UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA

LA MOLINA

INFORME DE LABORATORIO

Profesora :
Curso : Biología general
Alumna : Zevallos Alvites Martha Angela
Ciclo : 2015 – I
 I. INTRODUCCIÓN
El conocimiento de las estructuras del ser vivo está basado casi totalmente en el
estudio con el microscopio. El microscopio óptico es un instrumento que permite la
observación de objetos y detalles de estructuras tan pequeñas que no podrían ser
observadas a simple vista. Con él, nuestro grado de visibilidad se amplía en cientos o
miles de veces, gracias a un conjunto de lentes, dispuestos convenientemente. Dado
que el microscopio permite superar estas dos dificultades, su uso y el conocimiento de
los principios y técnicas en microscopía, resultan fundamentales para el desarrollo de
la investigación en ciencias biológicas, especialmente en los campos de estudio que
conforman el área académica de la Universidad Nacional Agraria La Molina, pues al
ser una universidad dedicada a la formación de jóvenes profesionales con inclinación
hacia la investigación científica, es necesario que reciban una base sólida para realizar
estudios e investigaciones, empezando por lo más básico, que es saber utilizar
correcta y eficientemente las diferentes clases de microscopios, que le permitirán
descubrir un mundo que no tenían a su alcance anteriormente, pero que ahora
aprovecharán al máximo y del que nunca dejarán de aprender y sorprenderse.

II. OBJETIVOS
 Identificar las partes del microscopio compuesto y comprender sus
características.
 Manejar el microscopio óptico compuesto y estereoscopio correctamente
 Identificar las similitudes y diferencias entre el microscopio compuesto y el
estereoscopio.
 Realizar observaciones de muestras biológicas (vasos conductores – abeja) en
los microscopios y aprender a enfocarlas a diferentes aumentos.
 Calcular la distancia límite de resolución, el grado de aumento y la distancia de
trabajo en el microscopio.

III. REVISIÓN LITERARIA

 1. Tipos de microscopio utilizados en la práctica

El tipo de microscopio más utilizado es el microscopio óptico, que se sirve de la luz

visible para crear una imagen aumentada del objeto. El microscopio óptico más simple
es la lente convexa doble con una distancia focal corta. Estas lentes pueden aumentar
un objeto hasta 15 veces. Por lo general se utilizan microscopios compuestos, que
disponen de varias lentes con las que se consiguen aumentos mayores. Algunos
microscopios ópticos pueden aumentar un objeto por encima de las 2.000 veces.

Los microscopios ópticos actuales tienen un poder resolutivo de 0,2 µm, unas mil
veces la del ojo humano

A. Microscopio Óptico Compuesto

El microscopio compuesto consiste en dos sistemas de lentes, el objetivo y el ocular,
montados en extremos opuestos de un tubo cerrado. El objetivo está compuesto de
varias lentes que crean una imagen real aumentada del objeto examinado. Las lentes
de los microscopios están dispuestas de forma que el objetivo se encuentre en el
punto focal del ocular. Cuando se mira a través del ocular se ve una imagen virtual
aumentada de la imagen real. El aumento total del microscopio depende de las
longitudes focales de los dos sistemas de lentes.

Parte mecánica
- Pie o soporte: sirve como base al microscopio y en él se encuentra la fuente de
iluminación.
- Platina: superficie sobre la que se colocan las preparaciones. En el centro se
encuentra un orificio que permite el paso de la luz. Sobre la platina hay un
sistema de pinza o similar, para sujetar el portaobjetos con la preparación, y
unas escalas que ayudan a conocer qué parte de la muestra se está
observando.
- Tubo: cilindro hueco que forma el cuerpo del microscopio. Constituye el soporte
de oculares y objetivos.
- Revólver: estructura giratoria que contiene los objetivos.
- Brazo o asa: une el tubo a la platina. Lugar por el que se debe tomar el
microscopio para trasladarlo de lugar.
- Tornillo macrométrico o de enfoque grosero: sirve para obtener un primer
enfoque de la muestra al utilizarse el objetivo de menor aumento. Desplaza la
platina verticalmente de forma perceptible.
- Tornillo micrométrico o de enfoque fino: sirve para un enfoque preciso de la
muestra, una vez que se ha realizado el enfoque con el macrométrico. También
desplaza verticalmente la platina, pero de forma prácticamente imperceptible.
Es el único tornillo de enfoque que se utiliza, una vez realizado el primer
enfoque, al ir cambiando a objetivos de mayor aumento.

