„Ó мых ежесекундно во всех живых системах. Более то-
ÔÓˆÂÒÒ‡ Ë ÔËÏÂÌÂÌË го, ферменты являются регуляторами скорости
ÙÂÏÂÌÚÓ‚ ‚ ÍÎËÌËÍ химических реакций, строго контролируя процессы
синтеза и распада индивидуальных химических
‰Îfl ‰Ë‡„ÌÓÒÚËÍË ÌÂÍÓ- компонентов клетки и всего организма в целом.
© ÅÂÂÁÓ‚ í.í., 1996

ÚÓ˚ı ‡ÒÔÓÒÚ‡ÌÂÌ- Благодаря этому свойству ферментов живые систе-


Ì˚ı Á‡·Ó΂‡ÌËÈ ˜ÂÎÓ- мы сохраняют постоянство внутренней среды (так
называемый гомеостаз); они отличаются от совре-
‚Â͇. менных крупных промышленных производств не
мощностью или даже не грузоподъемностью, а вы-
сокой эффективностью, экономичностью, рацио-
нальностью и ювелирной точностью результатов в
микропространстве клетки (никаких побочных

ÅÖêÖáéÇ í.í. èêàåÖçÖçàÖ îÖêåÖçíéÇ Ç åÖÑàñàçÖ 23


продуктов, никаких отходов, загрязняющих окру- литические функции, но и, обладая выраженной
жающую среду). органотропностью и высокой специфичностью
Ферменты выполняют важные защитные функ- действия, могут быть использованы в качестве са-
ции, обезвреживая как экзогенные (поступающие мых тонких и избирательных инструментов для на-
из внешней среды), так и эндогенные (образующи- правленного воздействия на патологический про-
еся в самом организме) токсические вещества; по- цесс. Как известно, из более чем двух тысяч
следние подвергаются под действием ферментов наследственных болезней человека молекулярный
различным реакциям окисления, восстановления механизм развития выяснен только у двух – трех де-
и, наконец, распада на продукты, теряющие свои сятков. Чаще всего развитие болезни непосредст-
токсические свойства. Эта область исследования венно связано с наследственной недостаточностью
получила название ксенобиохимии. или полным отсутствием синтеза одного-единст-
венного фермента в организме больного.
Ферменты используются, кроме того, в качестве
инструментов для осуществления тонкого химичес- Типичным примером подобной связи болезни с
кого органического синтеза в легкой, пищевой, мик- отсутствием синтеза в печени специфического фер-
робиологической и фармацевтической промышлен- мента является фенилпировиноградная олигофре-
ности (производство кормового белка, гормонов, ния – наследственное заболевание, приводящее в
антибиотиков и других лекарственных препаратов и раннем детстве к гибели ребенка или к развитию тя-
L-аминокислот), а также в генноинженерных ис- желой умственной отсталости. Молекулярный де-
следованиях и биотехнологии. фект болезни заключается в блокировании превра-
щения незаменимой аминокислоты фенилаланина
Касаясь медицинских проблем учения о фер- (Фен) в тирозин (Тир) в соответствии с уравнением
ментах, следует прежде всего подчеркнуть, что одно
из перспективных направлений исследования фер- O2
ментов – медицинская энзимология – явилось ло- CH2 CH COOH Aty - 4 -ublhj-
гическим развитием общего биологического учения NH2 rcbkfpf
