Facultad de Ciencias Biológicas

EP Microbiología y Parasitología

Curso de Bacteriología
Semestre 2019 II

Laboratorio de Bacteriología

Práctica 1: Bioseguridad en el laboratorio

Práctica 2: Medios de cultivo

Profesora de teoría: Jeanne Alba Luna

Profesora de laboratorio: Nora Vera

Integrantes:

Gambini Valderrama Paolo Marcelo

Olivas Villanera Katherin Fiorela

Ubillus Montero Angel David

2019
Bacteriología EP Microbiología y Parasitología – 2019 I

I. Introducción

En un laboratorio siempre hay exposición a una serie de riesgos que debemos tener a
consideración en cada momento que trabajemos en este ambiente, estos riesgos varían
según el agente, su patogenia y otros factores como las maniobras o procedimientos
empleados, por ejemplo, cuando se manipulan agentes infecciosos se producen una serie
de riesgos a los que están expuestas las personas, medio ambiente e incluso toda la
comunidad. En tal sentido, las normas de bioseguridad pretenden reducir a un nivel
aceptable el riesgo inherente a la manipulación de este material peligroso y su rigurosidad
dependerá del tipo de agente. Por esto, en la práctica de Bioseguridad se efectuó una
evaluación de riesgos para proporcionar a todos medidas de contención que en conjunto
reducen la exposición a peligros hasta límites mínimos.

En la siguiente práctica, abordamos el tema de medios de cultivo y aprendimos los tipos

de medios, los componentes de estos y las condiciones a las que se utilizan para poder
obtener cepas bacterianas aisladas, que es el objetivo principal de esta técnica utilizada
en nuestra carrera de Microbiología. También, se ensayaron técnicas de estriado en
medios de cultivo presentados en placas Petri, usando un pool de bacterias y se
obtuvieron cepas aisladas, estudiando sus características y comportamiento frente a
diferentes tipos de medios.

Objetivos

De la práctica 1:

● Aplicar las normas de bioseguridad descritas en el laboratorio.

De la práctica 2:

● Diferenciar los tipos de medios de cultivo y su aplicación.

● Ensayar métodos de estriado.
● Obtener colonias aisladas.
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II. Procedimiento

Práctica 1:

Se explicó las normas de bioseguridad, los agentes de riesgo, grupos de riesgo y niveles
de bioseguridad, además se identificó el nivel de bioseguridad del laboratorio. Luego se
observaron imágenes de personas en un laboratorio y se identificó lo correcto e incorrecto
respecto a la bioseguridad.

Imagen 1. El joven de la foto no usó guantes para sostener las muestras de sangre, usó
una identificación sobre el guardapolvo que puede ser un contaminante si cae sobre las
muestras y además trae lapiceros sobre su guardapolvo.

Imagen 2. La joven de la foto usó joyas como brazaletes y aretes grandes lo que indica
que no cumplió con las normas de bioseguridad establecidas para un laboratorio.
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Práctica 2:

Se describió los medios de cultivo empleados comúnmente en bacteriología, así como

también se conoció sus aplicaciones y utilidades. Se sembró por estriado en 4 placas con
medios diferentes para conocer las diferentes características culturales que pueden
presentar aquellas cepas bacterianas que puedan crecer en cada medio y entender los
fundamentos de estos. La finalidad es la obtención de cepas aisladas, con esto habremos
adquirido la competencia requerida para los siguientes experimentos.

Imagen 3. En la foto se muestra medios de cultivo del tipo definido, pues se conoce
exactamente la cantidad de cada uno de los compuestos que hay en el medio, tanto
cualitativa y cuantitativamente.

