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Fermentación obtención ácido itaconico

La condición para el proceso de fermentación está sometida a partir de unas condiciones de PH


y temperatura determinadas, en este aspecto el PH debe estar en un límite medio en un rango
favorable para el desarrollo de los microorganismos. Un PH alrededor de 3 o 4 para incrementar
la producción de ácido itaconico. Según el referente una vez iniciado el proceso se prioriza en
alcanzar un 35% del rendimiento inicial en la concentración de azúcar. Una vez se alcance un PH
de 4 la concentración de ácido itatonico puede aumentar alrededor de un 77,5% en su
rendimiento respecto a el azúcar utilizado. Posteriormente al alcanzar un PH de 5 la
concentración de ácido itatonico debería ser alrededor de un 51,8% conforme a su rendimiento
y en relación a el azúcar utilizado inicialmente. Los rangos de PH deberían mantenerse entre 4,1
y 4,6 en donde es más prominente la generación de ácido itatonico.

Es posible establecer también una relación entra el consumo de glucosa, así como componentes
glucósidos los cuales presentan una tendencia inversamente proporcional entre sí, en donde la
disminución de la cantidad de glucosa a un PH 4,0 presenta valores para el ácido itaconico que
varían entre los 10g/l a 30g/l mientras que el valor mínimo de glucosa obtenido es de alrededor
1 a 5 g/l.

La concentración de azúcar inicial en la fermentación para un PH de 4.0 es funcional en cierta


medida debido a que la concentración de ácido itaconico presenta valores entre 30 g/l y 40g/l
en un lapso de operación de 96h no siendo esta cantidad las más óptima debido que el tiempo
es bastante corto, mas sin embargo se pueden notar cambios sustanciales en la cantidad inicial
de sustrato, en donde a partir de datos establecidos en el referente se suele partir de 200 g/l y
tiende a consumirse en 30% durante el tiempo mencionado anteriormente. Además, debería
esperarse que el ácido itaconico pueda alcanzar su máximo una vez esté sometido a un ambiente
de fase estacionaria.

En lo concerniente a la máxima obtención del ácido itaconico es necesario a cabo el proceso


durante 140 a 170h, si se analiza de forma objetiva en tiempos inferiores a estos tanto la
glucosa como el sustrato no se han consumido completamente por lo que no se ha alcanzado
el punto crítico en la fermentación en donde ambos suplementos preliminares llegan al punto
álgido en la generación de producto, además después de 96h es probable que el A. niger
pueda mantener la tendencia en su metabolismo y fomentando el crecimiento en miras de
obtener la mayor cantidad ácido itaconico posible.

Para realizar un análisis exhaustivo del proceso se tiene que revisar su cinética, para esto es
necesario la obtención los parámetros cinéticos para un sistema de fermentación Batch los
cuales permitan la optimización del proceso. A partir del referente bibliográfico se hace uso del
amonio como sustrato para caracterizar el sistema conforme a las propiedades del ácido
itaconico, por lo que ciertamente la determinación de los parámetros cinéticos se deben
considerar la relación de decrecimiento del amonio con respecto al ácido itaconico teniendo
en cuenta esto se obtiene:
Parámetros (Cantidad inicial de sustrato amonio)1g/l
μ(ℎ^(−1)) 0,0701
qm.(g de producto/ g de biomasa por
h) 0,0095
k(g de producto/ g de biomasa) 3,4725

Mientras que el rango de crecimiento de sustrato en g/l en este caso de concentración inicial de
amonio fue determinada a partir de la siguiente ecuación:
𝑋𝑚𝑎𝑥 𝑋
𝜇𝑡 = 𝐼𝑛 ( − 1,0) + 𝐼𝑛( )
𝑋0 1−𝑋

𝑋
Se debe tener en cuenta al momento de graficar esta función el intercepto el cual es 𝐼𝑛(1−𝑋)
debe solo considerarse cuando el proceso se encuentra en fase exponencial y con valores de
𝜇 no menores a 0,008 tomando en cuenta la concentración inicial de sustrato en este caso
amonio.

Los parámetros de producción en la fermentación como qm. y k es posible obtenerlos utilizando


la ecuación de Leudeking- Piret la cual se expresa de la siguiente manera:
𝑑𝐵 𝑑𝑋
=𝛼 𝛽𝑋
𝑑𝑡 𝑑𝑡
Donde:

B: Es el producto

X: Es la biomasa total

𝛼, 𝛽: Parámetros empíricos establecidos para el componente en cuestión, estos dependen de


las condiciones de dilución en el fermentador Batch, generalmente estos dos parámetros son
constantes.