о ферментах. К настоящему времени получены убе-
дительные доказательства, что современная биоло- Atybkfkfyby
гия и медицина говорят на языке энзимологии и что
возможности применения ферментов в медицине
O2
теоретически безграничны [1, 2]. В частности, четко HO CH2 CH COOH .
Aty - 4 -ublhj-
определились три основных направления исследо-
ваний в области медицинской энзимологии: энзи-
rcbkfpf NH2
мопатология, энзимодиагностика и энзимотера-
Nbhjpby
пия. По этим проблемам созываются национальные
и международные конференции, симпозиумы и Оказалось, что фермент, катализирующий дан-
конгрессы, издаются научные журналы (например, ную реакцию, – Фен-4-гидроксилаза, точнее Фен-
“Вопросы медицинской химии”), публикуются 4-монооксигеназа, – не синтезируется в клетках пе-
ежегодные сборники (Advanses in Clinical Enzymolo- чени, единственном органе, где он в норме открыт.
gy, Annual Reports in Medical Chemistry) и т.д. Отме- Следствием этого молекулярного нарушения обме-
тим также, что в каждой из указанных областей ме- на фенилаланина является развитие тяжелого на-
дицинской энзимологии имеются не только следственного заболевания, обусловленного избы-
собственные цели и конкретные задачи, но и осо- точным накоплением самого фенилаланина и
бые методологические подходы и методические продуктов его побочного пути обмена – фенилпи-
приемы. Ниже будут кратко изложены наши пред- ровиноградной кислоты (отсюда и название болез-
ставления о первом направлении медицинской эн- ни) – в организме, в частности в ткани мозга и сы-
зимологии, в частности энзимопатологии, и более воротке крови больных детей. Обычно диагноз
подробно об использовании ферментов для диагно- ставят на основании химического метода открытия
стики органических и функциональных поражений фенилаланина или фенилпировиноградной кисло-
организма и отдельных органов при патологии. ты на пеленках детей. Лечение в основном сводится
Область исследования энзимопатологии, хотя и к исключению из питания ребенка (в том числе и из
включает название патологии (учение о причинах и молока матери) аминокислоты фенилаланина [4].
механизмах развития болезней), на самом деле яв- Для такого ребенка тирозин (см. отличия в форму-
ляется теоретической, фундаментальной частью лах) оказывается незаменимой аминокислотой.
медицинской энзимологии. Она призвана изучать Аналогично, развитие другого тяжелого на-
молекулярные основы развития патологического следственного заболевания – галактоземии, то
процесса, основанные на данных нарушения меха- есть непереносимость молочного сахара, связано
низмов регуляции активности или синтеза инди- с отсутствием синтеза в клетках печени фермента,
видуального фермента, или группы ферментов. катализирующего превращение галактозы в глю-
Ферменты выполняют не только уникальные ката- козу. Следствием подобной аномалии является