Imagen 4. Se utilizaron 4 medios de cultivo sólidos: Agar eosina metil blue (EMB), Agar
Salmonella Shiguella (ASS), Agar xilosa lisina desoxicolato (XLD), Agar Nutritivo (AN).
Cada medio fue inoculado con un pool de microorganismos compuestos por: Escherichia
coli, Serratia sp., Citrobacter freundi, Klebsiella sp., Acinetobacter sp.
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Imagen 5. Se sembró el pool de microorganismos en los medios utilizando el método de

estriado observado en la figura, con el objetivo de aislar, reconocer y distinguir las
bacterias del pool.
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III. Resultados y conclusión

Práctica 1:

Cuestionario:

- Elabore un cuadro comparativo con ventajas y desventajas de las clases de

cabina de seguridad

Clases de cabina Ventajas Desventajas

El flujo de aire arrastra las partículas No garantiza la protección

hacia adentro alejándose del operador y del producto manipulado ni
I la pasa por un filtro. la exposición por contacto
a materiales peligrosos.
Para agentes biológicos
de riesgo casi nulo.
El aire recirculado es
mucho mayor que otros.

Flujo de aire
uniforme,
Un motor. descendente
Tipo
Aire recirculado 70%. y
A No protegen de las
II unidireccional exposiciones por contacto.
.
El flujo
laminar
protege al
Dos motores. Aire producto.
Tipo recirculado 30%. Para agentes
B biológicos
tipo 2.
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Herméticamente cerrados, protege a

operador por el panel frontal cerrado y
guantes adheridos a este. El aire No protege de radiaciones,
III extraído es 100% y hay filtros de alta ninguno previene.
eficacia.
Para agentes biológicos tipo 3 y 4.
Filtro para absorción de contaminantes
químicos.

La siguiente tabla muestra, a modo de esquema, la cabina más idónea a elegir en función
del grupo de riesgo.

GRUPO DE RIESGO CLASE I CLASE II A CLASE II B CLASE III

1 TI TI TI TI

2 TI TI TI TI

3 NR PU PU TI

4 NR NR NR TI

TI: Totalmente indicada PU: Puede utilizarse NR: No recomendable

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- Suponga que el día de hoy un compañero no asistió a la práctica,

enumere 5 mensajes clave que compartiría con él o ella acerca de la
bioseguridad.

1. La bioseguridad es un conjunto de normas, medidas y procedimientos que se

deben emplear en un laboratorio para minimizar y/o controlar los riesgos que se
pueden ocasionar durante el empleo de agentes infecciosos, químicos o físicos.
Estas medidas no solo protegen a las personas sino también al medio ambiente.
2. Existen agentes de riesgo y pueden ser biológicos, químicos, físicos e inclusive
humanos y ambientales, de cada uno de estos los factores más importantes a
considerar son: en biológicos, los 4 grupos de riesgo en los que están divididos
según el organismo trabajado y si la posible infección de uno de estos pueda
afectar seriamente al individuo que lo maneja o propagarse a la población. En
agentes químicos tenemos una clasificación en base a los daños que puede
ocasionar en el manipulador como, por ejemplo, si es explosivo, inflamable, tóxico,
corrosivo, irritante y nocivo. Para los agentes físicos lo más importante son las
exposiciones al fuego, en caso se utilizan mecheros Bunsen y para los agentes
humanos está la poca atención al trabajo que se realice o malas prácticas de
laboratorio que se hagan.
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3. Hay niveles de bioseguridad en base a las condiciones que un laboratorio cumple

y son 4 niveles que dependen de los agentes de peligro potencial para el personal
y/o el medio ambiente, además de considerar también los sistemas de contención
que son inherentes a las barreras de protección y estructura del laboratorio. En
nuestro caso trabajaremos con un nivel 1 de bioseguridad.
4. Entre los métodos de barrera utilizados en el laboratorio encontramos a la bata,
guantes, mascarillas, toca y gafas. Sin estos instrumentos no se realizará el
estudio a realizar de una manera debida ya que el analista se verá expuesto a más
riesgos en el uso y manipulación de equipos en el laboratorio.
5. Las buenas prácticas de laboratorio son métodos técnicos destinados a evitar o
reducir al mínimo los accidentes más comunes al momento de una mala praxis del
equipo o instalaciones ya que solo con la combinación adecuada de instalaciones,
equipo y prácticas de laboratorio se obtendrá el nivel de bioseguridad requerido.