Parte óptica
- Lentes oculares: son los sistemas de lentes más cercanos al ojo del
observador, situados en la parte superior del microscopio. Son cilindros huecos
 provistos de lentes convergentes cuyo aumento se reseña en la parte superior
de los mismos (normalmente 10X).
- Lentes objetivos: son sistemas de lentes convergentes que se acoplan en la
parte inferior del tubo, mediante el revólver. En esta estructura se pueden
acoplar varios objetivos. Algunos objetivos no enfocan bien la preparación al
aire, y se deben de utilizar con un aceite de inmersión (100x).

Sistema de iluminación

Este tipo de sistema tiene la finalidad de dirigir la luz natural o artificial de modo que
ilumine la muestra para observarla al microscopio óptico. Está formada por cuatro
partes muy importantes, como la fuente de luz, espejos, condensador y diafragma.

- Fuente de luz: puede ser natural o artificial. La luz artificial puede ser
independiente del microscopio. Si lo es, este debe tener un espejo que dirija los
rayos hacia el eje óptico y en forma paralela a el.
- Espejo: puede moverse para orientarlo de la manera más conveniente. El
espejo tiene dos caras, una plana y una cóncava. Si utiliza la cara cóncava
cuando no se trabaja con el condensador, con una fuente luminosa natural. En
cambio la cara plana se utiliza cuando se trabaja con luz artificial o cuando se
usa el condensador.
- Condensador: sistema de lentes convergentes que capta los rayos de luz y los
concentra sobre la preparación, de manera que proporciona mayor o menos
contraste. Se regula en altura mediante un tornillo.
- Diafragma o iris: sobre el reflector de la fuente de iluminación. Abriéndolo o
cerrándolo permite graduar la intensidad de la luz.

B. Microscopio Óptico Simple o Estereoscopio

El microscopio estereoscópico tiene dos lentes objetivos y posee una profundidad de
foco mucho mayor que la del microscopio compuesto; ambas características le
permiten producir imágenes tridimensionales (estereoscópicas). El poder de resolución
y de aumento del estereoscopio son mucho menores que las del microscopio
compuesto y por esta razón el estereoscopio se usa para estudiar objetos y
especímenes relativamente grandes (razón por la cual también se le llama microscopio
de disección). En realidad son dos lupas, colocadas una al lado de la otra y con cierta
oblicuidad entre sí (15 grados), que da a la imagen el efecto de profundidad. La lupa
posee una capacidad de aumento limitada, que oscila entre 1,5x a 50x, y forma una
imagen aumentada y derecha

Las partes de este microscopio son prácticamente las mismas que las discutidas para
el microscopio compuesto.

2. Características de visión con el microscopio

Grado de Aumento
Es la magnificación total que sufre la imagen del objeto debido al efecto de los lentes
oculares y objetivos. Se obtiene multiplicando el número de veces que aumenta el
lente ocular por el número de veces que aumenta el lente objetivo.

Grado de aumento: Aumento del objetivo x Aumento del ocular

Si el objetivo aumenta la imagen de un objeto 40 veces, ésta al pasar por la lente

ocular será nuevamente aumentada. Si el ocular aumenta 10 veces, la magnificación
total en este caso será:

10X x 40X = 400X.

Este resultado permite saber cuántas veces más grande estamos viendo la imagen de
un objeto.

Poder de Resolución
Es la posibilidad de distinguir separados dos puntos muy cercanos entre sí. Cuanto
mayor sea el poder de resolución, menor será la distancia entre dos puntos a la cual
pueden distinguirse como tales. La distancia límite en la cual dos puntos pueden ser
todavía distinguibles se denomina Límite de Resolución. El poder de resolución de un
microscopio compuesto depende de la longitud de onda de la fuente luminosa y de la
apertura numérica (propiedad óptica de la lente).

Límites de Resolución aproximados de algunos sistemas ópticos:

- Ojo humano: 0,2 mm.

- Microscopio Óptico: 0,2 µm.
- Microscopio electrónico: 0,2 nm.

Puede ser calculado mediante la siguiente fórmula:

D.L.R = (0,61 ƛ) / A.N

ƛ: Longitud de onda de la fuente luminosa

A.N: Apertura numérica del lente

D.L.R: Distancia Límite de Resolución

Distancia de trabajo
Es la distancia que se mide entre la muestra observada y el lente objetivo. Es
inversamente proporcional a la apertura numérica y al aumento. Por lo tanto, cuanto
mayor la apertura del objetivo menor la profundidad de campo, e igualmente, cuanto
mayor el aumento menor la profundidad de campo.