24 ëéêéëéÇëäàâ éÅêÄáéÇÄíÖãúçõâ ÜìêçÄã, ‹3, 1996


накопление галактозы в тканях и развитие катарак- ишемической болезни сердца активность обеих
ты в раннем детстве, поражения тканей печени и трансаминаз в сыворотке крови больного лишь
мозга, нередко приводящие к гибели ребенка; лече- слегка, хотя и статистически достоверно, повыша-
ние в этом случае сводится к исключению из диеты ется; однако при наступлении инфаркта миокарда
молочного сахара. уже через 20 минут активность обеих трансаминаз в
Помимо наследственных заболеваний, энзимо- сыворотке крови резко, в десятки и сотни раз, пре-
патология успешно решает и проблемы патогенеза вышает уровни контрольных величин в крови здо-
соматических болезней, не столько причинных рового человека [3].
факторов, вызывающих развитие болезни, сколько Необходимо указать, что, помимо трансаминаз
механизмов развития наиболее распространенных сыворотки крови, при инфаркте миокарда весьма
болезней человека. В частности, организованы информативными диагностическими ферментны-
крупные научные центры и Научно-исследователь- ми пробами являются лактатдегидрогеназный и
ские институты (Онкологический научный центр креатинфосфокиназный тесты, относящиеся также
РАМН, Кардиологический научный центр РАМН, к так называемым некротическим ферментным ме-
НИИ ревматологии РАМН), в задачу которых вхо- тодам. Это означает, что при повреждении и распа-
дит выяснение молекулярных основ, например, де части сердечной мышцы вследствие закупорки
злокачественного роста, артериосклероза или рев- коронарной артерии тромбом из обескровленной
матоидных артритов. Нетрудно представить огром- зоны вымываются в кровь продукты распада, вклю-
ную роль ферментных систем или даже отдельных чая ферменты. Укажем также, что при благополуч-
ферментов, нарушение регуляции активности или ном исходе болезни уровни ферментов в сыворотке
синтеза которых приводит к развитию, формирова- крови возвращаются к норме уже ко 2 – 3-му дню
нию патологического процесса. после инфаркта. В то же время при повторном ин-
фаркте миокарда, наступающем обычно в течение
Второе направление научных исследований в
первой недели болезни, электрокардиограмма обыч-
области медицинской энзимологии – энзимодиаг-
но не улавливает повторного инфаркта, тогда как
ностика – призвано заниматься разработкой фер-
ферментные тесты реагируют повторным и резким
ментных тестов, основанных на определении ак-
повышением уровня их в сыворотке крови.
тивности (уровня) ферментов и изоферментов в
биологических жидкостях организма больного (сы- Диагностическая ценность ферментов сущест-
воротка крови, желудочный или дуоденальный сок, венно повысилась после внедрения в клиническую
спинномозговая жидкость, моча и др.). Эти иссле- практику методов определения изоферментов, раз-
дования развиваются в двух направлениях: во-пер- личающихся преимущественно разной электрофо-
вых, по пути поиска органотропных или тканетроп- ретической подвижностью, хотя и наделенных оди-
ных ферментов, специфичных для определенного наковой биологической активностью [3]. В этой
органа, группы органов или целостного организма связи следует более подробно рассмотреть диагнос-
человека; во-вторых, по пути совершенствования тическую значимость двух ферментов, определение
уже описанных в литературе методов определения изоферментных спектров которых внедрено почти
активности ферментов в биосредах. во всех лабораториях клинической химии мира.
Первым из них является упоминавшаяся выше
Диагностическая энзимология достигла огром-
лактатдегидрогеназа (ЛДГ), которая катализирует
ных успехов, помогая врачу не только в постановке
обратимое превращение пировиноградной кислоты
правильного диагноза заболевания и выяснения
в молочную кислоту по уравнению
степени тяжести болезни, но и в определении пра-
вильности избранного метода лечения. В настоящее +
YFLY2 YFL
время разработаны количественные методы анали- CH3 CH3
за многих распространенных ферментов, выявляе-
C O CH OH .
мых в биологических жидкостях при поражении KLU
разных органов. Для каждого из этих ферментов оп- COOH COOH
ределены контрольные величины (уровни) актив-
ности и пределы колебания в норме как в сыворотке Gbhedfn Kfrnfn
крови, так и в самом органе [3, 4]. Следует подчеркнуть, что ЛДГ является ключе-
В качестве примера можно сослаться на резуль- вым ферментом анаэробного обмена углеводов во
таты определения активности двух трансаминаз: ас- всех живых организмах, определяя скорость образо-
партатаминотрансферазы (в клинической литера- вания энергии в виде аденозинтрифосфата (АТФ).
туре больше известной как глутамат-оксалоацетат- ЛДГ – широко распространенный фермент, он
трансаминаза – GOT) и аланинаминотрансферазы синтезируется почти во всех клетках организма че-
(глутамат-пируват-трансаминазы – GPT); величи- ловека [3]; различают два типа ЛДГ: так называемый
ны активности этих ферментов в сыворотке крови в сердечный тип, обозначаемый H-тип (от англ.
норме колеблются между 5 – 40 международными heart), и мышечный тип, обозначаемый M-тип
единицами. При сердечной недостаточности, при (от англ. muscle); каждый из них состоит из четырех

