Contenido

ANÁLISIS INSTRUMENTAL  Definición y características

 Clasificación de los métodos cromatográficos
 Recuento histórico de la cromatografía de reparto
TEMA 3  Principales componentes del equipo:

SEPARACIONES  Gas de arrastre

 Inyector
CROMATOGRÁFICAS  Columna
 Horno
Cromatografía de Gases-  Detector

Clase 1
Prof. Luis Peña 1 2

Definición y características Definición y características

La cromatografía agrupa un conjunto importante y diverso
de métodos, que permite a los científicos separar
componentes estrechamente relacionados en mezclas
complejas, lo que en muchas ocasiones resulta imposible
por otros medios (destilación, extracción, filtración)
Muestra Fase Móvil
(Mezcla de sustancias) (Gas, Líquido o Fluido
Supercrítico)
Es una técnica muy completa por diversas razones:
 puede identificar y cuantificar los compuestos de una fase
líquida o gaseosa homogénea
elevada selectividad, puede separar al analito de posibles
interferentes en una matriz compleja
se puede acoplar con técnicas como espectrometría de
masas (CG/MS o HPLC/MS) para mejorar los resultados

Fase Estacionaria  amplia aplicación en laboratorios de diversa naturaleza

(Sólido o Líquido en soporte)
3 como farmacia, forenses, control de calidad, entre otros. 4
 Clasificación de los métodos Clasificación de los métodos
cromatográficos cromatográficos
Los métodos cromatográficos pueden clasificarse de A) Según los mecanismos físicos o químicos responsables
tres formas distintas según: de la separación de los componentes de la muestra
A) Mecanismos físicos o químicos responsables de la
separación de los componentes de la muestra Cromatografía
Liquida

B) Método de contacto entre las fases móvil y

Cromatografía
Cromatografía Cromatografía Cromatografía
estacionaria de Exclusión
de Reparto Iónica de Adsorción
por tamaño

C) Estado físico de la fase móvil y la fase estacionaria

Filtración en Penetración en
Gel Gel

5 6

Clasificación de los métodos Clasificación de los métodos

cromatográficos cromatográficos
Particularmente, la cromatografía de reparto se centra en la separación de B) Según el método de contacto entre las fases móvil y
mezclas por la interacción diferencial de sus componentes entre una FASE
estacionaria
ESTACIONARIA (líquida o sólida) y una FASE MOVIL (líquido o gas).

Se dispone la FE en una superficie

Plana plana como un papel o una placa

Se dispone la FE en el interior
De Columna
de una columna

7 8
 Clasificación de los métodos Clasificación de los métodos
cromatográficos cromatográficos

Figura 5. Ascenso por capilaridad de los analitos en la

Figura 6. Separación de los pigmentos vegetales mediante cromatografía
cromatografía en papel 9 10
en papel

Clasificación de los métodos Recuento histórico de la cromatografía

cromatográficos de reparto
C) Estado físico de la fase móvil y la fase estacionaria
A modo de recuento histórico, en 1903 Michael Tsweet
FM = Líquido Cromatografía Líquida logró la separación de mezclas de pigmentos
vegetales en columnas rellenas con adsorbentes
Cromatografía Gaseosa (CG) sólidos y varios solventes.
FM = Gas éter de
petróleo
mezcla de
Sólida Cromatografía Gas-Sólido (CGS) pigmentos

En CG la FE pigmentos
CaCO3
puede ser: separados
Líquida Cromatografía Gas-Líquido (CGL)

FM = Fluido Supercrítico Cromatografía de Fluido Cromatografía =

Supercrítico khroma [color] + graph [escritura]
11 (griego) 12
 Recuento histórico de la cromatografía Recuento histórico de la cromatografía
de reparto de reparto

Figura 8. (a) Diagrama que muestra la separación de una mezcla de A y B por 13

cromatografía de elución en columna. (b) Señal de salida del detector en las distintas Figura 9. Cromatograma de algunos pesticidas clorados en agua14
fases de la elución mostradas en (a).

Principales componentes del equipo Principales componentes del equipo

1 6

4
5

3 Observación: se
mantienen a T controlada

1 – Tanque de gas de arrastre y controles de caudal y presión

2 - Inyector (Vaporizador) de la muestra.
3 - Columna cromatográfica y horno de la columna.
4 - Detector.
5 –Tratamiento electrónico de la señal (Amplificación).
15 16
6 - Registro de la señal (Registrador o Computador).
 Principales componentes del equipo Principales componentes del equipo

 Gas de arrastre (Gas Carreer):  Gas de arrastre (Gas Carreer):

En CG, la fase móvil NO interactúa con la muestra, sino que la Las impurezas típicas de los gases de arrastre y sus
arrastra a través de la columna. efectos son:

Oxida / hidroliza algunas FE;