En la siguiente tabla se expresan algunos de estos parámetros con base a reactor de


fermentación de batch en un sistema de 1 a 3 reactores:

R^2
μmax(ℎ^(−1)
Cultivo ) Biomasa Producto
1,65 +_
Reactor Batch 1 0,133 15,487+_ 2,2 0,09 0,894 0,977
2,34
Reactor Batch 4 0,116 26,56 +_2,2 +_0,14 0,896 0,965
4,53+_0,0
Reactor Batch 1 0,147 13,46+_3,4 7 0,985 0,944
3,56 +_
Reactor Batch 4 0,158 23,05 +_ 3,2 0,05 0,984 0,965
4,67
Reactor Batch 6 0,125 24,19 +_1,7 +_0,06 0,976 0,945
6,77+_0,1
Reactor Batch 10 0,189 32,01 +_3,4 5 0,977 0,967
Cuando el sistema se encuentra en fase estacionaria la ecuación para qm varia debido que
(dx/dt)=0 por tanto este parámetro que denota en la detención del crecimiento en el tiempo
quedaría expresado de la siguiente manera:

𝑞 𝑑𝑃
𝑚 =( )𝑠𝑡𝑎𝑡𝑖𝑐/𝑋𝑚𝑎𝑥
𝑑𝑡

Calculando qm para un valor inicial de sustrato para este caso amonio de 1g/l se reporta en el
referente que se obtuvo como resultado 0,00096 g de producto/ g de biomasa * h

Ahora bien para establecer una relación a partir del modelo de crecimiento en la fermentación
convencional en contraposición de la formación del producto en este caso el consumo de
azucares correspondientes y el sustrato se parte de las ecuaciones de crecimiento y la ecuación
de Leudeking- Piret :

𝜇= 𝜇 𝑋
max∗(1− )
𝑋𝑚𝑎𝑥

Donde:

𝜇 = 𝑅𝑎𝑛𝑔𝑜 𝑒𝑠𝑝𝑒𝑐𝑖𝑓𝑖𝑐𝑜 𝑑𝑒 𝑐𝑟𝑒𝑐𝑖𝑚𝑖𝑒𝑛𝑡𝑜 (ℎ−1 )


𝑋 = 𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑑𝑒𝑙 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑜𝑛𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑒𝑛 𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎
𝜇𝑚𝑎𝑥 = 𝑅𝑎𝑛𝑔𝑜 𝑚𝑎𝑥𝑖𝑚𝑜 𝑒𝑠𝑝𝑒𝑐𝑖𝑓𝑖𝑐𝑜 𝑒𝑛 𝑒𝑙 𝑐𝑟𝑒𝑐𝑖𝑚𝑖𝑒𝑛𝑡𝑜 (ℎ − 1)
𝑋𝑚𝑎𝑥 = 𝑀𝑎𝑥𝑖𝑚𝑎 𝑐𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑑𝑒𝑙 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑜𝑛𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑒𝑛 𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎(𝑔/𝑙)

Mientras que para la formación del producto se hace uso de la ecuación de Leudeking-Piret:
1 𝑑𝑃
∗ = 𝑞𝑚 + 𝑘𝜇
𝑋 𝑑𝑡
Donde:
𝑔𝑝𝑟𝑜𝑑𝑢𝑐𝑡𝑜
𝑞𝑚 = 𝑃𝑎𝑟𝑎𝑚𝑒𝑡𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑑𝑒𝑡𝑒𝑛𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑑𝑒 𝑐𝑟𝑒𝑐𝑖𝑚𝑖𝑒𝑛𝑡𝑜 ( )
𝑔𝑏𝑖𝑜𝑚𝑎𝑠𝑎
𝑔
𝑃 = 𝐹𝑜𝑟𝑚𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑑𝑒𝑙 𝑝𝑟𝑜𝑑𝑢𝑐𝑡𝑜 ( )
𝑙
𝑔𝑝𝑟𝑜𝑑𝑢𝑐𝑡𝑜
𝑘 = 𝑃𝑎𝑟𝑎𝑚𝑒𝑡𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑐𝑟𝑒𝑐𝑖𝑚𝑖𝑒𝑛𝑡𝑜 ( )
𝑔𝑏𝑖𝑜𝑚𝑎𝑠𝑎