3. Manejo del microscopio

Antes de observar la preparación al microscopio, esta debe de ser montada sobre
vidrio. Para ello existen dos piezas de vidrio denominadas portaobjetos (porta), que,
como su nombre indica, es el soporte sobre el que va la muestra, y cubreobjetos
(cubre) que siempre ha de colocarse sobre la muestra. Una vez colocada la muestra
en el porta, se debe añadir una gota de agua, o de la solución acuosa pertinente,
antes de colocar el cubre, para evitar interfases agua-aire, que provocan zonas ciegas.

Los pasos a seguir para la perfecta utilización del microscopio son las siguientes:

a. Enchufar el microscopio a la red.

b. Colocar la preparación sobre la platina de forma que la estructura a observar
quede en el orificio central de la platina.
c. Poner el objetivo de menor aumento cuyo amplio campo visual facilita el
hallazgo de estructuras importantes.
d. Subir la pletina accionando el tornillo macrométrico y mirando la preparación
desde fuera hasta alcanzar el tope superior. En ningún caso tocar la
preparación con los objetivos.
e. Mirando por los oculares, bajar lentamente la platina con el tornillo
macrométrico hasta conseguir ver el objeto lo más nítido posible.
f. Ajustar el enfoque con el tornillo micrométrico hasta verlo claramente.
g. Para observar la preparación a mayores aumentos cambiar de objetivo con un
simple giro del revolver (sin mover el tornillo macro). Las pequeñas variaciones
que se observen en el enfoque se producen al cambiar de objetivo y se
corrigen con el micro.
h. Para observar otros campos, desplazar la preparación moviendo los tornillos de
la platina.

IV. MATERIALES
Materiales del alumno por mesa

- 2 estiletes
- Láminas portaobjetos
- Goteros
- Regla milimetrada de 20 cm
- Láminas cubreobjetos
- Muestras de agua estancada

Materiales del laboratorio

- Microscopio óptico simple o estereoscopio

- Placas Petri
- Microscopio óptico compuesto
- Pipetas Pasteur

V. PROCEDIMIENTO
1. Actividad partes del microscopio y poder de resolución
Se procedió a escribir en los espacios en blanco del cuadro con los sistemas que
conforman el microscopio óptico compuesto, sus partes y funciones; utilizando el
conocimiento adquirido previamente por la teoría y la explicación de la profesora,
ayudada de un gráfico contenido en la guía de laboratorio y la observación física de los
microscopios compuestos presentes en cada mesa de laboratorio.

A continuación se completó el cuadro para hallar el poder de resolución de cada uno

de los objetivos del microscopio, considerando a la longitud de onda con el valor de
5500 Å; esta actividad la realizamos apoyándonos en los microscopios que se nos
proporcionaron al inicio de la clase de laboratorio, para poder identificar cada lente
objetivo presente en el revólver y así poder calcular:

- el grado de aumento: multiplicando el aumento del ocular por el objetivo.

- la distancia límite de resolución: con la fórmula explicada por la profesora
D.L.R = (0,61 ƛ) / A.N
- la distancia de trabajo: midiendo con una regla la distancia entre el objetivo y el
porta objeto en donde se encontraba la muestra.

2. Observación de muestras
Utilizamos los materiales solicitado para la práctica.
Tomamos unas gotas de la muestra de agua estancada y las colocamos en el porta
objeto, protegiéndolas con el cubre objeto. Pusimos el porta objeto en la platina
asegurándolo con la pinza; procedimos a observar la muestra con el objetivo de menor
aumento (10x). Para enfocar nuestros objetos de observación alternamos moviendo
los tornillos macrométrico y micrométrico hasta que logramos imágenes aceptables y
nítidas que nos permitieran hacer nuestras observaciones.
A continuación, procedimos a retirar la muestra de agua estancada, para observar la
muestra de vasos conductores de plantas proporcionado por la profesora, repetimos la
operación anterior y anotamos los resultados; aunque esta vez utilizando primero el
objetivo de menor aumento (10x) luego con el de mediano aumento (40x) y finalmente
con el de mayor aumento (100x) aunque no se utilizó el aceite de inmersión como se
solicita. Además al conseguir cada imagen requerida, medimos con una regla la
distancia de trabajo y calculamos la distancia límite de resolución.
Por último, utilizamos el estereoscopio para observar más detalladamente el cuerpo de
una abeja, también modulando la imagen a través de los tornillos del microscopio, para
luego proceder a documentar lo aprendido.