Requisitos: H2O, O2
Son incompatibles con el DCE
: No debe reaccionar con la muestra, ni con la fase
estacionaria o con las superficies del instrumento.
Hidrocarbonatos Producen ruido en la señal del DIF
: Debe estar exento de impurezas que puedan degradar
la fase estacionaria y por tanto confundirse con componentes
de la muestra.
17 18

Principales componentes del equipo Principales componentes del equipo

 Gas de arrastre (Gas Carreer):  Gas de arrastre (Gas Carreer):

A medida que aumentan los requerimientos de pureza Requisitos:
también aumentan los costos. : Cada detector
demanda un gas de arraste específico para su mejor
funcionamento.
C A = 99,995 %
COSTO

B B = 99,999 % Selección de gases de arrastre en función del detector:

A C = 99,9999 % DCT He, H2
PUREZA
DIF N2, H2
Figura 10. Relación entre el costo y la pureza de un gas de DCE N2, Ar + 5%CH4
19
arrastre. 20
 Principales componentes del equipo Principales componentes del equipo
 Gas de arrastre (Gas Carreer):
 Gas de arrastre (Gas Carreer):
En la línea de alimentación del gas son necesarios los
¿Puede cualquier mezcla separarse por CG?
siguientes componentes :

3 Para que una sustancia cualquiera pueda ser

4 6
“arrastada” por un flujo de un gas (FM) ésta se debe disolver,
2 por lo menos parcialmente en el gas
1

Mezclas cuyos componentes sean volátiles

5
1 - Cilindro de Gas; 2 - Regulador de Presión Primario; 3 - “Trampas” para
eliminar impurezas del Gas; 4 - Regulador de Presión Secundario;
5 - Regulador de Caudal (Controlador Diferencial de Flujo);
6 - Medidor de Caudal (Rotámetro)
Nota: Los tubos y conexiones son de acero inoxidable o cobre.
VOLÁTILES (=“evaporados”)
DE FORMA GENERAL: La CG se aplica a la separación y análisis de
mezclas cuyos constituyentes tengan PUNTOS DE EBULLICION por
22
21 debajo de los 300ºC y que sean térmicamente estables.

Principales componentes del equipo Principales componentes del equipo

 Inyector “on-column” Convencional:  Inyector “on-column” Convencional:

Alimentación de Septum (silicona)

gas de arraste 1 2 3

1 – La punta de la aguja de la microjeringa se introduce al inicio de la

Bloque columna;
Punta de columna metálico 2 – La muestra inyectada se vaporiza instantaneamente al inicio de la
cromatográfica caliente columna;
23 3 – Un “Plug” de vapor de la muestra es forzado por el gas de arrastre 24
a fluir por la columna.
 Principales componentes del equipo Principales componentes del equipo
 Inyector “on-column” Convencional:  Inyector “on-column” Convencional:

Algunos parámetros de inyección son: 2) Volumen Inyectado

Depende del tipo de columna y del estado físico de la muestra
1) La Temperatura del Inyector
Muestras Muestras
Ésta debe ser suficientemente elevada para que la muestra COLUMNA
Líquidas Gaseosas
se vaporice inmediatamente, pero sin decomposición Empacada 0,2 l ... 20 l 0,1 ml ... 50 ml
 = 3,2 mm (1/4”)

Capilar 0,01 l ... 3 l 0,001 ml ... 0,1 ml

 = 0,25 mm
Por Regla General:
Tinj = 50oC sobre la temperatura de ebullición del
Para el caso de los Sólidos, éstos convencionalmente se disuelven en
componente menos volátil
25 un solvente adecuado e inyectan como solución 26

Principales componentes del equipo Principales componentes del equipo

 Columnas:  Columnas:
Además de la interacción con la FE, el tiempo que un analito
demora en recorrer la columna depende de su PRESIÓN DE
VAPOR (p0).
Estructura química del analito
p0 = f
Temperatura de la columna