ÅÖêÖáéÇ í.í. èêàåÖçÖçàÖ îÖêåÖçíéÇ Ç åÖÑàñàçÖ 25


субъединиц, обозначаемых соответственно цифра- Креатинфосфокиназа – ключевой фермент био-
ми. Если в молекуле ЛДГ все четыре субъединицы синтеза макроэргического (наделенного или содер-
представлены H-типом, ее обозначают ЛДГ H4 ; ес- жащего высокий энергетический потенциал) субст-
ли все субъединицы составлены из M-типа, тогда рата – креатинфосфата, играющего наряду с АТФ
фермент обозначают M4 . Поскольку в клетках все- выдающуюся роль в биоэнергетике сердечной
гда содержатся оба типа молекул H и M, суммарно мышцы и всего организма. Оказалось, что молекула
четыре субъединицы строятся как из H-, так и из КФК также состоит из двух типов субъединиц: из
M-типов. Таким образом, различают 5 изофермен- M-типа (то есть мышечный тип, от англ. muscle) и
тов ЛДГ, составленных из следующих типов H и M: B-типа (то есть мозговой; от англ. brain); соответст-
венно выделены и охарактеризованы три изофер-
H4 , H3M1 , H2M2 , H1M3 и M4 ; мента КФК, которые обозначаются латинскими
соответственно они обозначаются: 1-, 2-, 3-, 4- и 5-й буквами: MM-изофермент (мышечный тип), пре-
изоферменты ЛДГ. имущественно характерный для поперечно-поло-
сатой мускулатуры, BB-изофермент (мозговой тип,
При органическом поражении сердечной мыш- преимущественно содержится в ткани мозга) и сме-
цы, например при инфаркте миокарда, в сыворотке шанный тип, обозначаемый MB-изоферментом,
крови резко повышается уровень не только общей который содержится только в сердечной мышце.
лактатдегидрогеназы, но, что очень важно для точ- Учитывая эти данные, в частности органотроп-
ности диагноза, это повышение преимущественно ность изоферментов КФК, при органических или
обусловлено изоферментами 1 и 2, соответственно функциональных поражениях этих тканей в сыво-
H4 и H3M1 . ротке крови больного появляются в норме отсутст-
С другой стороны, при поражениях скелетной вующие изоферменты КФК, и, соответственно, они
мускулатуры, а также при воспалительных процес- открываются при электрофорезе.
сах печени (гепатиты) или при вирусных поражени- На нашей кафедре В.П. Сараев и Ф.Б. Левин ис-
ях ткани печени [4], и наконец, при отравлении че- следовали сыворотку крови больных инфарктом
тыреххлористым углеродом или другими ядами, миокарда в динамике с первого часа наступления
когда преимущественно поражается печень, вызы- болезни и показали, что общая активность ЛДГ рез-
вая некроз ткани [3, 4], изоферментный спектр пе- ко повышается уже через 0,5 часа и держится на
ремещается слева направо (то есть уровни 5 и 4 этом высоком уровне до 2 – 3 дней, а у отдельных
изоферментов ЛДГ резко повышаются при почти больных – до 4 дней; после острого периода величи-
неизмененном уровне 1 и 2 изоферментов). Эти ре- ны ЛДГ быстро приходят к норме, хотя изофер-
зультаты очень важны для лечащего врача, который ментный спектр ЛДГ все еще сохраняет сердечный
на основании главным образом клинической кар- тип до 7 – 8 суток. Укажем также, что во всех случа-
тины болезни, лабораторных данных, электрофоре- ях инфарктов миокарда, включая благополучные
тической картины спектров ЛДГ ставит оконча- случаи, В.П. Сараев и Ф.Б. Левин определяли ак-
тельный диагноз и приступает к лечению больного. тивность еще одного фермента – гамма-глутамил-
Естественно, что методы лечения будут резко отли- трансферазы – в сыворотке крови. Оказалось, что
чаться, и в выборе этих методов немалую роль игра- активность этого фермента медленно повышается
ет изоферментный спектр ЛДГ сердечного или мы- при наступлении инфаркта, но высокие уровни его
шечного типа. появляются в крови только на 10 – 14-е сутки после
Вторым ферментом, диагностическая ценность наступления инфаркта. По мнению многих клини-
которого еще выше, в особенности при инфаркте цистов, гамма-глутамилтрансферазный тест сыво-
миокарда [3, 4], является креатинфосфокиназа ротки крови может служить важным постинфаркт-
(КФК), катализирующая биосинтез креатинфосфа- ным ферментным тестом. Имеющиеся данные
та из креатина и АТФ в соответствии с уравнением свидетельствуют о том, что некротизированная зо-
на сердечной мышцы скорее всего не является ис-
HN C NH2 точником гамма-глутамилтрансферазы, поскольку
вымывание ткани при инфаркте наступает уже в
N CH3 + FNA первые 10 – 15 минут. Более вероятно предположе-
RAR
CH2 COOH ние, что в процессе заживления и заполнения не-
кротизированной зоны нормальной мышечной
Rhtfnby тканью в постинфарктном периоде происходит уси-
ленная васкуляризация (развитие сосудистой сети);
HN C NH ∼ PO3H в эндотелии образующихся в этой зоне сосудов от-
крыто повышенное количество (по активности)
RAR
N CH3 + FLA . гамма-глутамилтрансферазы, что, по-видимому,
CH2 COOH может служить источником повышенного содержа-
ния этого фермента в сыворотке крови больных ин-
Rhtfnbyajcafn фарктом миокарда.