VI. RESULTADOS Y DISCUSIÓN

1. Actividad partes del microscopio y poder de resolución
Se completó el cuadro de Partes del microscopio óptico compuesto de acuerdo a la
información proporcionada en clase, diferenciando el sistema óptico, de iluminación y
mecánico, las partes que los conforman y sus funciones.

Sistemas Partes Función

1. Lente ocular Amplía la imagen de objetivo.
Óptico Amplía la imagen de la muestra, se sitúa cerca de
12. Lente objetivo
esta.
8. Fuente de luz Envía los rayos luminosos hacia el condensador.
Regula la cantidad de luz que entra en el
10. Diafragma
Iluminación condensador.
Sistema de lentes que concentran los rayos
9. Condensador
luminosos sobre la preparación.
2. Tubo ocular Contiene en su parte superior al lente ocular.
3. Revólver Permite cambiar de objetivo al girar
11. Platina Lugar donde se coloca la muestra
Soporte
Mecánico 4. Brazo
7. Base
Tornillos de enfoque
Consigue el enfoque nítido
5. Micrométrico
6.Macrométrico Logra el enfoque rápido

Se desarrolló el cuadro para hallar el poder de resolución de cada uno de los objetivos
del microscopio compuesto.

Ocular Objetivo G.A D.L.R D.T

0.61/ 0.25 )
Menor: 10x 100 ¿ 1 cm
0.55 µm
10x
0.61/ 0.6 5 )
Mediano: 40x 400 ¿ 2 mm
0.55 µm

X: aumentos D.L.R: Distancia Límite de Resolución

G.A: Grado de aumento D.T: Distancia de trabajo

2. Observación de muestras

Observación en el microscopio óptico compuesto

Se estudió la muestra de agua estancada que cada grupo consiguió, se pudo observar
lo siguiente:

Muestra Agua estancada

Se pudo reconocer protozoarios desarrollándose en el agua
Observación
estancada.
Objetivo 10x
Grado de
100
aumento

Imagen

A continuación se nos entregaron distintas muestras para ser analizadas, en este

caso, se trabajó con vasos conductores de plantas y los resultados fueron los
siguientes:

Muestra Vasos conductores

La imagen es mucho La muestra está
La imagen no es muy
más nítida, se aumentada al punto
Observació expresiva, no se puede
observa la que podemos
n ver la composición de
composición de la observar detalles
la muestra.
muestra. mínimos.
100x (sin aceite de
Objetivo 10x 40x
inmersión)
Grado de
100 400 1000
aumento

Imagen

Observación en el estereoscopio:
 Muestra abeja
Observación Se pudo ver que la composición de las alas era parecida a
celdas, además del cuerpo aumentado de la abeja, patas y
cabeza.
Grado de aumento 12x

Imagen

VII. CONCLUSIONES
 Podemos afirmar que el estereoscopio y el microscopio compuesto son
artefactos indispensables en el proceso de observación de muestras
biológicas, son la base de todo estudio biológico pues permiten conocer la
composición de la muestra y analizarla según se necesite.
 Se concluyó que en el agua estancada, suelen encontrarse protozoarios y
algas, producto de la exposición a los factores ambientales del lugar.
 El microscopio nos permitió estudiar la composición y forma de los vasos
conductores de plantas, reafirmando lo aprendido anteriormente; además,
aprendimos acerca del cuerpo de un insecto (abeja) al poder observarlo de
manera detallada.

VIII. CUESTIONARIO
1. ¿Qué es la apertura numérica?
 Es la capacidad de recoger luz de una lente, indica el poder de resolución del
objetivo. Para lentes secas su valor máximo es de 1, pero por las limitaciones
físicas de la calidad de las lentes, raras veces sobrepasan el valor de 0,95. Cuanto
mayor sea la apertura podremos conseguir mayor resolución y brillo en la imagen.
Si queremos usar lentes con una apertura mayor de 1 (máximo 1,4) estas deben
ser de inmersión en aceite con el mismo índice de refracción que la lente. El uso
del aceite implica que la distancia de trabajo entre el objeto y la lente debe ser muy
pequeña lo que imposibilita la observación de células vivas directamente en el
frasco de cultivo.

2. ¿A cuántos micrómetros (µm), Armstrong (Å) y nanómetros (nm) equivalen 0.2

milímetros (mm)?

