PRACTICA Nº 6

OBSERVACIÓN DE CÉLULAS EUCARIOTES

I. Introducción

Como breve introducción a esta práctica acerca de la observación de células

eucariotas lo que vamos a tener en cuenta es saber los diferentes tipos de
coloraciones el cuales presentan estos tipos de células y a su vez poder
clasificar a qué tipo de tinción se han sometido este tipo de células ya sea
células animales o vegetales; además cabe resaltar que para esta práctica se
utilizaran muestras de sarro bucal humano y muestra de sangre por que estas
células son complejas ya que son de tipo eucariota.

Demos también saber que las células eucariotas tienen en su interior un núcleo
definido y membranas internas y todo esto está protegido por una membrana
celular o plasmática; las células eucariotas pueden clasificarse de acuerdo a
las características resaltantes que le dan ciertas peculiaridades.

Las células vegetales son célula que encontramos haciendo parte del reino
plantae y las células animales tienen características que las diferencian
claramente del resto de las células. Para la ejecución de esta práctica se van
a usar diferentes tipos de células animales y vegetales cuyas funciones son
características de su sitio de obtención.
II. Competencias Generales

1. Reconocer los diferentes tipos de coloraciones que presenta las células

eucariotas para su diagnóstico clínico.

2. Identificar la clasificación de los leucocitos polimorfonucleares mediante la

tinción Wright.

3. Observar y caracterizar células eucariotas de tipo vegetal (epidermis de

cebolla).

4. Observar y caracterizar células eucariotas de tipo animal (epitelio bucal, tejido

adiposo y sangre).
III. MATERIALES Y MUESTRAS

3.1. MATERIAL INDIVIDUAL:

● Un frasco vacío pequeño con gotero.

● 5 Láminas y 5 laminillas
● Un marcador de tinta indeleble
● Gorro
● Mandil
● Guantes
● Mascarilla

3.2. MATERIAL GRUPAL:

● 10 ml de colorante Azul de metileno un frasco pequeño (el colorante que

llevaron en la práctica 5)
● 10 ml colorante Wright (el colorante que llevaron en la práctica 5)
● Paños limpiadores
● Un sobre de FLORATIL ( lo venden en cualquier botica o farmacia, puede
ser polvo o en liquido)
● Una caja de mondadientes.
● Una catáfila de cebolla
● Un trozo de Tocino (5 gramos)
● Bisturí u hoja de afeitar
● Una caja de Fósforo

3.3. MATERIAL QUE ENCONTRARÁS EN EL LABORATORIO:

● Batería GRAM (Alcohol acetona, fucsina o safranina, cristal violeta, lugol)

● Microscopio óptico
● Aceite de cedro
● Pipetas pasteur
● Goteros
● Agua destilada
● Mechero de alcohol
● Escobilla lava tubos
● Detergente
● Cubeta de tinción
● Frasco lavador
● Mechero de Alcohol
● Lanceta estéril
● Sudan III
● Láminas portaobjeto y cubreobjeto
● Materiales de disección: tijera, pinza, estilete.

IV. Procedimiento

A. Observación de Células levaduriformes Saccharomyces boulardii

(En muestra de FLORATIL)

Diluya el sobre de
Floratil con 3ml de agua
destilada en un tubo de
ensayo, homogenizar la
dilución, esperar por 5
minutos.
Coloque una gota de la Ubique a menor
dilución en un porta aumento y luego
objeto y cubra con una Observe con el objetivo
laminilla. de 40x.

Observe la forma y
Ajuste el diafragma para
tamaño de estos
incrementar el contraste.
microorganismos
B. OBSERVACIÓN DE CÉLULAS VEGETALES (Células epiteliales de Allium cepa)

Con ayuda de una pinza

desprenda la membrana Utilizando una hoja de afeitar
Separe una de las capas del
epidérmica que cubre la parte obtenga una porción de medio
bulbo de la cebolla.
interna de la cebolla y centímetro cuadrado.
extiéndala en el portaobjetos.

cúbrala con una gota de lugol,

coloque cuidadosamente el Reconozca las partes de la
cubreobjetos y observe en el célula vegetal.
microscopio.