Combinando estas dos ecuaciones es posible establecer una razón para la formación de
producto es nuestro caso el ácido itaconico respecto al consumo de sustrato utilizado en la
fermentación:
𝑒 𝜇𝑡 𝑋max
𝑃(𝑡) = 𝑃0 + 𝑘𝑋0 ( ) ∗ (1 − 𝑒 𝜇𝑡 )) − 1) + 𝑞𝑚 ∗ ∗ 𝐼𝑛(1 − 𝑋0 /𝑋max ∗ (1
𝑋0 𝜇
1−𝑋
max
− 𝑒 𝜇𝑡 ))

𝑒 𝜇𝑡 𝑋max 𝑋0
Al graficar 𝑋0 ( 𝑋0 ) − 1 contra 𝑃 − 𝑃0 − 𝑞𝑚 ∗ ∗ ln(1 − ) (1 − 𝑒 𝜇𝑡 )) dan los
1− 𝜇 𝑋max
𝑋max
valores del parámetro de crecimiento k en la cinética del proceso de fermentación los valores
determinados para k según el referente cuando se grafican los dos ejes para un valor de sustrato
inicial de 1 g/l se toma amonio como ejemplo fue de 3,526 (g producto / g biomasa)

Si el proceso incurre en fase estacionaria entonces la ecuación se simplifica para la


determinación de un nuevo parámetro de estabilización o no crecimiento D el cual se denota
como:
𝑑𝑆
𝐷=( ) 𝑠𝑡𝑎𝑡𝑖𝑐/𝑋max
𝑑𝑡
Suponiendo entonces una concentración inicial de sustrato (amonio) de 1 (g/l) se obtiene un
valor de D de 0,0053 según lo determinado en el referente de consulta.

Con estas dos variables en mente se puede pretender realizar una expresión para el consumo
del sustrato por lo que igualando la ecuación anterior para el parámetro de D de estabilización
y el parámetro de crecimiento e integrando se obtiene:

𝐷𝑋max 𝑋0
𝑆0 − 𝑆𝑡 = 𝐶(𝑋 − 𝑋0 ) + ( ) 𝐼𝑛 (1 − )
𝜇 𝑋max (1 − 𝑒𝜇𝑡 )
𝐷𝑋max 𝑋0
Graficando 𝑆0 − 𝑆 −( ) 𝐼𝑛 (1 − 𝑋 𝜇𝑡 ) 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑟𝑎 (𝑋 − 𝑋0 ) nos proporciona tal
𝜇 max (1−𝑒 )
parámetro el cual se definirá como C que como se expresó anteriormente expresa el nivel de
consumo de sustrato durante la fermentación, con base en esto según lo registrado en el
referente consultado a partir de la misma concentración inicial de sustrato se obtiene que C
presenta un valor de 1,6558 (g de sustrato/g biomasa).

Respecto a los valores expresados anteriormente se pueden realizar las siguientes asunciones:

Si el valor de qm. es más pequeño comparado con la producción de k indica que durante un
tiempo determinado tuvo tendencia a aumentar continuamente la presencia de producto en
relación a el consumo de los azucares en el proceso. Asimismo, si se consideran valores de
crecimiento mayores con la constante C respecto a la constante de estabilización o no
crecimiento D indica que el consumo de sustrato fue el adecuado para el proceso favoreciendo
en gran medida la generación de ácido itaconico

En el marco teórico las concentraciones de glucosa, biomasa y ácido itaconico se pueden calcular
a partir de los parámetros anteriormente expresados con la siguiente ecuación:
𝑒 𝜇𝑡
𝑋𝑡 = 𝑋 ∗ ∗ (1 − 𝑒 𝜇𝑡 )
𝑋0
1−𝑋
max

Para la glucosa y componentes obtenidos del proceso de hidrolisis enzimática se aplican las
ecuaciones es del parámetro P(t) y S(t) las cuales denotan el consumo de sustrato y la generación
de producto de ácido itaconico esto de manera teórica con el fin de comparar con datos
compilados a partir de diversas experimentaciones exponiendo el proceso de fermentación
Batch en un tiempo de 72 a 96 h llegando a un estado estacionario donde la gráfica se mantiene
constante alcanzando un pico de 144 h. La grafica comparativa se puede ver a continuación
gracias a la herramienta Matlab:

Experimental Teórico
Biomasa concentración Tiempo Biomasa concentración Tiempo
11,6 0 12 0
15,47 23 14,5 22,3
16,4 47 19,7 47
18,2 72 18,1 72
19,5 93 19,5 93
14,8 130 17,4 130
9,8 150 18,7 150
La grafica expresada anteriormente denota el comportamiento dela concentración de biomasa
con respecto al tiempo de fermentación comparando datos teóricos con datos experimentales
obtenido a partir de simulaciones del proceso o pruebas en planta piloto, cabe destacar que la
biomasa tiende a variar de manera errática durante todo el proceso debido a que no está ligada
a un condicionante en específico y al transcurrir su tendencia a disminuir o aumentar es
claramente visible.