1 µm = 0,001 mm = 1 × 10-3 mm; por lo tanto, 0.2 mm = 2 x 102 µm

1 Å = 10-7 mm; por lo tanto, 0.2 mm = 2 x 106 Å

3. ¿Qué lente objetivo utilizaría para enfocar el preparado y obtener un mayor campo
visual?

Para enfocar el preparado y poder observarlo y estudiarlo de una manera más

efectiva, se utilizaría el lente objetivo de mayor intensidad, preferentemente el de
100x, pero con el aceite de inmersión, pues de otro modo no recomendable; o el
de 40x, con el que se logra un buen alcance.

4. ¿Qué tipo de imagen se obtiene con el microscopio estereoscopio?

El microscopio estereoscopio proporciona una imagen tridimensional
(estereoscópica) con un aumento de 4 a 40 veces el tamaño de la muestra
observada, lográndose una imagen aumentada y derecha. Se usa para estudiar
objetos y especímenes relativamente grandes, ya que su poder de resolución y
aumento son mucho menores que las del microscopio electrónico.
5. ¿Cuál es la diferencia entre aumento y poder de resolución?
El aumento de un microscopio es la capacidad que poseen sus lentes para formar
una imagen de mucho mayor tamaño que la imagen real del objeto. Se podría
pensar que la capacidad de aumento es infinita, o al menos, enorme y que
depende de los lentes que se usen. Sin embargo no es así, ya que de nada sirve
tener un gran aumento si la imagen no es nítida, y es aquí en donde se relaciona y
diferencia con la resolución en el caso de la microscopia óptica, pues esta es la
capacidad de mostrar claramente los detalles del objeto.

6. Describa los diferentes tipos de microscopio óptico y electrónico.

Microscopio óptico
- Microscopios Compuestos: es el tipo de microscopio más utilizado. Un
microscopio compuesto es un aparato óptico hecho para agrandar objetos,
consiste en un número de lentes formando la imagen por lentes o una
combinación de lentes posicionados cerca del objeto, proyectándolo hacia los
lentes oculares u el ocular.
- Microscopio Binocular Estereoscópico: Sólo sirve para exámenes superficiales
(disección de animales, observación de colonias, detección de quistes de
parásitos). Es otro tipo de microscopio compuesto que posee una lente
 convergente. El objeto se coloca entre la lente y el foco, de modo que la
imagen es virtual y está a una distancia que es la distancia mínima de visón
nítida.
- Microscopio Campo oscuro: Este es una variación del microscopio compuesto
pero presenta un fondo oscuro sobre el que se ven los objetos intensamente
iluminados. Permite ver el contorno de las bacterias y su movilidad, además de
los microorganismos sin teñir.
- Microscopio Contraste de fases: El microscopio de contraste de fases permite
observar células sin colorear y resulta especialmente útil para células vivas.
Este aprovecha las pequeñas diferencias de los índices de refracción en las
distintas partes de una célula y en distintas partes de una muestra de tejido de
forma que sean visibles las distintas partes de una muestra.
- Microscopio Fluorescencia: la fluorescencia es la propiedad que tienen ciertas
sustancias de emitir, cuando son iluminadas por una radiación de L corta, otra
radiación de L más larga.

Microscopio electrónico
- Microscopio electrónico de transmisión (MET): Permite la observación de
muestras de cortes muy finos. Se ha de colocar una placa fotográfica detrás del
objeto para registrar la imagen aumentada. este tipo de microscopios pueden
aumentar un objeto hasta un millón de veces.
- Microscopio electrónico de barrido (MEB): En éste no es necesario que el
espécimen se encuentre en capas para observarlo. explora la superficie de la
imagen punto por punto, y recorre la muestra con un haz muy concentrado de
electrones. pueden llegar a ampliar una imagen unas 200.000 veces.

7. Enumere ejemplos de muestras que observaría en un microscopio óptico

compuesto y en un microscopio óptico simple.
Microscopio óptico compuesto
- Sangre
- Xilema y floema
- Proteínas
- bacterias

Microscopio óptico simple

- insecto
- hoja
- flor
- cabello

IX. BIBLIOGRAFÍA
BERNIS MATEU, F.J. 1997.- Atlas temático de Microscopía. Idea Books, S.A.,
Barcelona, España.
RAISMAN, J.S. Y A.M. GONZÁLEZ 2006.- Introducción: Principios de Microscopía en
http:// www.biología.edu.ar
HEALEY, P. 1971.-Microscopio y vida microscópica. Burguera.
Laboratorio n° 5: EL microscopio y las células - UPRM