C. Observación de células animales (Epitelio bucal)

Con un hisopo o
Deposite la mucosidad
mondadientes limpio Agregue unas gotas de
extraída en el centro de
extraiga suavemente la AZUL de metileno y espere
una lámina portaobjetos y
mucosidad de la cavidad 3 minutos.
extiéndalo con un frotis.
bucal.

Luego visualice a mayor

Elimine el exceso de
colorante utilizando agua.
Observe la muestra a
aumento y con objetivo de
menor aumento y localice:
inmersión utilizando aceite
células asociadas y
de cedro y reconozca los
dobladas.
componentes celulares.
D. Observación de células animales (Tejido adiposo)

Con ayuda de un bisturí,
cortar una fina capa de
grasa de tocino
Colocarla en un
Lavar la muestra con
portaobjetos y cubrirla
agua y cubrirla con unas
con unas gotas de
gotas de Sudán III. Dejar
formol. Dejar actuar 4
actuar unos 5 minutos.
minutos.

Volver a lavar la
preparación con agua,
Observar al microscopio.
cubrirla con un
cubreobjetos

E. OBSERVACIÓN DE CÉLULAS ANIMALES (SANGRE)

Extracción de sangre por punción de dedo

Con ayuda de una lanceta

desechable, realice una
Tome una gota de sangre y
punción del pulpejo del dedo
haga un frotis fino sobre la
anular de la mano izquierda,
lámina portaobjeto
previa desinfección con
algodón y alcohol.

Colocar el frotis extendido ya

Secar la muestra al medio
seco, sobre una base plana en
ambiente o con ayuda de un
posición totalmente
mechero
horizontal.
Tinción de Wright
Colocar el frotis secado sobre
una rejilla o cubeta de tinción
con la sangre hacia arriba
El colorante deberá cubrir
completamente la lámina,
pero no debe derramarse por
los bordes.
Limpiar el dorso del
portaobjetos con una gasa o
algodón humedecido en
alcohol para eliminar
cualquier resto de colorante.
Dejarlo que permanezca en el
frotis 1- 2 Minutos, agregar la
Cubrir completamente la
misma cantidad de agua
muestra con el colorante de
destilada homogenizar la
Wright gota a gota (10 gotas
coloración y esperar de 5-8
aprox).
minutos, para fijar los
glóbulos sanguíneos.
Lavar con agua en el chorro
cuidadosamente hasta que la
Esperar la formación de brillo
extensión presente un aspecto
metálico.
rosado al examinarlo a simple
vista.
Secar y observar con el
microscopio con el objetivo de
inmersión.
V. Resultados
 VI. DISCUSIÓN

Células vegetales y células animales:

El empleo de colorantes en la observación de células representa una gran ventaja

ya que permite identificar con mayor facilidad las estructuras básicas de la misma,
siempre y cuando se emplean concentraciones bajas, de lo contrario se convierte
en problema porque si el colorante es muy concentrado no deja diferenciar nada
en la célula. De acuerdo con las observaciones realizadas a la célula vegetal de
la epidermis de la cebolla, solo se pudo observar la pared celular delimitando al
citoplasma que a su vez rodea al núcleo No se observó aparato de golgi, retículo
endoplasmatico, vacuolas, ribosomas ni mitocondrias entre otros.
En la muestra con células del epitelio bucal observábamos en cada célula unos
puntos oscuros de color violeta debido al lugol, los cuales corresponden al núcleo
rodeando este y delimitado por la membrana celular.
¿Qué formas tienen las células de la epidermis de la cebolla? ¿Posee
adaptaciones relacionadas con su función?
La célula epidérmica de la cebolla es de forma de rombos alargados, que son la
pared celular (que está formada por celulosa y principalmente por agua).
Si poseen adaptación porque la forma de rombos alargado le permite a la cebolla
su forma característica además su elevado contenido acuoso
¿Cuál es el color y la forma del núcleo después de la adición del lugol?
La forma de núcleo fue de una forma ovoidea y el color luego de adiciono el lugol
fue morado.
¿Cuál fue la estructura celular que se observa dentro del núcleo?
Estructuras dentro del núcleo:
● Envoltura nuclear
● Cromatina
● Nucléolo
Solo pudimos observar la membrana externa de la envoltura nuclear con muy poco
detalle.¿De acuerdo a lo que has observado menciona que organelos pudiste
observar en la célula animal y vegetal.
 CÉLULA ANIMAL CÉLULA VEGETAL
Membrana celular Pared celular
núcleo núcleo
Citoplasma citoplasma