Práctica 2:

Luego de 2 días de realizar la inoculación del pool de microorganismos, se revisó el

estado de los medios de cultivo, el crecimiento y aislamiento de las colonias.

Imagen 6. Agar Nutritivo; se observó colonias aisladas, aunque unas más grandes que
otros, no se pudo establecer la especie bacteriana por ser un medio utilizado para
crecimiento en general, con componentes básicos para la mayoría de bacterias.
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Imagen 7. Agar XLD, se observó colonias un poco amarillas que corresponderian a

Escherichia coli, se observó colonias ligeramente rojas que corresponderían a Shigella sp.
y además se notó la presencia de colonias amarillentas con negro que posiblemente
corresponden a Salmonella sp.

Imagen 8. Agar EMB, se observó colonias negro azuladas con un brillo particular
correspondiente a Escherichia coli posiblemente y colonias incoloras que pueden
corresponder a Salmonella sp y/o Shigella sp.
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Agar SS, se observó crecimiento de algunas cepas aisladas cuyas características son dos
principalmente: las colonias transparentes correspondiente a Shigella sp., que tienen un
borde entero y son pequeñas a comparación de las colonias transparentes, pero con un
centro negro y que corresponden a Salmonella sp., en este caso el color negro es debido
a la formación de sulfuro de hierro proveniente de las reacciones del tiosulfato de sodio y
el citrato férrico. No se observó colonias rosadas o rojas que corresponden a bacterias
fermentadoras de lactosa, por lo tanto, las dos cepas aisladas son lactosa negativo.

Cuadro 1. Características de medio de cultivos observados en clase

Carbono
Indicado Agente Rangos
Medio Tipo r
fermentativ Otras características
selectivo de pH
o
Peptona favorece
Azul de
EMB Selectivo Eosina Lactosa 7.2±0.2 crecimiento
metileno
bacteriano
Puede ser
suplementado con
sangre ovina
desfribinada estéril
Extracto de
para favorecer el
AN No selectivo - - carne y 7.3±0.2
crecimiento de
peptona microorganismo
exigentes en sus
requerimientos
nutricionales
Sales Tiosulfato sódico y el
Selectivo y
biliares, citrato férrico permiten
de Rojo
ASS verde Lactosa 7.2±0.2 la detección de
diferenciació neutro
brillante, producción de ácido
n
citrato férrico sulfhídrico
Selectivo y Contiene extracto de
de Rojo de Desoxicolato levadura como fuente
XLD Xilosa 7.4±0.2
diferenciació fenol de sodio de nutrientes y
n vitaminas
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Conclusiones:

1. Práctica 1
- Se concluye que una correcta praxis del equipo de laboratorio se da con la
combinación adecuada de instalaciones, práctica y del propio equipo de
laboratorio según sea el nivel de bioseguridad requerido.
2. Práctica 2
- Se ensayaron los métodos de estriado en los diferentes medios de cultivos
analizados.

- Se obtuvieron colonias aisladas y se caracterizaron según su crecimiento

dado en cada medio, mostrando la capacidad de diferenciación de este
ante cada cepa.

BIBLIOGRAFÍA

 Taylor, W.I. 1965. Isolation of shigellae. I. Xylose lysine agars; new media for isolation
of enteric pathogens. Am. J. Clin. Pathol., 44:471-475.

 Bopp, C.A., Brenner, F.W., Fields, P.I., Wells, J.G., and N.A. Strockbine. 2003.
Escherichia

 Shigella, and Salmonella. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller,
and R. H. Yolken (Ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for
Microbiology, Washington, D.C

 Downes and Ito (ed.).2001. Compendium of methods for the microbiological

examination of foods, 4th ed. American Public Health Association, Washington, D.C.

 Leifson, E. 1935. New culture media based on sodium desoxycholate for the
isolation of intestinal pathogens and for the enumeration of colon bacilli in milk and
water. J. Pathol. and Bacteriol. 40:581-599.

 Mac Faddin. 1985, Media for isolation-ciltivation-identification-maintenance of medical

bacteria, volume 1. Williams & Wilkins, Baltimore,Md.