El microorganismo de trabajo A.niger posee ciertas cepas que pueden afectar los parámetros
cinéticos asociados al crecimiento y estabilización o no crecimiento del producto además de
afectar indirectamente al tiempo algunos de estos son:

Microorganismos
Parámetros A.niger B60/B3 A.niger B60/B5b
tm(h) 15 24
k1 1,9 2
k2 0,09 0,038

Asimismo los parámetros cinéticos se pueden corregir por medio de modelo de regresión tales
como el de Monod en miras de re expresar los valores para los estados que presenta el
sustrato durante la fermentación estos dos estados se definen como:

 Inhibición
 Saturación

En donde el estado de inhibición expresa el comienzo de la fermentación en donde el sustrato


comienza a interactuar en el proceso con la biomasa en miras de producir el ácido itaconico,
mientras que en la saturación es el estado en donde el sustrato está al borde del consumo y
el sistema se ha logrado una conversión del 80% de la biomasa en producto.
Valores
Símbolo Unidade
Parámetro nomenclatura parámetro s Melaza Suero

Máximo rango de crecimiento


especifico μ_max 0,9974 1,9366
Monod estado de saturación del
sustrato Ks h^-1 115,3839 4968,75
Monod constante de inhibición del
sustrato Ksp g/l 0,93285 -
Máximo rango de consumo para el
producto en presencia de sustrato μp_max g/l 0,2282 0,1019
Monod constante de saturación para
el producto Kp h^-1 0,3895 6875,18
Monod constante de inhibición para
el producto Kps g/l 0,1006 -
Coeficiente logístico para la inhibición
del sustrato para el producto Alpha-p g/l - 0,0348
Coeficiente logístico para la inhibición
del sustrato para el producto Beta-p g/l - 0,0022
Coeficiente logístico para la inhibición
de producto para el sustrato Alpha-s g/l - 5,7732
Coeficiente logístico para la inhibición
de producto para el sustrato Betha-s - - 2,8184
Rendimiento biomasa respecto al
sustrato Yxs g/g 0,2882 0,1205
Rendimiento producto en biomasa Ypx - 2,8841 4,998
Consumo de sustrato endógeno m h^´-1 0,001168 0,006
Rango de muerte Kd h^´-1 - 0,00012

Para el modelo cinético de Monod las ecuaciones anteriormente expresadas cambian respecto
a los conceptos de inhibición y saturación expresadas anteriormente, por ejemplo, para
expresar el máximo de crecimiento a partir de A.niger con el fin de obtener la mayor cantidad
de ácido itaconico:
𝑆
𝜇 = 𝜇𝑚𝑎𝑥 ∗
𝐾𝑠 + 𝑆

𝑆
𝜇𝑝 = 𝜇𝑝𝑚𝑎𝑥 ∗
𝐾𝑝 + 𝑃
Donde 𝜇𝑚𝑎𝑥 y 𝜇𝑝𝑚𝑎𝑥 representan el crecimiento especifico del sustrato y el rango máximo de
consumo del producto cuando el sustrato desaparece todo esto respecto a (h^-1)

S y P: Concentraciones de sustrato y producto (g/l)

𝐾𝑠 𝑦 𝐾𝑝 : 𝐶𝑜𝑛𝑠𝑡𝑎𝑛𝑡𝑒𝑠 𝑑𝑒 𝑠𝑎𝑡𝑢𝑟𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑑𝑒 𝑀𝑜𝑛𝑜𝑑

Se puede inferir que el máximo rango de crecimiento especifico es inhibido por la


concentración de producto durante el proceso, mientras que 𝜇𝑝 afecta al sustrato
respectivamente.

Existe un segundo grupo para los modelos de inhibición los cuales afectan la logística de la
cinética, es decir se hace uso de otros parámetros para realizar una corrección en el proceso
de inhibición del sustrato lo cual se puede expresar de la siguiente manera:

1
1 + 𝛽𝑚 ∗ (𝛼𝑚 ∗ 𝑀)
Esta relación es aplicada de manera diversa para 𝜇𝑝 y 𝜇 en donde M es la concentración de
sustrato considerando el tipo de inhibición que se esté llevando a cabo en el fermentador.