¿Qué organelos no pudieron ser observados con el microscopio de luz?

CÉLULA ANIMAL CÉLULA VEGETAL

Retículo endoplasmatico Retículo endoplasmatico
Membrana plasmática Membrana plasmática
Aparato de Golgi Aparato de Golgi
Mitocondrias Mitocondrias
Ribosomas Ribosomas
Vesículas membranosas ----------- NO tiene -----------
Centriolo ----------- NO tiene -----------
--------- NO tiene ----------- Cloroplastos
--------- NO tiene ----------- Vacuolas

Observación de células animales (sangre).-

Con el fin de estudiar satisfactoriamente los frotis sanguíneos, es necesario

colorearlos. En la mayoría de los laboratorios los colorantes más empleados para la
tinción hematológica se basan en el de Romanowsky constituido fundamentalmente
con la mezcla de eosina (ácido) y azul de metileno (básico). Además se han
incorporado el empleo de derivados por oxidación del azul de metileno que se conoce
con el nombre de azures (A, B, C). Son los azures los responsables de la coloración
púrpura o roja de ciertas estructuras. Tanto la eosina como el azul de metileno son
muy sensibles a las variaciones de pH de las diferentes estructuras celulares, de
forma que las que tienen carácter básico fijan la eosina mientras que las que poseen
propiedades ácidas fijan principalmente el azul de metileno. Esto explica que las
estructuras basófilas se tiñan de color azul mientras que los competente acidófilas
adquieren un color rosado. La diferente afinidad de ciertas granulaciones
citoplasmáticas por dichos colorantes permite clasificar a los leucocitos
polimorfonucleares en 3 grupos:

Granulocitos eosinófilos, en los que la granulación específica contiene sustancias

de carácter básicos que fijan los colorantes ácidos y se tiñen de color rojo-naranja.

Granulocitos basófilos, en los que la granulación específica posee sustancias de

carácter ácido que fijan los colorantes básicos y se tiñen de color azul oscuro.

Granulocitos neutrófilos, en los que la granulación específica posee compuestos

de carácter neutro por lo que fijan ambos colorantes simultáneamente, de ahí que se
tiñen de color pardo.

Dentro del grupo de colorante tipo Romanowsky los más utilizados son el de Wright,
Giemsa y May- Grünwald-Giemsa, entre otras.

Sobre la Tinción de Wright

Esta coloración es conocida como policromática debido a que produce varios colores.
Es una solución de alcohol metílico de un colorante ácido (eosina) y otro básico (azul
de metileno). El alcohol sirve como un fijador del frotis sanguíneo al portaobjetos. El
amortiguador, que consiste en una solución tamponada, mantiene el pH del colorante
y favorece la mejor absorción por los diferentes componentes celulares.