26 ëéêéëéÇëäàâ éÅêÄáéÇÄíÖãúçõâ ÜìêçÄã, ‹3, 1996


Диагностическая энзимология достигла значи- избирательных инструментов в направленном воз-
тельных успехов при постановке диагноза болезней действии на течение любой патологии. О степени
не только указанных органов, но и других, в ча- поражения органов, биомембран клеток и субкле-
стности почек, поджелудочной железы, желудка, точных структур, о тяжести патологического про-
кишечника и легких [2]. Широко используют в цесса можно судить по появлению (или резкому по-
клинической практике, например, определение вышению уровня) органотропных ферментов и
трансамидиназы в сыворотке крови – фермента, от- изоферментов в сыворотке крови больных, что со-
крытого только в ткани почек и поджелудочной же- ставляет предмет диагностической энзимологии.
лезы; или определяют активность фермента гисти-
дазы, обнаруженного только в клетках печени и ãàíÖêÄíìêÄ
эпидермиса кожи. Соответственно, при органичес- 1. Браунштейн А.Е. На стыке химии и биологии. М.,
ких поражениях этих органов, воспалительных про- 1987.
цессах, травмах, хирургических вмешательствах в 2. Мардашев С.Р. Биохимические проблемы медици-
сыворотке крови больных появляются указанные ны. М., 1975.
ферменты, в норме отсутствующие в сыворотке. 3. Зильва М., Пэннел Г. Клиническая химия в диагнос-
тике и лечении. М.: Медицина, 1984.
Естественно, что здесь представлены лишь от-
4. Панченко Н.И., Гусева Н.Р., Масленникова Н.К. и др. //
дельные примеры из большого числа ферментов, Лаб. диагностика. 1993. № 4. С. 37 – 41.
определяемых в клинике, и описаны только некото-
рые болезни из известных почти 10 тысяч болезней
* * *
человека. Однако и из этих примеров можно сде-
лать заключение, что ферментная диагностика мо- Темирболат Темболатович Березов, доктор ме-
жет служить основой не только для постановки пра- дицинских наук, профессор, зав. кафедрой биохи-
вильного и, что самое главное, своевременного мии Российского Университета дружбы народов.
диагноза болезни, но и для проверки эффективнос- Автор 400 научных работ, включая 4 монографии и
ти применяемого метода лечения. два учебника по биохимии для студентов медвузов.
Имеет 46 авторских свидетельств и 2 патента.
Обладая высокой специфичностью действия, Лауреат премии РАМН им. Н.И. Пирогова и
ферменты применяются в качестве самых тонких и академика В.С. Гулевича.

ÅÖêÖáéÇ í.í. èêàåÖçÖçàÖ îÖêåÖçíéÇ Ç åÖÑàñàçÖ 27

Оценить