Temperatura Presión Velocidad

EMPACADA CAPILAR de de de
 = 3 a 6 mm  = 0,1 a 0,5 mm la columna vapor migración
L = 0,5 m a 5 m L = 5 m a 100 m
Rellena con un sólido pulverizado Paredes internas recubiertas con
(FE sólida o FE líquida depositada una película fina (fracción de  m) EL ANALITO ELUYE MAS RAPIDAMENTE
sobre las partículas de relleno) de FE líquida o sólida (MENOR RETENCIÓN)
27 28
 Principales componentes del equipo
 Columnas:
TEMPERATURA DE LA COLUMNA
Aspecto ideal:
Buena resolución
Altura apreciable
Figura 11. Un control confiable de la temperatura de la columna es
esencial para obtener una buena separación en CG
Principales componentes del equipo
 Horno de la Columna. Programación lineal de la temperatura
Al tratar de separar ISOTERMICAMENTE mezclas complejas conformadas
por constituyentes con volatilidades muy diferentes se observa:
TCOL BAJA:
-Los componentes más volátiles son
separados;
- Los componentes menos volátiles
demoran a eluir, saliendo como picos
mal definidos
TCOL ALTA:
- Los componentes más volátiles no
son separados;
- Los componentes menos volátiles
eluyen más rápidamente
Principales componentes del equipo
 Horno de la Columna:
Las características deseadas de un horno son:
 Amplio rango de temperatura de uso
 Temperatura independiente de los demás módulos
 Temperatura uniforme en su interior
 Fácil acceso a la columna
 Calentamiento y enfriamiento rápido
 Temperatura estable y reproducible
29 30
Principales componentes del equipo
 Horno de la Columna. Programación lineal de la temperatura
La temperatura del horno puede ser variada linealmente durante la separación
Se consigue buena separación
de los componentes de la
muestra en menor tiempo.
Parámetros de una programación de temperatura:
TINI Temperatura Inicial
TEMPERATURA
T FIM
TFIM Temperatura Final
R
tINI Tiempo Isotérmico Inicial
T INI
tFIM Tiempo Final de Programación
R Velocidad de calentamiento tINI tFIM
31 TIEMPO 32
 Principales componentes del equipo Principales componentes del equipo
 Detectores  Detectores
Son dispositivos que examinan continuamente el material Son dispositivos que generan una señal eléctrica
proporcional a la cantidad eluida de un analito
eluido, generando una señal cuando detecta sustancias
~ 60 detectores se han usado en CG
diferentes al gas de arrastre.
~ 15 equipan cromatógrafos comerciales

4 responden a la mayor parte de las aplicaciones

DCT (TCD) DIF (FID)

Detector por Detector por ionización
conductividad térmica de llama

DCE (ECD) EM (MS) 34

El gráfico Señal vs Tiempo = CROMATOGRAMA 33 Detector por captura de Detector por
Idealmente: cada sustancia separada aparece como un PICO en el cromatograma. electrones espectrometria de masas

Principales componentes del equipo Principales componentes del equipo

 Detectores  Detectores
Los más importantes:
UNIVERSALES:
DETECTOR POR CONDUCTIVIDAD TÉRMICA (DCT O TCD) Generan una señal para cualquier
Variación de la conductividad térmica del “gas de arraste”. sustancia eluida

DETECTOR POR IONIZACIÓN DE FLAMA (DIF O FID)

SELECTIVOS:
Iones generados durante la quema de los eluatos en una llama de
Detectan apenas sustancias con
H2 + aire. determinadas
propiedades fisico-químicas
DETECTOR POR CAPTURA DE ELECTRONES (DCE O ECD)
Disminución de una corriente causada por la absorción de
electrones por eluatos altamente electrolíticos. ESPECÍFICOS:
Detectan sustancias que poseen
35 determinado elemento 36
o grupo funcional
 Principales componentes del equipo Principales componentes del equipo
 Detectores Detector por Conductividad Térmica DCT  Detectores Detector por Ionización de Flama DIF
Se basa en la variación de la conductividad térmica del gas cuando Se basa en la formación de iones cuando un compuesto se quema en una
eluye un analito. llama de hidrógeno y oxígeno
La tasa de transferencia de calor entre un cuerpo
caliente y un cuerpo frio depende de la conductividad
térmica del gas en el espacio que separa los cuerpos. El eluyente de la columna se mezcla con
H2 y O2 y se quema. Como en una llama
Si la conductividad térmica del gas disminuye, la de H2 + O2 no existen iones, esta no
cantidad de calor transferido disminuye: el cuerpo conduce corriente eléctrica.
caliente se calienta más.
Celda de Detección del DCT:
i
1 Bloque metálico (caliente)
2 Entrada de gas de arraste
5 Cuando un compuesto orgánico eluye,
3 3 Salida de gas de arraste también es quemado. A medida que se
4 Filamento metálico (mezcla W-Re) calentado combustiona se forman iones: la llama
4 5 Alimentación de corriente eléctrica para pasa a conducir corriente eléctrica
2 1 calentamiento del filamento 37
38

Principales componentes del equipo Principales componentes del equipo

 Detectores Detector por Captura de Electrones DCE  Detectores Detector por Espectrometria de Masas MS
Se basa en la disminución de un flujo de electrones lentos (térmicos)
causada por su absorción por especies electrofílicas 1 Fuente de iones
3 Analizador

Un flujo continuo de electrones lentos es

establecido entre un ánodo (fuente radioactiva
β -emissora) y un cátodo.

Al pasar una sustancia electrofílica

algunos electrones son absorbidos,
resultando una disminución de la
corriente eléctrica. 39 2 Purga de gases 4 Detector
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