Por ultimo existe un tercer grupo que considera la inhibición del sustrato y está relacionada
con los parámetros del modelo de Monod y la concentración del sustrato en sí, se puede
expresar:

𝑀 𝑛𝑀
1−( )
𝐾𝑀
En donde:

𝐾𝑀 : 𝑃𝑎𝑟𝑎𝑚𝑒𝑡𝑟𝑜 𝑐𝑖𝑛𝑒𝑡𝑖𝑐𝑜
𝑀: 𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑑𝑒 𝑝𝑟𝑜𝑑𝑢𝑐𝑡𝑜; 𝑑𝑒 𝑠𝑢𝑠𝑡𝑟𝑎𝑡𝑜

Con base en estos 3 modelos se pueden consultar datos en la literatura a partir de


experimentos con reactores Batch, los cuales nos permitirán una mejor visión entorno a
consideraciones matemáticas esto se puede lograr a partir de las siguientes ecuaciones:
𝑑𝑆
= −𝑟𝑠
𝑑𝑡
𝑑𝑋
= −𝑟𝑥 + 𝑟𝑝 − 𝐾𝑑 ∗ 𝑋
𝑑𝑡
𝑑𝑃
= 𝑟𝑝 − 𝑟𝑝∗
𝑑𝑡
Estas relaciones matemáticas expresan los rangos de mantenimiento en el consumo de sustrato,
a partir de la muerte de los microorganismos con base a factores externos y si se pretende usar
el ácido itaconico como sustrato secundario de crecimiento. Es posible realizar otra asunción
entorno al decrecimiento de la concentración de ácido itaconico en varios procesos
experimentales para sistemas que manejan sueros, los rangos de reacciones están expresados
a partir de las siguientes ecuaciones:

𝑟𝑥 = 𝜇 ∗ 𝑋
𝑟𝑥
𝑟𝑆 = +𝑚∗𝑋
𝑌𝑥𝑠
𝑟𝑝 = 𝑟𝑥 + 𝑌𝑝𝑥

𝑟𝑝∗ = 𝜇𝑝 ∗ 𝑋

Algunos valores reportados en la literatura para estas expresiones matemáticas entorno a un


sistema de fermentación batch en un lapso de 144 h para el ácido cítrico (se asume este para el
ácido itaconico como he expresado anteriormente) son:

Parámetros cinéticos Valores reportados


𝑟𝑥 0,0034
𝑟𝑆 0,0057
𝑟𝑝 0,008
𝑟𝑝∗ 0,0034
𝜇𝑝 0,974
𝜇 18,34
𝐾𝑀 0,000085
S (g/l) 143,37
P (g/l) 156,7

Experimentalmente los datos obtenidos quizás puedan ser confiables respecto al


comportamiento que tiene la biomasa, el sustrato y el ácido cítrico respecto al proceso de
fermentación, pero cabe resaltar que depende de múltiples regresiones y consideraciones
matemáticas para lograr la máxima optimización y rendimiento del proceso.
Comportamiento glucosa vs tiempo
160

140

120

100

80

60

40

20

0
0 20 40 60 80 100 120 140
t

Concentración glucosa Tiempo


118 0

100 23,8
65 47,2
43 71
24 95
18 123
0 140

En el grafico es posible ver el comportamiento de la glucosa en torno al proceso de


fermentación en un lapso de 144h, esta muestra un carácter decreciente consumiéndose por
completo antes del tiempo estipulado alrededor de las 120 horas. Indica que si se tienen en
cuenta los factores pertinentes un reactor Batch para la fermentación puede ser adecuado
para la obtención del ácido itaconico, considerando el consumo de sustrato, biomasa y
microorganismo, los parámetros cinéticos y tiempos de reacción.
Experimental Teórico
Concentración de ácido
Concentración ácido itaconico Tiempo itatonico Tiempo
0 0 0 0
21,7 23,2 19,6 23,5
34,5 47,6 21 46
36,8 72 22,3 72,4
39 95 24 95,1
40 120 40 120
49,8 143 89 144

Por último el sistema demuestra que el rendimiento del ácido itatonico en un reactor bacth
en un lapso de tiempo establecido tomando datos teóricos y experimentales de la literatura,
nos permite ver la obtención de este es sustancial una vez supera las 100h en el modelo
teórico por lo que se pueden recomendar este tipo de condiciones para el proceso.

Bibliografía

https://pdfs.semanticscholar.org/66d3/fb12f1fa80fc06fcd0f564e50cd7e56df882.pdf

http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1516-89131999000300001

http://www.scielo.br/pdf/bjce/v25n2/a01v25n2.pdf