Sobre sus materiales Materiales:

Colorante de Wright: para 100 mL se requiere de colorante de Wright (0.3g), metanol

(97.0 mL) y glicerol (3.0 mL). Disolver en un mortero el colorante con el glicerol. Una
vez disuelto se adiciona el metanol trasvasándolo a un frasco oscuro. Agitar. Filtrar
antes de usar. Solución amortiguadora tamponada: en un litro de agua destilada se
agregan 3.76 g de hidrofosfato disódico (Na2HPO4* 2H20) y 2.10g de fosfato de
potasio dihidrogenado (KH2PO4). Mezclar todos los reactivos y guardar en frasco de
vidrio en lugar fresco. Ajustar el pH a 7.2.
En los resultados de esta coloración podemos determinar lo siguiente:

Los eritrocitos se observarán de color naranja o rosado.El citoplasma de los

monocitos presentará una tonalidad azul grisácea con gránulo rojizos bastante finos
y sus vacuolas características. El citoplasma de los linfocitos presentará varias
tonalidades azules. Los núcleos de los linfocitos y neutrófilos aparecerán de color
púrpura oscuro. Los núcleos de los monocitos de color púrpura algo más claros (lila).
Los gránulos de los eosinófilos son de color rojo-anaranjado intenso. Los gránulos de
los basófilos púrpura azulado muy oscuro. Los gránulos de los neutrófilos se aprecian
de color lila, bastante finos.Las plaquetas toman coloración violeta o púrpura.
 VII. Conclusiones

1. Se llegó a reconocer los diversos tipos de coloraciones que presentan las

células eucariotas en cada una de las tinciones que le elaboró.
2. Se identificó la clasificación de las células en la muestra de sangre a través de
la tinción Wright
3. Se llegó a observar y ver las características de las células eucariotas de tipo
vegetal (epidermis de cebolla).
4. Se observó y se pudo visualizar las características células eucariotas de tipo
animal (epitelio bucal, tejido adiposo y sangre).
 VIII. Referencias bibliograficas

Starr C, Taggart R. Biología. La unidad y la diversidad de la vida. (Versión

Abreviada) 11 ed. Thomson Learning. 2008.

Buchanan BB, Gruissem W & Jones RL, Biochemistry & Molecular Biology of
Plants. American Society of Plant Physiologists. Maryland. USA .2000.

Sánchez González, D. J. y Trejo Bahena N. I. Biología celular y molecular, 1ª

ed, Alfil:México, 2008.
Alberts, Bruce y cols., Introducción a la Biología celular, 3ª ed., México: Médica
Panamericana, 2011.
 IX. Anexos
Cuestionario:

1. ¿cuál es el fundamento de la tinción SUDAN III con las células

adiposas?

La técnica del sudán III es un método utilizado generalmente para demostrar

la presencia de grasas mediante tinción de triglicéridos, aunque también tiñe
otros lípidos.

Pertenece al grupo de colorantes indiferentes, que son aquellos que no tienen

afinidad por estructuras ácidas o básicas. Son insolubles en el agua y tiñen
aquellas sustancias que tienen un poder de disolución superior al del líquido
empleado para preparar la solución colorante.

Los colorantes para grasas son más solubles en las propias grasas que en el
medio en el que van disueltos. Así, al bañar la grasa con la solución del
colorante, éste tiende a disolverse en la grasa que se va cargando del
colorante. Por regla general estos colorantes siempre van en solución
alcohólica o bien en una mezcla de alcohol/acetona o alcohol/agua.

2. ¿Qués es el FLORATIL y por qué es importante en el campo de la

clínica?

Floratil: es un antidiarreico de origen natural indicado en el tratamiento de las

diarreas de cualquier etiología y como profiláctico en el tratamiento de las
diarreas por antibioticoterapia, además de añadir podemos añadir que es
restaurador fisiológico del ecosistema intestinal.

Con respecto a la importancia en el campo de la clínica este antidiarreico como

su nombre lo dice ayuda al tratamiento de las diarreas; según La Organización
Mundial de la Salud define a la diarrea como el cambio en las deposiciones
habituales que ocasiona la presencia de heces líquidas, al menos 3 veces en
un período de 24 horas, es por eso para contrarrestarlas se utiliza el FLORATIL
como remedio natural.